本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪類化合物及其用途，確切地說，涉及該類化合物作為腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑在制備抗腫瘤的藥物方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是威脅人類健康與生命的嚴(yán)重疾病，是導(dǎo)致人類死亡的主要原因之一。尋找和發(fā)現(xiàn)治療與預(yù)防腫瘤的新藥是當(dāng)前世界醫(yī)藥研究的熱點方向。

Combretastatin A-4(CA-4)是從南非柳樹中分離得到的順式二苯乙烯類天然產(chǎn)物，其化學(xué)名稱為(Z)-2-甲氧基-5-(3,4,5-三甲氧基苯乙烯基)苯酚。CA-4為微管蛋白聚合抑制劑，呈現(xiàn)很強的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性，由于其水溶性差，現(xiàn)已制成前藥CA-4磷酸酯鹽(CA-4-P),并以進(jìn)入三期臨床試驗研究階段。以CA-4為先導(dǎo)化合物進(jìn)行抗腫瘤活性研究目前已經(jīng)有大量報道，但是大多數(shù)合成的新化合物存在活性不夠突出或毒性較大或合成比較困難等缺點。五元雜環(huán)并六元雜環(huán)類化合物作為CA-4類似物已有文獻(xiàn)報道，具有代表性的化合物結(jié)構(gòu)如下所示。(相關(guān)報道參見：Lu Y.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2009,52,1701；Chen J.J.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2010,53,7414；Xiao M.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2013,56,3318；Romagnoli R.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2011,54,5144；Lu Y.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2014,57,7355；Hwang D.J.,et al.ACS Medicinal Chemistry Letter,2015,6,993.)

本文涉及的3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪類化合物作為抗腫瘤活性化合物的研究目前尚未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于設(shè)計、合成具有良好的腫瘤細(xì)胞增殖活性的CA-4的結(jié)構(gòu)類似物，即以[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪為中間連接片段的CA-4類似物；所制備的化合物在體內(nèi)外抗腫瘤活性測試中顯現(xiàn)良好的結(jié)果。

本發(fā)明的目標(biāo)產(chǎn)物可用結(jié)構(gòu)通式式I來表示：

本發(fā)明優(yōu)選涉及定義如下的通式I的化合物：

其中，通式I中，R₁-R₃獨立地為C₁-C₆烷氧基，R₄-R₆各自獨立地為氫、鹵素取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷基、羥基、C₁-C₆烷基氧基、C₁-C₆烷基硫基、芐氧基、烯丙氧基、氨基、C₁-C₆烷基氨基、二C₁-C₆烷基氨基、鹵素、硝基；

或者，R₁為氫，R₆為C₁-C₆烷氧基，R₅為芐氧基、羥基、氨基、鹵素，R₂-R₄同時為C₁-C₆烷氧基、或者相鄰的兩個取代基為C₁-C₆烷氧基另外一個為氫、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂O-從而構(gòu)成五元環(huán)、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂CH₂O-從而構(gòu)成六元環(huán)、或者其中一個取代基為C₁-C₆烷氧基另外兩個為氫。

本發(fā)明優(yōu)選涉及定義如下的通式I的化合物：

其中，通式I中，R₁-R₃獨立地為C₁-C₆烷氧基，R₄-R₆各自獨立地為氫、鹵素取代的C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基、羥基、C₁-C₄烷基氧基、C₁-C₄烷基硫基、芐氧基、烯丙氧基、氨基、C₁-C₄烷基氨基、二C₁-C₄烷基氨基、鹵素、硝基；

或者，R₁為氫，R₆為C₁-C₆烷氧基，R₅為芐氧基、羥基、氨基、鹵素，R₂-R₄同時為C₁-C₄烷氧基、或者相鄰的兩個取代基為C₁-C₄烷氧基另外一個為氫、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂O-從而構(gòu)成五元環(huán)、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂CH₂O-從而構(gòu)成六元環(huán)、或者其中一個取代基為C₁-C₄烷氧基另外兩個為氫。

