本發(fā)明涉及分子生物學和免疫學領域，具體地說，涉及結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c及其T細胞表位肽在結核病檢測試劑、疫苗和藥物制備中的應用。
背景技術：
：結核病是由結核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病，調查結果顯示全世界有三分之一的人口處于潛伏感染，且有5％～10％在未來的生活中將可能發(fā)展為活動性結核病。自1993年世界衛(wèi)生組織宣布結核病成為全球危機后，結核病的發(fā)病率和死亡率一直居高不下，據(jù)WHO報告，每年新增結核病人約800萬，每年約有200～300萬人死于結核病。我國在22個結核高負擔國家中位居第2位，全國第5次流行病學抽樣檢查結果顯示：全國130萬人發(fā)病，占全球發(fā)病率的14.3％，我國也是全球27個耐藥結核病高負擔國家之一，耐多藥結核病患病人數(shù)占據(jù)全球第一。每個未經治療的活動性肺結核病人能夠傳染10～15人。結核病已經成為全球重要的衛(wèi)生問題，需引起人們的高度重視。結核的早期診斷和預防治療對結核病的控制至關重要，研究者應致力于開發(fā)高效、敏感、特異的結核診斷檢測方法。臨床上肺結核癥狀表現(xiàn)為咳嗽、咳痰、高熱等，容易與慢性支氣管炎、支氣管擴張、肺炎、感冒等混淆，需要借助影像學、細菌學、免疫學等診斷方法方可確診。臨床上常用的是細菌學方法痰涂片鏡檢和痰培養(yǎng)，痰涂片鏡檢是世界范圍內結核病檢查中使用最廣泛的技術，由于此法設備簡便，適合在經濟不發(fā)達的地區(qū)使用。但是由于對樣本中的菌含量要求高，因此該方法靈敏度不高，導致大量涂陰患者不被發(fā)現(xiàn)從而轉陽，且涂陰患者具有傳染性，不容忽視，該方法無種特異性，靈敏度差，受痰液標本和病情的影響。痰培養(yǎng)作為結核病診斷的金標準，但是存在培養(yǎng)時間過長，現(xiàn)在已有BACTECMGIT960系統(tǒng)等快速培養(yǎng)系統(tǒng)可在2周內分離培養(yǎng)結核分枝桿菌，但由于其配制的培養(yǎng)基、營養(yǎng)添加劑、雜菌抑制劑價格昂貴，無法在發(fā)展中國家廣泛推廣，并且快速培養(yǎng)與改良L-J培養(yǎng)相比污染率顯著增高，導致假陽性結果出現(xiàn)。常用的用于人群篩查的檢測方法是皮膚結核菌素實驗，使用的是結核菌純蛋白衍生物(PPD)，由于PPD中含有許多分枝桿菌種類(致病性分枝桿菌、環(huán)境分枝桿菌和BCG)所共有的抗原分子，因此PPD診斷結核病的特異性較差，不能有效區(qū)分結核分枝桿菌感染與卡介苗接種，結核的影像學檢查如常規(guī)的X線檢查、CT檢查、MRI檢查、超聲檢查等價格昂貴，且對身體造成一定傷害，特異性低，不適合用于常規(guī)的檢查診斷。目前以T細胞為基礎的檢測方法T-SPOT是利用IFN-γ特異性抗體捕獲經結核抗原刺激的外周血淋巴細胞培養(yǎng)后產生的IFN-γ，并以酶聯(lián)免疫斑點顯色的方式表現(xiàn)出來，從斑點的數(shù)量來確定細胞分泌細胞因子的情況，從單細胞水平評價細胞免疫功能。以T細胞為基礎的體外γ干擾素的檢測被用于結核病的輔助診斷，該檢測方法不僅能篩選出活動性結核病人，同時也能檢測出潛伏期病人，從而能更好的預防和控制潛伏期結核，目前已有以結核分枝桿菌基因組RD1區(qū)編碼的結核特異性抗原ESAT-6和CFP-10的全蛋白或多肽為刺激物的商品化的IGRA檢測試劑盒，如QuantiFERON-TBGoldtest和T-SPOT，均呈現(xiàn)較高的靈敏性和特異性。而Rv0585c(GI:15607725)是H37Rv基因組上的基因，基因全長2388bp，編碼795個氨基酸，是一種保守膜蛋白，目前功能未知，可能是一種結核毒力相關蛋白，Rv0585c在結核分枝桿菌復合群中存在，利用生物信息學軟件對其進行抗原表位預測分析，發(fā)現(xiàn)Rv0585c蛋白存在較多的T細胞表位，具有潛在的診斷效能。