本發(fā)明涉及合成醫(yī)藥化工領(lǐng)域，主要涉及一種含C-3全取代氧化吲哚衍生物及其快速、高選擇性的化學(xué)合成方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

氧化吲哚衍生物是天然產(chǎn)物和合成重要藥物不可或缺的重要骨架結(jié)構(gòu)單元，在許多海洋生物和真菌代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)中均含有此類骨架結(jié)構(gòu)，具有抗菌、抗腫瘤、抗癌和酶抑制等生物活性，因此對其合成方法的研究一直是天熱產(chǎn)物研究領(lǐng)域和藥物化學(xué)領(lǐng)域的熱點課題。近年來，化學(xué)家們也發(fā)現(xiàn)了很多氧化吲哚類衍生物的合成方法，如Overman在合成膠枝菌素C(Gliocladine C)時，使用Fu催化(Angew.Chem.Int.Ed.,2003,42,3921-3924)才得到氧化吲哚這一結(jié)構(gòu)骨架，(J.Am.Chem.Soc.,2011,133,6549-6552)；而Stephenson使用的是光敏催化劑Ru才得以完成該結(jié)構(gòu)骨架的構(gòu)建(Angew.Chem.Int.Ed.,2011,50,9655-9659)。之后陸續(xù)也有人發(fā)現(xiàn)了新合成方法，但這些新合成方法和路線均有步驟長、成本高、耗時長、產(chǎn)率低、操作及后處理煩瑣等缺點，在工業(yè)化方面很難大規(guī)模的應(yīng)用，經(jīng)濟(jì)價值有限。因此，上述方法都不利于含C-3全取代氧化吲哚衍生物在有機(jī)合成中的應(yīng)用及其工業(yè)化合成。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，提出一種含C-3全取代氧化吲哚衍生物及其合成方法，所述方法制備路線短、操作簡單、效率高，所述C-3全取代氧化吲哚衍生物為C-3全取代季碳手性中心化合物。本發(fā)明的方法以重氮化合物、2-((1'-芳基)(1'-叔丁氧羰氧基))甲基丙烯酸酯(MBH carbonate)為原料，在手性有機(jī)堿和烯丙基氯化鈀[Pd(allyl)Cl]₂共催化作用下，制備得到所述含C-3全取代氧化吲哚衍生物。相比于已報道的合成方法，本發(fā)明以廉價易得的化合物為原料，具有反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)路線短、反應(yīng)快、成本低、廢物少、操作簡單、原子經(jīng)濟(jì)性高等特點，本發(fā)明的合成方法在藥物合成領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。

本發(fā)明提出的含C-3全取代氧化吲哚衍生物，如式(I)所示，

其中，

Ar為芳基，選自于苯基、鹵素取代的苯基、硝基取代的苯基、C1-C10烷基取代的苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、鹵素、C1-C10烷基、硝基、甲氧基；

R₂為C1-C10烷基、芐基；

R₃為C1-C10烷基、芐基；

R₄位C1-C10烷基。

優(yōu)選地，

Ar為芳基，選自于苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、3-氯苯基、4-硝基苯基、4-氟苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、4-氯、4-溴、4-甲基、4-硝基、4-氟、4-甲氧基；

R₂為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₃為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₄位烷基，選自于甲基、叔丁基。

進(jìn)一步優(yōu)選地，

Ar為芳基，選自于苯基、4-溴苯基、4-硝基苯基、4-氟苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、4-溴；

R₂為烷基，選自于甲基；

R₃為烷基，選自于甲基；

R₄位烷基，選自于甲基、叔丁基。

本發(fā)明提出一種含C-3全取代氧化吲哚衍生物的合成方法，以式(1)所示重氮化合物、式(2)所示2-((1'-芳基)(1'-叔丁氧羰氧基))甲基丙烯酸酯(MBH carbonate)為原料，在有機(jī)溶劑中，在手性有機(jī)堿和金屬催化劑共催化作用下，經(jīng)一步反應(yīng)制備得到式(I)所示含C-3全取代氧化吲哚衍生物。

