本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及蘭索拉唑的新用途，具體涉及蘭索拉唑的藥物組合物及其醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：

蘭索拉唑?qū)儆谫|(zhì)子泵抑制劑。本藥分布于胃粘膜壁細(xì)胞的酸性環(huán)境后，轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘拇x物。這種代謝物與存在于酸生成部位的H+，K+-ATP酶的巰基結(jié)合，通過抑制H+，K+-ATP酶的活性而抑制酸分泌。適應(yīng)癥為胃潰瘍、十二指腸潰瘍、反流性食管炎。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種蘭索拉唑的藥物組合物，該藥物組合物中含有蘭索拉唑和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，蘭索拉唑和該天然產(chǎn)物可協(xié)同治療免疫性血小板減少性紫癜。

本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，

一種蘭索拉唑的藥物組合物，包括蘭索拉唑、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。

進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。

進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。

上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將胡黃連粉碎，用75～85％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用25％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～16個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)用80％乙醇熱回流提取，合并提取液。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。

進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。

上述化合物(Ⅰ)在制備治療免疫性血小板減少性紫癜的藥物中的應(yīng)用。

上述蘭索拉唑的藥物組合物在制備治療免疫性血小板減少性紫癜的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供的蘭索拉唑的藥物組合物中含有蘭索拉唑和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，蘭索拉唑、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)免疫性血小板減少性紫癜具有治療作用；蘭索拉唑和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)免疫性血小板減少性紫癜的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療免疫性血小板減少性紫癜的藥物。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。

實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證

分離方法：(a)將胡黃連(2kg)粉碎，用80％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用25％乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1(10個(gè)柱體積)、45:1(8個(gè)柱體積)、25:1(10個(gè)柱體積)和15:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(10個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和1:1(6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72％的甲醇水溶液等度洗脫，收集10～16個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。

結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+Na]⁺為m/z 285.1201，結(jié)合核磁特征可得分子式為C₁₅H₁₈O₄，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δ_H(ppm，CD₃OD，500MHz)：H-1α(2.14，m)，H-1β(1.52，m)，H-2α(1.93，m)，H-2β(2.12，m)，H-5(2.43，m)，H-6α(2.41，m)，H-6β(2.51，m)，H-9α(2.24，d，J＝13.4Hz)，H-9β(1.52，d，J＝13.4Hz)，H-13(1.82，s)，H-14(1.02，s)，H-15a(5.45，s)，H-15b(5.32，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ_C(ppm，CD₃OD，125MHz)：36.9(CH₂，1-C)，33.2(CH₂，2-C)，198.4(C，3-C)，145.2(C，4-C)，46.9(CH，5-C)，25.2(CH₂，6-C)，162.7(C，7-C)，105.1(C，8-C)，52.3(CH₂，9-C)，37.2(C，10-C)，122.1(C，11-C)，172.9(C，12-C)，8.2(CH₃，13-C)，16.3(CH₃，14-C)，113.1(CH₂，15-C)。紅外光譜表明該化合物含有羥基(3582cm^-1)和內(nèi)酯羰基(1736cm^-1)結(jié)構(gòu)。氫譜和碳譜顯示該化合物含有一個(gè)α,β-不飽和γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)[δ_C162.7(C-7)，105.1(C-8)，122.1(C-11)，172.9(C-12)]，一個(gè)半縮醛碳[δ_C105.1(C-8)]，一個(gè)乙烯基甲基[δ_H1.82(3H，s，H-13)；δ_C8.2(C-13)]，一個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)[δ_H1.02(3H，s，H-14)；δ_C16.3(C-14)]以及一個(gè)環(huán)外亞甲基質(zhì)子信號(hào)[δ_H5.45(1H，s，H-15a)和5.32(1H，s，H-15b)；δ_C113.1(C-15)和145.2(C-4)]。結(jié)合核磁數(shù)據(jù)信息以及高分辨質(zhì)譜信息可以看出這個(gè)化合物是典型的桉烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，該化合物和已知化合物ent-3-hydroxyatractylenolide III具有相似的結(jié)構(gòu)，通過和該化合物進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，新化合物中多了一個(gè)酮羰基碳信號(hào)。對(duì)該化合物的HMBC譜的解析中發(fā)現(xiàn)，H-1/C-3，H-2/C-3，H-5/C-3的相關(guān)性說明在新化合物中多出來的酮羰基是位于C-3位的。ROESY譜中，Me-14/H-6α，H-6β/Me-13之間的相關(guān)性說明該化合物的8-OΗ是α型的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。

