本發(fā)明涉及N-(2-乙基-5-(6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]噠嗪-2-基)苯基)-1-甲基環(huán)丙烷甲酰胺的結(jié)晶形式及其制備方法。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤已經(jīng)成為常見且嚴(yán)重威脅人們生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。隨著對腫瘤基因?qū)W和分子生物學(xué)研究的不斷深入，多個(gè)細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)的關(guān)鍵信號通路被發(fā)現(xiàn)。1980年，Hedgehog(Hh)基因首先在果蠅中被發(fā)現(xiàn)。在研究果蠅的突變時(shí)發(fā)現(xiàn)了hedgehog信號通路，Hedgehog信號通路又名刺猬信號通路，Hedgehog基因是一種分節(jié)極性基因，因突變的果蠅胚胎呈多毛團(tuán)狀，酷似受驚刺猬而得名；人類存在三種hedgehog同源基因，包括sonic hedgehog(SHH)，indian hedgehog(IHH)和desert hedgehog(DHH)。它們在胚胎發(fā)育中起著重要的作用，控制著許多組織和器官的形成。

Hedgehog信號通路是一個(gè)重要的細(xì)胞生理過程調(diào)節(jié)通路，在正常情況下被嚴(yán)格調(diào)控并在細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化以及胚胎的形成過程中發(fā)揮重要作用。近幾年人們逐漸發(fā)現(xiàn)許多疾病都與這個(gè)信號通路有關(guān)，當(dāng)Hedgehog信號通路異常激活時(shí)，會引起多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，包括小細(xì)胞肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等，約占人類腫瘤的25％。目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些Hedgehog信號通路的調(diào)控因子和抑制物，比如Hh相互作用蛋白l(Hip1)，生長阻滯特異基因1(GAS-1)，小泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白RAB23，骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)以及甾醇類化合物等等，它們可以抑制細(xì)胞對Hedgehog信號通路應(yīng)答引起的增殖、分化并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這些研究結(jié)果為腫瘤的治療提供了重要線索。Cyelopamine是一種植物性甾體類生物堿，作為Hedgehog信號通路的拮抗劑，也是一種有前景的癌癥治療藥物。Vismodegib被批準(zhǔn)上市用于治療基底細(xì)胞癌，證明了hedgehog信號通路靶向藥物策略的成功。因此，開發(fā)小分子的hedgehog信號通路抑制劑，對于臨床工作中癌癥的治療，具有很大的發(fā)展前景。

WO2012088411公開了一種新的hedgehog信號通路抑制劑，其具有如下的式(I)所示結(jié)構(gòu)：

式(I)所示化合物作為一個(gè)全新的小分子hedgehog信號通路抑制劑，在體外對靶點(diǎn)的抑制作用和小鼠體內(nèi)藥效均比Vismodegib強(qiáng)兩倍以上；并且動物藥代結(jié)果顯示，相對于陽性藥Vismodegib，式(I)所示化合物體內(nèi)蓄積情況得到了很大的改善，具有很大的發(fā)展前景。

WO2012088411未深入研究該化合物的結(jié)晶形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，藥用的活性成分的晶型結(jié)構(gòu)往往影響到該藥物的化學(xué)穩(wěn)定性，結(jié)晶條件及儲存條件的不同有可能導(dǎo)致化合物的晶型結(jié)構(gòu)的變化，有時(shí)還會伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。因此，對藥物晶型的研究，特別是藥物穩(wěn)定晶型的研究，對藥物的后續(xù)開發(fā)具有十分重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種式(I)所示化合物的結(jié)晶形式以及制備方法。

式(I)所示化合物在不同結(jié)晶條件下得到了一系列結(jié)晶產(chǎn)物，對所得結(jié)晶產(chǎn)物進(jìn)行了X-衍射及DSC檢測，發(fā)現(xiàn)式(I)所示化合物在本發(fā)明特定的結(jié)晶條件下，可以得一種穩(wěn)定的結(jié)晶形式，命名為II型結(jié)晶。

本發(fā)明一方面提供了式(I)所示化合物的II型結(jié)晶。其特征在于，使用Cu-Ka輻射，得到以2θ角度和晶面間距表示的X-射線粉末衍射圖譜，所述結(jié)晶具有如圖1所示的X-射線粉末衍射圖譜，其中大約在4.65(19.00)，6.39(13.81)，7.97(11.08)，9.57(9.23)，11.11(7.96)，12.75(6.94)，13.64(6.49)，15.72(5.63)，17.36(5.10)，18.41(4.82)，19.18(4.62)，21.38(4.15)，22.75(3.91)，23.15(3.84)，24.77(3.59)，27.21(3.27)，28.50(3.13)，29.48(3.03)，30.47(2.93)，31.62(2.83)，32.96(2.72)的附近有特征峰；并且DSC圖譜顯示在116℃和192℃附近的熔融吸熱峰的DSC圖譜。

本發(fā)明制備式(I)所示化合物的II型結(jié)晶的方法，具體的，包括以下步驟：

(1)將任意晶型或無定型的N-(2-乙基-5-(6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]噠嗪-2-基)苯基)-1-甲基環(huán)丙烷甲酰胺固體加熱溶解于適量的有機(jī)溶劑中，冷卻、析晶；

(2)過濾結(jié)晶并洗滌，干燥。

在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟(1)中，有機(jī)溶劑選自碳原子數(shù)小于等于3的醇類；進(jìn)一步優(yōu)選有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇。