具體地，所述方法為：將式(2)所示2-((1'-芳基)(1'-叔丁氧羰氧基))甲基丙烯酸酯(MBH carbonate)、手性有機(jī)堿和金屬催化劑溶于有機(jī)溶劑，配制成混合溶液；將式(1)所示重氮化合物溶于有機(jī)溶劑配制成重氮化合物溶液；將重氮化合物溶液加入前述混合溶液；經(jīng)反應(yīng)、純化得到高對映選擇性和高非對映選擇性的式(I)所示含C-3全取代氧化吲哚衍生物，所述合成反應(yīng)如式(II)所示：

其中，

Ar為芳基，選自于苯基、鹵素取代的苯基、硝基取代的苯基、C1-C10烷基取代的苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、鹵素、C1-C10烷基、硝基、甲氧基；

R₂為C1-C10烷基、芐基；

R₃為C1-C10烷基、芐基；

R₄位C1-C10烷基。

優(yōu)選地，

Ar為芳基，選自于苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、3-氯苯基、4-硝基苯基、4-氟苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、4-氯、4-溴、4-甲基、4-硝基、4-氟、4-甲氧基；

R₂為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₃為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₄位烷基，選自于甲基、叔丁基。

進(jìn)一步優(yōu)選地，

Ar為芳基，選自于苯基、4-溴苯基、4-硝基苯基、4-氟苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、4-溴；

R₂為烷基，選自于甲基；

R₃為烷基，選自于甲基；

R₄位烷基，選自于甲基、叔丁基。

本發(fā)明方法中，所述MBH carbonate、式(1)所示重氮化合物、手性有機(jī)堿和金屬催化劑的投料量摩爾比為MBH carbonate：式(1)所示重氮化合物：手性有機(jī)堿：金屬催化劑＝1.0:0.8～1.5:0.15～0.30:0.01～0.08，優(yōu)選地，MBH carbonate：式(1)所示重氮化合物：手性有機(jī)堿：金屬催化劑的摩爾比為：1.0:1.5:0.25:0.05。

本發(fā)明方法中，有機(jī)溶劑用量與MBH carbonate用量的比例為5mL～10mL:1mmol。優(yōu)選地，有機(jī)溶劑用量與MBH carbonate用量的比例為10mL:1mmol。

本發(fā)明方法中，所述反應(yīng)溫度為-20～120℃。優(yōu)選地，所述反應(yīng)溫度為20℃。

本發(fā)明方法中，所述反應(yīng)時間為24～120h。優(yōu)選地，所述反應(yīng)時間為36～48h。

本發(fā)明方法中，所述重氮化合物包括N-烷基-N-芳基重氮酰胺化合物。

本發(fā)明方法中，所述有機(jī)溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯、1,2-二氯乙烷、甲苯和乙酸異丙酯。優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為以1:1體積混合的乙酸異丙酯和甲苯的混合溶液。

本發(fā)明方法中，采用的金屬催化劑選自烯丙基氯化鈀([Pd(Allyl)Cl]₂)、環(huán)辛單烯氯化銥二聚體([Ir(coe)Cl]₂)、二氯化鈀(PdCl₂)、四三苯基膦鈀(Pd(PPh₃)₄)、乙酸鈀(Pd(OAc)₂)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl₂)。優(yōu)選地，所述金屬催化劑選自烯丙基氯化鈀[Pd(allyl)Cl]₂。所述手性有機(jī)堿和金屬催化劑為共催化劑。

本發(fā)明方法中，所述有機(jī)堿為手性有機(jī)堿，選自手性β-ICD(如式(III))、4-二甲氨基吡啶(如式(IV))、手性3-((2-取代基環(huán)戊氨基)甲?；?-4-環(huán)戊氨基吡啶(如式(V))。優(yōu)選地，所述有機(jī)堿為手性β-ICD。