本發(fā)明優(yōu)選涉及定義如下的通式I的化合物：

其中，通式I中，R₁-R₃獨立地為C₁-C₄烷氧基，R₄-R₆各自獨立地為氫、鹵素取代的C₁-C₄烷基、C₁-C₄烷基、羥基、C₁-C₄烷基氧基、C₁-C₄烷基硫基、芐氧基、烯丙氧基、氨基、C₁-C₄烷基氨基、二C₁-C₄烷基氨基、氟、氯、溴、碘、硝基；

或者，R₁為氫，R₆為C₁-C₄烷氧基，R₅為芐氧基、羥基、氨基、鹵素，R₂-R₄同時為C₁-C₄烷氧基、或者相鄰的兩個取代基為C₁-C₄烷氧基另外一個為氫、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂O-從而構(gòu)成五元環(huán)、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂CH₂O-從而構(gòu)成六元環(huán)、或者其中一個取代基為C₁-C₄烷氧基另外兩個為氫。

本發(fā)明優(yōu)選涉及定義如下的通式I的化合物：

其中，通式I中，R₁-R₃獨立地為C₁-C₃烷氧基，R₄-R₆各自獨立地為氫、鹵素取代的C₁-C₄烷基、C₁-C₃烷基、羥基、C₁-C₃烷基氧基、C₁-C₃烷基硫基、芐氧基、烯丙氧基、氨基、氟、氯、溴、碘、硝基；

或者，R₁為氫，R₆為C₁-C₃烷氧基，R₅為芐氧基、羥基、氨基、氟，R₂-R₄同時為C₁-C₃烷氧基、或者相鄰的兩個取代基為C₁-C₃烷氧基另外一個為氫、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂O-從而構(gòu)成五元環(huán)、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂CH₂O-從而構(gòu)成六元環(huán)、或者其中一個取代基為C₁-C₃烷氧基另外兩個為氫。

本發(fā)明優(yōu)選涉及定義如下的通式I的化合物：

其中，通式I中，R₁-R₃獨立地為C₁-C₃烷氧基，R₄-R₆各自獨立地為氫、三氟甲基、甲基、羥基、甲氧基、甲硫基、芐氧基、氨基、氟、氯、溴、硝基；

或者，R₁為氫，R₆為甲氧基，R₅為芐氧基、羥基、氨基、氟，R₂-R₄同時為甲氧基、或者相鄰的兩個取代基為甲氧基另外一個為氫、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂O-從而構(gòu)成五元環(huán)、或者相鄰的兩個取代基為-OCH₂CH₂O-從而構(gòu)成六元環(huán)、或者其中一個取代基為甲氧基另外兩個為氫。

本發(fā)明的化合物還包括上述結(jié)構(gòu)式所示衍生物所形成的在藥學(xué)上可接受的無毒鹽及其水合物，這些藥學(xué)上可接受的無毒鹽包括該衍生物與酸所形成的鹽。所述的酸可以為鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸的無機酸或選自乙酸、檸檬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸、蘋果酸的有機酸。所述水合物的結(jié)晶水?dāng)?shù)目為0～16中的任意實數(shù)。

本發(fā)明優(yōu)選的部分化合物結(jié)構(gòu)如下：

化合物1

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物2

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物3

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-氟苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物4

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物5

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲硫基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物6

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-三氟甲基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物7

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3,4-二氟苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物8

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物9

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物10

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物11

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物12

3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物13

3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物14

3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物15

3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物16

3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物17

3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物18

3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物19

3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物20

3-(3,4-二甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物21

3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

化合物22

3-(3-甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪化合物23

3-(4-甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪

發(fā)明的3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪類化合物可以按照以下反應(yīng)路線合成得到：

以自行制備的化合物A(制備方法參見：Cheeseright T.J.,et al.Journal of Medicinal Chemistry,2009,52,4200)與各種取代的溴代苯乙酮B為原料，以無水乙醇為溶劑，微波輻射輔助加熱反應(yīng)1-10h；反應(yīng)完后，用氨水調(diào)pH為堿性，過濾干燥得終產(chǎn)品C，收率50-95％。