該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：

實(shí)施例2：藥理作用

本實(shí)施例使用通過獲取BALB/C小鼠血小板抗體，接種到豚鼠身上，獲取豚鼠抗小鼠血小板抗體(APS)，將APS腹腔注射BALB/C小鼠建立免疫性血小板減少性紫癜動(dòng)物模型，觀察藥物使血小板計(jì)數(shù)上升、脾臟系數(shù)減少、骨髓成熟巨核細(xì)胞增多等方面的抗免疫性血小板減少性紫癜作用。

1、材料與方法

1.1動(dòng)物

BALB/C小鼠，體重18～23g，雌雄各半，SPF級(jí)，購自廣東省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；豚鼠，雌性，體重350g，普通級(jí)，購自廣東省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2試劑與樣品

蘭索拉唑購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。弗氏不完全佐劑(北京鼎囯生物技術(shù)有限公司，DH-1341-1)，EDTA-Na2(天津巴斯夫化工有限公司，分析純)，烏來糖(廣東光華科技股份有限公司，分析純)，草酸氨(廣東光華科技股份有限公司，分析純)，潑尼松(西北第二合成制藥廠，藥用規(guī)格)，瑞士染色試劑(北京博潤(rùn)萊特科技有限公司)。

1.3儀器

全自動(dòng)血液分析儀(法囯，ABXPENTRA60)，電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司，BSA1245)，恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司，HA-4)，離心沉淀機(jī)(上海亞榮生化儀器廠，80-2)，電熱恒溫干燥箱(廣州市康恒儀器有限公司，101-A)，顯微鏡(尼康儀器有限公司，Nikoneclipsee100)。

1.4豚鼠抗血小板抗血清的制備

取健康的BALB/C小鼠摘眼球取血，靜置半個(gè)小時(shí)，8000rpm/min離心10min，取上層血清1500rpm/min離心15min，取上層血清900rpm/min離心10min，取上層血清3000rpm/min離心10min，棄去血清，得底部沉淀血小板，加入1％草酸氨1mL，靜置5min，3000rpm/min離心10min，棄去上層液體，底部血小板用生理鹽水洗滌三次，用生理鹽水稀釋到濃度為1～2×10⁹/L，分別與弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑按1：1混合成弗氏完全佐劑血小板抗原混合物與不弗氏完全佐劑血小板抗原混合物，備用；取健康豚鼠10只，于第1周注射弗氏完全佐劑血小板抗原混合物于其四肢、腹股抅、背部、皮下，每處注射100μL，于第2、3、4周注射同劑量的不弗氏完全佐劑血小板抗原混合物。第4周末用20％烏拉坦2mL腹腔視射麻醉豚鼠，心臟取血，1500rpm/min離心10min，取上層血清，余下全血繼續(xù)3000rpm/min離心10min，合并兩次所得血清，得豚鼠抗小鼠血小板血清APS，-20℃保存，備用。自制直徑9cm瓊脂糖平板，用打孔器打成梅花形孔，中間孔滴加血小板懸液(500×10⁹/L)，周圍孔加1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64不同效價(jià)的豚鼠抗小鼠血小板血清。37℃溫箱孵育24h，觀察沉淀弧，檢測(cè)抗血清效價(jià)。

