本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類(4-羥基苯基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮類衍生物及其組合物和在藥物方面的用途。

背景技術(shù)：

痛風(fēng)(Gout)是由于人體內(nèi)嘌呤代謝紊亂和/或尿酸排泄障礙導(dǎo)致高尿酸血癥(Hyper-uricemia)所引起的慢性代謝性疾病，以尿酸鹽沉積在關(guān)節(jié)等部位而引起的劇烈疼痛為主要特征。當(dāng)體內(nèi)血清尿酸水平超過6.8mg/dL時，尿酸鹽將在人體組織的滑膜液、外周關(guān)節(jié)的軟骨、耳朵的耳廓和手肘的鷹嘴囊等處出現(xiàn)尿酸單鈉鹽結(jié)晶沉積。當(dāng)有此類癥狀時，即可診斷為痛風(fēng)(Terkeltaub RA.Crystal Deposition Diseases.In:Goldman L,Aus-iello D,eds.The Cecil Textbook of Medicine,23rd ed.Philadelphia,PA:Saunders Elsevier Co；2008:2069-2075)(Richette P,Bardin T.Gout.Lancet.2010,375(9711):318-328)。

痛風(fēng)在普通人群中的發(fā)病率在1％-2％左右，發(fā)達國家發(fā)病率較高，2007-2008年的一份調(diào)查報道稱，美國痛風(fēng)病人已達830萬。中國近十幾年的痛風(fēng)發(fā)病率直線上升，據(jù)報道稱中國痛風(fēng)患者人數(shù)已超5000萬，且男性痛風(fēng)患者人數(shù)遠高于女性。

目前治療痛風(fēng)的藥物主要有抗急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥、抑制尿酸生成藥以及促進尿酸排泄藥?？辜毙酝达L(fēng)藥主要有秋水仙堿、非甾體抗炎藥、促腎上腺皮質(zhì)激素和糖皮質(zhì)激素等。抑制尿酸生成藥主要有別嘌呤醇和非布索坦。其作用機理是通過抑制嘌呤向尿酸轉(zhuǎn)化所需的黃嘌呤氧化酶，以減少尿酸的生成。促進尿酸排泄藥主要有丙磺舒、苯磺唑酮和苯溴馬隆等。

急性痛風(fēng)發(fā)作的治療只能控制癥狀、減輕患者疼痛，無法降低體內(nèi)血尿酸水平。其中秋水仙堿毒性很大，常伴有腹瀉、嘔吐、腹痛性痙攣等常見的不良反應(yīng)。臨床上常用的黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌呤醇使用劑量大，對一些人可引發(fā)致命性的Stevens Johnson綜合癥(皮膚重癥多形紅斑)，也常伴有胃部不適、惡心、腹瀉、頭疼、發(fā)熱、食欲不振、體重減輕、排尿疼、血尿等副作用。另一黃嘌呤氧化酶抑制劑為非布索坦，于2009年在歐美上市，其療效雖然優(yōu)于別嘌呤醇，但也有十分嚴(yán)重的心血管和胃腸道不適副作用，同時會導(dǎo)致頭疼及一定的肝損傷。苯溴馬隆促尿酸排泄作用十分優(yōu)異，但有很大的肝臟毒性。 丙磺舒和苯磺唑酮促尿酸排泄的作用十分差、使用劑量大，副作用大。

促尿酸排泄作用機理為抑制尿酸在近端小管的重吸收，增加尿酸的腎臟排泄而降低血尿酸濃度。人體約70％的尿酸經(jīng)腎臟排泄，而高尿酸血癥患者中約有80-85％是由于尿酸排泄障礙所致(Cheeseman C.Solute carrier family 2,member 9and uric acid homeostasis.Current Opinion in Nephrology and Hypertension,2009,18(5):428-432)。促尿酸排泄藥在高尿酸血癥和痛風(fēng)的治療中占有十分重要的地位。位于近曲小管上皮細胞膜的人尿酸陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是有機陰離子轉(zhuǎn)運體(OAT)超家族成員，由SLC22A12基因編碼，其cDNA存在多種突變，易引起尿酸代謝異常，一項Meta分析表明該基因?qū)ρ蛩崴接?.13％的變量貢獻(So A,Thorens B.Uric acid transport and disease.Journal of Clinical Investigation.2010,120(6):1791-1799)。該基因編碼的URAT1在尿酸從細胞內(nèi)重吸收到腎小管腔內(nèi)的過程中發(fā)揮重要作用，是人體內(nèi)主要的尿酸重吸收蛋白，控制著約90％以上的腎小球濾過后尿酸的重吸收。因此，抑制URAT1轉(zhuǎn)運作用可降低尿酸重吸收，促進尿酸在腎臟的排泄，而達到降低體內(nèi)血尿酸水平的效果(Michael FW,Jutabha P,Quada B.Developing potent human uric acid transporter 1(hURAT1)inhibitors.Journal of Medicinal Chemistry.2011,54:2701-2713)。

目前市場主要使用的URAT1抑制劑為苯溴馬隆，其化學(xué)名稱為(3,5-二溴-4-羥苯基)(2-乙基-3-苯并呋喃基)甲酮，由法國Snaofi-Synthelabo公司研制，并于1976年上市。該藥是目前世界市場最有效的促尿酸排泄藥，已使用近40年。但苯溴馬隆有很大的肝臟毒性，沒能進入美國市場，2003年已從大部分歐洲國家撤出(Jansen TL,Reinders MK,van Roon EN,et al.Benzbromarone withdrawn from the European market:another case of"absence of evidence is evidence of absence".Clinical Experimental Rheumatology,2004,22(5):651)。其另一缺點是對肝臟CYP2C9酶有較強的抑制作用。但因市場缺乏好的抗痛風(fēng)藥物，仍然有中國、德國、日本、巴西、新西蘭等20多個國家在廣泛使用。

研究表明，苯溴馬隆肝毒性主要是由人體肝臟代謝所引起。該藥物易被肝臟的CYP2C9氧化代謝成6-羥基苯溴馬隆，再進一步被P450s酶系代謝成兩種鄰苯雙醌類產(chǎn)物，此類 物質(zhì)化學(xué)性質(zhì)活潑，可通過與蛋白質(zhì)或多肽的半胱氨酸殘基上的巰基共軛加成，使蛋白質(zhì)變性失活，從而導(dǎo)致肝毒性。(Matthew G.McDonald,Rettie AE.Sequential metabolism and bioactivation of the hepatotoxin benzbromarone:formation of glutathione adducts from a catechol intermediate.Chemical Research in Toxicology.2007,20(12):1833-1842)。苯溴馬隆還有其它一些副作用，如腹瀉、胃部不適、惡心等消化系統(tǒng)癥狀；斑疹、潮紅、瘙癢等皮膚過敏癥。

無論是促尿酸排泄藥物還是抑制尿酸生成藥物在臨床應(yīng)用中均存在很大的毒副作用，因此，研究開發(fā)高效、低毒的抗痛風(fēng)藥物具有十分重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，設(shè)計并提供一類具有抑制URAT1轉(zhuǎn)運尿酸能力、促進尿酸排泄的(4-羥基苯基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮類衍生物。體內(nèi)、體外試驗結(jié)果表明，與苯溴馬隆相比較，本發(fā)明提供的化合物能夠明顯提高對URAT1的抑制效果，同時還可顯著增加在小鼠體內(nèi)的尿酸排泄；并可降低對正常肝臟細胞的毒性。大鼠急性毒性試驗的口服最大耐受劑量結(jié)果表明，本發(fā)明提供的化合物的毒性遠遠低于苯溴馬隆。顯示本發(fā)明提供的化合物具有更優(yōu)異的促尿酸排泄作用和更高的安全性。

本發(fā)明的另一目的是提供一種含有(4-羥基苯基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮類衍生物的藥物組合物。

本發(fā)明的第三個目的是提供上述(4-羥基苯基)(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮類衍生物在預(yù)防或治療高尿酸血癥、腎病或痛風(fēng)方面的用途。

本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到：

一類通式(I)所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，

其中，

R¹或R²分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、羥基、取代或非取代的C_1-5烷基、取代或非取代的C_1-3烷氧基、取代或非取代的C_1-3烷硫基中的一種或多種；

