本發(fā)明屬于醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及具有抗腫瘤活性的5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其制備方法，以及含有它們的抗腫瘤藥物組合物。具體地說，涉及母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間的連接子為C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑是近年來抗腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，目前已有數(shù)個(gè)優(yōu)秀品種獲準(zhǔn)上市，多個(gè)候選物處于臨床或臨床前研究階段(JShenyangPharmUniv.2011,28,1005；ChinJOrgChem.2011,31,1595)。作為第一個(gè)被美國FDA批準(zhǔn)上市的多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑，舒尼替尼(Sunitinib)對多種實(shí)體瘤顯示明確的抑瘤活性(ChinJNewDrugsClinRem.2007,26,474)，其臨床適應(yīng)癥為對標(biāo)準(zhǔn)療法沒有響應(yīng)或不能耐受之胃腸道基質(zhì)腫瘤和轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌。本品對其他實(shí)體瘤的研究目前處于II和/或III期臨床試驗(yàn)階段。遺憾的是，舒尼替尼已有耐藥性的報(bào)道。近年來，本領(lǐng)域科學(xué)家對舒尼替尼進(jìn)行了較全面的結(jié)構(gòu)修飾，并篩選得到若干值得進(jìn)一步評(píng)價(jià)的有苗頭的化合物或候選物(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3814；Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,3819；J.Med.Chem.2010,53,8140；Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,3062；Med.Chem.Res.2013,22,1723)。然而，所有這些修飾均是在保留舒尼替尼母核結(jié)構(gòu)(吲哚啉-2-酮)的基礎(chǔ)上，對其1-位、3-位和/或5-位上的取代基進(jìn)行改造和優(yōu)化，而未見對舒尼替尼母核結(jié)構(gòu)本身進(jìn)行修飾的報(bào)道。2015年，劉明亮等學(xué)者公開了母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間的連接子為次乙基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物的合成與抗腫瘤活性(CN201510229131.1)。未涉及連接子為C3～C5-次烷基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物。為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的缺陷，本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛的研究，設(shè)計(jì)合成了一系列母核3-位取代基中酰胺鍵與仲胺基之間具有不同連接子的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，并測定和比較了它們的抗腫瘤活性。最終發(fā)現(xiàn)，不同于以往文獻(xiàn)報(bào)道的連接子為C3～C5-次烷基的5-(5-溴代-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺類化合物具有意想不到的強(qiáng)抗腫瘤活性，與相應(yīng)的連接子為次乙基的5-鹵代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物或同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優(yōu)越的抗腫瘤活性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一類由通式(I)表示的5-溴代-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物及其藥用鹽，其中：n代表3～5；R代表同時(shí)含有二個(gè)C1～C3－烷基的仲胺基，其中二個(gè)烷基可以是相同的，也可以是不同的，或者R代表環(huán)胺基。本發(fā)明的式(I)化合物的在藥學(xué)上可接受的非毒性的藥用鹽，包括與無機(jī)酸，如鹽酸、硫酸形成的鹽，與有機(jī)酸，如乙酸、三氟乙酸、檸檬酸、馬來酸、草酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、富馬酸、扁桃酸、抗壞血酸或蘋果酸形成的鹽，以及氨基酸，如丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸形成的鹽或與磺酸，如甲磺酸、對甲苯磺酸形成的鹽。本發(fā)明具體包括以下化合物，以及它們的藥用鹽：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。優(yōu)選的，本發(fā)明的化合物，如下：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供式(I)化合物及其藥用鹽的制備方法。如反應(yīng)路線1所示。反應(yīng)路線1：在反應(yīng)路線1中，n和R如前述的定義。在質(zhì)子溶劑中加入堿，使式(II)化合物與式(III)化合物通過縮合反應(yīng)來制備式(I)化合物。用于本反應(yīng)的質(zhì)子溶劑選自水、醇或醇-水混合溶劑；所述的堿選自三乙胺、吡咯烷、哌啶、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀。在本發(fā)明中用作起始物的式(II)化合物為已知化合物,國內(nèi)有商品供應(yīng)。式(III)化合物也為已知化合物,并參考現(xiàn)有出版物中已知的方法可容易地制得，例如劉明亮等，CN201510229131.1；LvK等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21：3062；Med.Chem.Res.2013,22：1723以及WangMH等，Bioorg.Med.Chem.Lett.2015,25:2782。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物用途。