本發(fā)明涉及一種從甘草渣制備甘草查爾酮A的方法。

背景技術(shù)：

甘草查爾酮A（Licochalcone A）是甘草黃酮中的一種，其結(jié)構(gòu)如下：

甘草查爾酮A 是一種黃酮類化合物，主要來源于甘草中，具有抗寄生物、抗菌、抗腫瘤等作用。文獻(xiàn)《Licochalcone A induces apoptosis in malignant pleural mesothelioma through downregulation of Sp1 and subsequent activation of mitochondria-related apoptotic pathway》，《Licochalcone-A sensitizes human esophageal carcinoma cells to TＲAIL-mediated apoptosis by proteasomal degradation of XIAP》，《Licochalcone A inhibits the migration and invasion of human lung cancer cells via inactivation of the Akt signaling pathway with downregulation of MMP-1/-3 expression》表明甘草查爾酮A 對多種腫瘤細(xì)胞有抑制作用，文獻(xiàn)《甘草查爾酮A 抑制小鼠黑色素瘤B16F10 細(xì)胞增殖機(jī)制研究》報道了甘草查爾酮A 抑制B16F10 細(xì)胞增殖機(jī)制可能是通過使B16F10細(xì)胞G1期阻滯，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞分化和凋亡。

隨著甘草查爾酮A越來越多的藥理活性受到廣泛關(guān)注，如何實(shí)現(xiàn)甘草查爾酮A的工業(yè)化制備以及如何控制其成本問題變得越發(fā)緊迫。由于甘草查爾酮在甘草中含量較低，需經(jīng)多個純化步驟才能得到純度較高的甘草查爾酮A，導(dǎo)致甘草查爾酮A的成本居高不下。另一方面，因制備甘草酸系列化合物而廢棄的甘草渣，每年大約有數(shù)百噸之多，如能將其加以利用，則可極大地提高甘草資源的附加值和綜合利用率。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，在從甘草中提取甘草酸時由于采用水提工藝，甘草查爾酮A由于極性較小，并未被提取出來，仍存留于甘草渣中，如以甘草渣為原料制備甘草查爾酮A則原料成本可以大大降低，且由于之前的水提將其中很多雜質(zhì)提取出來，甘草查爾酮A的含量得到較大提高，更有利于分離純化。

《甘草查爾酮分離純化工藝的研究》（寧夏工程技術(shù)，4（4），2005，363-365）報道的甘草查爾酮A純化制備方法，包括乙醇浸泡，石灰水除雜，大孔樹脂吸附，Na2CO3和乙酸乙酯反復(fù)萃取，聚酰胺柱層析，硅膠柱層析等步驟，最后重結(jié)晶得到甘草查爾酮A，該工藝極其繁瑣，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化，且甘草查爾酮A得率極低，成本極高，且硅膠柱層析中使用大量有機(jī)溶劑，不利于環(huán)境保護(hù)。《高速逆流色譜法純化甘草查爾酮甲和脹果香豆素甲》（現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，18，2004，53-56）報道了95%乙醇超聲提取，2%NaOH除雜，2%鹽酸沉淀，高速逆流萃取純化得到甘草查爾酮A，該方法中由于采用高速逆流萃取，對于設(shè)備和溶劑系統(tǒng)要求很高，且消耗大量有機(jī)溶劑，不僅大大增加了工業(yè)化生產(chǎn)難度，產(chǎn)品成本也大大提高，且易引起環(huán)境污染等問題。中國專利《高純度甘草查爾酮A的制備方法，CN200710052521.1》報道了一種高純度甘草查爾酮A的制備方法，其工藝步驟為：提取，濃縮、萃取、柱層析分離、有機(jī)溶劑結(jié)晶即可獲得高純度甘草查爾酮A。由于其中采用有機(jī)溶劑萃取來除雜，不可避免的使用大量有機(jī)溶劑造成環(huán)境保護(hù)的壓力，且該工藝采用的提取方式，如為低有機(jī)相溶劑提取則提取率極低，如為高有機(jī)相提取則必然導(dǎo)致成本的極大提升。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種從甘草渣制備甘草查爾酮A的方法。

本發(fā)明具體的技術(shù)方案：甘草渣以飽和石灰水回流提取，提取液靜置后，以大孔樹脂吸附，以含水低級醇洗脫，洗脫液濃縮后，加入一定量的低級醇或水，加入NaOH溶液至溶液澄清，加酸沉淀，沉淀再以有機(jī)溶劑結(jié)晶。