重結(jié)晶的方法沒有特別限定，可以用通常的重結(jié)晶操作方法進(jìn)行。例如，可以將式(I)所示化合物在有機(jī)溶劑加熱溶解后冷卻析晶，結(jié)晶完成后，經(jīng)過濾干燥，即可得到所需要的結(jié)晶。需特別說明的是，所濾取的結(jié)晶體通常在減壓下，在30～100℃左右，優(yōu)選40～60℃的條件下進(jìn)行真空干燥，就能達(dá)到去除重結(jié)晶溶劑的效果。

通過差示掃描熱分析(DSC)、X-衍射圖譜測定，對得到的式(I)所示化合物結(jié)晶體進(jìn)行了晶型研究，同時(shí)對所得結(jié)晶的溶劑殘留進(jìn)行了檢測。

按照本發(fā)明的方法制備的式(I)所示化合物結(jié)晶不含有或僅含有較低含量的殘留溶劑，符合國家藥典規(guī)定的有關(guān)醫(yī)藥產(chǎn)品殘留溶劑的限量要求，因而本發(fā)明的結(jié)晶可以較好地作為醫(yī)藥活性成分使用。

經(jīng)研究表明，本發(fā)明制備的式(I)所示化合物的II型結(jié)晶在光照、高溫、高濕的條件下穩(wěn)定性良好，且在研磨、壓力和受熱等條件下，晶型穩(wěn)定，能夠滿足生產(chǎn)運(yùn)輸儲存的藥用要求，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可重復(fù)可控，能夠適應(yīng)于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的I型結(jié)晶可以方便地用于制備藥物組合物，所述藥用組合物包含式(I)所示化合物結(jié)晶和至少一種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。

附圖說明

圖1是式(I)所示化合物II型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖2是式(I)所示化合物II型結(jié)晶的DSC譜圖。

圖3是式(I)所示化合物III型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖譜。

圖4是式(I)所示化合物III型結(jié)晶的DSC譜圖。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合實(shí)施例更詳細(xì)地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。

實(shí)驗(yàn)所用的測試儀器

1、DSC譜

儀器型號：Mettler Toledo DSC 1Staree System

吹掃氣：氮?dú)?/p>

升溫速率：10.0℃/min

溫度范圍：40-250℃

2、X-射線衍射譜

儀器型號：Bruker D8Focus X-射線粉末衍射儀

射線：單色Cu-Kα射線

掃描方式：θ/2θ，掃描范圍：2-40°

電壓：40KV 電流：40mA

實(shí)施例1

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入10ml乙醇，加熱回流溶清，攪拌冷卻析晶至室溫，抽濾，干燥得固體668mg，收率為66.8％。該結(jié)晶樣品的X-射線衍射譜圖見圖1。該結(jié)晶在約4.65(19.00)，6.39(13.81)，7.97(11.08)，9.57(9.23)，11.11(7.96)，12.75(6.94)，13.64(6.49)，15.72(5.63)，17.36(5.10)，18.41(4.82)，19.18(4.62)，21.38(4.15)，22.75(3.91)，23.15(3.84)，24.77(3.59)，27.21(3.27)，28.50(3.13)，29.48(3.03)，30.47(2.93)，31.62(2.83)和32.96(2.72)有特征峰。DSC譜圖見圖2，有尖銳熔融吸熱峰116℃和192℃，將此晶型定義為II晶型。

實(shí)施例2

取(1.0g，2.15mmol)式(I)所示化合物(按WO2012088411公開方法制備)加入到25ml單口瓶中，加入8ml甲醇，加熱回流溶清，攪拌冷卻析晶至室溫，抽濾，干燥得固體606mg，收率為60.6％。該結(jié)晶樣品的X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為II晶型。

實(shí)施例3

重復(fù)WO2012088411實(shí)施例633的全部操作，將2-乙基-5-(6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]噠嗪-2-基)苯胺(500mg，1.30mol)，乙腈(5ml)和吡啶(0.315ml)加入燒瓶中。攪拌該混合液并加入1-甲基環(huán)丙基羧酸氯(169mg，1.43mmol)，并且室溫?cái)嚢柙摶旌弦?小時(shí)。反應(yīng)完成時(shí)，以硅膠濃縮該混合液，并且經(jīng)硅膠層析純化(0-80％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到化合物I的結(jié)晶(400mg，66％)。該結(jié)晶樣品的經(jīng)X-射線衍射和DSC譜圖經(jīng)研究比對，此處將其定義為III晶型，但I(xiàn)II晶型可能是一種混合晶型，DSC圖譜顯示其在相近位置出現(xiàn)兩個(gè)熔融吸熱峰，這種混晶型具有可能發(fā)生轉(zhuǎn)晶，從而導(dǎo)致藥物的吸收發(fā)生改變的風(fēng)險(xiǎn)，因此不建議臨床使用。

實(shí)施例4

將實(shí)施例1所得的II型結(jié)晶產(chǎn)物和分別敞口平攤放置，考察在光照(4500Lux)，加熱(40℃，60℃)，高濕(RH75％，RH90％)條件下樣品的穩(wěn)定性?？疾烊訒r(shí)間為5天和10天，HPLC檢測純度見表1。

表1、式(I)所示化合物的II型結(jié)晶樣品的穩(wěn)定性

穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，式(I)所示化合物II型結(jié)晶樣品在敞口放置的條件下，光照、高溫和高濕條件對其穩(wěn)定性影響不大。

實(shí)施例5

將按實(shí)施例1方法制得的式(I)所示化合物II型結(jié)晶進(jìn)行研磨、加熱及壓片處理，研究結(jié)果表明晶型穩(wěn)定，詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參見下表2。

表2、式(I)所示化合物的II晶型特殊穩(wěn)定性研究