本發(fā)明涉及煙草制絲加工
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的說是一種在煙草制絲加工工藝中使用的酶制劑，以及通過添加該酶制劑來降低煙葉雜味，提升煙葉香氣的方法。
背景技術(shù)：
：在煙草制品中，煙草的香氣和吸味是至關(guān)重要的。煙葉的化學成分多而復雜，其中占比例最大的是蛋白質(zhì)、淀粉及細胞壁物質(zhì)等大分子化合物。這些大分子化合物不僅對煙草的吸味有副作用，而且是大部分煙氣有害成分的前體。在煙葉眾多成分中，以蛋白質(zhì)含量最為豐富，如白肋煙中蛋白質(zhì)含量高達20.48％。煙葉中的蛋白質(zhì)分為可溶性蛋白和不溶性蛋白，而可溶性蛋白中一半左右是葉綠體蛋白質(zhì)(FractionIprotein,FI蛋白)，另一半為其他可溶性蛋白質(zhì)的復合物(FractionIIprotein,FII蛋白)。煙草中的蛋白質(zhì)是一種不利于卷煙吸味品質(zhì)的化學成分，燃燒后的蛋白質(zhì)會使煙氣的苦味增加并產(chǎn)生類似燒羽毛的氣味。煙葉在生長期問，淀粉含量逐步增加，隨葉片的衰老而顯著減少。成熟煙葉的淀粉含量通常在25％左右，烤后煙葉的淀粉含量在2％～8％，淀粉含量超過5％時，則認為對煙葉的品質(zhì)不利。煙草中存在淀粉形態(tài)的碳水化合物，一方面影響卷煙的燃燒性，另一方面淀粉在燃吸時會產(chǎn)生焦糊氣味，影響煙氣的質(zhì)量。煙葉細胞壁物質(zhì)主要包括纖維素、木質(zhì)素、半纖維素、果膠等成份，其含量占煙葉干物質(zhì)總量的28％，細胞壁物質(zhì)含量高則致使煙葉具有強烈的刺激性，青雜氣重，吸味辛辣、澀口，煙香氣不能顯露。在卷煙燃吸過程中，木質(zhì)素作為煙草重要的大分子物質(zhì)之一，通過燃燒和熱裂解參與卷煙煙氣的構(gòu)成，熱裂解產(chǎn)物主要為丙烯醛、乙酸、苯酚、CO、稠環(huán)芳烴等小分子化合物，對卷煙的感官品質(zhì)和安全性有負面影響。烤煙煙葉中纖維素含量一般為8％左右，纖維素過多時組織粗糙，容易破碎，并且吸濕性大，易霉，不宜儲藏。此外纖維素燃燒后會產(chǎn)生刺辣嗆喉的氣味，增加煙氣的刺激性，使煙氣中帶有尖刺的刺激性及“燒紙”的氣味。煙葉的等級隨著纖維素含量的增加而降低。煙草中的果膠含量約在6％～20％，果膠分子結(jié)構(gòu)中含有甲醇，甲醇在煙氣中進一步轉(zhuǎn)化為甲醛和甲酸等，給煙草帶來刺激性和不安全性。此外，果膠質(zhì)是吸濕性物質(zhì)，影響煙葉的燃燒性，導致焦油量升高。影響卷煙的吸味?，F(xiàn)有技術(shù)中，采用對煙葉發(fā)酵處理的方法提高煙葉的質(zhì)量。煙葉發(fā)酵處理實質(zhì)上是在一定的溫度和濕度條件下，促使煙葉理化特性發(fā)生深刻變化，煙葉香氣和吸味品質(zhì)明顯改善的加工工程，又稱陳化。煙葉陳化后可消除初烤煙葉帶有的青色，使煙葉顏色轉(zhuǎn)深并均勻一致，青雜氣、刺激性和異味減少，香氣顯露，香氣質(zhì)和香氣量變佳，吸味醇和，余味純凈舒適，粘性和吸濕性降低，彈性和燃燒性得到增強。目前，煙葉陳化主要有自然陳化(也稱醇化或發(fā)酵)和人工陳化(又稱加溫發(fā)酵)兩種方式。前者主要是在煙葉貯存期間，借助自然氣候的變化，促使煙葉內(nèi)各種化學變化加速進行，進而達到改善煙葉品質(zhì)和理化性狀的目的。后者則是在人為控制溫濕度的條件下，使堆放于陳化庫內(nèi)的煙葉理化性質(zhì)變化加速，在較短時間內(nèi)改善煙葉品質(zhì)的方法。自然陳化煙葉的缺陷是貯存周期長(一般需1～3年)，占用倉庫大，積壓資金多，生產(chǎn)成本高，但由于自然陳化具有煙葉色澤鮮亮、香氣優(yōu)美、刺激性弱、工藝簡單、操作簡便等優(yōu)點，且提高香氣與吸味品質(zhì)的效果明顯優(yōu)于人工陳化煙葉，所以，經(jīng)濟發(fā)達國家普遍采用自然陳化的方法。而人工陳化周期短(一般為12～20天)，資金積壓少，生產(chǎn)成本低，但煙葉質(zhì)量卻不及自然陳化好。我國受經(jīng)濟條件的限制，國內(nèi)中小型卷煙廠仍以人工陳化為主，即使大型卷煙廠也同樣面臨在提高產(chǎn)品質(zhì)量的同時，降低生產(chǎn)成本、提高經(jīng)濟效益的問題，故而不能完全擺脫人工陳化。因此，進一步研究和改進煙葉發(fā)酵技術(shù)，對中國煙草企業(yè)改善卷煙香氣品質(zhì)，提高卷煙生產(chǎn)經(jīng)濟效益具有廣泛的現(xiàn)實意義。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科技工作者已經(jīng)開始研究利用微生物以及酶制劑來降解煙葉中的大分子化合物。