本發(fā)明涉及放射性藥物化學(xué)和臨床核醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿爾茲海默癥(Alzheimer’s Disease，簡稱AD)，是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，是癡呆最常見的病因，主要表現(xiàn)出漸進(jìn)性記憶障礙、認(rèn)知功能障礙、人格改變及語言障礙等神經(jīng)精神癥狀，嚴(yán)重影響人的社交、職業(yè)與生活能力。全球共有超過2000萬AD病例，其患病率隨年齡增高而增高。隨著人口的老齡化，AD的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重危害老年人的身心健康和生活質(zhì)量，給病人造成深重的痛苦，同時也給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的社會問題，引起各國政府和醫(yī)學(xué)界的普遍關(guān)注。

然而臨床上至今沒有能對AD進(jìn)行確診的方法，唯有在顯微鏡下對死者腦組織進(jìn)行檢查，根據(jù)神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibrillary Tangles,NFTs)和老年斑(Senile Plaques,SPs)這兩項最主要的病理特征的有無，才能最終確診。因此，AD的診斷目前仍然是一項世界難題，該領(lǐng)域內(nèi)還有很多空白有待填補。

根據(jù)β淀粉樣蛋白(Amyloid-βPeptide,Aβ)級聯(lián)假說，可以針對腦內(nèi)Aβ斑塊設(shè)計小分子探針，通過影像學(xué)的方法，實現(xiàn)AD的診斷。結(jié)合核醫(yī)學(xué)技術(shù)所具有的高靈敏度、簡便安全、無創(chuàng)傷等優(yōu)點，有希望得到性能優(yōu)良的Aβ斑塊分子探針，從而早期無創(chuàng)傷地診斷AD。

在過去的十年里，已經(jīng)有很多Aβ分子探針進(jìn)入了臨床試驗階段，尤其是用于PET(正電子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像)的分子探針已經(jīng)取得了長足的發(fā)展，[¹⁸F]GE-067，[¹⁸F]BAY94-9172和[¹⁸F]AV-45已經(jīng)獲得美國FDA批準(zhǔn)。然而，SPECT(單光子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像)顯像劑由于進(jìn)腦量或其他體內(nèi)性質(zhì)的限制始終沒有發(fā)現(xiàn)有效的Aβ分子探針。因此以Aβ斑塊為靶點，開發(fā)與之具有高親和力和高選擇性的SPECT顯像劑用于AD的臨床影像學(xué)準(zhǔn)確診斷具有非常重要的科學(xué)意義和實際應(yīng)用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物及其制備方法與應(yīng)用。

為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：

其中，M為Re或^99mTc，X為CH或N，R為H或CH₃，Y為-(CH₂)_nO-(n為3-6之間的整數(shù))或-(CH₂CH₂O)_n-(n為2或3)。

優(yōu)選地，所述化合物為：

當(dāng)M為Re，Y為-(CH₂)_nO-時，式(I)所示的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物可按照如下步驟進(jìn)行制備：

S11、稱取1.0mmol化合物(Ⅱ)，2.0mmol 1,n-二溴烷烴和1.0mmol碳酸鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約30mL乙腈，90℃加熱回流2h，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干，得化合物(Ⅲ)；

S12、稱取0.30mmol化合物Ⅲ、0.25mmol BAT-Boc、0.50mmol碳酸鉀和0.25mmol碘化鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約40mL乙腈，90℃加熱回流過夜；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化得標(biāo)記前體(Ⅳ)；

S13、稱取0.10mmol標(biāo)記前體(Ⅳ)于50mL圓底燒瓶中，置于冰水浴，先加入2mL三氟乙酸，攪拌5min，再加入40μL三乙基硅烷，攪拌10min，減壓除去三氟乙酸，加入0.10mmol(PPh₃)₂ReOCl₃、20mL CH₂Cl₂：MeOH＝9:1(v:v)的混合溶劑和適量無水乙酸鈉，90℃加熱回流2h；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化即得錸配合物。

當(dāng)M為^99mTc，Y為-(CH₂)_nO-時，式(I)所示的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物可按照如下步驟進(jìn)行制備：

S21、稱取1.0mmol化合物(Ⅱ)，2.0mmol 1,n-二溴烷烴和1.0mmol碳酸鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約30mL乙腈，90℃加熱回流2h，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干，得化合物(Ⅲ)；

S22、稱取0.30mmol化合物Ⅲ、0.25mmol BAT-Boc、0.50mmol碳酸鉀和0.25mmol碘化鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約40mL乙腈，90℃加熱回流過夜；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化得標(biāo)記前體(Ⅳ)；

S23、取0.05mg標(biāo)記前體(Ⅳ)溶于100μL三氟乙酸中，室溫靜置5min，加入2μL三乙基硅烷，室溫靜置10min，氮氣吹干，加入50μL無水乙醇溶解，加入新鮮制備的^99mTc-GH，90℃加熱10min后即得^99mTc標(biāo)記配合物。

當(dāng)M為Re，Y為-(CH₂CH₂O)_n-時，式(I)所示的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物可按照如下步驟進(jìn)行制備：

S31、稱取1.00mmol化合物(Ⅱ)，1.20mmol HO(CH₂CH₂O)_nCl和2.00mmol碳酸鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約5mL DMF，110℃加熱4h，加入去離子水，二氯甲烷萃取，有機(jī)相合并后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾除干燥劑，旋蒸除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干，得化合物(Ⅴ)；

S32、稱取0.80mmol化合物(Ⅴ)用二氯甲烷溶解，冰水浴中攪拌，加入三苯基膦1.60mmol，緩慢加入1.60mmol N-溴代丁二酰亞胺(NBS)，冰水浴中反應(yīng)1h，加入5mL飽和NaHSO₄溶液攪拌30min，加入去離子水，加飽和NaHCO₃中和，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，旋蒸除去溶劑，硅膠柱分離得化合物(Ⅵ)；

S33、稱取0.30mmol化合物(Ⅵ)、0.25mmol BAT-Boc、0.50mmol碳酸鉀和0.25mmol碘化鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約40mL乙腈，90℃加熱回流過夜；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化得標(biāo)記前體(Ⅶ)；

S34、稱取0.10mmol標(biāo)記前體(Ⅶ)于50mL圓底燒瓶中，置于冰水浴，先加入2mL三氟乙酸，攪拌5min，再加入40μL三乙基硅烷，攪拌10min，減壓除去三氟乙酸，加入0.10mmol(PPh₃)₂ReOCl₃、20mL CH₂Cl₂：MeOH＝9:1(v:v)的混合溶劑和適量無水乙酸鈉，90℃加熱回流2h；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化即得錸配合物。