R³選自取代或非取代的下述基團：C_1-4烷基或C_3-4環(huán)烷基，其取代基選自氘、鹵素、 C_1-2烷基或C_3-4環(huán)烷基；

R⁴或R⁵分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、取代或非取代的C_1-3烷基、取代或非取代的C_1-3烷氧基、取代或非取代的C_1-3烷硫基中的一種或幾種；

R¹、R²、R⁴或R⁵中的取代基選自氘、鹵素、C_1-3烷基、C_3-4環(huán)烷基或C_1-3烷氧基。

本發(fā)明中的R¹、R²、R⁴或R⁵基團，可以各自選擇所限定的基團中的一個，也可以選擇所限定的基團的中兩個或兩個以上。當(dāng)R¹、R²、R⁴或R⁵基團選擇兩個或兩個以上時，這兩個或兩個以上的基團分別在所對應(yīng)的苯基或咪唑并[1,2-a]吡啶基的不同位點。例如當(dāng)R⁴采用兩個基團時，這兩個基團可以分別在4-羥基苯基的2位和3位。

在一種優(yōu)選方案中，R¹或R²分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、羥基或者取代或非取代的下述基團：C_1-5烷基、C_1-3烷氧基或C_1-3烷硫基。其取代基選自氘、鹵素、C_1-3烷基、C_3-4環(huán)烷基或C_1-3烷氧基。

在另一種優(yōu)選方案中，R¹或R²分別獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、氰基、羥基、取代或非取代的C_1-3烷基、取代或非取代的C_1-3烷氧基中的一種或幾種；其取代基選自氘、鹵素、C_1-3烷基、C_3-4環(huán)烷基或C_1-3烷氧基。

在一種更優(yōu)選方案中，R¹或R²分別獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、氰基、C_1-3烷基、C_1-3鹵代烷基或C_1-3烷氧基中的一種或幾種。

在另一種更優(yōu)選方案中，R¹或R²分別獨立地選自氫、氘、氟、氯、溴、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基等。

在一種優(yōu)選方案中，R³選自取代或非取代的下述基團：C_1-3烷基、C_3-4環(huán)烷基；其取代基選自氘、鹵素、C_1-2烷基或C_3-4環(huán)烷基。

在一種更優(yōu)選方案中，R³選自C_2-3烷基或C_3-4環(huán)烷基。

在另一種更優(yōu)選方案中，R³選自乙基或環(huán)丙基。

在一種優(yōu)選方案中，R⁴或R⁵分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、C_2-3烯基、C_2-3炔基或者取代或非取代的下述基團：C_1-3烷基、C_1-3烷氧基或C_1-3烷硫基。其取代基選自氘、鹵素、C_1-3烷基、C_3-4環(huán)烷基或C_1-3烷氧基。

在另一種優(yōu)選方案中，R⁴或R⁵分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、乙烯基、乙炔基、取代或非取代的C_1-2烷基、取代或非取代的C_1-2烷氧基、取代或非取代的C_1-2烷硫基中的一種或幾種；其取代基選自氘、鹵素、C_1-2烷基、C_3-4環(huán)烷基或C_1-3烷氧基。

在一種更優(yōu)選方案中，R⁴或R⁵分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、C_1-2烷基、C_1-2鹵代烷基、C_1-2烷氧基或C_1-2烷硫基中的一種或幾種。

在另一種更優(yōu)選方案中，R⁴或R⁵分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、甲硫基、乙硫基中的一種或幾種。

在另一種更優(yōu)選方案中，R⁴選自鹵素中的一種或幾種，R⁵選自氰基。

在一種優(yōu)選方案中，本發(fā)明化合物藥學(xué)上可接受的鹽可選自鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丙烯酸鹽、草酸鹽、(D)或(L)蘋果酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、羥基苯甲酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽等。

本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中化合物選自：

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3,5-二碘苯基)甲酮，

(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

3-氯-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈，

(3-溴-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3-碘-5-甲基苯基)甲酮，

(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3-碘苯基)甲酮，

5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈，

(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3-溴-5-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-甲基苯甲腈，

(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)[4-羥基-3-(三氟甲基)苯基]甲酮，

[3-溴-4-羥基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈，

5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-碘苯甲腈，

5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-3-氟-2-羥基苯甲腈，

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(2-乙硫基-4-羥基苯基)甲酮，

(3-溴-5-氯-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(3-溴-5-氟-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-氟-4-羥基-5-碘苯基)甲酮，

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-羥基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(6-溴-2-乙基-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮，

(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-7-三氟甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

3-(3,5-二溴-4-羥基苯基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-甲腈，

(2-氘-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(2-氘-3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮，

(6-氘-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮，

(2-環(huán)丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮，

3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈鹽酸鹽，

5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-碘苯甲腈鹽酸鹽。

本發(fā)明化合物可按下述合成方法制備：

通式一：

該通式中將2-氨基吡啶類化合物跟酰氯反應(yīng)制成酰胺后與取代的溴代苯乙酮反應(yīng)得到相應(yīng)的咪唑并[1,2-a]吡啶類化合物，該化合物可能為最終產(chǎn)物，或經(jīng)過去甲基、鹵化反應(yīng)或其它反應(yīng)得到相應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物。

通式二：

該通式中將取代的苯乙酮跟相應(yīng)的酯反應(yīng)，得到1.3-二酮類化合物，該化合物跟相應(yīng)的2-氨基吡啶反應(yīng)，得到咪唑并[1,2-a]吡啶類化合物，該化合物經(jīng)過去甲基、鹵化反應(yīng)或其它反應(yīng)得到相應(yīng)的目標(biāo)產(chǎn)物。

合成方法中各基團的定義如上所述。

除非另有說明，下列用在權(quán)利要求書和說明書中的術(shù)語有如下含義：

“氫”，是指氕(1H)，它是氫元素的主要穩(wěn)定同位素。

“氘”，是指氫的一種穩(wěn)定形態(tài)同位素，也被稱為重氫，其元素符號為D。

“鹵素”，是指氟原子，氯原子，溴原子或碘原子。

“烷基”，表示1-20個碳原子的飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團(本申請書中提到的數(shù)字范圍，例如“1-20”，是指該基團，此時為烷基，可以含1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子等，直至包括20個碳原子)。含1-4個碳原子的烷基稱為低級烷基。當(dāng)?shù)图壨榛鶝]有取代基時，稱其為未取代的低級烷基。更優(yōu)選的是，烷基是有2-5個碳原子的中等大小的烷基。本發(fā)明中的烷基例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基為有2-4個碳原子的低級烷基，例如乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。

“烷氧基”，表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的環(huán)烷基)基團，其進一步表示-O-(未取代的烷基)。代表性實施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。

“烷硫基”，表示-S-(未取代的烷基)和-S-(未取代的環(huán)烷基)基團，其進一步表示-S-(未取代的烷基)。代表性實施例包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、環(huán)丙硫基、環(huán)丁硫基、環(huán)戊硫基、環(huán)己硫基等。

“烯基”，表示具有C＝C雙鍵的不飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團；本發(fā)明中的烯基優(yōu)選采用C_2-7烯基，進一步優(yōu)選C_2-6烯基或C_2-4烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、 丙-1-烯-2-基等。

“炔基”，表示具有C≡C叁鍵的不飽和的脂烴基，包括直鏈和支鏈基團；本發(fā)明中的炔基優(yōu)選采用C_2-7炔基，進一步優(yōu)選C_2-6炔基或C_2-4炔基，例如乙炔基、丙炔基、炔丙基、丙-1-炔-2-基等。

“環(huán)烷基”，表示具有3個以上C原子的單環(huán)或雙環(huán)烷基，包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、二環(huán)庚基。

“氰基”，表示-CN基團。

“藥學(xué)上可接受的鹽”，是包含通式(I)的化合物與有機酸或無機酸形成的鹽，表示保留母體化合物的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽。這類鹽包括：

(1)與酸成鹽，通過母體化合物的游離堿與無機酸或有機酸的反應(yīng)而得，無機酸例如(但不限于)鹽酸、氫溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亞硫酸和高氯酸等，有機酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)蘋果酸、富馬酸、馬來酸、羥基苯甲酸、γ-羥基丁酸、甲氧基苯甲酸、鄰苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。

(2)存在于母體化合物中的酸性質(zhì)子被金屬離子代替或者與有機堿配位化合所生成的鹽，金屬離子例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁離子，有機堿例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。

“藥物組合物”，指的是在此描述的一種或多種化合物或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽和前藥與其它的化學(xué)成分，例如藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑的混合物。藥物組合物的目的是促進化合物對生物體的給藥。