在滿足現(xiàn)有煙葉制絲生產(chǎn)工藝的條件下，利用酶制劑降解對煙草吸食品質(zhì)有害的大分子化合物進而起到降低煙葉雜味、提升香氣的作用是本發(fā)明人研究的主要目的。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種在煙草制絲加工工藝中利用酶制劑改善煙葉雜味提升香氣的方法。它利用煙草制絲加工工藝中貯葉柜或人工發(fā)酵室的存放周轉(zhuǎn)時間，利用針對具體煙葉葉組特質(zhì)而定制的酶制劑在合適的條件下短時間內(nèi)對煙葉進行酶處理，達到提升煙葉質(zhì)量的效果，進而改善了卷煙產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種在煙草制絲加工工藝中進行酶處理改善煙葉質(zhì)量的方法，制絲加工工藝依次包括片煙回潮工序、加料工序、貯葉工序、切絲工序、烘絲工序、加香工序等主要工序，本方法是在片煙回潮工序或加料工序，將酶制劑均勻噴灑到配方煙葉葉組上，使加酶后煙葉水分達到12％～30％；再將加酶后的煙葉存入貯葉柜或人工發(fā)酵室中進入貯葉工序，在貯葉工序中酶對煙葉進行處理；利用后序烘絲工藝中的高溫使酶活性。因此，本發(fā)明的第一方面提供了一種酶制劑。本發(fā)明的酶制劑是表1中的單酶或者它們之中的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19種酶組成的復合酶。表1酶制劑的組成及施用量編號酶制劑施用量(酶活單位/克煙葉)最佳施用量(酶活單位/克煙葉)1α-淀粉酶0～10005～2002β-淀粉酶0～10001～2003糖化酶0～300090～7004普魯蘭酶0～30005～3505纖維素酶0～15005～2006半纖維素酶0～150020～8007木聚糖酶0～15005～2508果膠酶0～150050～6009漆酶0～15005～20010木瓜蛋白酶0～20005～20011芒果蛋白酶0～20001～25012菠蘿蛋白酶0～200015～20013無花果蛋白酶0～20001～70014胰蛋白酶0～20005～20015胃蛋白酶0～20001～16016中性蛋白酶0～20001～110017酸性蛋白酶0～200050～50018堿性蛋白酶0～200040～16019脂肪酶0～20002～200優(yōu)選地，酶制劑是包括α-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、胃蛋白酶和脂肪酶的復合酶制劑。在特定的實施方案中，復合酶制劑可以是：(1)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、無花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；(2)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、無花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；(3)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；(4)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；(5)由α-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；(6)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑；或(7)由α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶、普魯蘭酶、纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、漆酶、木瓜蛋白酶、芒果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和脂肪酶組成的酶制劑。酶制劑中酶的種類以及施用量可以根據(jù)煙葉葉組的特質(zhì)進行調(diào)整。各種酶的施用量范圍如表1所示。施用酶制劑與煙葉葉組之間的質(zhì)量比為0.01％～25％。本發(fā)明的第二方面還提供了一種利用酶制劑改善煙葉雜味并提升香氣的方法。酶制劑的施用添加在回潮工序或加料工序進行。酶制劑既可以通過松散回潮或真空回潮工藝通過水分噴口施加在煙葉上，也可以在加料工序通過獨立加料噴口或與料液混合后施加。通過這兩道工序，煙葉的含水率應(yīng)在12％～30％以保證酶在后續(xù)的貯葉工序中對煙葉的處理效率。酶制劑對煙葉的處理通過貯葉工序在貯葉間或人工發(fā)酵室中完成，溫度為25～55℃，相對濕度為40％～80％，貯葉時間為1～48小時。