1.一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基，其特征在于，每1000ml培養(yǎng)基中包括有以下組分：PPLO肉湯10.5 g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1 ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基形式或固體培養(yǎng)基形式。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基，其特征在于，所述用于牛鼻支原體分離純化的液體培養(yǎng)基中，每1000ml液體培養(yǎng)基是由以下組分制備得到的：PPLO肉湯10.5 g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60 ml、1%酚紅2.5 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1 ml、余量為去離子水。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基，其特征在于，所述用于牛鼻支原體分離純化的固體培養(yǎng)基中，每1000ml固體培養(yǎng)基是由以下組分制備得到的：PPLO肉湯10.5 g、腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鮮酵母浸出液60 ml、無菌豬血清100 ml、無菌馬血清100 ml、氨芐青霉素100 mg、10%醋酸鉈1 ml、瓊脂粉15.0 g、余量為去離子水。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，每1000ml液體培養(yǎng)基的制備方法為：
1）稱取腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g，加490 ml去離子水混勻，加熱溶解，再加入1%酚紅2.5 ml，混合后115℃高壓滅菌20分鐘，作為A液；
2）稱取PPLO肉湯10.5 g、水解乳蛋白5.0 g，量取60 ml 25%新鮮酵母浸出液，加去離子水至300 ml，混合后115℃高壓滅菌20分鐘，作為B液；
3）待A液、B液晾至50℃-55℃混合后，再在其中加入無菌豬血清和馬血清各100 ml，再加入濾過除菌100 mg/ml氨芐青霉素1 ml和滅菌的10%醋酸鉈1 ml，用滅菌去離子水調(diào)至1000 ml，用滅菌1 M NaOH調(diào)pH值到7.2-7.4，充分搖勻，得到液體培養(yǎng)基，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，每1000ml固體培養(yǎng)基的制備方法為：
1）稱取腦心浸出液8.0 g、氯化鈉4.0 g、硫酸鎂0.05 g、氯化鉀0.2 g、氯化鈣0.09 g、磷酸氫二鈉0.024 g、磷酸二氫鉀0.03 g、葡萄糖5.0 g，加490 ml去離子水混勻，加熱溶解，混合后115℃高壓滅菌20分鐘，作為A液；
2）稱取PPLO肉湯10.5 g、水解乳蛋白5.0 g、瓊脂粉15.0 g，量取60 ml/L 25%新鮮酵母浸出液，加去離子水至300 ml，混合后115℃高壓滅菌20分鐘，作為B液；
3）待A液、B液晾至50℃-55℃混合后，再在其中加入無菌豬血清和馬血清各100 ml，再加入濾過除菌100 mg/ml的氨芐青霉素1 ml和滅菌的10%醋酸鉈1 ml，用滅菌去離子水調(diào)至1000 ml，用滅菌1M NaOH調(diào)pH值到7.2-7.4，搖勻，倒平皿，得到固體培養(yǎng)基，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述25%新鮮酵母浸出液的制備方法為：取鮮酵母500g，加入去離子水2000 ml中，攪拌溶解，用鹽酸溶液調(diào)pH值至4.5-5.0，80℃水浴30分鐘，3000 轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，取上清液，將上清液用1 M NaOH調(diào)pH值至7.8，煮沸，置室溫放涼后用雙層濾紙過濾，再補(bǔ)水至2000 ml，即得到25%新鮮酵母浸出液，-20℃保存?zhèn)溆?；所述鹽酸溶液中，按照體積比濃鹽酸：水為1：1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的一種用于牛鼻支原體分離純化的培養(yǎng)基在牛鼻支原體分離純化方法中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述牛鼻支原體分離純化的方法包括以下步驟：
1）用無菌棉簽采集牛的鼻拭子或無菌條件下剪切一小塊肺臟組織接種到4.5 ml的液體培養(yǎng)基中，用液體培養(yǎng)基作3個以上的十倍稀釋，稀釋到10-3，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；同時取0.1 ml梯度稀釋樣品分別接種固體培養(yǎng)基，置37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)；每天觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化和有無絮狀物出現(xiàn)，若5天仍不見液體培養(yǎng)基顏色變化，按1:10比例盲傳接種至液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；24小時若肉眼觀察出現(xiàn)混濁時，表示有細(xì)菌污染，應(yīng)將培養(yǎng)物經(jīng)0.45μm的濾膜過濾后移植，按1:10的比例轉(zhuǎn)接到新的液體培養(yǎng)基或用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)；若24小時后仍未出現(xiàn)顏色變化及混濁，繼續(xù)在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待顏色變黃后立即轉(zhuǎn)接新的液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基；
2）上述固體培養(yǎng)基培養(yǎng)5-7天，低倍鏡下觀察菌落的形態(tài)及生長情況，用接種環(huán)無菌刮取平板上的菌落或用無菌巴氏吸管將帶有單個菌落的瓊脂塊吸出，接種到新的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)生長，再將變黃的培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基上；重復(fù)該步驟，確保分離到支原體特征菌落；
3）上述培養(yǎng)支原體特征菌落生長變黃的液體培養(yǎng)物，在繼代之前，用0.45μm的濾膜過濾以除去雜菌或細(xì)胞聚集物，有利于純化，取0.2 ml過濾培養(yǎng)物原液加到1.8 ml液體培養(yǎng)基中做連續(xù)10倍稀釋，稀釋到10-7，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；取100μL原液和不同稀釋度的培養(yǎng)物分別涂布在固體培養(yǎng)基中，37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)5-7天，固體培養(yǎng)基長出肉眼可見的針尖大小、灰白色小菌落；
4）將固體培養(yǎng)基置低倍顯微鏡下觀察，選取單個特征菌落并在平板底部做好標(biāo)記；用接種環(huán)刮取平板上的單個菌落或用滅菌巴氏吸管吸取單一菌落接種到4.5 ml液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當(dāng)pH值下降，液體由紅色變?yōu)辄S色時，重復(fù)步驟3）整體和步驟4）的前部操作；如此重復(fù)3次，得到純化的牛鼻支原體，凍存管中培養(yǎng)物和甘油混合至甘油終濃度為25%，置-80℃保存。