在一個具體實施方案中，本發(fā)明含C-3全取代氧化吲哚衍生物的合成方法，包括以下步驟：MBH carbonate：N-烷基-N-芳基重氮酰胺：手性β-ICD：烯丙基氯化鈀＝1.0:1.5:0.25:0.05摩爾比(以MBH carbonate用量為基準(zhǔn))，稱取原料。將MBH carbonate、手性β-ICD和烯丙基氯化鈀溶于有機(jī)溶劑，配制成混合溶液；將N-烷基-N-芳基重氮酰胺化合物溶于有機(jī)溶劑，配制成重氮酰胺化合物溶液；在室溫下，將重氮酰胺化合物溶液用注射泵加入前述混合溶液，同時劇烈攪拌；重氮酰胺化合物溶液滴加完畢后，室溫下繼續(xù)攪拌36～48小時，直至重氮酰胺化合物消耗完全；將粗產(chǎn)物進(jìn)行柱層析(以石油醚：乙酸乙酯＝15:1～5:1為洗脫劑)得到純產(chǎn)品式(I)含C-3全取代氧化吲哚衍生物。

本發(fā)明還提出依本發(fā)明合成方法制備得到的式(I)含C-3全取代氧化吲哚衍生物。

本發(fā)明還提出了式(I)含C-3全取代氧化吲哚衍生物在制備抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提出式(I)所示含C-3全取代氧化吲哚衍生物在制備抗結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提出式(I)所示含C-3全取代氧化吲哚衍生物在制備抗結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明含C-3全取代氧化吲哚衍生物是重要的化工和醫(yī)藥中間體，在醫(yī)藥化工領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，具有很大應(yīng)用前景。本發(fā)明的合成方法以廉價易得的化合物為原料，具有反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)步驟少、反應(yīng)快、成本低、產(chǎn)生的廢物少、操作簡單安全、原子經(jīng)濟(jì)性高、選擇性高等有益效果。

附圖說明

圖1為實施例1所得產(chǎn)物的¹H NMR示意圖。

圖2為實施例1所得產(chǎn)物的¹³C NMR示意圖。

圖3為實施例1所得消旋產(chǎn)物液相圖。

圖4為實施例1所得手性產(chǎn)物液相圖。

圖5為實施例2所得產(chǎn)物的¹H NMR示意圖。

圖6為實施例2所得產(chǎn)物的¹³C NMR示意圖。

圖7為實施例3所得產(chǎn)物的¹H NMR示意圖。

圖8為實施例3所得產(chǎn)物的¹³C NMR示意圖。

圖9為實施例3所得消旋產(chǎn)物液相圖。

圖10為實施例3所得手性產(chǎn)物液相圖。

圖11為實施例4所得產(chǎn)物的¹H NMR示意圖。

圖12為實施例4所得產(chǎn)物的¹³C NMR示意圖。

圖13為實施例4所得消旋產(chǎn)物液相圖。

圖14為實施例4所得手性產(chǎn)物液相圖。

圖15為實施例5所得產(chǎn)物的¹H NMR示意圖。

圖16為實施例5所得產(chǎn)物的¹³C NMR示意圖。

圖17為實施例5所得產(chǎn)物的¹⁹F NMR示意圖。

圖18為實施例5所得消旋產(chǎn)物液相圖。

圖19為實施例5所得手性產(chǎn)物液相圖。

圖20為實施例1所得產(chǎn)物抑制HCT116細(xì)胞的實驗結(jié)果。

圖21為實施例3所得產(chǎn)物抑制HCT116細(xì)胞的實驗結(jié)果。

圖22為實施例4所得產(chǎn)物抑制HCT116細(xì)胞的實驗結(jié)果。

具體實施方式

結(jié)合以下具體實施例和附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不局限于以下實施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變化和優(yōu)點都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求書為保護(hù)范圍。實施本發(fā)明的過程、條件、試劑、實驗方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。

本發(fā)明合成含C-3全取代氧化吲哚衍生物的制備方法，將MBH carbonate、β-ICD溶于有機(jī)溶劑，配制成混合溶液；重氮酰胺化合物溶于有機(jī)溶劑配制成重氮酰胺化合物溶液；將重氮酰胺化合物溶液用注射泵加入前述混合溶液中；注射完畢36～48小時后，將粗產(chǎn)物進(jìn)行柱層析(以石油醚:乙酸乙酯＝15:1～5:1為洗脫劑)得到純產(chǎn)品，得到高對映選擇性和高非對映選擇性含C-3全取代氧化吲哚衍生物。

合成反應(yīng)過程如下：

其中，

Ar為芳基，選自于苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、3-氯苯基、4-硝基苯基、4-氟苯基；