本發(fā)明式(I)所示化合物及其藥用鹽在制備治療實(shí)體瘤和非實(shí)體瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述實(shí)體瘤包括肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、子宮癌、鼻咽癌、頭頸癌、食道癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腎癌、前列腺癌、骨癌和腦癌；所述非實(shí)體瘤指白血病。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含有式(I)所示化合物及其藥用鹽的藥物組合物。本發(fā)明所述的藥物組合物，還含有藥物上可接受的載體。本發(fā)明所述的藥物組合物，以式(I)所示化合物及其藥用鹽作為抗腫瘤藥物的活性成分。藥物組合物含有的式(I)所示化合物及其藥用鹽在組合物中的重量比為0.1～99.9％，藥物可接受的載體在組合物中的重量比為0.1～99.9％。藥物組合物以適合藥用的制劑形式存在。藥用的制劑為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、混懸劑、注射劑、粉針劑、栓劑、霜?jiǎng)?、滴劑或貼劑。其中，所述片劑為糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑或緩釋片劑；所述膠囊劑為硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑；所述粉針劑為凍干粉針劑。本發(fā)明的藥物組合物，作為制劑形式，每劑中含有的發(fā)明化合物的有效量為0.1～1000mg，所述每劑指的是，每一制劑單位，如片劑的每片，膠囊的每粒，也可指每次服用劑量，如每次服用100mg。本發(fā)明的藥物組合物在制備成粉劑、片劑、可分散粉劑、膠囊、扁囊劑、栓劑和軟膏形式的固體或半固體藥物制劑時(shí)，可使用固體載體。可使用的固體載體優(yōu)選為選自稀釋劑、調(diào)味劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、膨脹劑等中的一種或多種物質(zhì)，或可為包封物質(zhì)。在粉狀制劑中，在載體中含有5～70％的微?；钚猿煞?。適宜的固體載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖、果膠、糊精、淀粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低沸點(diǎn)蠟、可可脂等。由于它們易于給藥，片劑，粉劑、扁囊劑和膠囊等代表最有利的口服固體制劑。本發(fā)明的液體制劑包括溶液、懸液和乳液。例如，非胃腸道給藥的注射制劑可為水或水-丙二醇溶液形式，調(diào)節(jié)其等滲度，pH等使適于活體的生理?xiàng)l件。液體制劑還可制成在聚乙二醇、水溶液中的溶液形式?？赏ㄟ^將活性成分溶解在水中，再加入適量的著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑和增稠劑，來制備口服水溶液?？蓪⑽⒘；幕钚猿煞址稚⒃谡承晕镔|(zhì)如天然和合成膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它已知懸浮劑中制備適于口服的水懸液。為了易于給藥及劑量均一，將上述藥物制劑配制成劑量單位形式是特別有利的。制劑的劑量單位形式指適于作為單一劑量的物理分離單位，每個(gè)單位含有產(chǎn)生所期望的治療效果的計(jì)算好的預(yù)定量的活性成分。這種劑量單位形式可為包裝形式，如片劑、膠囊或裝在小管或小瓶中的粉劑，或裝在管或瓶中的軟膏、凝膠或霜?jiǎng)?。雖然劑量單位形式中所含活性成分的量可以變化，但一般根據(jù)所選擇活性成分的效力，調(diào)節(jié)在1～800mg范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可按常規(guī)方法確定適于某種情況的優(yōu)選劑量。一般，開始治療的量低于活性成分的最佳劑量，然后逐漸增加給藥劑量，直到達(dá)到最佳治療效果。為治療需要，總的日劑量可一次給藥或分?jǐn)?shù)次給藥。本發(fā)明式(I)所示5-溴-7-氮雜吲哚啉-2-酮類化合物，與現(xiàn)有的同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼相比，具有更加優(yōu)越的抗腫瘤活性。而且，本發(fā)明的藥物安全性更高，有效的降低藥物的毒副作用。同時(shí)，本發(fā)明的制備方法工藝簡單，用時(shí)短，大大降低藥品的成本，適合大規(guī)模生產(chǎn)。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸(167mg,1mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(230mg,1.2mmol)、1-羥基苯并三唑(162mg，1.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)攪拌反應(yīng)20min后，加入N,N-二異丙基乙胺(365ml，2.2mmol)，N,N-二甲氨基丙胺(205mg，2mmol)，室溫反應(yīng)12h以上。加10ml蒸餾水稀釋，10ml飽和食鹽水，10ml飽和碳酸鈉,用氫氧化鈉溶液調(diào)pH＝10-11，用含10％甲醇的二氯甲烷萃取15mLx3次，水洗1次，飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥。抽濾，濾液減壓濃縮得紅色油狀液體(收率57％)。將上述油狀液體和5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮(100mg,0.46mmol)溶于無水乙醇(8mL)，加入6滴哌啶于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2h。過濾,濾餅用乙醇洗滌，后經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷：甲醇＝20:1，加少量三乙胺)分離純化，得橘黃色固體(收率：54％)，mp:258-260℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.61(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.2Hz,1H),3.25(q,J＝12.4Hz,2H),2.45(s,3H),2.42(s,3H),2.30(t,J＝6.5Hz,2H),2.16(s,6H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):446.3(M+H)+,448.3(M+H)+.