酶處理完成后，利用烘絲工序的高溫處理使酶失活。烘干工序可以選擇HXD干燥，工藝熱風氣體溫度為170～210℃?；蜻x用薄板烘干，筒壁溫度為130～150℃，熱風溫度為90～110℃。烘干處理時間為1～5分鐘，煙絲經(jīng)過烘絲工序后的含水率為11％～14％。本發(fā)明具有以下優(yōu)點：(1)經(jīng)過本發(fā)明的酶制劑處理，能夠顯著降解對煙草吸食品質(zhì)有害的大分子化合物，從而起到改善煙葉雜味、提升香氣的作用。(2)本發(fā)明的酶制劑組成多樣，能夠適用于各種不同類型、不同特質(zhì)的煙葉葉組。(3)本發(fā)明的方法工藝簡單，利用現(xiàn)有的煙葉制絲生產(chǎn)工藝，不需要增加額外的工藝步驟，成本低，應(yīng)用前景好。附圖說明圖1本發(fā)明的工藝流程示意圖。圖2酶處理后煙絲中的淀粉、還原糖、蛋白質(zhì)含量，其中，葉組2和葉組3分別為實施例2和實施例3中的葉組。具體實施方式下面通過實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1～8酶制劑處理后煙葉葉組的感官評吸實施例1～8分別選用不同的煙葉葉組(見表2)，針對每種葉組的特質(zhì)選擇了不同的酶制劑配方(見表3)，按照表4的工藝參數(shù)對8種不同類型的葉組進行酶處理。表2實施例1～8中使用的煙葉葉組表3實施例1～8中酶制劑的組成及施用量(酶活單位/克煙葉)實施例12345678α-淀粉酶61523398012117727β-淀粉酶91822214016012糖化酶96137111169600459485189普魯蘭酶913015116851693206纖維素酶1601901528851752323半纖維素酶199251145667823234821木聚糖酶0001771323655果膠酶18619926955918765152459漆酶0001754333685木瓜蛋白酶26551823647551966芒果蛋白酶2045699241699菠蘿蛋白酶00017355688818無花果蛋白酶159224766255182422胰蛋白酶0608818555440胃蛋白酶766435815359681中性蛋白酶45855993610055502036酸性蛋白酶561950634451726899堿性蛋白酶5568478896151078脂肪酶8819567325568734表4實施例1～8中的酶處理工藝條件對照試驗葉組施加同比例的純凈水，試驗工藝條件與酶處理葉組完全相同。酶處理后對實施例1～8的葉組進行感官評吸。對比感官評吸的結(jié)果如表5所示。表5實施例1～8中酶處理葉組的感官評吸結(jié)果實施例受施葉組1煙氣青雜氣明顯降低，刺激性減輕2煙氣透發(fā)性提升明顯，香氣質(zhì)提高3雜氣刺激性降低，甜感提升，協(xié)調(diào)性提高4雜味降低，香氣質(zhì)、香氣量均有提升，透發(fā)性改善5雜氣刺激性降低，香氣質(zhì)提升6雜味改善明顯，透發(fā)性改善7青雜氣降低，透發(fā)性改善，甜感增加，刺激降低8雜氣刺激性降低，甜感增加感官評吸結(jié)果顯示，經(jīng)過本發(fā)明的酶制劑處理，能夠顯著降低各種類型煙葉的雜味，提升其香氣，達到改善煙葉吸食品質(zhì)的作用。實施例9酶活測定方法(1)α-淀粉酶：在10mL試管中依次加入0.5％可溶性淀粉溶液1mL，pH4.2的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液2.5mL，40℃預熱10min。然后加入多倍稀釋的0.5mL酶液，40℃保溫5min后，加入0.1mol/LH2SO41mL終止反應(yīng)。再取2mL反應(yīng)液與0.5％KI-I2溶液0.5mL顯色，測定OD620。與淀粉梯度標準曲線對照得反應(yīng)液淀粉濃度后，計算酶活力。在pH4.2、溫度40℃下，5min水解可溶性淀粉1mg所需的酶量為一個酶活力單位。(2)β-淀粉酶：在10mL試管中依次加入0.5％可溶性淀粉溶液1mL，pH4.2的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液2.5mL，40℃預熱10min。然后加入多倍稀釋的0.5mL酶液，40℃保溫5min后，加入0.1mol/LH2SO41mL終止反應(yīng)。再取2mL反應(yīng)液與0.5％KI-I2溶液0.5mL顯色，測定OD620。與淀粉梯度標準曲線對照得反應(yīng)液淀粉濃度后，計算酶活力。在pH4.2、溫度40℃下，5min水解可溶性淀粉1mg所需的酶量為一個酶活力單位。(3)糖化酶：采用次碘酸鈉法，定義為：40℃，pH4.5下，1小時水解生成1mg葡萄糖為一個酶活力單位。(4)普魯蘭酶：將1克普魯蘭酶加入1ml0.5％的普魯蘭糖溶液，60℃保溫20min；冷水降溫，加入1ml的DNS溶液沸水浴煮10min；迅速冷卻后在540nm波長下測定溶液的吸光值。