本發(fā)明涉及一類新化合物、其制備方法與應(yīng)用，具體是N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物、其制備方法及其在制備抗癌藥的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

Holla等[European Medical Chemistry，2003，38：313-318]描述了2-芳氨基-4-（2，4-二氯-5-氟苯基）噻唑的制備與生物活性；中國發(fā)明專利（CN1018445026，CN101781269）描述了5-（4-氯苯甲基）-4-叔丁基噻唑衍生物和4-叔丁基-2-（硝基芐亞氨基）噻唑的制備及其作為制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。中國發(fā)明專利（CN101277692A，2008.10.01公開）描述了5-芐基-4-甲基/三氟甲基-2-芳氨基噻唑的制備。中國發(fā)明專利（CN102070556A，2011.5.25公開；CN102067845A，2011.5.25公開）描述了5-芐基-4-烷基-2-芳氨基噻唑氫溴酸鹽的制備。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一類N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物、其制備方法、藥物組合物和用途。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面是提供了一類如結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其在藥學(xué)上可接受的鹽：

I

式中R選自：C₁~C₂烷基、C₃~C₄直鏈烷基或C₃~C₄支鏈烷基；n選自：0、1、2或3。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了第一方面所述通式I所示的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

I

式中R選自：C₁~C₂烷基、C₃~C₄直鏈烷基或C₃~C₄支鏈烷基；n選自：0、1、2或3。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的含有藥用載體。其中所述的藥用載體指藥學(xué)領(lǐng)域常用的藥用載體；該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑組合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在其藥物組合物中的含量通常為0.1%~95 %重量百分比。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑（包括真溶液和膠體溶液）、乳劑（包括o/w型、w/o型和復(fù)乳）、混懸劑、注射劑（包括水針劑、粉針劑和輸液）、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑（包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片）、膠囊劑（包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊）、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣（粉）霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼?，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、pH調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；pH調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供本發(fā)明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備抗癌藥物方面的應(yīng)用。

進(jìn)一步，本發(fā)明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備抗宮頸癌藥物方面的應(yīng)用。

進(jìn)一步，本發(fā)明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備抗人肺腺癌藥物方面的應(yīng)用。

有益技術(shù)效果：本發(fā)明的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物是一類新結(jié)構(gòu)類型的具有抗癌活性的化合物。

具體實施方式

以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進(jìn)一步限定。

實施例 1

N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)二氯乙酰胺的合成

1.55 mmol5-胡椒基-4-叔丁基-2-氨基噻唑、1.7 mmol三乙胺溶于15 mL二氯甲烷中，攪拌至固體完全溶解，在冰浴下緩慢滴加1.7 mmol二氯乙酰氯的5 mL二氯甲烷溶液；TLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，0.5 h反應(yīng)完畢，反應(yīng)液水洗3次，無水Na₂SO₄干燥，旋蒸二氯甲烷，采用柱層析(V_石油醚 : V_乙酸乙酯 = 10 : 1)分離，得到白色固體N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)二氯乙酰胺0.24 g，收率40%，m.p. 125~127 ℃，¹H NMR (400 MHz，CDCl₃)，δ: 1.40 (s，9H，3×CH₃)，4.15 (s，2H，CH₂)，5.95 (s，2H，OCH₂O)，6.09 (s，1H，CH)，6.65 (d，J = 7.9 Hz，H，C₆H₃C₆H₃ 6-H)，6.66 (s，1H，C₆H₃ C₆H₃ 2-H)，6.74 (d，J = 7.9 Hz，1H，C₆H₃ C₆H₃ 5-H)。¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ：30.66，32.68，35.41，66.08， 100.96，108.26，108.76，121.29，125.68，133.51，146.34，147.83，151.84，154.18，162.99。

實施例 2

N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物及其鹽的抗腫瘤活性

1. 抗腫瘤活性原理

MTT法生物活性測試又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑噻唑藍(lán)[3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四氮唑; 3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]為基礎(chǔ)。MTT是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲瓚（formazon），而死細(xì)胞則無此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波長下用酶標(biāo)儀測定光密度值，既可定量測出細(xì)胞的存活率。根據(jù)光密度值的變化觀察樣品對腫瘤細(xì)胞的抑制作用。

2. 抗腫瘤活性實驗

試 樣：實施例化合物。

細(xì)胞系：宮頸癌細(xì)胞系Hela和肺腺癌細(xì)胞系A549（中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院細(xì)胞庫提供）。

試 劑：噻唑藍(lán)（MTT）、RPMI 1640培養(yǎng)液、新生牛血清、抗生素（美國英杰生命技術(shù)公司）；胰酶（美國AMRESCO公司）；96孔培養(yǎng)板（美國英杰生命技術(shù)公司）；二甲基亞砜（美國Sigma公司）。

儀 器：HFsafe-1500型超凈工作臺、HF151UV型CO₂培養(yǎng)箱（上海力申科學(xué)儀器有限公司）；XSP-15C型倒置顯微鏡（上海長方光學(xué)儀器有限公司）；Multiskan MK3型酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）；超純水制備儀（美國Milli-Q公司）。

實驗操作：試樣對Hela細(xì)胞、A549細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的測試。每種細(xì)胞的實驗操作過程相同，一次實驗過程中，每種試樣設(shè)置5個濃度梯度（10 μM、30 μM、100 μM、300 μM和1000 μM），每個濃度四個平行試樣，每組實驗平行3次，并通過空白組對照得出結(jié)論。酶標(biāo)儀檢測各孔OD值，檢測波長570 nm。

3. 抗腫瘤活性評價

1） 細(xì)胞抑制率計算：

2）IC₅₀值計算

試樣濃度對數(shù)值與細(xì)胞抑制率線性回歸，利用軟件計算試樣對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC₅₀值。N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)二氯乙酰胺對Hela細(xì)胞和A549細(xì)胞的IC₅₀分別為32.6±5.7μM和8.3±1.8μM

活性測試結(jié)果顯示，N-(5-胡椒基噻唑-2-基)二氯酰胺衍生物或其鹽對宮頸癌細(xì)胞（Hela細(xì)胞）、人肺腺癌細(xì)胞（A549細(xì)胞）具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。