1.5小鼠分組及模型制備

小鼠隨機(jī)分為6組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(強(qiáng)的松龍組，2.25mg·kg^-1)和蘭索拉唑組(120mg·kg^-1)、化合物(Ⅰ)組(120mg·kg^-1)、蘭索拉唑與化合物(Ⅰ)組合物組【60mg·kg^-1蘭索拉唑+60mg·kg^-1化合物(Ⅰ)】。取出-20℃保存的APS，56℃水浴30min滅活補(bǔ)體，用生理鹽水稀釋到1：4的效價(jià)，小鼠進(jìn)行腹腔注射。于0、2、4、6、8、10d按照100μg/20g小鼠腹腔注入稀釋的抗血清，每2d重復(fù)注射一次，以維持血小板的持續(xù)降低。從第1次注射APS后，給藥組按上述相應(yīng)劑量腹腔注射給藥，正常對(duì)照組與模型對(duì)照組注射生理鹽水。

1.6血小板計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

第10天給藥后2h，摘眼球取血，檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)。

1.7脾臟系數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)

解剖取出肝臟，稱重，計(jì)算脾臟系數(shù)。

1.8巨核細(xì)胞的分類數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)

剝離股骨，取出骨髓涂片，瑞士染色法染色，計(jì)算巨核細(xì)胞的分類數(shù)

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1對(duì)免疫性血小板減少性紫癜模型小鼠血小板計(jì)數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠血小板計(jì)數(shù)明顯降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組血小板計(jì)數(shù)顯著升高(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑組、化合物(Ⅰ)組小鼠血小板計(jì)數(shù)升高(P＜0.05)。結(jié)果見表1。

2.2對(duì)免疫性血小板減少性紫癜模型小鼠脾臟系數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比，模型對(duì)照組小鼠的脾臟系數(shù)明顯升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組小鼠脾臟系數(shù)顯著降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑組、化合物(Ⅰ)組小鼠脾臟系數(shù)顯著降低(P＜0.05)。

試驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.3對(duì)免疫性血小板減少性紫癜模型小鼠巨噬細(xì)胞的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的成熟巨噬細(xì)胞數(shù)明顯下降(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組小鼠的成熟巨噬細(xì)胞數(shù)顯著升高(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，蘭索拉唑組、化合物(Ⅰ)組小鼠的成熟巨噬細(xì)胞數(shù)升高(P＜0.05)。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1對(duì)免疫性血小板減少性紫癜模型小鼠血小板、脾臟系數(shù)及巨噬細(xì)胞的影響

紫癜是臨床上常見的出血癥狀之一，是由于患者體內(nèi)存在抗血小板抗體。目前囯內(nèi)外對(duì)于紫癜的治療主要一線藥物是激素類藥物如強(qiáng)的松、可的松、潑尼松龍等，或是靜脈注射人免疫球蛋白和脾臟切除等。從藥理學(xué)角度看，使用激素進(jìn)行治療主要通過抑制對(duì)血小板的吞噬、抑制血小板抗體的生成。脾臟等免疫器官是產(chǎn)生血小板抗體的主要場(chǎng)所，通過產(chǎn)生血小板抗體破壞吞噬血小板，繼而激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，經(jīng)過經(jīng)典、非經(jīng)典膝血管外破壞血小板，導(dǎo)致皮下出血現(xiàn)象。但據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)，使用激素類藥物治療有復(fù)發(fā)率高，副作用多，療程長(zhǎng)等缺點(diǎn)，患者需長(zhǎng)期服藥治療。據(jù)統(tǒng)計(jì)，只有10～20％患者停藥后沒有復(fù)發(fā)現(xiàn)象。使用脾臟切除治療，對(duì)于難治性紫癜通是沒有效果的，對(duì)于體質(zhì)弱的患者，特別是高齡患者難以長(zhǎng)期大劑量接受激素類藥物的沖擊治療。

上述結(jié)果表明，蘭索拉唑、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)免疫性血小板減少性紫癜具有治療作用；蘭索拉唑和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)免疫性血小板減少性紫癜的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療免疫性血小板減少性紫癜的藥物。

上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。