其中，化合物中含有氨基的3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪類化合物可由相應(yīng)的化合物中含有硝基的化合物經(jīng)還原反應(yīng)制備，還原劑為無水三氯化鐵/水合肼/活性炭體系；化合物中含有羥基的3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪類化合物可由相應(yīng)的化合物中含有芐氧基的化合物經(jīng)去芐基化反應(yīng)制備，去芐基化反應(yīng)試劑為四氯化鈦。

具體實施方式

通過下述實例將有助于理解本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不限于所舉實例。

本發(fā)明所用試劑均為市售，所用微波型號為XH-300A祥鵠電腦微波超聲波組合合成/萃取儀，超聲儀為KQ-400KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，核磁共振譜由AVANCE-400、Bruker ARX-300、Bruker ARX-400、Bruker ARX-600傅立葉變換核磁共振波譜儀測定，質(zhì)譜由Brukee Esqure 2000、Shimadzu GCMS-QP5050A型質(zhì)譜儀測定。

實施例1：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物1)的制備：

將中間體4-氨基-5-(2,3,4-三甲氧基苯基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醇0.28g(1mmol)和中間體2-溴-4'-甲基苯乙酮0.23g(1mmol)加入到50mL茄型瓶中，用無水乙醇作溶劑，微波輻射輔助加熱反應(yīng)1h；TLC檢查反應(yīng)完后，用氨水調(diào)pH為堿性，過濾干燥得粗產(chǎn)品，色譜方法純化，得到化合物1；黃色固體，收率79％。M.p.:89-92℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.71(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(d,J＝8.6Hz,1H),7.24(d,J＝8.2Hz,2H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),3.97(s,2H),3.93(s,3H),3.87(s,3H),3.76(s,3H),2.39(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ155.9,152.8,152.7,151.7,142.5,142.0,141.3,130.7,129.7(2C),127.2(2C),126.3,113.0,107.0,61.6,60.9,56.1,23.4,21.5；ESI-MS:m/z＝397.3[M+H]⁺,419.3[M+Na]⁺。

實施例2：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-氯苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物2)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物2；黃色固體，收率82％。M.p.:88-90℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.75(d,J＝8.6Hz,2H),7.39(d,J＝8.6Hz,2H),7.29(d,J＝8.7Hz,1H),6.77(d,J＝8.7Hz,1H),3.98(s,2H),3.92(s,3H),3.86(s,3H),3.74(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ155.9,152.6,151.7,151.7,141.9,141.0,138.0,131.9,129.2(2C),128.5(2C),126.1,112.8,107.0,61.5,60.8,56.0,23.3；ESI-MS:m/z＝417.3[M+H]⁺,439.2[M+Na]⁺。

實施例3：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-氟苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物3)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物3；白色固體，收率65％。M.p.:92-94℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.81-7.85(m,2H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),7.11-7.15(m,2H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),3.98(s,2H),3.93(s,3H),3.87(s,3H),3.77(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ166.1,163.6,156.0,152.7,151.8,142.0,141.1,129.7,126.5(d,J＝8.8Hz,2C),126.2,116.2(d,J＝21.8Hz,2C),112.9,107.1,61.6,60.9,56.1,23.5；ESI-MS:m/z＝401.3[M+H]⁺,423.2[M+Na]⁺。

實施例4：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物4)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物4；黃色固體，收率80％。M.p.:92-95℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.6Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),6.75(d,J＝8.6Hz,1H),3.95(s,2H),3.90(s,3H),3.84(s,3H),3.81(s,3H),3.74(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ162.5,155.9,152.7,152.5,151.6,142.0,141.3,129.0(2C),126.2,125.7,114.4(2C),113.1,107.0,61.6,60.9,56.1,55.5,23.3；ESI-MS:m/z＝413.3[M+H]⁺,432.3[M+Na]⁺。