本發(fā)明建立在反向疫苗學的基礎上，利用計算機篩選出結核分枝桿菌可能的免疫原性抗原庫，然后利用生物信息學軟件TEpredict和IEDB預測結核抗原MHC-I類T細胞表位，通過固態(tài)合成法合成這些多肽，先利用人群免疫篩選試驗對結核新抗原進行篩選，篩選出免疫優(yōu)勢抗原之后，再通過動物實驗對其免疫原性進行驗證，最后經驗證得到的免疫優(yōu)勢抗原可一方面用于結核診斷，另一方面可用于卡介苗的改造。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c的應用。本發(fā)明的另一目的是提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585cT細胞表位肽及其應用。本發(fā)明基于以下構思：Rv0585c是結核分枝桿菌上的保守膜蛋白，主要參與細胞壁的加工過程，是可能的結核毒力相關蛋白。本發(fā)明基于T細胞IFN-γ釋放技術，利用生物信息學軟件TEpredict和IEDB對Rv0585c編碼基因上T細胞抗原表位進行預測，利用固態(tài)合成法合成表位多肽，再通過T-SPOT法對結核病人、肺部其他疾病患者、健康人體內的特異性T淋巴細胞進行檢測，從而評價該抗原用于結核檢測的靈敏度和特異性，同時通過人群免疫學實驗篩選出Rv2201抗原蛋白上的免疫優(yōu)勢表位肽，再通過動物實驗，確定免疫優(yōu)勢T細胞表位肽的免疫原性。為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c在制備結核檢測與診斷試劑中的應用；其中，所述抗原蛋白Rv0585c的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有相同免疫原性和相同抗原性的氨基酸序列。本發(fā)明還提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585cT細胞表位肽，所述表位肽選自P24、P26、P31，其氨基酸序列分別如SEQIDNO:1-3所示。本發(fā)明還提供由所述T細胞表位肽衍生的表位肽或其類似物。本發(fā)明還提供編碼所述表位肽的DNA分子。本發(fā)明還提供含有編碼所述表位肽的DNA分子的表達盒及表達載體。本發(fā)明還提供含有編碼所述表位肽的DNA分子的轉基因細胞系。本發(fā)明還提供含有編碼所述表位肽的DNA分子的重組菌及其表達純化的重組蛋白。本發(fā)明還提供所述表位肽、編碼所述表位肽的DNA分子、所述轉基因細胞系或所述重組菌及其表達純化的重組蛋白在制備結核檢測試劑、疫苗和藥物中的應用。本發(fā)明還提供一種結核診斷試劑，所述診斷試劑中含有結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c，或編碼所述抗原蛋白Rv0585c的DNA分子，或由含有所述DNA分子的重組菌產生的重組蛋白；和/或，所述表位肽、編碼所述表位肽的DNA分子和/或所述重組蛋白。本發(fā)明還提供含有上述診斷試劑的結核T-SPOT檢測試劑盒。所述試劑盒還包括以下材料或試劑：①一抗：抗人或動物IFN-γ的小鼠IgG單克隆抗體。②酶標試劑：辣根過氧化物酶標記的抗人或動物IFN-γ不同表位的另一種小鼠IgG單克隆抗體。③標準品：培養(yǎng)板：含有PVDF膜或硝酸纖維素膜的96孔微孔反應板，陽性對照孔中含有結核非特異性刺激抗原(如PHA等)，陰性對照孔含有PBS或基底液。④其他T-SPOT檢測所需的試劑及耗材。優(yōu)選地，一抗固定在上述微孔反應板上。本發(fā)明是基于雙抗體夾心原理，采用T-SPOT法檢測抗原，實驗過程為：PVDF膜上包被的一抗作為捕獲抗體能夠結合細胞上清中的IFN-γ，而IFN-γ又能被酶標二抗捕獲、顯色。兩種抗體為識別IFN-γ不同抗原表位的單克隆抗體。