R₁為苯環(huán)取代基，選自于氫、4-氯、4-溴、4-甲基、4-硝基、4-氟、4-甲氧基；

R₂為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₃為烷基，選自于甲基、乙基、芐基；

R₄位烷基，選自于甲基、叔丁基。

實施例1

將MBH carbonate(0.2mmol)，β-ICD(0.25mmol)和烯丙基氯化鈀(0.05mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成混合溶液A，在室溫下攪拌10分鐘。再將N-烷基-N-芳基重氮酰胺(0.3mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成溶液B。將溶液B于20^oC下，在1小時內(nèi)用注射泵加入混合溶液A。攪拌36～48小時，反應(yīng)混合物通過柱層析進(jìn)行純化，得到純產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)如式(a)所示，為叔丁基-2-((R)-(4-溴苯基)-(R)-1,3-二甲基-2-氧化吲哚-3-取代)甲基)丙烯酸酯，產(chǎn)率為64％，dr值等于95:5，ee值大于99％。式(a)所示化合物的¹H NMR示意圖如圖1所示，其¹³C NMR示意圖如圖2所示，消旋產(chǎn)物液相圖如圖3所示，其手性產(chǎn)物液相圖如圖4所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(m,2H),7.18(d,1H),6.92(s,1H),6.64(d,J＝8.1Hz,1H),6.19(s,1H),5.35(s,1H),4.55(s,1H),3.11(s,3H),1.37(s,3H),1.31(s,9H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ179.11,165.69,142.20,141.22,137.09,134.84,130.77,130.37,127.80,127.70,127.34,124.71,114.89,109.30,80.96,51.34,50.83,27.82,26.24,24.97.HRMS(ESI):Calcd.for C₂₄H₂₆BrNO₃Na[M+Na]⁺:478.0994,Found:478.0979.HPLC(手性IA，波長等于254納米,正己烷/乙醇＝20：1，流速＝1.0毫升/分鐘)，t_major＝6.86分鐘,t_minor＝6.22分鐘。

實施例2

將MBH carbonate(0.2mmol)，β-ICD(0.25mmol)和烯丙基氯化鈀(0.05mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成混合溶液A，在室溫下攪拌10分鐘。再將N-烷基-N-芳基重氮酰胺(0.3mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成溶液B。將溶液B于20℃下，在1小時內(nèi)用注射泵加入混合溶液A。攪拌36～48小時，反應(yīng)混合物通過柱層析進(jìn)行純化，得到純產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)如式(b)所示，為甲基-2-((R)-((R)-5-溴-1,3-二甲基-2-氧化吲哚-3-取代)(苯基)甲基)丙烯酸酯，產(chǎn)率為75％，dr值等于91:9，ee值race。式(b)所示化合物的¹H NMR示意圖如圖5所示，其¹³C NMR示意圖如圖6所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.31(m,6H),6.90(s,1H),6.30(s,1H),5.54(s,1H),4.63(s,1H),3.64(s,3H),3.09(s,3H),1.38(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ179.07,166.90,142.27,139.62,136.38,134.71,130.90,130.31,127.81,127.55,126.20,114.89,109.32,52.20,51.16,51.13,26.23,24.59.HRMS(ESI):Calcd.for C₂₁H₂₀BrNO₃Na[M+Na]⁺:436.0524,Found:436.0502.