在下文中，除非特別地限制，作為治療劑活性成分的式(I)化合物包括它們的所有藥學(xué)上可接受的鹽，它們應(yīng)當(dāng)理解為落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本說明書中，僅僅為了方便，將它們簡稱為“式(I)的化合物”。

本發(fā)明包括一種藥物組合物，其包含本發(fā)明中任一所述化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽或其易水解的前藥酯作為活性成分，輔以藥學(xué)上可接受的輔料。

本發(fā)明的上述的式(I)化合物在下面的實施例中已證實，它們能夠明顯提高對URAT1的抑制效果，顯著增加在小鼠體內(nèi)的尿酸排泄，并且毒性遠遠低于苯溴馬隆。因此，本發(fā)明提供的化合物具有更優(yōu)異的促尿酸排泄作用和更高的安全性。基于這些性能，本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可應(yīng)用于制備促尿酸排泄藥物方面，用來治療與尿酸排泄障礙相關(guān)的疾病，特別是應(yīng)用于治療或預(yù)防高尿酸血癥、腎病或痛風(fēng)藥物方面，具有良好的應(yīng)用前景。

具體實施方式

實施例1：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(4)的合成

步驟A：將2-氨基吡啶(2.0g，21.3mmol)和三乙胺(2.58g，25.5mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)，然后在冰水浴下滴加丙酰氯(2.07g，22.4mmol)，所得混合物自然升溫到室溫并繼續(xù)攪拌過夜。加入水(40mL)，用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:15～1:10洗脫)，得N-(吡啶-2-基)丙酰胺(1)(2.74g)。收率為85.6％。

步驟B：將含有化合物1(300mg，2.0mmol)、2-溴-1-(4-甲氧基苯基)乙酮(460mg，2.0mmol)和甲苯(10mL)的混合物在回流下攪拌48小時。冷卻到室溫，加入水(30mL)，用飽和碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至8～9。用二氯甲烷(40mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:1洗脫)，得(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(2)(254mg)。收率為45.3％。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.18(d，J＝7.0Hz，1H)，7.74-7.69(m，3H)，7.58-7.55(m，1H)，7.17-7.14(m，1H)，7.09(d，J＝8.5Hz，2H)，3.87(s，3H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.11(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：281.1[M+H]⁺。

步驟C：在冰水浴下，將1.0M三溴化硼甲苯溶液(0.6mL)滴加到化合物2(80mg，0.285mmol)的無水二氯甲烷(6mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物倒入冰水(30mL)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:1洗脫)，得(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基苯基)甲酮(3)(67mg)。收率為88.3％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ10.29(s，1H)，9.11(d， J＝6.6Hz，1H)，7.71(d，J＝9.0Hz，1H)，7.62-7.51(m，3H)，7.15-7.11(m，1H)，6.90(d，J＝8.4Hz，2H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.12(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：267.2[M+H]⁺。

步驟D：將溴(90mg，0.563mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物3(67mg，0.252mmol)和乙酸鈉(62mg，0.755mmol)的醋酸(5mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌3小時。向反應(yīng)混合物中滴加飽和亞硫酸氫鈉水溶液，直到顏色褪去。減壓蒸除溶劑，然后加入水(30mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:1洗脫)，得(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(4)(48mg)。收率為44.9％。¹H NMR(DMSO-d6,300MHz)δ9.19(d，J＝6.9Hz，1H)，7.87(s，2H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，7.63-7.58(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，2.44(q，J＝7.5Hz，2H)，1.17(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：422.9[M+H]⁺。

實施例2：(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3,5-二碘苯基)甲酮(5)的合成

將含有化合物3(556mg，2.09mmol)、甲醇(40mL)、乙酸鈉(367mg，4.58mmol)和碘(1.17g，4.61mmol)的混合物在回流下攪拌1小時。然后加入含有氫氧化鈉(151mg，3.78mmol)的水(20mL)溶液，繼續(xù)回流1小時。冷卻到室溫，加入飽和亞硫酸氫鈉溶液(50mL)，過濾，收集固體。固體用乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶，得(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3,5-二碘苯基)甲酮(5)(924mg)。收率為85.3％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.17(d，J＝6.9Hz，1H)，8.05(s，2H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，7.64-7.58(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.17(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：518.8[M+H]⁺。

實施例3：(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(8)和(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(9)的合成

步驟A：在0～5℃下，將溴乙酰溴(6.8g，33.7mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液經(jīng)過約20分鐘滴加到2-氯苯甲醚(4.0g，28.1mmol)和三氯化鋁(4.12g，30.9mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中。加畢，所得混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1.5小時。將反應(yīng)液分批倒入冰水(100mL)中，用二氯甲烷(60mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(30mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL×2)、水(30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。有機相再通過短硅膠柱過濾。減壓蒸除溶劑，所得產(chǎn)物用石油醚/二氯甲烷重結(jié)晶，得2-溴-1-(3-氯-4-甲氧基苯基)乙酮(6)(3.37g)。收率為45.5％。

步驟B：將含有化合物1(780mg，5.23mmol)、化合物6(1.37g，5.20mmol)和甲苯(20mL)的混合物在回流下攪拌24小時。冷卻到室溫，加入水(50mL)，用飽和碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至8～9。用二氯甲烷(60mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:5洗脫)，得(3-氯-4-甲氧基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(7)(510mg)。收率為31.2％。

步驟C：在冰水浴下，將1.0M三溴化硼甲苯溶液(3.2mL)滴加到化合物7(500mg，1.59mmol)的無水二氯甲烷(15mL)溶液中，然后自然升溫到室溫攪拌過夜。將反應(yīng)物倒入冰水(40mL)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～3:1洗脫)，得(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(8)(380mg)。收率為79.5％。MS(EI，m/z)：301.7[M+H]⁺。

步驟D：將含有化合物8(378mg，1.26mmol)、甲醇(30mL)、乙酸鈉(114mg，1.39mmol)和碘(351mg，1.38mmol)的混合物在回流下攪拌1小時。然后加入含有氫氧化鈉(45mg，1.13mmol)的水(13mL)溶液，繼續(xù)回流1小時。冷卻到室溫，加入 飽和亞硫酸氫鈉溶液(30mL)，過濾，收集固體。固體用乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶，得(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(9)(430mg)。收率為85.3％。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.04(d，J＝7.0Hz，1H)，7.95(d，J＝1.5Hz，1H)，7.71-7.68(m，2H)，7.54-7.51(m，1H)，7.13-7.10(m，1H)，2.49-2.47(m，2H)，1.18(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：426.9[M+H]⁺。

實施例4：3-氯-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(10)的合成

將含有化合物9(393mg，0.921mmol)、氰化亞銅(124mg，1.38mmol)和DMF(5mL)的混合物在130℃攪拌過夜。冷卻到室溫，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(20mL×2)和飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，先用乙酸乙酯:石油醚＝2:1～5:1，然后用乙酸乙酯:甲醇＝30:1洗脫)，得3-氯-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(10)。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.11(d，J＝6.3Hz，1H)，7.94-7.90(m，2H)，7.80-7.77(m，1H)，7.68-7.63(m，1H)，7.26-7.21(m，1H)，2.50-2.48(m，2H)，1.17(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：324.0[M-H]^-。

實施例5：(3-溴-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(11)的合成

化合物11的制備方法參見實施例3，其中實施例3步驟A中的2-氯苯甲醚用2-溴苯甲醚替代。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.16(d，J＝6.9Hz，1H)，8.03(d，J＝1.8Hz，1H)，7.87(d，J＝1.8Hz，1H)，7.74(d，J＝8.7Hz，1H)，7.62-7.56(m，1H)，7.20-7.16(m，1H)，2.43(t，J＝7.5Hz，2H)，1.18(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：470.9[M+H]⁺。

實施例6：(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3-碘-5-甲基苯基)甲酮(12)的合成

化合物12的制備方法參見實施例3，其中實施例3步驟A中的2-氯苯甲醚用2-甲基苯甲醚替代。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.91(s，1H)，9.14(dd，J＝0.9，6.9Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.74-7.71(m，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.18-7.13(m，1H)，2.44(t，J＝7.5Hz，2H)，2.30(s，3H)，1.17(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：406.9[M+H]⁺。