本發(fā)明還提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c和/或所述表位肽、編碼所述表位肽的DNA分子、所述轉基因細胞系或所述重組菌及其表達純化的重組蛋白在制備結核疫苗和抗結核藥物中的應用。本發(fā)明還提供一種結核疫苗，其有效成分為結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c，或編碼所述抗原蛋白Rv0585c的DNA分子，或由含有所述DNA分子的重組菌產生的重組蛋白；和/或，所述表位肽、編碼所述表位肽的DNA分子和/或所述重組蛋白。本發(fā)明還提供一種抗結核藥物，其有效成分包括以結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c和/或所述表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實驗動物，制備的多克隆抗體，或者以結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c和/或所述表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實驗動物，采用雜交瘤技術或DNA重組技術，制備的識別所述結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c及其T細胞表位肽抗原的人源化單克隆抗體。本發(fā)明進一步提供結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c和/或所述表位肽及其衍生的表位肽或其類似物在檢測結核分枝桿菌感染引起的特異性T細胞和B細胞免疫反應中的應用。其是將人或動物的淋巴細胞經所述表位肽及其衍生的表位肽或其類似物抗原或它們的組合物刺激后，檢測T細胞或B細胞分泌的細胞因子。其中，結核特異性T細胞分泌的細胞因子包括：γ干擾素(IFN-γ)、白細胞介素2(IL-2)、白細胞介素4(IL-4)、白細胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)等。B細胞分泌的細胞因子包括抗體。針對結核特異性T細胞分泌的細胞因子的檢測方法包括酶聯(lián)免疫斑點試驗(T-SPOT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫膠體金試驗、細胞因子內染色和T細胞增殖試驗等。B細胞分泌的細胞因子的檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等。所述淋巴細胞來自人或動物的外周血、靜脈血、腦脊液、胸腔積液或胸水等。本發(fā)明具有以下優(yōu)點：(一)本發(fā)明利用結核分枝桿菌Rv0585c蛋白抗原及其T細胞表位肽作為刺激物用于結核分枝桿菌感染引起的特異性T細胞和B細胞免疫反應，與以往采用完全抗原相比，能夠降低由于抗原不純造成的假陽性。(二)研究證明，本發(fā)明提供的抗原表位均能夠刺激機體產生較強的T細胞免疫反應，因此當使用上述表位作為刺激物進行體外T細胞γ干擾素釋放實驗時，靈敏度顯著提高。(三)采用固相合成的方法合成表位多肽，有利于質量控制，且成本較低，純度高，適合大規(guī)模商業(yè)化生產。(四)本發(fā)明的抗原蛋白Rv0585c是結核毒力相關因子，T細胞反應的高強度顯示該抗原具有較強的免疫原性，動物實驗同樣證實了Rv0585c及其T細胞表位具有良好的免疫原性，因此可用作新型結核疫苗候選抗原。(五)本發(fā)明的檢測試劑可廣泛用于結核病的輔助診斷、流行病學監(jiān)測等相關領域。附圖說明圖1顯示本發(fā)明實施例5中抗原蛋白Rv0585c的T細胞表位肽P24、p26可有效刺激機體產生IFN-γ(A)、IL-4(B)和IL-10(C)。實施方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。