當(dāng)M為^99mTc，Y為-(CH₂CH₂O)_n-時，式(I)所示的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物可按照如下步驟進(jìn)行制備：

S41、稱取1.00mmol化合物(Ⅱ)，1.20mmol HO(CH₂CH₂O)_nCl和2.00mmol碳酸鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約5mL DMF，110℃加熱4h，加入去離子水，二氯甲烷萃取，有機(jī)相合并后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾除干燥劑，旋蒸除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干，得化合物(Ⅴ)；

S42、稱取0.80mmol化合物(Ⅴ)用二氯甲烷溶解，冰水浴中攪拌，加入三苯基膦1.60mmol，緩慢加入1.60mmol N-溴代丁二酰亞胺(NBS)，冰水浴中反應(yīng)1h，加入5mL飽和NaHSO₄溶液攪拌30min，加入去離子水，加飽和NaHCO₃中和，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，旋蒸除去溶劑，硅膠柱分離得化合物(Ⅵ)；

S43、稱取0.30mmol化合物(Ⅵ)、0.25mmol BAT-Boc、0.50mmol碳酸鉀和0.25mmol碘化鉀于100mL圓底燒瓶中，加入約40mL乙腈，90℃加熱回流過夜；TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化得標(biāo)記前體(Ⅶ)；

S44、取0.05mg標(biāo)記前體(Ⅶ)溶于100μL三氟乙酸中，室溫靜置5min，加入2μL三乙基硅烷，室溫靜置10min，氮氣吹干，加入50μL無水乙醇溶解，加入新鮮制備的^99mTc-GH，90℃加熱10min后即得^99mTc標(biāo)記配合物。

上述制備方法中涉及的各化合物的結(jié)構(gòu)式如下：

采用上述制備方法可制備獲得所述與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物，在此基礎(chǔ)上，對于各反應(yīng)物用量、反應(yīng)條件等參數(shù)所做出的適當(dāng)調(diào)整，只要能夠獲得本發(fā)明的化合物，均落入本發(fā)明保護(hù)范圍。

本發(fā)明還提供所述與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物在制備核醫(yī)學(xué)單光子顯像劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供由所述與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物制備的核醫(yī)學(xué)單光子顯像劑。

本發(fā)明還提供所述與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物在制備與β-淀粉樣蛋白沉積相關(guān)中樞疾病的診斷試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供由所述與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物制備的與β-淀粉樣蛋白沉積相關(guān)中樞疾病的診斷試劑。

本發(fā)明進(jìn)一步提供含有上述診斷試劑的用于檢測與β-淀粉樣蛋白沉積相關(guān)中樞疾病的試劑盒。

本發(fā)明提供一類新的與Aβ斑塊具有高親和力的N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物，體內(nèi)外實驗均表明，該類分子大多與Aβ_1-42聚集體具有較高的親和力，可特異性地與轉(zhuǎn)基因小鼠和AD病人腦切片上的Aβ斑塊結(jié)合，部分^99mTc標(biāo)記的顯像劑在正常小鼠體內(nèi)具有較高的初始腦攝取和較快的腦清除速率，有潛力開發(fā)為一種新的用于AD早期臨床診斷的Aβ斑塊SPECT顯像劑。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例40-42，44，46，49和50中的化合物在AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片的熒光染色結(jié)果(A-G)及相鄰切片用硫磺素-S染色對照結(jié)果(H-N)。

圖2為本發(fā)明實施例55和56中的化合物在AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片的熒光染色結(jié)果(A和C)及相鄰切片用硫磺素-S染色對照結(jié)果(B和D)。

圖3為本發(fā)明實施例40-42，44，46，49和50中的化合物在AD人腦切片的熒光染色結(jié)果(A-G)。

圖4為本發(fā)明實施例55(A)和實施例56(B)中的化合物在AD人腦切片的熒光染色結(jié)果。

圖5為本發(fā)明實施例57-63中化合物[^99mTc]40，[^99mTc]41，[^99mTc]42，[^99mTc]44，[^99mTc]46，[^99mTc]49和[^99mTc]50在AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片上的放射性自顯影結(jié)果(A-G)及相同切片的硫磺素-S熒光染色對照結(jié)果(H-N)。

圖6為本發(fā)明實施例中N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物的合成路線。

圖7為本發(fā)明實施例中N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物的^99mTc標(biāo)記路線。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。

實施例1合成中間體1

稱取270.1mg 2-(4-(二甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑(1.0mmol)，403.8mg 1,3-二溴丙烷(2.0mmol)和414.6mg碳酸鉀(3.0mmol)于100mL圓底燒瓶中，加入約30mL乙腈，90℃加熱回流2h，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干得產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：79％，熔點128.5-129.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝8.6Hz,2H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.03(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),4.16(t,J＝5.8Hz,2H),3.63(t,J＝6.4Hz,2H),2.89(s,6H),2.35(p,J＝6.1Hz,2H)。

實施例2合成中間體2

由2-(4-(二甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,4-二溴丁烷反應(yīng)制得中間體2，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：65％，熔點139.5-141.4℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(d,J＝8.5Hz,2H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.51(t,J＝6.6Hz,2H),3.06(s,6H),2.11(p,J＝6.5Hz,2H),1.99(p,J＝6.0Hz,2H)。

實施例3合成中間體3

由2-(4-(二甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,5-二溴戊烷反應(yīng)制得中間體3，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：45％，熔點185.1-186.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(d,J＝8.8Hz,2H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,2H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.45(t,J＝6.8Hz,2H),3.05(s,6H),2.01–1.91(m,2H),1.90–1.81(m,2H),1.71–1.63(m,2H)。

實施例4合成中間體4

由2-(4-(二甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,6-二溴己烷反應(yīng)制得中間體4，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：56％，熔點142.8-144.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04–7.85(m,3H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.76(d,J＝8.6Hz,2H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),3.06(s,6H),1.96–1.88(m,2H),1.88–1.79(m,2H),1.57–1.50(m,4H)。

實施例5合成中間體5

由2-(4-(甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,3-二溴丙烷反應(yīng)制得中間體5，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：77％，熔點86.8-88.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝8.6Hz,2H),δ7.86(d,J＝8.8Hz,1H),δ7.33(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),4.17(t,J＝5.8Hz,2H),3.64(t,J＝6.4Hz,2H),2.91(s,3H),2.36(p,J＝6.1Hz,2H)。

