1.一種殼聚糖微球的制備方法,其特征在于,所述殼聚糖微球的制備方法包括如下步驟:
(1) 除鈣:將昆蟲(chóng)甲殼粉碎后,置于質(zhì)量濃度為10-20%的稀酸中于30-50℃浸煮4-6小時(shí),過(guò)濾,取濾餅水洗3-5次后干燥得脫鈣產(chǎn)物A待用;
(2) 脫蛋白:將脫鈣產(chǎn)物A、復(fù)合酶和水置于反應(yīng)容器中,控制反應(yīng)液PH為7.5-8.5,于40-55℃攪拌水解2-3小時(shí)后,過(guò)濾,取濾餅水洗干燥得脫蛋白產(chǎn)物B待用;所述復(fù)合酶為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和堿性脂肪酶的混合物,三者的質(zhì)量比為1:1:2;
(3) 純化:將脫蛋白產(chǎn)物B置于混合溶劑中,并加入中性鹽,于60-80℃攪拌溶解1-3小時(shí)后,過(guò)濾,濾液經(jīng)減壓干燥去除溶劑,再經(jīng)水洗去除中性鹽,干燥得所需甲殼素;所述混合溶劑為己酸、乙二酸和吡啶的混合物,三者的質(zhì)量比為1:0.8:0.5;
(4) 脫乙酰:將步驟(3)所得甲殼素和15-20%NaOH水溶液加入石英玻璃反應(yīng)容器中,置于紫外光下照射2-3小時(shí),同時(shí)予以超聲處理,反應(yīng)結(jié)束后降溫至室溫,離心,沉淀物水洗至中性,于50-60℃干燥24小時(shí)后得殼聚糖;
(5) 殼聚糖溶液制備:將步驟(3)所得殼聚糖加入3%乙酸水溶液中,攪拌至完全溶解;
(6) 乳化交聯(lián)劑制備:將司盤(pán)80、液體石蠟和戊二醛混合均勻得乳化交聯(lián)劑;
(7) 殼聚糖微球的制備:將步驟(5)所得殼聚糖溶液滴加入步驟(6)所得乳化交聯(lián)劑中,邊加邊攪拌,于30-50min內(nèi)滴加完畢后,保持30-40℃繼續(xù)攪拌1-2小時(shí)后,攪拌速度為800-1000r/min,離心,取沉淀物采用熱無(wú)水乙醇洗滌3次后,真空干燥得殼聚糖微球。
2.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述稀酸為鹽酸、硫酸或磷酸。
3.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述稀酸質(zhì)量為昆蟲(chóng)甲殼質(zhì)量的20-30倍。
4.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述脫鈣產(chǎn)物A、復(fù)合酶和水的質(zhì)量比為1:0.05-0.08:10-30。
5.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(3)中所述脫蛋白產(chǎn)物B、混合溶劑和中性鹽的質(zhì)量比為1:15-20:0.1-0.3。
6.如權(quán)利要求1或5所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,所述中性鹽為NaCl、KCl、Na2SO4、MgCl2或MgSO4。
7.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(4)中所述甲殼素與NaOH水溶液質(zhì)量比為1:8-15。
8.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(5)中所述乙酸水溶液的質(zhì)量為殼聚糖質(zhì)量的8-10倍。
9.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(6)中所述司盤(pán)80、液體石蠟和戊二醛的質(zhì)量比為1:10-20:2-3。
10.如權(quán)利要求1所述的殼聚糖微球制備方法,其特征在于,步驟(7)中所述殼聚糖溶液與乳化交聯(lián)劑的質(zhì)量比為1:8-10。