實施例7：(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基-3-碘苯基)甲酮(13)的合成

化合物13的制備方法參見實施例3中的步驟A、B和C，其中實施例3步驟A中的2-氯苯甲醚用2-碘苯甲醚替代。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ11.16(s，1H)，9.13(d，J＝7.0Hz，1H)，8.02(d，J＝1.5Hz，1H)，7.71(d，J＝8.5Hz，1H)，7.61(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.16-7.13(m，1H)，7.01(d，J＝8.5Hz，1H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.15(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：392.9[M+H]⁺。

實施例8：5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(14)的合成

化合物13和氰化亞銅在DMF中反應(yīng)得化合物14。具體實驗操作參見實施例4。

¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ11.91(s，1H)，9.19(d，J＝6.5Hz，1H)，7.98(d，J＝2.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.74(d，J＝9.0Hz，1H)，7.61-7.57(m，1H)，7.19-7.15(m，2H)，2.43(q，J＝7.5Hz，2H)，1.13(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：292.0[M+H]⁺。

實施例9：(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(17)和(3-溴-5-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(18)的合成

步驟A：將2-氨基-5-氟吡啶(2.5g，22.3mmol)和三乙胺(2.71g，26.8mmol)溶解于二氯甲烷(25mL)，然后在冰水浴下滴加丙酰氯(2.17g，23.5mmol)，所得混合物自然升溫到室溫并繼續(xù)攪拌過夜。加入水(40mL)，用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:5洗脫)，得N-(5-氟吡啶-2-基)丙酰胺(15)(3.04g)。收率為81.1％。

步驟B：將含有化合物15(960mg，5.71mmol)、化合物6(1.50g，5.69mmol)和二甲苯(30mL)的混合物在回流下攪拌過夜。冷卻到室溫，加入水(30mL)，用飽和碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至8～9。用二氯甲烷(40mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:1洗脫)，得(3-氯-4-甲氧基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(16)(270mg)。收率為14.3％。

步驟C：在冰水浴下，將1.0M三溴化硼甲苯溶液(2.4mL)滴加到化合物16(262mg，0.787mmol)的無水二氯甲烷(10mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌6小時。將反應(yīng)混合物倒入冰水(30mL)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:6～4:1洗脫)，得(3-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(17)(90mg)。收率為35.9％。MS(EI，m/z)：339.7[M+H]⁺。

步驟D：將溴(25mg，0.156mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物17(41mg，0.129mmol)和乙酸鈉(26mg，0.317mmol)的醋酸(5mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌1.5小時。向反應(yīng)混合物中滴加飽和亞硫酸氫鈉水溶液，直到顏色褪去。減壓蒸 除溶劑，然后加入水(20mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:6～1:3洗脫)，得(3-溴-5-氯-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(18)。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ11.06(s，1H)，9.22-9.21(m，1H)，7.86-7.83(m，2H)，7.76-7.70(m，2H)，2.43(q，J＝7.5Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：398.9[M+H]⁺。

實施例10：(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(19)的合成

將含有化合物17(41mg，0.129mmol)、甲醇(10mL)、乙酸鈉(12mg，0.146mmol)和碘(36mg，0.142mmol)的混合物在回流下攪拌1小時。然后加入含有氫氧化鈉(5mg，0.125mmol)的水(3mL)溶液，繼續(xù)回流1小時。冷卻到室溫，加入飽和亞硫酸氫鈉溶液(10mL)，過濾，收集固體。固體用乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶，得(3-氯-4-羥基-5-碘苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(19)。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.13(s，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)，7.83-7.80(m，1H)，7.71(d，J＝2.0Hz，1H)，7.69-7.65(m，1H)，2.46(q，J＝7.5Hz，2H)，1.17(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：444.9[M+H]⁺。

實施例11：5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-甲基苯甲腈(24)的合成

步驟A：將乙酸-(2-甲基)苯酯通過重排反應(yīng)得到的3-甲基-4-羥基苯乙酮(20)(4.95g，33.0mmol)、甲醇(80mL)、乙酸鈉(2.98g，36.3mmol)和碘(9.21g，36.3mmol)的混合物在回流下攪拌1小時。然后加入含有氫氧化鈉(1.19g，29.7mmol)的水(55mL)溶液，繼續(xù)回流1小時。減壓蒸除大部分溶劑，過濾，收集固體。固體用乙酸乙酯(200mL)溶解，然后依次用飽和亞硫酸氫鈉溶液(40mL)和飽和食鹽水(40mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，得1-(4-羥基-3-碘-5-甲基苯基)乙酮(21)(7.91g)。收率為86.8％。

步驟B：將含有化合物21(3.90g，14.1mmol)、氰化亞銅(1.90g，21.2mmol)和DMF(25mL)的混合物在130℃攪拌過夜。冷卻到室溫，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(30mL×2)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:15～1:3洗脫)，得5-乙?；?2-羥基-3-甲基苯甲腈(22)(2.07g)。收率為83.8％。

步驟C：將溴(548mg，3.43mmol)的甲醇(4mL)溶液滴加到化合物22(500mg，2.85mmol)的甲醇(10mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌6小時。加入水(50mL)，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，得5-(2-溴-乙?；?-2-羥基-3-甲基苯甲腈(23)(800mg)。該化合物不經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。

步驟D：將含有化合物23粗品(800mg)、化合物1(600mg，3.99mmol)和甲苯(15mL)的混合物在回流下攪拌過夜。冷卻到室溫，加入甲醇(15mL)和碳酸鉀(1.10g，8.00mmol)，所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入水(40mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:1洗脫)，得5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-甲基苯甲腈(24)。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ10.99(s，1H)，9.15(d，J＝6.9Hz，1H)，7.79(s，1H)，7.74-7.72(m，2H)，7.60-7.55(m，1H)，7.19-7.14(m，1H)，2.43(q，J＝7.5Hz，2H)，2.26(s，3H)，1.14(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：306.1[M+H]⁺。

實施例12：(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)[4-羥基-3-(三氟甲基)苯基]甲酮(28)和[3-溴-4-羥基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(29)的合成

步驟A：將含有甲醇鈉(288mg，5.33mmol)、1-[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]乙酮(1.0g，4.85mmol)和DMF(5mL)的混合物在在冰水浴下攪拌2小時，然后自然升溫到室溫攪拌過夜。加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有機相依次用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:40洗脫)，得1-[4-甲氧基-3-(三氟甲基)苯基]乙酮(25)(950mg)。收率為89.8％。

步驟B和C的實驗操作分別參見實施例11中的步驟C和D。

步驟D：將60％氫化鈉(69mg，1.73mmol)分批加入到乙硫醇(107mg，1.73mmol)的DMF(5mL)溶液中，攪拌約5分鐘后再將化合物27(200mg，0.574mmol)的DMF(3mL)溶液加入上述反應(yīng)混合物中，所得混合物在120℃攪拌2小時。冷卻到室溫，加入水(40mL)，用2M鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8～9。然后用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(30mL)和飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:1洗脫)，得(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)[4-羥基-3-(三氟甲基)苯基]甲酮(28)(120mg)。收率為62.6％。

¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.55(s，1H)，9.17(d，J＝6.9Hz，1H)，7.86(d，J＝6.0Hz，2H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，7.63-7.57(m，1H)，7.21-7.16(m，1H)，2.43(q，J＝7.5Hz，2H)，1.15(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：335.1[M+H]⁺。

步驟E：將溴(55mg，0.344mmol)的醋酸(1mL)溶液滴加到化合物28(96mg，0.287mmol)和乙酸鈉(59mg，0.719mmol)的醋酸(5mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌1.5小時。向反應(yīng)混合物中滴加飽和亞硫酸氫鈉水溶液，直到顏色褪去。減壓蒸除溶劑，然后加入水(20mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:5～3:2洗脫)，得[3-溴-4-羥基-5-(三氟甲基)苯基](2-乙基咪唑并 [1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(29)(85mg)。收率為71.9％。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.19(d，J＝6.5Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.88(s，1H)，7.77(d，J＝9.0Hz，1H)，7.66-7.62(m，1H)，7.24-7.21(m，1H)，2.41(q，J＝7.5Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：413.0[M+H]⁺。

實施例13：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(30)的合成

化合物30的制備方法參見實施例1，其中實施例1步驟A中的2-氨基吡啶用2-氨基-5-甲基吡啶替代。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.04(s，1H)，7.87(s，2H)，7.69(d，J＝9.0Hz，1H)，7.52(d，J＝9.0Hz，1H)，2.42-2.38(m，5H)，1.15(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：436.9[M-H]^-。