實施例1結核分枝桿菌抗原基因Rv0585c的克隆及蛋白的表達純化Rv0585c(GI:15607725)是結核分枝桿菌H37Rv基因組編碼的保守膜蛋白，含795個氨基酸，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。根據(jù)其編碼基因序列(SEQIDNO:5)，設計引物，利用原核表達系統(tǒng)(如大腸桿菌)表達并純化獲得抗原蛋白Rv0585c。實施例2結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585cT細胞表位肽的合成基于T細胞IFN-γ釋放技術，利用生物信息學軟件TEpredict和IEDB對Rv0585c編碼基因上T細胞抗原表位進行預測，利用固態(tài)合成法合成表位多肽，再通過T-SPOT法對結核病人、肺部其他疾病患者、健康人體內的特異性T淋巴細胞進行檢測，從而評價該抗原用于結核檢測的靈敏度和特異性。本實施例提供的結核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585cT細胞表位肽選自P24、P26、P31，其氨基酸序列分別如SEQIDNO:1-3所示。實施例3結核T-SPOT檢測試劑盒的制備所述試劑盒基本組成如下：①實施例1制備的蛋白抗原Rv0585c和/或實施例2合成的表位肽抗原：所述表位肽選自P24、P26、P31中的至少一種。②一抗：抗人或動物IFN-γ的小鼠IgG單克隆抗體。酶標試劑：辣根過氧化物酶標記的抗人或動物IFN-γ不同表位的另一種小鼠IgG單克隆抗體。③標準品：培養(yǎng)板：含有PVDF膜或硝酸纖維素膜的96孔微孔反應板，陽性對照孔中含有結核非特異性刺激抗原(如PHA等)，陰性對照孔含有PBS或基底液。④其他T-SPOT檢測所需的試劑及耗材。將一抗固定在上述微孔反應板上。該試劑盒是基于雙抗體夾心原理設計的，采用T-SPOT法檢測抗原，實驗過程為：PVDF膜上包被的一抗作為捕獲抗體能夠結合細胞上清中的IFN-γ，而IFN-γ又能被酶標二抗捕獲、顯色。兩種抗體為識別IFN-γ不同抗原表位的單克隆抗體。實施例4抗原表位肽用于結核感染的臨床檢測1.外周血淋巴細胞的分離1.1受試對象①志愿者病例的篩選標準：臨床表現(xiàn)癥狀、體征及胸部影像學檢查診斷為肺結核的，且痰培養(yǎng)為陽性的肺結核患者。②肺部疾病患者的篩選標準：痰培養(yǎng)和痰涂片為陰性的肺部其他疾病，如塵肺、慢阻肺等肺部疾病患者。③健康志愿者的篩選標準：無結核臨床癥狀、無結核病人密切接觸史、無其他疾病或感染。入選的結核病患者和志愿者年齡在15-80歲之間，從到結核病室就診的連續(xù)時間樣本中隨機選取。共采集了50例結核病志愿者、43例肺部疾病患者及55例健康志愿者血液樣本，采血時使用無內毒素的肝素抗凝真空采血管采集外周靜脈血，每名志愿者采血約5ml～10ml。1)樣品于4小時內用Ficoll-Hypaque分離液分離PBMCs。2)先將全血用RPMI-1640培養(yǎng)基1:1稀釋混勻，在離心管中加入一定體積的分離液，將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方，保持兩液面界面清晰，分離液、抗凝未經稀釋全血、RPMI1640培養(yǎng)基體積為1:1:1，室溫(18～26℃)，800g離心20分鐘。3)離心結束后，管底是紅細胞，中間層是分離液，最上層是血漿層，血漿層與分離液層之間是白色云霧狀的單個核細胞(包括淋巴細胞和單核細胞)層。用吸管吸取白色云霧狀細胞層并轉移至15ml無菌離心管中，加入RPMI1640培養(yǎng)基至10ml，室溫下800g離心10分鐘。4)棄去上清，重懸后加入7mlRPMI1640培養(yǎng)基，700g離心10分鐘。5)棄去上清加0.5mlAIM-V培養(yǎng)基重懸沉淀。6)利用自動細胞計數(shù)儀對細胞計數(shù)，用AIM-V培養(yǎng)基配制500μl細胞濃度為2.5×106/ml的細胞懸液。