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      融合蛋白sHA1?Fc及應(yīng)用的制作方法

      文檔序號(hào):11827950閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.融合蛋白sHA1-Fc,其氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示。

      2.權(quán)利要求1所述融合蛋白對(duì)應(yīng)的基因。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因,所述基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

      4.權(quán)利要求1所述的融合蛋白或權(quán)利要求2所述的基因在制備禽流感疫苗中的應(yīng)用。

      5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用,所述的禽流感疫苗為禽流感H5N1疫苗。

      6.權(quán)利要求1所述的融合蛋白或權(quán)利要求2所述的基因在制備提高雞免疫力的生物制劑中的應(yīng)用。

      7.權(quán)利要求1所述的融合蛋白或權(quán)利要求2所述的基因在制備提高雞HI抗體的生物制劑中的應(yīng)用。

      8.權(quán)利要求1所述的融合蛋白的制備方法,包括:

      1). 雞IgY Fc基因的擴(kuò)增:按常規(guī)方案提取雞脾臟組織RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,獲得CDNA,再以CDNA為模板,利用Fc-up(含42bp Linker序列)與Fc-down引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到Linker-Fc基因片段;

      Fc-up:5'-GGATCAGGCGGGGGTGGGTCCGGAGGAGGTGGCTCGGGATCTCAGGTCTGCCGGGTAGA-3',斜體劃線部分為L(zhǎng)inker;

      Fc-down:5'-CCGCTCGAGTTATTTACCAGCCTGTTTCTGCAGCG-3',斜體劃線部分為Xho?

      2). 禽流感病毒H5N1 HA1的擴(kuò)增:pFAST HTb-sHA1-Linker-wFc重組質(zhì)粒為模板,利用sHA1-up與sHA1-down(含42bp Linker序列)引物,用PCR擴(kuò)增得到sHA1-Linker 基因片段;

      Fc-up:5'-GGATCAGGCGGGGGTGGGTCCGGAGGAGGTGGCTCGG

      GATCTCAGGTCTGCCGGGTAGA-3',斜體劃線部分為L(zhǎng)inker;

      Fc-down:5'-CCGCTCGAGTTATTTACCAGCCTGTTTCTGCAGCG-3',斜體劃線部分為Xho?酶切位點(diǎn);

      3). sHA1-Fc融合基因的擴(kuò)增:以回收的sHA1-Linker和Linker-Fc片段為模板,利用sHA1-up與Fc-down引物,用重疊PCR擴(kuò)增得到sHA1-Linker-Fc基因片段,簡(jiǎn)稱sHA1-Fc基因,其序列為SEQ ID NO.1所示;

      4). 重組質(zhì)粒pFastBac HTB-sHA1-Fc的構(gòu)建:將回收的sHA1-Linker-Fc基因片段插入到真核表達(dá)載體pFastBac HTB的Xba?和Xho?酶切位點(diǎn)之間,獲得的重組質(zhì)粒命名為pFastBac HTB-sHA1-Fc;

      5). 桿粒Bacmid的獲得:pFastBac HTB-sHA1-Fc轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH10Bac,挑取陽(yáng)性菌落,提取陽(yáng)性桿粒Bacmid進(jìn)行PCR鑒定,獲得重組陽(yáng)性桿粒Bacmid;

      6). 利用重組陽(yáng)性桿粒Bacmid轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,收獲感染的SF9細(xì)胞,經(jīng)純化后獲得融合蛋白sHA1-Fc,其序列為SEQ ID NO.2所示。

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