實施例14：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(33)的合成

步驟A：將溴(960mg，6.0mmol)的醋酸(5mL)溶液滴加到2-溴-1-(4-羥基苯基)乙酮(639mg，2.98mmol)和乙酸鈉(740mg，9.02mmol)的醋酸(10mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌10分鐘。加入水(40mL)，過濾，收集固體。固體用乙酸乙酯溶解，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，得2-溴-1-(3,5-二溴-4-羥基苯基)乙酮(31)(890mg)。收率為80.1％。

步驟B：將2-氨基-5-甲氧基吡啶(1.0g，8.05mmol)和三乙胺(981mg，9.69mmol) 溶解于二氯甲烷(8mL)，然后在冰水浴下滴加丙酰氯(777mg，8.40mmol)，所得混合物自然升溫到室溫并繼續(xù)攪拌過夜。加入水(40mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～1:8洗脫)，所得產(chǎn)物再用石油醚重結(jié)晶，得N-(5-甲氧基吡啶-2-基)丙酰胺(32)(349mg)。收率為24.1％。

步驟C：將含有化合物31(790mg，2.12mmol)、化合物32(340mg，1.89mmol)和甲苯(20mL)的混合物在回流下攪拌48小時。冷卻到室溫，加入水(50mL)，用飽和碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至8～9。用二氯甲烷(50mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～2:5洗脫)，得(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(33)(87mg)。收率為10.1％。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ8.71(s，1H)，7.79(s，2H)，7.64(d，J＝10.0Hz，1H)，7.34(d，J＝10.0Hz，1H)，3.81(s，3H)，2.45(q，J＝7.5Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：452.9[M-H]^-。

實施例15：3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(38)的合成

步驟A：在冰水浴下，將4-甲氧基苯乙酮(44g，293mmol)加到含有1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)鹽(104g，294mmol)、碘(38.6g，152mmol)和乙腈(440mL)的混合物中。加畢，所得混合物在室溫下攪拌過夜。向反應(yīng)混合物中加入水(1350mL)，有大量固體析出。過濾，干燥，得3-碘-4-甲氧基苯乙酮(34)(70g)。收率為86.5％。

步驟B：將含有化合物34(70.0g，254mmol)、氰化亞銅(34.0g，380mmol)和DMF(400mL)的混合物在130℃攪拌過夜。冷卻到室溫，經(jīng)硅藻土過濾后，加入水(1600 mL)，用乙酸乙酯(800mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(400mL×2)和飽和食鹽水(400mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，得5-乙?；?2-甲氧基苯甲腈(35)(50.0g)。該化合物不經(jīng)進一步處理直接用于下一步反應(yīng)。

步驟C：將溴(49.0g，307mmol)的甲醇(50mL)溶液滴加到化合物35粗品(45.0g)的甲醇(250mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(900mL)，過濾，干燥，得5-(2-溴-乙?；?-2-羥基-3-甲基苯甲腈(36)(41.0g)。步驟B和C兩步反應(yīng)總收率為70.6％。

步驟D：將含有化合物36(41.0g，161mmol)、化合物1(24.0g，161mmol)和甲苯(600mL)的混合物在回流下攪拌48小時。冷卻到室溫，加入水(400mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8。用乙酸乙酯(600mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30～2:1洗脫)，得5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-甲氧基苯甲腈(37)(25.7g)。收率為52.3％。

步驟E：在冰水浴下，將60％氫化鈉(4.8g，120mmol)分批加入到乙硫醇(8.4mL)的THF(30mL)溶液中，攪拌約5分鐘后過濾，收集濾餅。再將該濾餅加入到含有化合物37(9.0g，29.5mmol)和DMF(25mL)的混合物中，所得混合物在60℃攪拌2小時。冷卻到室溫，經(jīng)硅藻土過濾后，加入水(100mL)，用2M檸檬酸水溶液調(diào)節(jié)pH值至5～6。過濾，濾餅用乙腈重結(jié)晶，得5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(14)(7.2g)。收率為83.8％。

步驟F：將NBS(5.28g，29.7mmol)分批加入到化合物14(7.2g，24.7mmol)的DMF(70mL)溶液中，加畢，所得混合物在室溫下攪拌1小時。加入水(210mL)，過濾，濾餅用水(100mL×3)洗滌，再用乙腈重結(jié)晶，得3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈(38)(7.0g)。收率為76.8％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.01(d，J＝6.9Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.83(s，1H)，7.78-7.75(m，1H)，7.65-7.59(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，2.58-2.50(m，2H)，1.19(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：368.0[M-H]^-。

實施例16：5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-碘苯甲腈(39)的合成

將化合物14和碘在甲醇中進行碘代反應(yīng)，得5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2- 羥基-3-碘苯甲腈(39)，具體實驗操作參見實施例10。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.04(d，J＝7.0Hz，1H)，8.23(d，J＝1.5Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.77(d，J＝8.5Hz，1H)，7.66-7.63(m，1H)，7.23-7.21(m，1H)，2.56-2.50(m，2H)，1.20(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：416.0[M-H]^-。

實施例17：5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-3-氟-2-羥基苯甲腈(40)的合成

化合物40的制備方法參見實施例11中的步驟A、B和C以及實施例14中的步驟C，其中實施例11步驟A中的3-甲基-4-羥基苯乙酮用3-氟-4-羥基苯乙酮替代，實施例14步驟C中的化合物32用化合物1替代。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.18(d，J＝6.9Hz，1H)，7.83-7.75(m，3H)，7.64-7.59(m，1H)，7.23-7.18(m，1H)，2.46-2.41(m，2H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：310.1[M+H]⁺。

實施例18：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(41)的合成

化合物41的制備方法參見實施例1，其中實施例1步驟A中的丙酰氯用丁酰氯替代。

¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ10.81(s，1H)，9.18(d，J＝6.5Hz，1H)，7.86(s，2H)，7.73(d，J＝9.0Hz，1H)，7.61-7.58(m，1H)，7.19-7.17(m，1H)，2.38(q，J＝7.5Hz，2H)，1.68-1.63(m，2H)，0.76(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：436.9[M-H]^-。

實施例19：(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(2-乙硫基-4-羥基苯基)甲酮(44)的合成

化合物44的制備方法參見實施例12中的步驟B、C和D，其中實施例12步驟B中的化合物25用1-(2-氟-4-甲氧基苯基)乙酮替代。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ10.08(s，1H)，9.42(d，J＝7.0Hz，1H)，7.74(d，J＝8.5Hz，1H)，7.63-7.59(m，1H)，7.27-7.20(m，2H)，6.88(d，J＝2.0Hz，1H)，6.68(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，2.88(q，J＝7.5Hz，2H)，2.26(q，J＝7.5Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)，1.05(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：325.1[M-H]^-。

實施例20：(3-溴-5-氯-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(45)的合成

以化合物8為原料，化合物45的制備方法參見實施例9中的步驟D。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ9.19(d，J＝6.5Hz，1H)，7.83(d，J＝2.0Hz，1H)，7.76-7.74(m，2H)，7.61-7.58(m，1H)，7.20-7.17(m，1H)，2.43(q，J＝7.5Hz，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：379.0[M-H]^-。

實施例21：(3-溴-5-氟-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(48)的合成

步驟A：將NBS(977mg，5.49mmol)分批加入到3-氟-4-羥基苯乙酮(806mg，5.23mmol)的DMF(10mL)中，所得混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有機相依次用水(30mL×3)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，所得產(chǎn)物用石油醚/乙酸乙酯重結(jié)晶，得3-溴-5-氟-4-羥基苯乙酮(46)(1.0g)。收率為82.0％。

步驟B：將溴(824mg，5.16mmol)的甲醇(5mL)溶液滴加到化合物46(1.0g，4.29mmol)的甲醇(20mL)溶液中，所得混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(60mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:5洗脫)，得2-溴-1-(3-溴-5-氟-4-羥基苯基)乙酮(47)(940mg)。收率為70.2％。

步驟C：將含有化合物15(210mg，1.25mmol)、化合物47(300mg，0.962mmol)和N-甲基吡咯烷酮(10mL)的混合物在150℃攪拌過夜。冷卻到室溫，加入水(50mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，再用2M檸檬酸水溶液調(diào)節(jié)pH值至5～6。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:25～1:5洗脫)，得(3-溴-5-氟-4-羥基苯基)(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(48)。¹H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ11.44(s，1H)，9.24-9.22(m，1H)，7.88-7.85(m，1H)，7.75-7.71(m，2H)，7.63-7.60(m，1H)，2.47(q，J＝7.5Hz，2H)，1.18(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：379.0[M-H]^-。