實施例5：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-甲硫基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物5)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物5；紅色固體，收率75％。M.p.:86-88℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.72(d,J＝8.5Hz,2H),7.31(d,J＝8.6Hz,1H),7.23(d,J＝8.5Hz,2H),6.77(d,J＝8.6Hz,1H),3.96(s,2H),3.92(s,3H),3.86(s,3H),3.75(s,3H),2.49(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ155.9,152.7,152.3,151.7,144.4,142.0,129.5,127.5(3C),126.2,125.6(2C),113.0,107.0,61.6,60.9,56.1,23.2,14.9；ESI-MS:m/z＝429.0[M+H]⁺。

實施例6：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(4-三氟甲基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物6)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物6；黃色固體，收率67％。M.p.:95-96℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.94(d,J＝8.3Hz,2H),7.68(d,J＝8.3Hz,2H),7.30(d,J＝8.6Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),4.04(s,2H),3.92(s,3H),3.86(s,3H),3.74(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ156.1,152.6,152.0,151.5,142.0,141.1,137.0,133.2(d,J＝29.8Hz),127.7(2C),126.2,126.0,124.9,122.2,112.8,107.1,61.6,60.9,56.1,23.5；ESI-MS:m/z＝451.0[M+H]⁺。

實施例7：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3,4-二氟苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物7)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物7；黃色固體，收率66％。M.p.:95-97℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.68-7.72(m,1H),7.54-7.56(m,1H),7.31(d,J＝8.6Hz,1H),7.22-7.26(m,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,1H),3.96(s,2H),3.94(s,3H),3.89(s,3H),3.76(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ156.0,152.6,151.8,150.5,142.0,130.6,126.1(2C),123.8,117.9,117.8,116.5,116.4,112.8,107.1,61.5,60.8,56.0,23.2；ESI-MS:m/z＝419.3[M+H]⁺,441.2[M+Na]⁺。

實施例8：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物8)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物8；黃色固體，收率71％。M.p.:92-94℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.62(d,J＝12.2Hz,1H),7.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.32(d,J＝8.6Hz,1H),6.97-7.01(m,1H),6.79(d,J＝8.6Hz,1H),3.93(s,8H),3.88(s,3H),3.76(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ155.0,152.6,151.7,150.7,150.3,150.1,149.9,149.8,141.0,140.1,125.2,123.1(d,J＝3.0Hz),113.7(d,J＝20.0Hz),111.9,106.1,60.6,59.9,55.3,55.1,22.1；ESI-MS:m/z＝431.3[M+H]⁺,453.3[M+Na]⁺。

實施例9：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物9)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物9；黃色固體，收率79％。M.p.:134-136℃；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆):δ8.39(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(dd,J＝8.9Hz,J＝2.4Hz,1H),7.52(d,J＝8.9Hz,1H),7.24(d,J＝8.7Hz,1H),6.96(d,J＝8.7Hz,1H),4.45(s,2H),3.99(s,3H),3.88(s,3H),3.79(s,3H),3.70(s,3H)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ156.0,154.7,153.3,152.5,151.0,141.9,141.6,139.6,133.5,126.4,125.9,124.5,115.9,112.9,108.1,61.8,60.8,57.6,56.4,23.1；ESI-MS:m/z＝458.3[M+H]⁺,480.2[M+Na]⁺。

實施例10：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物10)的制備：

將0.23g(0.5mmol)化合物9加入到50mL茄型瓶中，加入活性炭20mg和三氯化鐵20mg作催化劑，用無水乙醇作溶劑，攪拌下滴加80％水合肼0.1mL，回流反應(yīng)3小時；TLC檢測反應(yīng)完畢后，過濾除去活性炭，將無水乙醇蒸干，加水，用乙酸乙酯萃取，將有機層合并干燥，減壓蒸餾得到粗品，色譜分離得化合物10；黃色固體，收率74％。M.p.:93-94℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.30(d,J＝8.7Hz,1H),7.22(d,J＝2.0Hz,1H),7.14(dd,J＝8.7Hz,J＝2.0Hz,1H),6.76(d,J＝8.6Hz,2H),3.91(s,5H),3.87(s,3H),3.85(s,3H),3.76(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ155.8,153.0,152.7,151.6,150.3,142.0,136.9,129.8,126.2,126.0,118.5,113.3,112.6,109.8,107.0,61.6,60.9,56.1,55.7,23.3；ESI-MS:m/z＝428.3[M+H]⁺,450.3[M+Na]⁺。