實施例6合成中間體6

由2-(4-(甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,4-二溴丁烷反應(yīng)制得中間體6，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：61％，熔點148.5-149.2℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.86(d,J＝8.6Hz,2H),δ7.85(d,J＝8.7Hz,1H),δ7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.64(d,J＝8.6Hz,2H),4.05(t,J＝6.0Hz,2H),3.51(t,J＝6.5Hz,2H),2.90(s,3H),2.12–2.05(m,2H),2.02–1.93(m,2H)。

實施例7合成中間體7

由2-(4-(甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,5-二溴戊烷反應(yīng)制得中間體7，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：78％，熔點114.9-115.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.89(d,J＝8.6Hz,3H),7.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.46(t,J＝6.7Hz,2H),2.91(s,3H),2.00–1.92(m,2H),1.90–1.81(m,2H),1.70–1.63(m,2H)。

實施例8合成中間體8

由2-(4-(甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑和1,6-二溴己烷反應(yīng)制得中間體8，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：65％，熔點125.3-126.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝8.5Hz,2H),δ7.86(d,J＝8.4Hz,1H),δ7.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.64(d,J＝8.6Hz,2H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),2.91(s,3H),1.96–1.78(m,4H),1.55–1.51(m,4H)。

實施例9合成中間體9

由2-(2-(二甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,3-二溴丙烷反應(yīng)制得中間體9，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：89％，熔點128.8-131.8℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(s,1H),8.15–8.11(m,1H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),7.34(s,1H),7.06(t,J＝6.6Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),4.18(t,J＝5.7Hz,2H),3.64(t,J＝6.4Hz,2H),3.18(s,6H),2.40–2.32(m,2H)。

實施例10合成中間體10

由2-(2-(二甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,4-二溴丁烷反應(yīng)制得中間體10，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：68％，熔點124.2-125.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.11(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(d,J＝2.3Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.57(d,J＝9.0Hz,1H),4.05(t,J＝6.0Hz,2H),3.51(t,J＝6.5Hz,2H),3.17(s,6H),2.14–2.04(m,2H),2.02–1.93(m,2H)。

實施例11合成中間體11

由2-(2-(二甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,5-二溴戊烷反應(yīng)制得中間體11，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：85％，熔點144.5-145.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(s,1H),8.14(d,J＝8.9Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝1.9Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.60(d,J＝9.0Hz,1H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.46(t,J＝6.7Hz,2H),3.19(s,6H),2.02–1.81(m,4H),1.74–1.60(m,2H)。

實施例12合成中間體12

由2-(2-(二甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,6-二溴己烷反應(yīng)制得中間體12，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：55％，熔點150.7-152.2℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.60(d,J＝9.0Hz,1H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),3.20(s,6H),1.99–1.77(m,4H),1.61–1.46(m,4H)。

實施例13合成中間體13

由2-(2-(甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,3-二溴丙烷反應(yīng)制得中間體13，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：83％，熔點122.2-123.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.34(d,J＝2.4Hz,1H),7.06(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.48(d,J＝8.7Hz,1H),5.01(d,J＝4.6Hz,1H),4.18(t,J＝5.8Hz,2H),3.64(t,J＝6.4Hz,2H),3.01(d,J＝5.2Hz,3H),2.36(p,J＝6.1Hz,2H)。

實施例14合成中間體14

由2-(2-(甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1，4-二溴丁烷反應(yīng)制得中間體14，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：55％，熔點152.9-154.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.47(d,J＝8.8Hz,1H),4.99(d,J＝4.4Hz,1H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.51(t,J＝6.5Hz,2H),3.00(d,J＝5.1Hz,3H),2.17–2.05(m,2H),2.04–1.94(m,2H)。

實施例15合成中間體15

由2-(2-(甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,5-二溴戊烷反應(yīng)制得中間體15，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：73％，熔點124.7-125.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝1.9Hz,1H),8.11(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.46(d,J＝8.8Hz,1H),4.94(d,J＝4.9Hz,1H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.46(t,J＝6.7Hz,2H),3.00(d,J＝5.2Hz,3H),2.01–1.92(m,2H),1.90–1.82(m,2H),1.69–1.63(m,2H)。

實施例16合成中間體16

由2-(2-(甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和1,6-二溴己烷反應(yīng)制得中間體16，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例1相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：63％，熔點116.4-117.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝2.4Hz,1H),8.11(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝2.5Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.46(d,J＝8.8Hz,1H),4.94(d,J＝4.9Hz,1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.44(t,J＝6.8Hz,2H),3.00(d,J＝5.2Hz,3H),1.97–1.78(m,4H),1.57–1.50(m,4H)。

實施例17合成中間體17

稱取270.1mg 2-(4-(二甲氨基)苯基)-6-羥基苯并噻唑(化合物Ⅱ，1.00mmol)，148.8mg 2-(2-氯乙氧基)乙醇(1.20mmol)和276.4mg碳酸鉀(2.00mmol)于100mL圓底燒瓶中，加入約5mL DMF，110℃加熱4h，加入去離子水，二氯甲烷萃取，有機(jī)相合并后經(jīng)無水硫酸鈉干燥，濾除干燥劑，旋蒸除去溶劑，加入少量石油醚，有固體析出，抽濾，用石油醚充分沖洗所得固體，烘干，得產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：85％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.9Hz,2H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.33(d,J＝2.5Hz,1H),7.05(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,2H),4.20(t,J＝4.5Hz,2H),3.90(t,J＝4.8Hz,2H),3.78(t,J＝4.6Hz,2H),3.70(t,J＝4.8Hz,2H),3.04(s,6H).

實施例18合成中間體18

由2-(2-(二甲氨基)吡啶基)-6-羥基苯并噻唑和2-(2-氯乙氧基)乙醇反應(yīng)制得中間體18，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例17相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：73％.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.34(d,J＝2.5Hz,1H),7.07(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),4.21(t,J＝4.7Hz,2H),3.91(t,J＝4.7Hz,2H),3.79(s,2H),3.70(t,J＝4.4Hz,2H),3.18(s,6H).

實施例19合成中間體19

稱取286.5mg中間體17(0.80mmol)用二氯甲烷溶解，冰水浴中攪拌，加入三苯基膦419.2mg(1.60mmol)，緩慢加入284.6mg N-溴代丁二酰亞胺(NBS,1.60mmol)，冰水浴中反應(yīng)1h，加入5mL飽和NaHSO₄溶液攪拌30min，加入去離子水，加飽和NaHCO₃中和，二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鎂干燥，旋蒸除去溶劑，硅膠柱分離得產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：62％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.91(d,J＝8.9Hz,2H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.35(d,J＝2.5Hz,1H),7.06(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.75(d,J＝9.0Hz,2H),4.21(t,J＝4.7Hz,2H),3.95–3.88(m,4H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.05(s,6H).