實施例22：(2-乙基-6-氟咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-氟-4-羥基-5-碘苯基)甲酮(51)的合成

以化合物15為原料，化合物51的制備方法參見實施例9中的步驟B和C以及實施例10。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.44(s，1H)，9.19-9.17(m，1H)，7.86-7.81(m，2H)，7.73-7.66(m，1H)，7.60-7.56(m，1H)，2.49-2.41(m，2H)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：427.1[M-H]^-。

實施例23：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-6-羥基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(52)的合成

以化合物33為原料，化合物52的制備方法參見實施例1中的步驟C。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.00(s，1H)，8.92(s，1H)，7.84(s，2H)，7.63(d，J＝9.6Hz，1H)，7.31-7.29(m，1H)，2.37(q，J＝7.6Hz，2H)，1.13(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：441.0[M+H]⁺。

實施例24：(6-溴-2-乙基-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(56)的合成

步驟A：在-10～0℃下，將60％氫化鈉(1.68g，42mmol)分批加入到對甲氧基苯乙酮(3.0g，20.0mmol)的DMF(15mL)溶液中。加完后在該溫度下繼續(xù)攪拌40分鐘，然后滴入丙酸乙酯(2.04g，20mmol)。加畢，自然升溫到室溫攪拌過夜。加入水(60mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(20mL×2)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30洗脫)，得1-(4-甲氧基苯基)戊烷-1.3-二酮(53)(3.16g)。收率為76.6％。

步驟B：將2-氨基-5-溴-4-甲基吡啶(187mg，1.0mmol)和化合物53(247mg，1.20mmol)溶解于THF(6mL)，然后在冰水浴下依次加入碘苯二乙酸(386mg，1.20mmol)和三氟化硼乙醚(28mg，0.2mmol)，加畢，自然升到室溫攪拌過夜。加入水(30mL)，用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并的有機相用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:30洗脫)，得(6-溴-2-乙基-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(54)(120mg)。收率為32.2％。

步驟C和D的實驗操作參見實施例1中的步驟C和D，得(6-溴-2-乙基-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(56)。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.35(s，1H)，7.86(s，2H)，7.80(s，1H)，2.50-2.41(m，5H)，1.16(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：518.9[M+H]⁺。

實施例25：(3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基-7-三氟甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(57)的合成

化合物57的制備方法參見實施例24中的步驟B和實施例1中的步驟C和D，其中實施例24步驟B中的2-氨基-5-溴-4-甲基吡啶用2-氨基-4-三氟甲基吡啶替代。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.23(d，J＝7.2Hz，1H)，8.27(s，1H)，7.93(s，2H)，7.45(dd，J＝2.0，7.2Hz，1H)，2.50-2.48(m，2H)，1.20(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：492.9[M+H]⁺。

實施例26：3-(3,5-二溴-4-羥基苯基)-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-甲腈(58)的合成

化合物58的制備方法參見實施例24中的步驟B和實施例1中的步驟C和D，其中實施例24步驟B中的2-氨基-5-溴-4-甲基吡啶用2-氨基-5-氰基吡啶替代。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.56-9.55(m，1H)，7.92-7.89(m，3H)，7.86-7.83(m，1H)，2.48-2.46(m，2H)，1.22-1.17(m，3H)。MS(EI，m/z)：450.0[M+H]⁺。

實施例27：(2-氘-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(62)和(2-氘-3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(63)的合成

步驟A：向含有2-溴-4-甲氧基苯乙酮(1.28g，5.59mmol)、DMF(10mL)和重水 (0.5mL)的混合物中加入5％鈀碳(100mg)，所得混合物在氘氣下常壓攪拌過夜。通過硅澡土過濾后，加入水(40mL)，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并的有機相用水(10mL×4)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，得2-氘-4-甲氧基苯乙酮(59)(910mg)。收率為100％。

步驟B的實驗操作參見實施例15中的步驟C。步驟C、D和E的實驗操作參見實施例1中的步驟B、C和D，得(2-氘-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(62)， ¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.20(s，1H)，9.16(d，J＝6.8Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.61-7.56(m，2H)，7.19-7.15(m，1H)，7.11-7.09(m，1H)，2.46(q，J＝7.2Hz，2H)，1.15(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：268.2[M+H]⁺；以及(2-氘-3,5-二溴-4-羥基苯基)(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲酮(63)，¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.19(d，J＝6.8Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.76(d，J＝8.8Hz，1H)，7.63-7.59(m，1H)，7.21-7.18(m，1H)，2.44(q，J＝7.2Hz，2H)，1.17(t，J＝7.2Hz，3H)。MS(EI，m/z)：426.0[M+H]⁺。

實施例28：(6-氘-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(69)的合成

步驟A：將含有2-氨基-5-溴吡啶(5.19g，30.0mmol)、二異丙基乙胺(8.58g，66.4mmol)、4-二甲氨基吡啶(366mg，3.0mmol)、二碳酸二叔丁酯(14.4g，66.0mmol)和二氯甲烷(100mL)的混合物在室溫下攪拌過夜。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:50洗脫)，再用石油醚重結(jié)晶，得亞氨基二碳酸[2-(4-溴-2-吡啶基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)]酯(64)(5.38g)。收率為48.0％。

步驟B：將化合物64(5.59g，15.0mmol)懸浮在DMF(25mL)中，加入重水(0.5mL)及5％鈀碳(200mg)，所得混合物在氘氣下常壓攪拌48小時。通過硅澡土過濾后， 加入水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并的有機相用水(30mL×3)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:40～1:1洗脫)，得亞氨基二碳酸[2-(4-氘-2-吡啶基)-1,3-二(1,1-二甲基乙基)]酯(65)(2.70g)。收率為60.9％。

步驟C：將含有化合物65(2.69g，9.11mmol)、三氟乙酸(4mL)、水(0.5mL)和二氯甲烷(20mL)的混合物在室溫下攪拌過夜。加入水(30mL)，用2M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8～9，然后用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，無水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化(200～300目硅膠，乙酸乙酯:石油醚＝1:10～1:1洗脫)，得2-氨基-4-氘吡啶(66)(676mg)。收率為78.0％。

步驟D、E和F的實驗操作參見實施例25中的步驟B、C和D，得(6-氘-2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(69)。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.20-9.19(m，1H)，7.88(s，2H)，7.77-7.75(m，1H)，7.64-7.59(m，1H)，2.43(q，J＝7.6Hz，2H)，1.16(t，J＝7.6Hz，3H)。MS(EI，m/z)：426.0[M+H]⁺。

實施例29：(2-環(huán)丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(73)的合成

步驟A和B的實驗操作參見實施例24中的步驟A和B，其中實施例24步驟A中的丙酸乙酯用環(huán)丙基甲酸乙酯替代，步驟B中的2-氨基-5-溴-4-甲基吡啶用2-氨基吡啶替代，得(2-環(huán)丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-甲氧基苯基)甲酮(73)。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.24-9.23(m，1H)，7.81-7.79(m，2H)，7.68-7.65(m，1H)，7.58-7.56(m，1H)，7.16-7.09(m，3H)，3.87(s，3H)，1.56-1.54(m，1H)，1.08-1.06(m，2H)，0.88-0.85(m，2H)。

步驟C的實驗操作參見實施例15中的步驟E，得(2-環(huán)丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-羥基苯基)甲酮(72)。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.17-9.16(m，1H)，7.72-7.70(m，2H)，7.66-7.64(m，1H)，7.55-7.51(m，1H)，7.14-7.10(m，1H)，6.91-6.89(m，2H)，1.62-1.60(m，1H)，1.07-1.05(m，2H)，0.88-0.85(m，2H)。

步驟D的實驗操作參見實施例15中的步驟F，得(2-環(huán)丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3,5-二溴-4-羥基苯基)甲酮(73)。¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.25-9.23(m，1H)，7.97(s，2H)，7.70-7.68(m，1H)，7.61-7.57(m，1H)，7.20-7.16(m，1H)，1.58-1.55(m，1H)，1.13-1.10(m，2H)，0.94-0.89(m，2H)。MS(EI，m/z)：437.0[M+H]⁺。