實施例11：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物11)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物11；灰色固體，收率82％。M.p.:85-86℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.45(d,J＝1.8Hz,1H),7.32-7.36(m,4H),7.26-7.28(m,3H),6.90(d,J＝8.6Hz,1H),6.80(d,J＝8.6Hz,1H),5.10(s,2H),3.93(s,6H),3.89(s,2H),3.86(s,3H),3.71(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ154.9,152.0,151.7,151.2,150.6,147.3,141.0,140.3,135.3,127.6(2C),127.1,126.4(2C),125.2,124.9,120.5,112.2,111.2,110.0,105.9,70.1,60.5,59.8,55.1(2C),22.2；ESI-MS:m/z＝519.2[M+H]⁺,541.1[M+Na]⁺。

實施例12：3-(2,3,4-三甲氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物12)的制備：

將0.26g(0.5mmol)化合物11加入到50mL茄型瓶中，用二氯甲烷作溶劑，冰浴攪拌下滴加四氯化鈦0.5mL，于0℃下反應(yīng)半小時；TLC檢測反應(yīng)完畢后，加水淬滅，用二氯甲烷萃取，將有機層合并干燥，減壓蒸餾得到粗品，色譜分離得化合物12；棕色固體，收率83％。M.p.:88-89℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.48(s,1H),7.39(dd,J＝8.6Hz,J＝2.3Hz,1H),7.33(d,J＝2.3Hz,1H),7.21(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝8.6Hz,1H),6.96(d,J＝8.6Hz,1H),4.35(s,2H),3.88(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.72(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ155.9,155.0,152.6,151.7,151.0,147.2,142.0,142.0,126.5,126.0,120.7,113.6,113.3,112.1,108.0,61.9,60.9,56.5,56.1,23.1；ESI-MS:m/z＝429.1[M+H]⁺,451.1[M+Na]⁺。

實施例13：3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物13)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物13；棕色固體，收率64％。M.p.:93-94℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.58(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.43(m,4H),7.30-7.33(m,3H),6.97(d,J＝8.2Hz,1H),5.14(s,2H),3.96(s,3H),3.91-3.93(m,5H),3.87(s,6H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ153.5,153.2(3C),148.7,139.9,136.2,128.7(2C),128.3(2C),127.5(2C),125.9,121.8(2C),121.5,112.5,111.3,105.7(2C),71.6,61.0,56.4(2C),56.2,23.0；ESI-MS:m/z＝519.2[M+H]⁺,541.1[M+Na]⁺。

實施例14：3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物14)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例12相同的方法制備化合物14；黃色固體，收率60％。M.p.:95-97℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.53(s,1H),7.56(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(dd,J＝8.5Hz,J＝2.2Hz,1H),7.38(s,2H),7.09(d,J＝8.5Hz,1H),4.36(s,2H),3.86(s,3H),3.85(s,6H),3.76(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ155.8,153.4,151.9,151.5,147.5,143.0,139.5,126.0,121.8,120.8,113.6,112.1,105.6,60.7,56.4(2C),56.2,22.7；ESI-MS:m/z＝429.1[M+H]⁺,451.1[M+Na]⁺。

實施例15：3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物15)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物15；淺黃色固體，收率74％。M.p.:115-118℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.87-7.93(m,2H),7.39(s,3H),4.40(s,2H),3.94(s,3H),3.85(s,6H),3.75(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ155.0,153.4(2C),151.4,150.8,139.6,126.3,125.4,121.7,115.1,114.9,114.5,105.7(2C),60.7,56.9,56.4(2C),22.8；ESI-MS:m/z＝431.1[M+H]⁺,453.1[M+Na]⁺。

實施例16：3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物16)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例10相同的方法制備化合物16；黃褐色固體，收率65％。M.p.:112-115℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.40-7.41(m,3H),7.26(dd,J＝8.4Hz,J＝2.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),5.03(s,2H),4.33(s,2H),3.85(s,3H),3.84(s,6H),3.75(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ156.2,153.3(2C),151.3,150.3,143.0,139.4,138.8,125.9,121.8,117.8,111.0,110.4,105.5(2C),60.6,56.3(2C),56.0,22.7；ESI-MS:m/z＝428.3[M+H]⁺,450.3[M+Na]⁺。