實施例20合成中間體20

由中間體18和NBS反應(yīng)制得中間體20，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例19相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：92％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.35(d,J＝2.5Hz,1H),7.07(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),4.21(t,J＝4.7Hz,2H),3.93–3.89(m,4H),3.51(t,J＝6.3Hz,2H),3.18(s,6H).

實施例21合成標(biāo)記前體21

稱取117.0mg中間體1(0.3mmol)、191.1mg BAT-Boc(0.25mmol)、79.1mg(0.50mmol)碳酸鉀和41.5mg碘化鉀(0.25mmol)于100mL圓底燒瓶中，加入約40mL乙腈，90℃加熱回流過夜。TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，趁熱抽濾，所得濾液減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化得產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：28％，熔點49.7-51.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.9Hz,2H),7.81(d,J＝8.9Hz,1H),7.43–7.34(m,13H),7.28–7.14(m,18H),6.95(d,J＝8.7Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,2H),3.93(t,J＝6.1Hz,2H),3.05(s,6H),3.00–2.77(m,4H),2.44–2.20(m,10H),1.78–1.66(m,2H),1.36(s,9H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₇H₇₁N₄O₃S₃[M+H]⁺:1075.5.Found:1075.2。

實施例22合成標(biāo)記前體22

由中間體2和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體22，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：29％，熔點58.6-60.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.40(d,J＝7.6Hz,13H),7.31–7.22(m,12H),7.21–7.13(m,6H),6.99(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),6.73(d,J＝8.9Hz,2H),3.93(t,J＝6.2Hz,2H),3.03(s,6H),3.00–2.79(m,4H),2.41–2.16(m,10H),1.76–1.63(m,2H),1.48–1.30(m,11H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₈H₇₃N₄O₃S₃[M+H]⁺:1089.5.Found:1089.2。

實施例23合成標(biāo)記前體23

由中間體3和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體23，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：43％，熔點49.9-51.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.9Hz,2H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.45–7.34(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.22–7.14(m,6H),7.00(d,J＝6.9Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,2H),3.96(t,J＝6.2Hz,2H),3.05(s,6H),3.01–2.82(m,4H),2.42–2.14(m,8H),1.80–1.70(m,2H),1.61–1.51(m,2H),1.44–1.28(m,13H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₉H₇₅N₄O₃S₃[M+H]⁺:1103.5.Found:1103.1。

實施例24合成標(biāo)記前體24

由中間體4和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體24，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：37％，熔點52.3-53.4℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.9Hz,2H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.45–7.35(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.22–7.13(m,6H),7.01(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.74(d,J＝9.0Hz,2H),3.98(t,J＝6.4Hz,2H),3.05(s,6H),3.00–2.78(m,4H),2.40–2.14(m,8H),1.84–1.72(m,2H),1.57(s,4H),1.47–1.31(m,13H).MS(ESI):m/z calcd for C₇₀H₇₇N₄O₃S₃[M+H]⁺:1117.5.Found:1117.1。

實施例25合成標(biāo)記前體25

由中間體5和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體25，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：24％，熔點57.2-58.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝8.6Hz,2H),7.81(d,J＝8.9Hz,1H),7.42–7.35(m,12H),7.30–7.13(m,19H),6.95(d,J＝7.1Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),3.93(t,J＝6.1Hz,2H),3.06–2.80(m,7H),2.44–2.19(m,10H),1.76–1.69(m,2H),1.42–1.33(m,9H).MS(ESI):m/zcalcd for C₆₆H₆₉N₄O₃S₃[M+H]⁺:1061.5.Found:1060.9。

實施例26合成標(biāo)記前體26

由中間體6和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體26，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：28％，熔點55.1-56.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94–7.81(m,3H),7.50–7.35(m,12H),7.35–7.16(m,19H),7.01(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),3.95(t,J＝6.1Hz,2H),3.12–2.78(m,7H),2.49–2.16(m,10H),1.77–1.65(m,2H),1.50–1.33(m,11H).MS(ESI):m/z calcd forC₆₇H₇₁N₄O₃S₃[M+H]⁺:1075.5.Found:1075.1。

實施例27合成標(biāo)記前體27

由中間體7和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體27，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：59％，熔點53.7-54.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.87(d,J＝8.7Hz,2H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.44–7.36(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.22–7.13(m,6H),7.01(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),3.96(t,J＝6.4Hz,2H),3.09–2.79(m,7H),2.43–2.13(m,10H),1.80–1.70(m,2H),1.44–1.28(m,13H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₈H₇₃N₄O₃S₃[M+H]⁺:1089.5.Found:1089.1。

實施例28合成標(biāo)記前體28

由中間體8和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體28，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：51％，熔點53.4-54.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90–7.82(m,3H),7.44–7.36(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.22–7.14(m,6H),7.01(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),3.98(t,J＝6.4Hz,2H),3.09–2.78(m,7H),2.41–2.11(m,10H),1.83–1.73(m,2H),1.47–1.32(m,11H),1.30–1.20(m,4H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₉H₇₅N₄O₃S₃[M+H]⁺:1103.5.Found:1103.2。

實施例29合成標(biāo)記前體29

由中間體9和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體29，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：18％，熔點49.1-50.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),8.12(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.9Hz,1H),7.43–7.35(m,12H),7.29–7.12(m,19H),6.97(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),6.57(d,J＝9.0Hz,1H),3.94(t,J＝6.1Hz,2H),3.16(s,6H),3.06–2.81(m,4H),2.42–2.20(m,10H),1.76–1.69(m,2H),1.37(s,9H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₆H₇₀N₅O₃S₃[M+H]⁺:1075.5.Found:1075.8。

實施例30合成標(biāo)記前體30

由中間體10和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體30，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：32％，熔點52.8-53.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.2Hz,1H),8.12(dd,J＝9.0,2.3Hz,1H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.45–7.34(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.21–7.13(m,6H),7.01(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.56(d,J＝9.0Hz,1H),3.94(t,J＝6.3Hz,2H),3.15(s,6H),3.07–2.81(m,4H),2.42–2.18(m,10H),1.76–1.65(m,2H),1.50–1.31(m,11H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₇H₇₂N₅O₃S₃[M+H]⁺:1090.5.Found:1090.1。