實施例3

將MBH carbonate(0.2mmol)，β-ICD(0.25mmol)和烯丙基氯化鈀(0.05mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成混合溶液A，在室溫下攪拌10分鐘。再將N-烷基N-芳基重氮酰胺(0.3mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成溶液B。將溶液B于20℃下，在1小時內(nèi)用注射泵加入混合溶液A。攪拌36～48小時，反應(yīng)混合物通過柱層析進(jìn)行純化，得到純產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)如式(c)所示，為叔丁基-2-((R)-((R)-1,3-二甲基-2-氧化吲哚-3-取代)(苯基)甲基)丙烯酸酯，產(chǎn)率為64％，dr值大于95:5，ee值等于84％。式(c)所示化合物的¹H NMR示意圖如圖7所示，其¹³C NMR示意圖如圖8所示，消旋產(chǎn)物液相圖如圖9所示，其手性產(chǎn)物液相圖如圖10所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.38–7.05(m,6H),6.96(t,J＝7.5Hz,1H),6.79(t,J＝8.2Hz,2H),6.15(s,1H),5.29(s,1H),4.56(s,1H),3.15(s,3H),1.37(s,3H),1.29(s,9H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ179.74,165.82,143.16,141.47,137.61,132.66,130.55,127.96,127.56,127.05,124.61,124.58,122.18,107.97,80.80,51.30,50.55,27.81,26.19,25.27.HRMS(ESI):Calcd.for C₂₄H₂₇NO₃Na[M+Na]⁺:400.1889,Found:400.1891.HPLC(手性IA，波長等于254納米,正己烷/乙醇＝20：1，流速＝1.0毫升/分鐘)，t_major＝7.98分鐘,t_minor＝6.64分鐘。

實施例4

將MBH carbonate(0.2mmol)，β-ICD(0.25mmol)和烯丙基氯化鈀(0.05mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成混合溶液A，在室溫下攪拌10分鐘。再將N-烷基-N-芳基重氮酰胺(0.3mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成溶液B。將溶液B于20℃下，在1小時內(nèi)用注射泵加入混合溶液A。攪拌36～48小時，反應(yīng)混合物通過柱層析進(jìn)行純化，得到純產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)如式(d)所示，為叔丁基-2-((R)-((R)-1,3-二甲基-2-氧化吲哚-3-取代)(4-硝基苯基)甲基)丙烯酸酯，產(chǎn)率為61％，dr值等于81:19，ee值等于38％。式(d)所示化合物的¹H NMR示意圖如圖11所示，其¹³C NMR示意圖如圖12所示，消旋產(chǎn)物液相圖如圖13所示，其手性產(chǎn)物液相圖如圖14所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.08(d,J＝8.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.6Hz,2H),7.29–7.24(t,1H),7.02(t,J＝7.5Hz,1H),6.88(d,J＝7.3Hz,1H),6.75(d,J＝7.8Hz,1H),6.34(s,1H),5.82(s,1H),4.66(s,1H),3.10(s,3H),1.42(s,3H),1.34(s,9H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ178.85,165.43,147.00,145.85,142.95,139.94,132.19,130.98,128.50,126.87,123.81,122.71,122.57,108.28,81.38,51.51,50.71,27.89,26.22,24.44.HRMS(ESI):Calcd.for C₂₄H₂₆N₂O₅Na[M+Na]⁺:445.1739,Found:445.1746.HPLC(手性IA，波長等于254納米,正己烷/乙醇＝20：1，流速＝1.0毫升/分鐘)，t_major＝30.55分鐘,t_minor＝15.60分鐘。

實施例5

將MBH carbonate(0.2mmol)，β-ICD(0.25mmol)和烯丙基氯化鈀(0.05mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成混合溶液A，在室溫下攪拌10分鐘。再將N-烷基-N-芳基重氮酰胺(0.3mmol)溶于1mL i-PrOAc:DCM＝1:1的混合溶劑中，配制成溶液B。將溶液B于20℃下，在1小時內(nèi)用注射泵加入混合溶液A。攪拌36～48小時，反應(yīng)混合物通過柱層析進(jìn)行純化，得到純產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)如式(e)所示，為叔丁基-2-((R)-((R)-1,3-二甲基-2-氧化吲哚-3-取代)(4-氟苯基)甲基)丙烯酸酯，產(chǎn)率為70％，dr值大于95:5，ee值等于79％。式(e)所示化合物的¹H NMR示意圖如圖15所示，其¹³C NMR示意圖如圖16所示，¹⁹F NMR示意圖如圖17所示，消旋產(chǎn)物液相圖如圖18所示，其手性產(chǎn)物液相圖如圖19所示。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.26(t,J＝9.3,6.1Hz,1H),7.13(dd,J＝8.2,5.6Hz,1H),6.98(t,J＝7.6Hz,1H),6.93(t,J＝8.6Hz,2H),6.82(d,J＝7.4Hz,1H),6.77(d,J＝7.8Hz,1H),6.19(s,1H),5.44(s,1H),4.54(s,1H),3.13(s,3H),1.37(s,3H),1.32(s,9H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ179.52,165.72,163.20,160.76,143.12,141.23,133.41,133.38,132.61,131.89,131.81,128.09,125.03,124.27,122.28,114.50,114.29,108.05,80.95,50.70,50.68,27.85,26.17,24.90.¹⁹F NMR(376MHz,CDCl₃)δ-115.78,-115.79,-115.80,-115.80,-115.81,-115.82,-115.83,-115.84,-115.85.HRMS(ESI):Calcd.for C₂₄H₂₆FNO₃Na[M+Na]⁺:418.1794,Found:418.1807.HPLC(手性IA，波長等于254納米,正己烷/乙醇＝20：1，流速＝1.0毫升/分鐘)，t_major＝6.95分鐘,t_minor＝5.74分鐘。