實施例17：3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物17)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物17；淺黃色固體，收率76％。M.p.:93-95℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.85(s,1H),7.83(s,1H),7.54(dd,J＝8.2Hz,J＝1.6Hz,1H),7.50(d,J＝1.6Hz,1H),7.35-7.39(m,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,1H),6.13(s,2H),4.37(s,2H),3.94(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ155.1,151.7,150.7,149.4,148.0,142.6,126.3,125.5,123.1,120.1,115.3,115.1,114.5,109.1,108.2,102.2,56.8,22.9；ESI-MS:m/z＝385.1[M+H]⁺,407.1[M+Na]⁺。

實施例18：3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-芐氧基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物18)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例1相同的方法制備化合物18；淺黃色固體，收率81％。M.p.:86-88℃；¹H-NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.64-7.65(m,2H),7.59(d,J＝1.6Hz,1H),7.39-7.45(m,3H),7.30-7.37(m,3H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.02(s,2H),5.19(s,2H),3.96(s,3H),3.90(s,2H)；¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃):δ153.3,153.1,149.3,148.6,147.8,136.4,128.7(3C),128.2,127.5(2C),127.4,125.8,123.0,121.7,120.1,111.8,111.1,108.5(2C),101.5,71.1,56.2,22.9；ESI-MS:m/z＝473.0[M+H]⁺,945.1[2M+H]⁺。

實施例19：3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物19)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例12相同的方法制備化合物19；黃色固體，收率68％。M.p.:85-87℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ9.55(s,1H),7.56(dd,J＝8.2Hz,J＝1.6Hz,1H),7.50(d,J＝1.6Hz,1H),7.45-7.47(m,2H),7.08-7.13(m,2H),6.14(s,2H),4.33(s,2H),3.86(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ156.0,151.8,151.6,149.3,148.0,147.3,142.9,126.1,123.0,120.8,120.3,113.9,112.2,109.1,108.2,102.1,56.2,22.9；ESI-MS:m/z＝383.1[M+H]⁺。

實施例20：3-(3,4-二甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物20)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例10相同的方法制備化合物20；淺黃色固體，收率68％。M.p.:213-215℃；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆):δ7.66(d,J＝8.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.36(s,1H),7.24(dd,J＝8.5Hz,J＝1.6Hz,1H),7.16(d,J＝8.9Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),5.07(s,2H),4.32(s,2H),3.86(s,3H),3.84(s,3H),3.83(s,3H)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ156.2,151.5,150.7,150.2,148.9,142.6,138.7,126.1,121.2,119.0,117.7,112.1,111.2(2C),110.4,55.9,55.8,55.3,22.8；ESI-MS:m/z＝398.4[M+H]⁺,420.3[M+Na]⁺。

實施例21：3-(3,4-亞甲二氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物21)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例10相同的方法制備化合物21；黃色固體，收率78％。M.p.:88-90℃；¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.58(dd,J＝8.2Hz,J＝1.4Hz,1H),7.49(d,J＝1.4Hz,1H),7.28(d,J＝2.1Hz,1H),7.22(dd,J＝8.4Hz,J＝2.1Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.13(s,2H),5.06(s,2H),4.30(s,2H),3.85(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):δ156.4,151.5,150.2,149.2,147.9,142.9,138.6,126.1,122.9,120.3,117.7,111.4,110.5,109.0,108.1,102.0,56.0,23.0；ESI-MS:m/z＝382.0[M+H]⁺。

實施例22：3-(3-甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物22)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例10相同的方法制備化合物22；紅棕色固體，收率65％。M.p.:138-140℃；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆):δ7.64(d,J＝7.8Hz,1H),7.60(s,1H),7.48-7.51(m,1H),7.34(d,J＝2.2Hz,1H),7.24(dd,J＝8.4Hz,J＝2.2Hz,1H),7.12(dd,J＝8.2Hz,J＝2.1Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),5.07(s,2H),4.34(s,2H),3.86(s,3H),3.83(s,3H)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ159.6,156.5,151.5,150.2,143.3,138.7,130.3,127.7,126.0,120.5,117.8,116.5,113.1,111.3,110.4,55.9,55.6,22.9；ESI-MS:m/z＝368.1[M+H]⁺。