實施例31合成標(biāo)記前體31

由中間體11和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體31，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：26％，熔點37.2-38.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),8.13(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),7.85(d,J＝8.9Hz,1H),7.44–7.36(m,12H),7.32–7.22(m,13H),7.22–7.14(m,6H),7.02(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),3.97(t,J＝6.5Hz,2H),3.18(s,6H),3.08–2.81(m,4H),2.40–2.16(m,10H),1.80–1.71(m,2H),1.47–1.28(m,13H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₈H₇₄N₅O₃S₃[M+H]⁺:1104.5.Found:1103.8。

實施例32合成標(biāo)記前體32

由中間體12和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體32，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：64％，熔點48.5-49.4℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),8.13(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.85(d,J＝8.9Hz,1H),7.45–7.35(m,12H),7.31–7.23(m,13H),7.22–7.13(m,6H),7.03(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),3.98(t,J＝6.4Hz,2H),3.18(s,6H),3.08–2.78(m,4H),2.39–2.12(m,10H),1.83–1.74(m,2H),1.47–1.34(m,11H),1.29–1.22(m,4H).MS(ESI):m/z calcd forC₆₉H₇₆N₅O₃S₃[M+H]⁺:1118.5.Found:1118.2。

實施例33合成標(biāo)記前體33

由中間體13和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體33，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：49％，熔點58.9-59.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.71(s,1H),8.13(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.83(d,J＝8.9Hz,1H),7.44–7.35(m,12H),7.30–7.21(m,13H),7.21–7.14(m,6H),6.97(d,J＝9.2Hz,1H),6.48(d,J＝8.8Hz,1H),3.94(t,J＝6.0Hz,2H),3.01(d,J＝5.0Hz,3H),3.00–2.77(m,4H),2.45–2.20(m,8H),1.79–1.69(m,2H),1.67–1.56(m,2H),1.37(s,9H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₅H₆₇N₅O₃S₃[M+H]⁺:1062.4.Found:1062.4。

實施例34合成標(biāo)記前體34

由中間體14和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體34，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：46％，熔點51.7-53.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.11(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.47–7.36(m,12H),7.32–7.23(m,13H),7.23–7.14(m,6H),7.02(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.47(d,J＝8.8Hz,1H),3.95(t,J＝6.3Hz,2H),3.09–2.81(m,7H),2.41–2.20(m,10H),1.76–1.66(m,2H),1.49–1.31(m,11H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₆H₇₀N₅O₃S₃[M+H]⁺:1076.5.Found:1076.1。

實施例35合成標(biāo)記前體35

由中間體15和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體35，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：44％，熔點52.6-54.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝2.1Hz,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.44–7.34(m,12H),7.31–7.22(m,13H),7.22–7.14(m,6H),7.03(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.47(d,J＝8.8Hz,1H),3.97(t,J＝6.4Hz,2H),3.09–2.79(m,7H),2.41–2.12(m,10H),1.81–1.70(m,2H),1.44–1.29(m,13H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₇H₇₂N₅O₃S₃[M+H]⁺:1090.5.Found:1090.2。

實施例36合成標(biāo)記前體36

由中間體16和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體36，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：51％，熔點40.6-41.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.70(d,J＝2.1Hz,1H),8.14(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.46–7.36(m,12H),7.31–7.23(m,13H),7.22–7.15(m,6H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.49(d,J＝8.8Hz,1H),3.98(t,J＝6.4Hz,2H),3.16–2.79(m,7H),2.46–2.10(m,10H),1.83–1.73(m,2H),1.48–1.33(m,11H),1.30–1.21(m,4H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₈H₇₄N₅O₃S₃[M+H]⁺:1104.5.Found:1104.2。

實施例37合成標(biāo)記前體37

由中間體19和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體37，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：44％，熔點57.6-58.8℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝8.9Hz,2H),7.83(d,J＝8.9Hz,1H),7.43–7.34(m,12H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.28–7.23(m,12H),7.21–7.15(m,6H),7.02(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝9.0Hz,2H),4.11(t,J＝4.9Hz,2H),3.74(t,J＝4.8Hz,2H),3.42(t,J＝6.1Hz,2H),3.05(s,6H),3.01–2.81(m,4H),2.53–2.45(m,2H),2.45–2.39(m,2H),2.37–2.20(m,6H),1.36(s,9H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₈H₇₃N₄O₄S₃[M+H]⁺:1105.5.Found:1105.4.

實施例38合成標(biāo)記前體38

由中間體20和BAT-Boc反應(yīng)制得標(biāo)記前體38，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例21相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：55％，熔點45.3-46.7℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.1Hz,1H),8.12(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.43–7.36(m,12H),7.29(d,J＝2.5Hz,1H),7.28–7.22(m,12H),7.21–7.15(m,6H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.58(d,J＝8.8Hz,1H),4.11(t,J＝4.9Hz,2H),3.75(t,J＝4.8Hz,2H),3.42(t,J＝5.9Hz,2H),3.18(s,6H),3.07–2.81(m,4H),2.52–2.45(m,2H),2.45–2.39(m,2H),2.37–2.21(m,6H),1.36(s,9H).MS(ESI):m/z calcd for C₆₇H₇₂N₅O₄S₃[M+H]⁺:1106.5.Found:1106.3.

實施例39合成錸配合物39

稱取98.7mg標(biāo)記前體21(0.092mmol)于50mL圓底燒瓶中，置于冰水浴，先加入2mL三氟乙酸，攪拌5min，再加入40μL三乙基硅烷，攪拌10min，減壓除去三氟乙酸，加入76.5mg(PPh₃)₂ReOCl₃(0.092mmol)、20mL CH₂Cl₂：MeOH＝9:1(v:v)的混合溶劑和適量無水乙酸鈉，90℃加熱回流2h。TLC監(jiān)測反應(yīng)結(jié)束后，減壓除去溶劑，硅膠柱層析分離純化即得，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：47％，熔點239.5-240.3℃。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.88–7.79(m,3H),7.67(d,J＝2.5Hz,1H),7.10(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.81(d,J＝9.0Hz,2H),4.21–4.04(m,5H),3.90–3.78(m,1H),3.67–3.49(m,3H),3.46–3.35(m,1H),3.32–3.16(m,2H),3.10–3.03(m,1H),3.01(s,6H),2.74–2.62(m,2H),2.36–2.23(m,2H),1.75–1.65(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd forC₂₄H₃₂N₄O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:691.1245.Found:691.1242。