(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺鹽酸鹽攪拌下,向上述橘黃色固體(100mg，0.224mmol)的甲醇混懸液中，通入干燥鹽酸氣30min，后回流攪拌30min。降至室溫，抽濾，干燥，得類白色固體(收率40％)。C20H24BrN5O2·HClCHNBrCl計(jì)算值49.755.2214.5116.557.34實(shí)測值49.745.2314.5016.537.34類似地也可以制備下述的鹽，例如：(Z)-N-[3-(二甲胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽。實(shí)施例2(Z)-N-[3-(二乙胺基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與3-二乙胺基丙胺發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:234-236℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.45(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.74(t,J＝5.3Hz,1H),3.25-3.31(m,2H),3.06-3.15(m,6H),2.47(s,3H),2.44(s,3H),1.86-1.92(m,2H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).MS-ESI(m/z):474.3(M+H)+,476.3(M+H)+.實(shí)施例3(Z)-N-[3-(吡咯烷-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)吡咯烷發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：54％)，mp:222-224℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.0Hz,1H),8.10(d,J＝2.0Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.4Hz,1H),3.26(q,J＝12.6Hz,2H),2.46-2.47(m,6H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),1.65-1.71(m,6H).MS-ESI(m/z):472.3(M+H)+,474.3(M+H)+.實(shí)施例4(Z)-N-[4-(吡咯烷-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)吡咯烷發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:230-232℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.74(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.3Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.37-2.40(m,6H),1.65-1.67(m,4H),1.48-1.53(m,4H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.實(shí)施例5(Z)-N-[5-(吡咯烷-1-基)戊基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(5-氨戊基)吡咯烷發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：55％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.76(t,J＝6.5Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.33-2.40(m,8H),1.66-1.68(m,4H),1.48-1.52(m,4H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.實(shí)施例6(Z)-N-[3-(哌啶-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：56％)，mp:236-238℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.56(t,J＝6.3Hz,1H),3.24(q,J＝12.6Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.17-2.37(m,6H),1.38-1.67(m,8H).MS-ESI(m/z):486.3(M+H)+,488.3(M+H)+.實(shí)施例7(Z)-N-[4-(哌啶-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)哌啶發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：58％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.64(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.1Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.37(m,6H),1.43-1.53(m,8H),1.33-1.40(m,2H).MS-ESI(m/z):500.3(M+H)+,502.3(M+H)+.實(shí)施例8(Z)-N-[3-(哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)哌嗪發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：50％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6+D2O)δ:8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):487.3(M+H)+,489.3(M+H)+.實(shí)施例9(Z)-N-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-甲基哌嗪發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：57％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.8Hz,2H),2.44(s,3H),2.42(s,3H),2.22-2.35(m,10H),2.13(s,3H),1.62-1.68(m,2H).MS-ESI(m/z):501.3(M+H)+,503.3(M+H)+.