實施例23：3-(4-甲氧基苯基)-6-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二嗪(化合物23)的制備：

除了使用相應(yīng)的原料外，以實施例10相同的方法制備化合物23；淺黃色固體，收率71％。M.p.:214-215℃；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆):δ8.00(d,J＝8.9Hz,2H),7.32(d,J＝2.3Hz,1H),7.23dd,J＝8.5Hz,J＝2.3Hz,1H),7.14(d,J＝8.9Hz,2H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),5.09(s,2H),4.32(s,2H),3.86(s,3H),3.85(s,3H)；¹³C-NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ161.0,156.3,151.6,150.2,142.5,138.7,129.7(2C),126.1,119.0,117.8,114.6(2C),111.3,110.4,55.9,55.7,22.9；ESI-MS:m/z＝368.3[M+H]⁺,390.3[M+Na]⁺。

實施例24：本發(fā)明的化合物的體外抗腫瘤活性測試

體外活性測試方法和結(jié)果如下：

其中,選用臨床常用的抗腫瘤藥物阿霉素(ADM)為陽性對照實驗組。

抗腫瘤活性體外篩選試驗-1

篩選方法：四氮唑鹽(micoculture tetrozolium,MTT)還原法

細(xì)胞株：人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901cell line

作用時間：72h

各化合物10μg/mL劑量下對腫瘤生長的抑制率(％)見表-1。

抗腫瘤活性體外篩選試驗-2

篩選方法：四氮唑鹽(micoculture tetrozolium,MTT)還原法

細(xì)胞株：人口腔上皮癌細(xì)胞株KB cell line

作用時間：72h

各化合物10μg/mL劑量下對腫瘤生長的抑制率(％)見表-1。

抗腫瘤活性體外篩選試驗3

篩選方法：四氮唑鹽(micoculture tetrozolium,MTT)還原法

細(xì)胞株：人纖維肉瘤細(xì)胞株HT-1080cell line

作用時間：72h

各化合物10μg/mL劑量下對腫瘤生長的抑制率(％)見表-1。

實施例25：本發(fā)明的化合物的動物體內(nèi)抗腫瘤活性測試

選擇體外活性較好的化合物1和化合物22進(jìn)行了動物體內(nèi)抗腫瘤活性測試，所用模型為小鼠S-180肉瘤模型，陽性對照藥物為臨床常用的抗腫瘤藥物氟尿嘧啶(Fluorouracil)。

實驗方法：選用18-22克雌性昆明小鼠及生長良好的7-11天的S-180瘤種，將瘤組織制成細(xì)胞懸液，接種至小鼠右側(cè)腋部皮下，約1.0-2.0×10⁶細(xì)胞/只，接種24小時后隨機分籠，腹腔注射給藥連續(xù)7天。停藥后24小時處死動物，稱體重、瘤重，計算各組平均瘤重，按如下公式求出腫瘤抑制率并進(jìn)行t檢驗。

腫瘤抑制率＝[(空白對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/(空白對照組平均瘤重)]×100％

實驗結(jié)果見表-2。

實施例26：本發(fā)明的化合物的動物體內(nèi)急性毒性初步測試

選擇動物體內(nèi)抗腫瘤活性較好的化合物1和化合物22進(jìn)行了動物體內(nèi)急性毒性測試。

選用18-22克雌性昆明小鼠各10只，分別腹腔注射給藥化合物1、化合物22各500mg/kg后，出現(xiàn)自發(fā)運動抑制，扭體，并對體重增長、攝食量、攝水量的抑制，但未見小鼠死亡。停藥數(shù)日后，存活動物恢復(fù)正常。腹腔給藥的LD₅₀值大于500mg/kg。

表-1

表-2