上述提取所用方法為：甘草渣以4-20BV飽和石灰水回流提取1-5次，優(yōu)選的為6-15BV，提取3-5次；更優(yōu)選的為8BV，提取5次。

上述靜置所用時間為8-48小時，優(yōu)選的為10-36小時；更優(yōu)選的為16小時。

上述所用大孔樹脂為D101大孔樹脂、AB-8、HP20等極性或非極性大孔樹脂，優(yōu)選的為D101大孔樹脂。

上述大孔樹脂洗脫溶劑包括可與水互溶的低級醇，如甲醇、乙醇、異丙醇等，低級醇與水的比例為30%-100%，優(yōu)選的為40-80%；更優(yōu)選的為60%。

上述洗脫液濃縮的體積為與藥材重量比為1：2-3:1，優(yōu)選的為1:2-2:1；更優(yōu)選的為1:1。

上述加入濃縮液中的低級醇或水，其中低級醇為與水互溶的醇，如甲醇、乙醇、異丙醇等，加入比例為與濃縮液體積比為1：10-1:1，優(yōu)選的為1:5-1:2；更優(yōu)選的為1:3。

上述加入NaOH溶液為2%-10%（w/v）的稀溶液，加入的量為至溶液剛好澄清，優(yōu)選的為3%-8%；更優(yōu)選的為5%。

上述加入鹽酸溶液為5-38%（w/v）的溶液，加入的量為至溶液的pH為1-5，鹽酸溶液優(yōu)選的為10-38%，更優(yōu)選的為35%-38%； pH優(yōu)選的為2-4， pH更優(yōu)選的為2-3。

上述的結(jié)晶溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、異丙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、環(huán)己烷等有機(jī)溶劑。所得結(jié)晶純度不低于95%，優(yōu)選的為石油醚-乙酸乙酯。

發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明所制備的提取物工藝簡單，適合于大生產(chǎn)中應(yīng)用；本發(fā)明所采用的起始原料為甘草渣為廢棄物，成本極低；本發(fā)明所采用的提取溶劑為飽和石灰水，成本極低，且提取率較高；本發(fā)明所采用的工藝步驟中除結(jié)晶步驟使用少量有機(jī)溶劑外，其余步驟均避免使用有機(jī)溶劑，不僅大大降低成本，且不會造成環(huán)境污染。

附圖說明

圖1甘草查爾酮A HPLC圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

甘草渣10Kg，以飽和石灰水回流提取5次，每次體積為80L，合并提取液，靜置過夜后，以10LD101大孔樹脂柱吸附，水洗30L，再以60%乙醇洗脫50L，將60%乙醇洗脫液濃縮至10L，加入3L95%乙醇，再加入5%NaOH溶液至溶液澄清，加入35%鹽酸并不停攪拌至pH=2-3產(chǎn)生大量沉淀，過濾，沉淀烘干后再以乙酸乙酯-石油醚重結(jié)晶4次，即得到甘草查爾酮A結(jié)晶，經(jīng)檢測，含量為98.2%。

實(shí)施例2

甘草渣5Kg，以飽和石灰水回流提取2次，每次體積為20L，合并提取液，靜置8小時后，以3L AB-8大孔樹脂柱吸附，水洗9L，再以30%乙醇洗脫30L，將30%乙醇洗脫液濃縮至2.5L，加入0.25L95%異丙醇，再加入2%NaOH溶液至溶液澄清，加入5%鹽酸并不停攪拌至pH=1產(chǎn)生大量沉淀，過濾，沉淀烘干后再以氯仿-甲醇重結(jié)晶3次，即得到甘草查爾酮A結(jié)晶，經(jīng)檢測，含量為95.0%。

實(shí)施例3

甘草渣1Kg，以飽和石灰水回流提取4次，每次體積為10L，合并提取液，靜置48小時后，以10LD101大孔樹脂柱吸附，水洗30L，再以甲醇洗脫30L，將甲醇洗脫液濃縮至3L，加入3L水，再加入10%NaOH溶液至溶液澄清，加入5%鹽酸并不停攪拌至pH=5產(chǎn)生大量沉淀，過濾，沉淀烘干后再以異丙醚-丙酮重結(jié)晶5次，即得到甘草查爾酮A結(jié)晶，經(jīng)檢測，含量為97.7%。