實施例30：3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈鹽酸鹽(74)的合成

將含有化合物38(970mg，2.62mmol)和乙酸乙酯(200mL)的混合物加熱到回流并繼續(xù)攪拌20分鐘，得到澄清溶液。然后冷卻到室溫，通入氯化氫氣體約5分鐘，有大量不溶物析出，過濾，收集濾餅，得到白色固體3-溴-5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基苯甲腈鹽酸鹽(74)(794mg)。收率為74.5％。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.12(d，J＝6.9Hz，1H)，8.22(d，J＝2.1Hz，1H)，8.09(d，J＝2.1Hz，1H)，7.99-7.91(m，2H)，7.50-7.45(m，1H)，2.57(q，J＝7.5Hz，2H)，1.23(t，J＝7.5Hz，3H)。MS(EI，m/z)：368.0[M-H]^-。

實施例31：5-(2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-2-羥基-3-碘苯甲腈鹽酸鹽(75)的合成

化合物39為起始原料，化合物75的制備方法參見實施例30。¹H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.11(d，J＝6.9Hz，1H)，8.41(d，J＝1.8Hz，1H)，8.11(d，J＝2.1Hz，1H)，8.02-7.95(m，2H)，7.54-7.49(m，1H)，2.59(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。 MS(EI，m/z)：416.0[M-H]^-。

實施例32:化合物對HEK293轉(zhuǎn)染細胞株中hURAT1轉(zhuǎn)運尿酸的抑制試驗

一、試劑名稱及來源:

苯溴馬隆購自Sigma-Aldrich Co.LLC；質(zhì)粒pCMV6-hURAT1購自O(shè)rigene Technologies,Inc；G418購自生工生物工程股份有限公司；HEK293細胞株購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細胞資源中心；多聚賴氨酸購自Sigma-Aldrich Co.LLC；¹⁴C-尿酸購自美國American Radiolabeled Chemicals,Inc；葡萄糖酸鈉、葡萄糖酸鉀、葡萄糖酸鈣、KH₂PO₄、MgSO₄、葡萄糖和HEPES購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自Thermo Fisher Scientific Inc；

二、試驗方法和結(jié)果:

1.構(gòu)建高表達hURAT1的HEK293穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株：采用質(zhì)粒pCMV6-hURAT1轉(zhuǎn)染進入HEK293細胞內(nèi)，再經(jīng)過G418(終濃度500μg/mL)抗性篩選獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，其高表達hURAT1轉(zhuǎn)運膜蛋白，可用于體外hURAT1轉(zhuǎn)運尿酸的抑制試驗(Weaver YM,Ehresman DJ,Butenhoff JL,et al.Roles of rat renal organic anion transporters in transporting perfluorinated carboxylates with different chain lengths.Toxicological Sciences,2009,113(2):305-314)。

2.包被24孔板：按200μl/孔加入0.1mg/mL多聚賴氨酸，放置過夜。移去多聚賴氨酸，用無菌水清洗并徹底晾干，待用。

3.將HEK293-hURAT1穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞按2×10⁵個/孔接入包被過的24孔板中，在37℃、5％CO₂的條件下培養(yǎng)3天。

4.HBSS的配制：按125mM葡萄糖酸鈉、4.8mM葡萄糖酸鉀、1.3mM葡萄糖酸鈣、1.2mM KH₂PO₄、1.2mM MgSO₄、5.6mM葡萄糖、25mM HEPES的終濃度稱取各試劑，再加入去離子水定容至相應(yīng)體積，并充分混合均勻，即得pH 7.4的HBSS溶液，置冰箱中-20℃保存。

5.實驗當(dāng)天，從冰箱中取出HBSS，水浴加熱至37℃。再取出24孔細胞培養(yǎng)板，用HBSS清洗2遍細胞并吸凈，再按160μl/孔加入HBSS，并按20μl/孔加入終濃度為500nM試驗化合物，做為試驗化合物孔；按180μl/孔加入HBSS但不加試驗化合物，做為空白對照孔。放置室溫下10min。

6.按20μl/孔加入終濃度為50μM的¹⁴C尿酸，放置室溫下20min。

7.吸凈每孔溶液，用預(yù)冷的HBSS清洗細胞并吸凈。最后加入0.2M NaOH溶解細胞，收集細胞碎片并加入適量閃爍液，然后置PerkinElmer MicroBeta Trilux 1450液體閃爍分析儀上檢測同位素¹⁴C尿酸的放射強度(CPM值)。

8.在HEK293轉(zhuǎn)染細胞株中，化合物對hURAT1轉(zhuǎn)運尿酸的抑制率計算公式如下所示，試驗化合物的CPM值以CPM_{(試驗化合物)}表示；空白對照的CPM值以CPM_{(空白對照)}表示。試驗化合物均設(shè)三次重復(fù)，試驗結(jié)果取平均值，并計算標(biāo)準(zhǔn)偏差SD。試驗結(jié)果見表1。

三、試驗結(jié)果

試驗化合物與苯溴馬隆相比較，在濃度為500nM下，化合物4、5、9、11、12、18、19、29、30、33、38、39、41、45、51、52、56、69、74和75對HEK293轉(zhuǎn)染細胞中hURAT1轉(zhuǎn)運尿酸具有十分良好的抑制作用。

表1.試驗化合物和苯溴馬隆對HEK293轉(zhuǎn)染細胞株中hURAT1轉(zhuǎn)運尿酸的抑制率

實施例33:化合物對人正常肝細胞L-02和WRL-68的細胞毒性試驗

已有研究表明苯溴馬隆具有嚴(yán)重的肝臟毒性，因此，本實施例以苯溴馬隆作為陽性對照，測試了本發(fā)明提供的化合物對兩株人正常肝細胞L-02和WRL-68的細胞毒性作用。

一、試驗材料名稱及來源:

人正常肝細胞L-02購自武漢普諾賽生物科技有限公司；人正常肝細胞WRL-68由南京大學(xué)生命科學(xué)院惠贈；苯溴馬隆、Resazurin、亞甲基藍購自Sigma-Aldrich Co.LLC；鐵氰化鉀、亞鐵氰化鉀購自阿拉丁試劑股份有限公司；DMEM培養(yǎng)基、無酚紅DMEM、胎牛血清購自Thermo Fisher Scientific Inc；青霉素、鏈霉素購自碧云天生物技術(shù)有限公司。

二、實驗方法

1.人正常肝細胞L-02和WRL-68用DMEM培養(yǎng)基(含10％胎牛血清，100U/mL青霉素，0.1mg/mL)培養(yǎng)，置37℃、5％CO₂孵箱培養(yǎng)至細胞密度達90％左右。

2.按1×10³/孔細胞數(shù)接種于96孔板中，置37℃、5％CO₂孵箱培養(yǎng)24h。

3.用DMEM培養(yǎng)基配制不同濃度梯度的試驗化合物或?qū)φ账幬锉戒羼R隆，并按100μL/孔加入，做為試驗化合物孔或?qū)φ账幬锟祝话?00μL/孔加入DMEM培養(yǎng)液，做為陰性對照孔。置37℃、5％CO₂孵箱中培養(yǎng)120h。

4.將Resazurin(15mg/50mL,200×)、亞甲基藍(25mg/10mL,1000×)、鐵氰化鉀(0.329g/100mL,100×)和亞鐵氰化鉀(0.422g/100mL,100×)用PBS(0.1M、pH＝7.4)稀釋混合，配制成10×Alamar Blue溶液，再用無酚紅DMEM培養(yǎng)基稀釋成1×Alamar Blue溶液，臨用前配制。

5.L-02和WRL-68細胞分別用PBS(0.1M、pH＝7.4)清洗2次，按100μL/孔加入 Alamar Blue溶液；在無細胞的孔中加入100μL/孔Alamar Blue溶液，做為空白對照孔。將96孔板置37℃、5％CO₂孵箱中培養(yǎng)3h。

6.用酶標(biāo)儀Victor X4(Perkin Elmer)在Ex 530/Em 590nm處檢測細胞熒光值。試驗化合物孔的熒光值以F_{(試驗化合物)}表示；空白對照孔的熒光值以F_{(空白對照)}表示；陰性對照孔的熒光值以F_{(陰性對照)}表示。按以下公式計算不同藥物濃度下的細胞存活率，每個濃度重復(fù)測定3次，得出平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。

7.利用Prism Graph軟件分別計算出試驗化合物對L-02細胞和WRL-68細胞的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