2.抗原表位肽的準備將實施例2中固相合成法合成的抗原表位肽用DMSO溶解，各條表位肽分別用含10％胎牛血清的RPIM1640培養(yǎng)基稀釋至一定濃度后使用。3.T-SPOT檢測抗原表位肽特異性T細胞采用實施例3的試劑盒，向預包被一抗的微孔板中加入以下試劑，每個病人分別設6個檢測孔：陽性對照孔(加100μl濃度為15μg/ml的植物血凝素PHA作為陽性刺激物)、陰性對照孔(加100μlPBS作為陰性對照)、3個檢測孔(3個孔中分別加入100μl濃度為20μg/ml的4條表位肽P24、P26、P31中的一條)，每個孔中加入100μl上述稀釋好的PBMC，使每孔中PBMC的數(shù)量達25萬個，將抗原與PBMC細胞置于37℃，5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20小時。4.洗板及結果判定洗去PBMC細胞和抗原刺激物，加100μl一抗室溫下孵育1小時，用PBS洗5遍，加二抗室溫孵育1小時，再用PBS洗5遍，加底物避光顯色7分鐘后，用純化水終止顯色，將培養(yǎng)板放在通風口處晾干觀察板上的斑點數(shù)。結果判定(表1)：空白對照孔斑點數(shù)＝N、檢測孔斑點數(shù)＝T、陽性質控孔斑點數(shù)＝P。表1T-SPOT結果判斷標準其中三條表位肽檢測50例結核病人、43例肺部其他疾病患者和55個健康人的結果統(tǒng)計見表2。表2Rv0585c蛋白抗原三條表位肽檢測靈敏度和特異度統(tǒng)計表位肽靈敏度(％)特異度(％)P2414100P2612100P31697.963條多肽聯(lián)合2297.96檢測靈敏度＝(結核病患者檢測陽性數(shù)/結核病患者總數(shù))×100％檢測特異度＝1-(肺結核病患者檢測陽性數(shù)+健康志愿者檢測陽性數(shù))/(肺部疾病患者總數(shù)+健康志愿者總數(shù))按照單條多肽檢測出陽性即為陽性的原則，經計算得出Rv0585c蛋白抗原P24、P26、P31三條表位肽聯(lián)合檢測出結核病人的靈敏度為22％，特異度為97.96％。實施例5Rv0585cT細胞表位肽的免疫原性檢測1、為了驗證Rv0585cT細胞表位肽的免疫原性，考慮到裸肽易降解且不易被抗原遞呈細胞識別的特性，將合成的裸肽與血藍蛋白(KLH)進行偶聯(lián)，將偶聯(lián)得到的T細胞表位肽進行免疫BALB/c小鼠。2、免疫小鼠篩選6周齡的雌性BALB/c小鼠48只，分為8組，PBS陰性對照組(PBS)，佐劑對照組血藍蛋白(KLH)對照組，結核分枝桿菌抗原蛋白Ag85B20μg低劑量組(Ag85B-L)、Ag85B50μg高劑量組(Ag85B-H)、Rv0585cP24多肽50μg低劑量組(P24-L)、Rv0585cP24多肽100μg高劑量組(P24-H)、Rv0585cP26多肽50μg低劑量組(P26-L)、Rv0585cP26多肽100μg高劑量組(P26-H)。將每組抗原與相應的佐劑--多聚肌苷酸poly(I:C)50μl和雙十八烷基二甲基溴化銨(DDA)100μl充分乳化后采用皮下接種的方式免疫小鼠，每隔2周免疫一次，共免疫三次，末次免疫4周后進行檢測。3、將上述免疫的小鼠處死后，在75％酒精中浸泡5分鐘，將小鼠固定在超凈臺中的泡沫板上，剪開腹膜，分離出脾臟，將其置于裝有1640的平皿中。4、在200目的尼龍網(wǎng)上，用注射器內芯輕輕研磨小鼠脾臟，將研磨的細胞通過濾網(wǎng)過濾。1000r/min離心5分鐘棄上清，收集細胞沉淀。5、將細胞沉淀輕輕振蕩使其松動，按照2ml/只加入紅細胞裂解液，混勻后，置于37℃溫箱中孵育10分鐘后，加入相當于紅細胞裂解液2倍體積的1640培養(yǎng)基終止反應，1000r/min離心5分鐘棄上清，收集脾細胞沉淀。6、用1640培養(yǎng)基2ml/只重懸脾細胞，1000r/min離心5分鐘棄上清，收集脾細胞沉淀。用細胞計數(shù)儀測定細胞濃度。