對照為在加DNS后，沸水浴前加入酶液。酶活單位定義：在相應(yīng)條件下，每分鐘分解普魯蘭所釋放的還原糖，其還原力相當于lmmol葡萄糖所需的酶量，以一酶活單位表示。(5)纖維素酶：采用DNS顯色法，定義為：50℃，pH4.8下，半小時催化水解生成1mg葡萄糖為一個酶活力單位。(6)半纖維素酶：采用DNS顯色法，定義為：50℃，pH4.8下，半小時催化水解生成1mg葡萄糖為一個酶活力單位。(7)木聚糖酶：以木聚糖為底物，用DNS法測定還原糖的生成量。取稀釋酶液0.1ml，加1％木聚糖液0.9ml，置50℃水浴保溫30min后，加DNS2ml于沸水浴中顯色3min，用自來水冷卻后，加蒸餾水定容25ml，測OD值。每毫升酶液每分鐘水解木聚糖生成1μmol木糖所相當?shù)拿噶俊?8)果膠酶：向具塞試管中加入1.8mL0.30％聚半乳糖醛酸溶液(用0.05mol/LNa2CO3/NaHCO3緩沖溶液配制，調(diào)節(jié)pH10.0)，于55℃水浴下保溫5min，然后加入一定稀釋倍數(shù)的酶液0.2mL反應(yīng)15min，加入DNS試劑1.5mL，混勻，在沸水中加熱10min，立即用自來水冷卻，再加入21.5mL蒸餾水，混勻，于分光光度計上520nm測定吸光度。空白用煮沸失活的酶液代替。在上述試驗條件下，以每分鐘分解底物產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸所需的酶量為1個酶活力單位。(9)漆酶：3.0mL反應(yīng)液中含20mmol/LABTS0.7mL，酶液0.lmL和25mmol/L琥珀酸緩沖液(pH4.5)，在25℃下反應(yīng)2min后立即用冰浴終止反應(yīng)，測定436nm處吸光度的增量。(10)木瓜蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(11)芒果蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(12)菠蘿蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(13)無花果蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(14)胰蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(15)胃蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(16)中性蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(17)酸性蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(18)堿性蛋白酶：取3支試管(一支空白管，兩支樣品管)，分別向3支試管中準確加入稀釋好的待測酶液1.0mL，將3支試管放入40℃水浴中預熱5min，同時將測定底物(1％酪素)置同一溫度水浴中預熱5min。分別向兩只樣品管中加入1％酪素溶液1.0mL，準確計時，反應(yīng)10min取出。迅速準確向兩只樣品管加入0.4mol/L三氯乙酸2mL，于空白管中加入0.4mol/L三氯乙酸2mL和1.0mL1％酪素溶液，搖勻。3支試管中反應(yīng)液用濾紙過濾。另取3支試管，分別吸取上述相應(yīng)濾出液1.0mL，0.4mol/L碳酸鈉溶液5.0mL和稀福林試劑1.0mL，搖勻，置40℃水浴中放置20min(顯色)，取出，迅速冷卻置室溫。以空白管調(diào)儀器零點，在分光光度計波長660nm處分別測兩支樣品管吸光度，取平均值。通過查標準曲線求出生成酪氨酸的含量。(19)脂肪酶：在40℃、pH7.5，以每分鐘從橄欖油中釋放lμmol脂肪酸的酶量定義為一個酶活力單位。實施例10酶處理后煙葉葉組的化學成分分析取實施例2和實施例3中酶處理后的煙葉葉組，與純凈水處理對照樣品進行了煙絲化學成分的分析，檢測了淀粉、還原糖、總蛋白質(zhì)的含量，結(jié)果如圖2所示?；瘜W成分分析結(jié)果顯示，經(jīng)過本發(fā)明的酶制劑處理，能夠顯著降低對煙草吸食品質(zhì)有害的大分子化合物含量，從而提升了煙葉質(zhì)量。本發(fā)明不局限于上述最佳實施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其它各種形式的產(chǎn)品，但不論在其形狀或結(jié)構(gòu)上作任何變化，凡是具有與本申請相同或相近似的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3