三、實驗結(jié)果

化合物4、5、9、18、33、38、39、45、51、52、56、69、74和75對正常肝細胞L-02和WRL-68的IC₅₀均大于100μM；而苯溴馬隆對于L-02和WRL-68細胞的IC₅₀分別為40.17μM和45.54μM。結(jié)果表明，這些化合物對肝細胞的體外毒性遠低于苯溴馬隆。

實施例34:化合物74促高尿酸血癥小鼠尿酸排泄的試驗研究

一、試驗材料

1.受試藥物

化合物74在臨用前用0.5％CMC-Na研磨配成相應(yīng)濃度的混懸液；苯溴馬隆為原料藥，購自綿陽凱新醫(yī)藥科技有限公司，批號：BXML-201506005，臨用前用0.5％CMC-Na研磨配成相應(yīng)濃度的混懸液。

2.試驗動物

動物：清潔級昆明種小鼠，雄性，25～30g，4～5周齡。由上海斯萊克動物實驗中心提供，許可證號為SCXK(滬)2012-2002，實驗動物質(zhì)量合格證明為2015000522173。

3.試驗試劑

酵母浸出粉購自北京奧博星生物有限公司；腺嘌呤、氧嗪酸鉀購自阿拉丁試劑股份有限公司；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；尿酸檢測試劑盒(磷鎢酸法)購自南京建成生物工程有限公司。

二、試驗方法

1.試劑準(zhǔn)備

稱取適量腺嘌呤和酵母浸出粉，加入一定量的雙蒸水，加熱攪拌，得濃度為0.6g/mL酵母浸出粉和12mg/mL腺嘌呤的造?；旌弦?；在臨用前稱取適量氧嗪酸鉀，加入一定量的0.5％CMC-Na，充分攪拌均勻，得濃度為20mg/mL的氧嗪酸鉀混懸液。

2.試驗分組與給藥方式

取昆明種雄性小鼠24只，隨機分為空白對照組、模型組、苯溴馬隆組和化合物74組，每組6只。禁食2-3小時后，模型組、苯溴馬隆組和化合物74組按10g/kg體重的酵母浸出粉和200mg/kg體重的腺嘌呤灌胃造?；旌弦?0.6g/mL酵母浸出粉和12mg/mL腺嘌呤混合液)；空白對照組灌胃相同體積的生理鹽水。2.5小時后，苯溴馬隆組、化合物74組分別按15mg/kg體重灌胃苯溴馬隆混懸液(1.5mg/mL)、化合物74混懸液(1.5mg/mL)；空白對照組和模型組灌胃相同體積的0.5％CMC-Na，連續(xù)給藥7d。最后一天，按上述給予造模混合劑2小時后，模型組、苯溴馬隆組和化合物74組按250mg/kg體重腹腔注射氧嗪酸鉀混懸液(20mg/ml)；空白對照組腹腔注射相同體積的0.5％CMC-Na。0.5小時后按上述灌胃試驗藥物。

3.樣品收集與分析

尿樣收集：最后一天給藥后將試驗小鼠置代謝籠中，正常飲食，收集24h尿液。取出收集管，計量尿液體積，再于3000rpm離心20min，收集上清，置-20℃保存。尿樣中尿酸水平檢測：采用尿酸試劑盒(磷鎢酸法)檢測樣本中尿酸濃度。

三、試驗結(jié)果

促小鼠尿酸排泄結(jié)果見表2?；衔?4與苯溴馬隆均能顯著地促進高尿酸血癥小鼠的尿酸排泄，且化合物74促尿酸排泄能力顯著高于苯溴馬隆。與高血尿酸模型組相比，化合物74促尿酸排泄量增加約46.77％，而苯溴馬隆促尿酸排泄量增加約25.35％。

表2.化合物74與苯溴馬隆灌胃給藥促小鼠尿酸排泄試驗

與空白對照相比，^##P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；

與苯溴馬隆組相比，^▲P＜0.05。

實施例35:化合物74的大鼠單次給藥急性毒性試驗研究

一、試驗材料

1.受試藥物

化合物74，臨用前以0.5％CMC-Na研磨配成相應(yīng)濃度的混懸液；苯溴馬隆，為原料藥，白色粉末，購自綿陽凱新醫(yī)藥科技有限公司，批號：BXML-201506005，臨用前以0.5％CMC-Na研磨配成相應(yīng)濃度的混懸液。

大鼠急性毒性預(yù)實驗中，化合物74的最高給藥劑量達5.0g/kg時，未出現(xiàn)死亡，因此，化合物74正式試驗的給藥劑量定為5.0g/kg。苯溴馬隆的大鼠急性毒性預(yù)實驗給藥劑量摸索至0.14g/kg時，大鼠未出現(xiàn)死亡。苯溴馬隆正式試驗的給藥劑量定為0.14g/kg。

2.試驗動物及飼養(yǎng)條件

SD大鼠，SPF級，體重：120～180g，5～6周齡。由武漢大學(xué)動物實驗中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(鄂)2014-0004，合格證號：42000500007670。

二、試驗方法與結(jié)果

取SD大鼠30只，隨機分為給藥組A1、B1和空白對照組，每組10只，雌雄各半，禁食6小時后分別按20mL/kg體重的給藥體積單次給藥。給藥組A1、B1和空白對照組分別灌胃給予化合物74混懸液、苯溴馬隆混懸液和0.5％CMC-Na溶液。各組大鼠給藥劑量及死亡率見表3。各給藥組給藥后均未見即時毒性反應(yīng)，24小時后至十四天的觀察期均未見延時毒性反應(yīng)，動物狀態(tài)良好，體重增加，大鼠全部存活，體重變化見表4。化合物74和苯溴馬隆的大鼠急性毒性試驗的最大耐受劑量分別為5.0g/kg和0.14g/kg。

表3.正式試驗中SD大鼠給藥劑量及死亡率

表4.正式試驗各藥物對SD大鼠體重的影響

“增減率”是指第14天與第0天相比，“+”表示體重增加。

實施例36:化合物74的SD大鼠體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)研究

一、試驗材料

1.試驗化合物74溶液的配制

用于灌胃的試驗化合物配制：分別稱取適量化合物74固體粉末，加入約70％的0.5％CMC-Na，渦旋攪拌至混懸液分散均勻，最后定容至相應(yīng)體積。

用于靜脈注射的試驗化合物配制：分別稱取適量化合物74固體粉末，加入一定量的DMSO，渦旋攪拌至溶解，再加入羥丙基-β-環(huán)糊精的水溶液(20％,w/v)，充分混合均勻，并定容至相應(yīng)體積。

2.試驗動物

SD大鼠，雄性，SPF級。購自Sino-British SIPPR/BK Lab Animal Ltd.,(上海)。

二、試驗方法

1.給藥劑量及方式

試驗動物在灌胃給藥前禁食過夜(10～14小時)。給藥4小時后再給予食物，期間自 由飲水。具體給藥劑量及方式見下表5。

表5.化合物對SD大鼠的給藥劑量和方式

2.操作

分別于給藥前和給藥后(5分鐘、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時和24小時)，采集SD大鼠頸靜脈血樣(250μL/樣本)，并置于含有抗凝劑肝素鈉的離心管中，2-8℃，8000rpm離心6分鐘分離血漿。取50μL血漿樣本，加入250μL IS溶液(200ng/mL甲苯磺丁脲)中。渦旋1分鐘后，以15000rpm離心5分鐘，取200μL置96孔板中進行LC/MS/MS分析，檢測血漿樣本中化合物74的含量。對化合物74分析方法的線性范圍為1.0-1000ng/mL，定量下限為1.0ng/mL。

3.藥物代謝動力學(xué)分析

非房室模型相關(guān)參數(shù)由Professional 5.2軟件計算獲得。

生物利用度F％＝(Dose_(IV)×AUC_(0-t)(PO))/(Dose_(PO)×AUC_(0-t)(IV))×100％

三、試驗結(jié)果

依據(jù)上述方法獲得的化合物74的SD大鼠藥物代謝動力學(xué)參數(shù)如表6所示。本發(fā)明化合物74的藥物代謝動力學(xué)相關(guān)參數(shù)優(yōu)秀，生物利用度高。

表6.口服或靜脈注射給予化合物74的SD大鼠藥物代謝動力學(xué)參數(shù)

*:由AUC_(0-t)計算獲得 。