實施例40合成錸配合物40

由標(biāo)記前體22和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物40，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：66％，熔點228.7-229.7℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.91(d,J＝8.8Hz,2H),7.87(d,J＝9.0Hz,1H),7.32(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,2H),4.25–4.05(m,5H),3.94–3.84(m,1H),3.83–3.73(m,1H),3.69–3.58(m,1H),3.48–3.31(m,3H),3.31–3.21(m,1H),3.05(s,6H),3.03–2.94(m,2H),2.79–2.70(m,1H),2.10–1.99(m,2H),1.93–1.83(m,2H),1.77–1.66(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₅H₃₄N₄O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:703.1374.Found:703.1361。

實施例41合成錸配合物41

由標(biāo)記前體23和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物41，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：53％，熔點229.9-231.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99–7.86(m,3H),7.31(d,J＝2.2Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.76(d,J＝8.6Hz,2H),4.18–4.09(m,3H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),3.91–3.82(m,1H),3.82–3.75(m,1H),3.64–3.54(m,1H),3.43–3.31(m,3H),3.30–3.20(m,1H),3.06(s,6H),3.04–2.94(m,2H),2.79–2.70(m,1H),1.97–1.84(m,4H),1.77–1.69(m,1H),1.64–1.58(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₆H₃₆N₄O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:719.1558.Found:719.1569。

實施例42合成錸配合物42

由標(biāo)記前體24和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物42，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：29％，熔點211.8-213.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.91(d,J＝8.9Hz,2H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.75(d,J＝8.9Hz,2H),4.16–4.08(m,3H),4.04(t,J＝6.2Hz,2H),3.88–3.74(m,2H),3.60–3.50(m,1H),3.40–3.30(m,3H),3.29–3.19(m,1H),3.05(s,6H),3.03–2.93(m,2H),2.77–2.69(m,1H),1.90–1.77(m,4H),1.74–1.66(m,1H),1.62–1.57(m,2H),1.51–1.44(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₇H₃₈N₄O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:731.1687.Found:731.1699。

實施例43合成錸配合物43

由標(biāo)記前體25和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物43，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：28％，熔點179.8-181.5℃。¹H NMR(400MHz,[D₆]-DMSO)δ7.80(d,J＝8.9Hz,1H),7.76(d,J＝8.7Hz,2H),7.65(d,J＝2.5Hz,1H),7.08(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),5.75(s,1H),4.16(t,J＝6.1Hz,2H),4.14–4.03(m,3H),3.88–3.79(m,1H),3.65–3.50(m,3H),3.44–3.35(m,1H),3.29–3.17(m,2H),3.06(d,J＝11.1Hz,1H),2.75(d,J＝4.9Hz,3H),2.71–2.64(m,2H),2.35–2.24(m,2H),1.76–1.66(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₃H₃₀N₄O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:677.1089.Found:677.1080。

實施例44合成錸配合物44

由標(biāo)記前體26和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物44，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：30％，熔點120.4-121.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01–7.83(m,3H),7.32(d,J＝2.3Hz,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.6Hz,2H),4.24–4.06(m,5H),3.95–3.86(m,1H),3.83–3.76(m,1H),3.70–3.59(m,1H),3.49–3.32(m,3H),3.32–3.22(m,1H),3.07–2.97(m,2H),2.92(s,3H),2.79–2.71(m,1H),2.12–1.99(m,2H),1.94–1.86(m,2H),1.77–1.68(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd forC₂₄H₃₂N₄O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:689.1217.Found:689.1224。

實施例45合成錸配合物45

由標(biāo)記前體27和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物45，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：37％，熔點187.2-188.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.83(m,3H),7.31(d,J＝2.5Hz,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),4.17–4.09(m,3H),4.05(t,J＝6.1Hz,2H),3.91–3.82(m,1H),3.82–3.75(m,1H),3.63–3.53(m,1H),3.43–3.31(m,3H),3.29–3.21(m,1H),3.06–2.94(m,2H),2.91(s,3H),2.79–2.71(m,1H),1.96–1.83(m,4H),1.76–1.67(m,1H),1.64–1.55(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₅H₃₄N₄O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:703.1374.Found:703.1384。

實施例46合成錸配合物46

由標(biāo)記前體28和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物46，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：61％，熔點111.1-112.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.83(m,3H),7.31(d,J＝2.4Hz,1H),7.03(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),4.16–4.07(m,3H),4.04(t,J＝6.2Hz,2H),3.89–3.74(m,2H),3.59–3.49(m,1H),3.42–3.30(m,3H),3.28–3.19(m,1H),3.05–2.93(m,2H),2.91(s,3H),2.77–2.69(m,1H),1.89–1.77(m,4H),1.74–1.65(m,1H),1.64–1.55(m,2H),1.50–1.41(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₆H₃₆N₄O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:717.1530.Found:717.1518。

實施例47合成錸配合物47

由標(biāo)記前體29和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物47，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：53％，熔點236.4-237.9℃。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.71(d,J＝2.4Hz,1H),8.09(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.70(d,J＝2.5Hz,1H),7.12(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.80(d,J＝9.1Hz,1H),4.17(t,J＝6.2Hz,2H),4.15–4.04(m,3H),3.89–3.79(m,1H),3.65–3.51(m,4H),3.30–3.18(m,2H),3.13(s,6H),3.10–3.02(m,1H),2.75–2.63(m,2H),2.35–2.24(m,2H),1.76–1.66(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₃H₃₁N₅O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:692.1198.Found:692.1194。

實施例48合成錸配合物48

由標(biāo)記前體30和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物48，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：44％，熔點231.2-231.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.1Hz,1H),8.14(d,J＝7.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.33(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.60(d,J＝8.3Hz,1H),4.26–4.06(m,5H),3.96–3.85(m,1H),3.83–3.75(m,1H),3.71–3.59(m,1H),3.51–3.33(m,3H),3.31–3.24(m,1H),3.19(s,6H),3.07–2.96(m,2H),2.80–2.71(m,1H),2.12–1.99(m,2H),1.95–1.85(m,2H),1.77–1.67(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₄H₃₃N₅O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:704.1326.Found:704.1323。

實施例49合成錸配合物49

由標(biāo)記前體31和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物49，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：41％，熔點212.2-213.5℃。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.72(d,J＝2.2Hz,1H),8.07(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),7.84(d,J＝8.9Hz,1H),7.66(d,J＝2.3Hz,1H),7.09(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.78(d,J＝9.1Hz,1H),4.18–3.98(m,4H),3.97–3.77(m,2H),3.64–3.56(m,1H),3.49–3.42(m,1H),3.41–3.29(m,2H),3.28–3.16(m,2H),3.13(s,6H),3.08–2.97(m,1H),2.73–2.61(m,2H),1.93–1.75(m,4H),1.73–1.62(m,1H),1.55–1.43(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₅H₃₅N₅O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:720.1511.Found:720.1500。