實施例6抗腫瘤活性測試

1)腫瘤抑制率測試

本實施例中用CCK8法對本發(fā)明化合物生物活性進(jìn)行測試，采用本發(fā)明化合物(實施例1、實施例2、實施例3、實施例4和實施例5制備得到的)進(jìn)行其對腫瘤細(xì)胞的抑制作用研究。本實施例中具體使用的細(xì)胞系為：HCT116(人結(jié)腸癌細(xì)胞)。細(xì)胞種板密度:3000個/孔；給藥濃度：本發(fā)明含C-3全取代氧化吲哚衍生物30.0μMol/L；藥物作用時間：72小時；陽性對照：PTX，濃度：100nMol/L，抑制率95％。

表一：本發(fā)明含C-3全取代氧化吲哚衍生物對HCT116(人結(jié)腸癌細(xì)胞)的抑制數(shù)據(jù)

實驗結(jié)果表明，本發(fā)明含C-3全取代氧化吲哚衍生物對人結(jié)腸癌細(xì)胞具有較好的抑制作用。因此對實施例1、實施例3和實施例4做了進(jìn)一步活性測試。

2)IC₅₀值測試

人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞接種于McCoy,s培養(yǎng)液中(10％血清，1％青-鏈霉素)。置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中，每2-3天傳代一次，試驗取對數(shù)生長期細(xì)胞。CCK-8法測定IC₅₀值。

取對數(shù)生長期細(xì)胞，以配置好的新鮮McCoy,s培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞懸液至2萬/ml，取100ul(2千細(xì)胞/孔)細(xì)胞懸液接種到96孔培養(yǎng)板。置于5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)12h后，更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液,每孔加入DMSO等體積稀釋的濃度梯度藥物與細(xì)胞共孵育72h，更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔加10ulCCK-8溶液繼續(xù)孵育2-4小時，終止培養(yǎng)，在多功能酶標(biāo)儀(Molecular Devices M5)450nm檢測吸光度。

將待測化合物實施例1、實施例3和實施例4制備的化合物a、c、d溶解在DMSO中并在培養(yǎng)液中進(jìn)一步稀釋。DMSO最終濃度不超過0.1％(v/v)。對照組中含HCT116細(xì)胞和等體積DMSO，但無化合物，空白組中含等體積DMSO但無細(xì)胞。在一次實驗內(nèi)，每個實驗條件的均設(shè)3個復(fù)孔(最終的統(tǒng)計結(jié)果不是平均值，是有error bar的)。從所有的對照值和樣品值中減去空白值。對于每個樣品，細(xì)胞生長的平均值都用對照細(xì)胞生長的平均值的百分?jǐn)?shù)表示，用GraphPad Prim6計算出IC₅₀(為將細(xì)胞生長降至對照組的50％所需的藥物濃度)。其檢測結(jié)果為：如圖20所示，化合物a的IC₅₀值為4.643μM；如圖21所示，化合物c的IC₅₀值為4.290μM；如圖22所示，化合物d的IC₅₀值為3.800μM。

綜上，實驗結(jié)果表明，含C-3全取代氧化吲哚衍生物對人結(jié)腸癌細(xì)胞具有顯著的抑制作用，為開發(fā)治療結(jié)腸癌藥物提供了廣闊的發(fā)展空間。