實(shí)施例10(Z)-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(4-氨丁基)-4-甲基哌嗪發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：55％)，mp:238-240℃。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.43(s,1H),11.63(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.73(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.0Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.16-2.37(m,10H),2.13(s,3H),1.45-1.50(m,4H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.實(shí)施例11(Z)-N-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺同實(shí)施例1化合物的制備方法，2,4-二甲基-5-醛基-1H-吡咯-3-羧酸先與1-(3-氨丙基)-4-乙基哌嗪發(fā)生縮合反應(yīng)，然后再與5-溴-7-氮雜吲哚-2-酮縮合，得橘黃色固體(收率：53％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.44(s,1H),11.62(s,1H),8.47(d,J＝2.1Hz,1H),8.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(s,1H),7.71(t,J＝5.6Hz,1H),3.22(q,J＝12.5Hz,2H),2.43(s,3H),2.41(s,3H),2.22-2.35(m,12H),1.62-1.68(m,2H),1.16(t,J＝7.0HZ,3H).MS-ESI(m/z):515.3(M+H)+,517.3(M+H)+.試驗(yàn)例1對實(shí)體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)本實(shí)驗(yàn)例在于研究本發(fā)明化合物對實(shí)體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性，試驗(yàn)方法采用SRB(磺酰羅丹明)法。根據(jù)腫瘤細(xì)胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的貼壁實(shí)體瘤細(xì)胞以170μL/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24h后加藥(30μL/孔)，每個(gè)濃度設(shè)3復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)48h。培養(yǎng)后，取出培養(yǎng)板，每孔加入50％(m/v)的三氯乙酸(TCA)50uL4℃放置lh，固定細(xì)胞。棄固定液，用蒸餾水洗滌5次，在空氣中干燥后，每孔加SRB溶液100uL，室溫下放置10-30min，進(jìn)行染色。去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣中自然干燥后，加入150μL/孔的Tris溶液，在平板振蕩器上振蕩10min。用酶聯(lián)免疫檢測儀測定570nm處的OD值，用空白對照調(diào)零。按以下公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：抑制率＝[(OD570對照孔－OD570給藥孔)/OD570對照孔]×100％。根據(jù)各濃度抑制率，采用Logit法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。以上每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)2～3次，求出2～3次實(shí)驗(yàn)的平均IC50值作為最終指標(biāo)。表1列出了本申請的式(Ⅰ)化合物中的若干代表化合物對三種實(shí)體瘤細(xì)胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性，并與同類抗腫瘤藥物-舒尼替尼以及CN201510229131.1中描述的結(jié)構(gòu)近似的代表化合物進(jìn)行比較。表1實(shí)施例1、3、5、6、7、9、10化合物對實(shí)體瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性(IC50：μM)*化合物A為CN201510229131.1中描述的實(shí)施例1化合物，即(Z)-N-[2-(二甲胺基)乙基]-5-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。*化合物B為CN201510229131.1中描述的實(shí)施例8化合物，即(Z)-N-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-5-(5-溴-2-氧代-1,2-二氫-3H-吡咯[2,3-b]吡啶-3-基亞甲基)-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。由表1可見，本申請的式(Ⅰ)化合物中的實(shí)施例1、3、5、6、7、9、10化合物對三種實(shí)體瘤細(xì)胞(HepG2/肝癌,A549/肺癌，SKOV-3/卵巢癌)的抗腫瘤活性(IC50：4.075–11.229μM)均優(yōu)于CN201510229131.1中描述的兩個(gè)結(jié)構(gòu)近似化合物(IC50：11.836–14.922μM)以及舒尼替尼(IC50：31.594–49.036μM)。其中，活性最強(qiáng)的式(Ⅰ)化合物中的實(shí)施例5化合物對三種實(shí)體瘤細(xì)胞的活性是CN201510229131.1中描述的兩個(gè)結(jié)構(gòu)近似化合物的1.9–3.7倍，而是舒尼替尼的5.2–12.1倍。盡管上述實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明只選取部分實(shí)施例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測試，但是實(shí)際上，本發(fā)明的其他藥物也能取得和上述藥物相同或者相近的治療效果。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3