7、用含有10％FBS的1640培養(yǎng)基稀釋脾細胞，使其濃度為2×106/ml。每組取500μl脾細胞液置于24孔培養(yǎng)板中，PBS組和DP佐劑組脾細胞分別用Ag85B蛋白(5μg/ml)、Rv0585c的T細胞表位肽P24、P26(5μg/ml未偶聯(lián)KLH蛋白的裸肽)與脾細胞共同孵育，Ag85B-L和Ag85B-H組分別用500μl的Ag85B蛋白(5μg/ml)與脾細胞共同孵育，P24-L和P24-H組均用500μlP24多肽(5μg/ml未偶聯(lián)KLH蛋白的裸肽)與脾細胞共同孵育，P26-L和P26-H組均用500μl的P26多肽(5μg/ml未偶聯(lián)KLH蛋白的裸肽)與脾細胞共同孵育，每組加入500μl的無菌PBS和500μl植物血凝素(PHA)(5μg/ml)作為陰性對照和陽性對照，每個檢測孔均做2個重復。將脾細胞與相應的刺激物在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育72小時后，收集細胞上清，采用ELISA法檢測上清中的IFN-γ、IL-4、IL-10。8、將IFN-γ單抗、IL-4單抗等用碳酸鹽緩沖液(pH＝9.6)，L-10單抗用碳酸鹽緩沖液(pH＝6.5)按照1:500倍稀釋后，按100μl/孔加入到96微孔板中，4℃包被過夜。9、用PBTS洗滌3遍后，拍干，加入含10％FBS的PBS液室溫封閉1小時。10、用PBST洗滌5遍后，將IFN-γ、IL-4、IL-10的標準品按照對應的比例稀釋成相應濃度，分別加入到各ELISA板上，作為標準曲線。其余加入100μl待檢測的細胞上清，室溫孵育2小時。11、用PBST稀釋5遍后，分別加入100μlIFN-γ、IL-4、IL-10各自的檢測抗體+HRP標記的二抗，室溫孵育1小時。12、用PBST洗滌7遍后，加入TMB顯色液100μl，室溫孵育30分鐘后，加入終止液50μl終止反應。13、酶標儀測定波長450nm的吸光值，同時檢測波長570nm的吸光值作為對照。14、結果分析：根據(jù)細胞因子標準品制作標準曲線，然后將檢測孔的OD值代入公式，計算每組小鼠各種細胞因子的終濃度。結果如圖1所示。結果顯示，與空白對照PBS組和陰性對照KLH組相比，Rv0585c的T細胞表位肽P24能刺激小鼠產生較高濃度的IFN-γ(P＜0.05)、IL-4(P＜0.001)，且P24高劑量組產生IFN-γ(P＜0.001)、IL-4(P＜0.001)的量高于低劑量組。Rv0585c的T細胞表位肽P26能刺激小鼠產生高濃度的IFN-γ(P＜0.05)、IL-4(P＜0.001)、IL-10(P＜0.001)，且P24高劑量組產生IFN-γ(P＜0.001)、IL-10(P＜0.001)的量高于低劑量組。IFN-γ是Th1型細胞因子，可以通過激活巨噬細胞從而促進巨噬細胞對結核分枝桿菌的清除。IL-4和IL-10是Th2型細胞因子，促進結核感染過程中的抗體產生。在結核感染中起到免疫調節(jié)作用。采用上述方法分別對Rv0585cT細胞表位肽P24、P26進行細胞免疫原性檢測，結果表明，P24、P26也能夠刺激小鼠產生相應的細胞因子?？梢姡Y核分枝桿菌抗原蛋白Rv0585c的三條T細胞表位肽，均能刺激結核病人產生IFN-γ，能有效區(qū)分結核病人和肺部其他疾患病人和健康人群，且三條多肽聯(lián)合診斷效率提高。Rv0585c及其T細胞表位肽均可作為一種檢測試劑用于結核病的診斷。在動物實驗中，Rv0585c的T細胞表位肽P24和P26均能有效刺激機體產生IFN-γ(P＜0.05)、IL-4(P＜0.001)、IL-10(P＜0.001)由此證明Rv0585c及其T細胞表位肽具有良好的免疫原性，能刺激機體產生細胞免疫應答，是一種免疫優(yōu)勢抗原，可以考慮用作結核分枝桿菌疫苗的構建和制備。雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。當前第1頁1 2 3