實施例50合成錸配合物50

由標(biāo)記前體32和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物50，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：53％，熔點192.8-194.2℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.0Hz,1H),8.15(d,J＝8.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.60(d,J＝9.0Hz,1H),4.17–4.07(m,3H),4.04(t,J＝6.3Hz,2H),3.90–3.75(m,2H),3.60–3.50(m,1H),3.42–3.31(m,3H),3.29–3.22(m,1H),3.19(s,6H),3.06–2.93(m,2H),2.77–2.70(m,1H),1.91–1.78(m,4H),1.75–1.66(m,1H),1.64–1.56(m,2H),1.52–1.40(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₆H₃₇N₅O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:732.1639.Found:732.1638。

實施例51合成錸配合物51

由標(biāo)記前體33和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物51，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：40％，熔點231.5-232.5℃。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.62(d,J＝2.3Hz,1H),8.06–7.98(m,1H),7.85(d,J＝8.9Hz,1H),7.70(d,J＝2.5Hz,1H),7.12(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.64(d,J＝8.9Hz,1H),4.17(t,J＝6.2Hz,2H),4.15–4.04(m,3H),3.89–3.80(m,1H),3.65–3.50(m,3H),3.44–3.17(m,3H),3.10–3.00(m,1H),2.87(d,J＝3.0Hz,3H),2.75–2.63(m,2H),2.34–2.25(m,2H),1.77–1.66(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₂H₂₉N₅O₂S₃¹⁸⁷Re[M+H]⁺:678.1041.Found:678.1039。

實施例52合成錸配合物52

由標(biāo)記前體34和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物52，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：32％，熔點205.0-206.2℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.72(d,J＝2.1Hz,1H),8.12(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.33(d,J＝2.3Hz,1H),7.06(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.48(d,J＝8.8Hz,1H),4.24–4.06(m,5H),3.95–3.85(m,1H),3.83–3.75(m,1H),3.70–3.59(m,1H),3.47–3.32(m,3H),3.31–3.23(m,1H),3.07–2.96(m,5H),2.78–2.70(m,1H),2.12–1.99(m,2H),1.95–1.84(m,2H),1.78–1.71(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₃H₃₁N₅O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:690.1170.Found:690.1176。

實施例53合成錸配合物53

由標(biāo)記前體35和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物53，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：54％，熔點167.7-168.0℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68(d,J＝2.0Hz,1H),8.16(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.05(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.52(d,J＝8.8Hz,1H),4.18–4.09(m,3H),4.06(t,J＝6.1Hz,2H),3.92–3.83(m,1H),3.82–3.76(m,1H),3.63–3.54(m,1H),3.44–3.32(m,3H),3.30–3.21(m,1H),3.06–2.95(m,5H),2.79–2.71(m,1H),1.97–1.84(m,4H),1.77–1.68(m,1H),1.66–1.56(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₄H₃₃N₅O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:704.1326.Found:704.1313。

實施例54合成錸配合物54

由標(biāo)記前體36和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物54，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：40％，熔點210.0-211.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.70(d,J＝1.9Hz,1H),8.14(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.32(d,J＝2.5Hz,1H),7.05(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.50(d,J＝8.8Hz,1H),4.17–4.08(m,3H),4.04(t,J＝6.2Hz,2H),3.90–3.75(m,2H),3.61–3.51(m,1H),3.43–3.31(m,3H),3.29–3.21(m,1H),3.06–2.94(m,5H),2.77–2.70(m,1H),1.91–1.77(m,4H),1.74–1.66(m,1H),1.65–1.56(m,2H),1.52–1.42(m,2H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₅H₃₅N₅O₂S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:718.1483.Found:718.1498。

實施例55合成錸配合物55

由標(biāo)記前體37和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物55，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：62％，熔點200.8-201.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90(d,J＝9.0Hz,2H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.33(d,J＝2.5Hz,1H),7.02(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.74(d,J＝9.0Hz,2H),4.29–4.25(m,1H),4.25–4.21(m,2H),4.14–4.08(m,1H),4.08–4.01(m,1H),4.00–3.96(m,2H),3.95–3.92(m,1H),3.91–3.87(m,2H),3.87–3.83(m,1H),3.81–3.75(m,1H),3.54–3.47(m,1H),3.47–3.39(m,1H),3.38–3.30(m,1H),3.22–3.15(m,2H),3.06(s,6H),3.04–2.96(m,1H),2.74–2.69(m,1H),1.81–1.73(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₅H₃₄N₄O₃S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:719.1323.Found:719.1326.

實施例56合成錸配合物56

由標(biāo)記前體38和(PPh₃)₂ReOCl₃反應(yīng)制得錸配合物56，其反應(yīng)的原料比例、溶劑、反應(yīng)條件等均與實施例39相同，結(jié)構(gòu)如下，產(chǎn)率：30％，熔點214.3-215.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.76(d,J＝2.1Hz,1H),8.14(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.34(d,J＝2.5Hz,1H),7.04(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.60(d,J＝9.0Hz,1H),4.29–4.26(m,1H),4.25–4.22(m,2H),4.14–4.09(m,1H),4.08–4.02(m,1H),4.01–3.96(m,2H),3.96–3.92(m,1H),3.92–3.89(m,2H),3.88–3.83(m,1H),3.81–3.76(m,1H),3.53–3.48(m,1H),3.47–3.40(m,1H),3.38–3.31(m,1H),3.23–3.16(m,8H),3.04–2.96(m,1H),2.74–2.69(m,1H),1.80–1.73(m,1H).HRMS(ESI):m/z calcd for C₂₄H₃₃N₅O₃S₃¹⁸⁵Re[M+H]⁺:720.1272.Found:720.1275.

