1.一種標(biāo)準(zhǔn)分子量片段混合物的制備方法,其特征在于,
所述標(biāo)準(zhǔn)分子量片段混合物包括1個(gè)80bp大小的SEQ ID No.1所示片段和其余9個(gè)片段,所述9個(gè)片段的大小分別為124bp、194bp、224bp、254bp、304bp、349bp、399bp、424bp和454bp,
其中,所述9個(gè)片段分兩部分進(jìn)行制備,首先以pMD18-T質(zhì)粒載體作為模板,利用針對(duì)以上9個(gè)片段的擴(kuò)增引物對(duì)所述模板分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得9個(gè)片段的擴(kuò)增序列,將所述擴(kuò)增序列酶切后獲得9個(gè)目標(biāo)片段,然后將各目標(biāo)片段分別插入質(zhì)粒載體獲得9個(gè)重組質(zhì)粒,并將各重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖,之后回收各重組質(zhì)粒并酶切獲得所述9個(gè)片段的第一部分,所述擴(kuò)增引物為SEQ ID No.2至SEQ ID No.19所示的核苷酸序列,然后將各片段的第一部分分別與作為第二部分的帶熒光接頭連接獲得所述9個(gè)片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述第一部分與所述第二部分通過粘性末端連接。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,插入目標(biāo)片段的質(zhì)粒載體為pMD18-T質(zhì)粒載體,所述酶切為Ecol RΙ和SalΙ雙酶酶切。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,作為第二部分的帶熒光接頭由兩條互補(bǔ)的DNA序列構(gòu)成,所述DNA序列為SEQ ID No.20和SEQ ID No.21所示的序列,所述帶熒光接頭的不互補(bǔ)端為Ecol RΙ粘性末端,所述帶熒光接頭的另一端的一條DNA鏈末端帶有熒光標(biāo)記物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述熒光標(biāo)記物位于SEQ ID No.20的5’端,所述熒光標(biāo)記物為ROX。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述宿主細(xì)胞為JM109大腸桿菌細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述第二部分與各片段的第一部分的連接條件為:第二部分與各片段的第一部分的摩爾比為3:1,連接溫度為37℃,連接時(shí)間為30min,然后升溫至95℃,5min終止連接反應(yīng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,將pMD18-T載體1963bp處至2391bp的序列作為模板來使用所述擴(kuò)增引物進(jìn)行擴(kuò)增。
9.一種標(biāo)準(zhǔn)分子量片段混合物,其特征在于,所述標(biāo)準(zhǔn)分子量片段混合物利用權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述方法獲得。
10.一種試劑盒,其特征在于,含有權(quán)利要求9所述的標(biāo)準(zhǔn)分子量片段混合物。