上述N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物的合成路線如圖6所示。

上述各實施例制備的化合物均可以通過現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)方法標(biāo)記放射性核素^99mTc，標(biāo)記反應(yīng)通式如圖7所示，方法如下：取0.05mg標(biāo)記前體溶于100μL三氟乙酸中，室溫靜置5min。加入2μL三乙基硅烷，室溫靜置10min，氮氣吹干。加入50μL無水乙醇溶解，加入新鮮制備的^99mTc-GH，90℃加熱10min后即得^99mTc標(biāo)記配合物。

所得配合物進(jìn)行HPLC檢測。HPLC分析條件：Venusil MP C18柱(Agela Technologies,5μm,4.6×250mm)；CH₃CN/H₂O＝80％/20％；流速,1mL/min。

表1 ^99mTc標(biāo)記配合物(實施例57-65)

實施例66N₂S₂類2-芳基苯并噻唑化合物的效果實驗

以下通過體外競爭結(jié)合實驗、熒光染色實驗和體外放射自顯影實驗對本發(fā)明所述化合物進(jìn)行親和力評價，充分驗證它們與Aβ斑塊的親和力。通過正常小鼠體內(nèi)分布實驗對標(biāo)記化合物進(jìn)行初始腦攝取及腦清除速率評價。

1.競爭結(jié)合實驗

競爭結(jié)合實驗(K_i測定)：一定濃度的Aβ_1-42聚集體與一定濃度的放射性配基[¹²⁵I]IMPY發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，反應(yīng)系統(tǒng)中同時加入不同濃度的待測錸配合物無與[¹²⁵I]IMPY發(fā)生競爭反應(yīng)，平衡后分離復(fù)合物通過測定放射性來計算抑制常數(shù)(K_i)。

1.1實驗步驟：

(1)配制pH＝7.4的PBS(0.2M)緩沖液4L；

(2)放射配基[¹²⁵I]IMPY按照已有方法制備；將[¹²⁵I]IMPY配制成100000cpm/100μL的水溶液；

(3)將待測化合物配制成10^-3至10^-9mol/L連續(xù)稀釋的乙醇溶液；

(4)受體Aβ_1-42蛋白按照已有方法制備。將其稀釋成約30nM的水溶液；

(5)玻璃纖維濾膜用含0.1％(體積分?jǐn)?shù))聚乙烯亞胺的PBS溶液浸泡0.5h；

(6)在12×75mm硼硅玻璃管中分別加入100μL不同濃度待測化合物溶液和100μL[¹²⁵I]IMPY溶液、700μL PBS及100μL Aβ_1-42溶液。用封口膜封好，渦旋；

(7)在37℃恒溫水浴中振蕩孵育2h；

(8)多頭細(xì)胞收集器收集反應(yīng)液，用PBS沖洗三遍，每次3mL；

(9)用γ計數(shù)儀測量計數(shù)；

(10)數(shù)據(jù)處理。

1.2實驗結(jié)果：

由競爭結(jié)合實驗得到的半抑制常數(shù)(IC₅₀)以及進(jìn)一步根據(jù)公式計算出的抑制常數(shù)K_i見表2。

表2本發(fā)明制備的化合物與Aβ_1-42聚集體親和力常數(shù)

通過上述競爭結(jié)合實驗可知，本發(fā)明提供的化合物均與Aβ_1-42聚集體具有一定的的親和力，特別是化合物40-42，44，46，49，50和55的親和力較高，K_i值小于50nM。

2.熒光染色實驗

2.1實驗步驟：

2.1.1小鼠腦切片的熒光染色

(1)分別配制錸化合物(40-42，44，46，49，50，55和56)的40％的乙醇溶液，濃度為1μM；

(2)將12個月齡轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片(石蠟)和兩片正常小鼠腦切片(石蠟)依次經(jīng)過3×20min的二甲苯脫蠟，然后依次經(jīng)過2×5min的100％的乙醇，2×5min的95％的乙醇，5min的80％的乙醇和5min的70％的乙醇洗滌，流水沖洗10min后，置于10mM的PBS(pH＝7.4)中；

(3)將小鼠腦切片分別浸于待測化合物溶液中10min；

(4)切片經(jīng)過40％的乙醇洗滌后，采用熒光顯微鏡觀察。

2.1.2AD患者腦切片的熒光染色

步驟及方法同上。

2.2實驗結(jié)果：

實驗結(jié)果如圖1-4所示，其中圖1是錸配合物(40-42，44，46，49，50)的AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片的熒光染色結(jié)果(A-G)，圖2是錸配合物(55和56)的AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片的熒光染色結(jié)果(A和C)，很明顯這些化合物都與Aβ斑塊有結(jié)合，而且相鄰腦切片均經(jīng)過硫磺素-S染色進(jìn)行對照(圖1，H-N；圖2，B和D)，均能得到良好的匹配。圖3是錸配合物(40-42，44，46，49，50)的AD人腦切片的熒光染色結(jié)果，圖4是錸配合物(55和56)的AD人腦切片的熒光染色結(jié)果，均能很明顯地觀測到腦切片上的Aβ斑塊。通過以上結(jié)果，充分說明本發(fā)明的化合物能與腦內(nèi)Aβ斑塊有效結(jié)合。

3.放射自顯影實驗

將一定濃度的^99mTc標(biāo)記化合物與AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片中的斑塊結(jié)合后，通過磷屏曝光，后用儲磷屏系統(tǒng)分析圖像。

3.1實驗步驟：

(1)預(yù)處理AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片與熒光染色實驗步驟(2)相同；

(2)在AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片上覆蓋約20μCi的^99mTc標(biāo)記化合物(40-42，44，46，49，50)200μL，室溫下孵育60分鐘；

(3)用40％乙醇溶液沖洗5分鐘，流水沖洗5分鐘；

(4)晾干后，置于磷屏下曝光60分鐘，用儲磷屏系統(tǒng)成像。

3.2實驗結(jié)果：

實驗結(jié)果如圖5所示，^99mTc標(biāo)記化合物能夠特異性與腦中Aβ斑塊結(jié)合，充分說明本發(fā)明的化合物被放射性核素標(biāo)記后，可以作為Aβ斑塊的顯像劑。

4.正常小鼠體內(nèi)分布實驗

通過體內(nèi)分布實驗研究了^99mTc標(biāo)記化合物(40-42，44，46，49，50，55和56)在ICR小鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)性質(zhì)。

4.1實驗步驟：

將5-10μCi標(biāo)記化合物(100μL生理鹽水溶液，含10％乙醇)由尾靜脈注射入正常小鼠(ICR，雄性，20-22g)體內(nèi)(n＝5)，分別于注射后2分鐘、10分鐘、30分鐘和60分鐘將其斷頭處死，解剖取出相關(guān)臟器，測量濕重及放射性計數(shù)。數(shù)據(jù)表示為臟器中放射性百分劑量(％ID/organ)和每克臟器中放射性百分劑量(％ID/g)。

4.2實驗結(jié)果：

實驗結(jié)果如表3所示，本發(fā)明提供的[^99mTc]44在2min的初始腦攝取較高，而且腦清除也較快，因此可能成為一種用于診斷AD的Aβ斑塊顯像劑。

表3 ^99mTc標(biāo)記化合物的正常小鼠(n＝5)體內(nèi)生物分布^a

注：^a表示％ID/g，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，^b表示％ID/臟器。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。