技術(shù)特征：

1.一種建立乳糖酶工程菌資源庫的特異引物組，其特征在于，所述特異引物組包含兩對特異引物，分別為GH2家族特異引物和GH42家族特異引物，GH2家族特異引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；GH42家族特異引物的上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一種乳糖酶工程菌資源庫的建立方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將Kefir粒放入滅菌后的脫脂牛奶中，在20～30℃的條件下培養(yǎng)60～84h，然后離心，收集菌體，用PBS緩沖液重懸菌體，離心取沉淀，然后用濃度為45～55mmol/L、pH7.5～8.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液進行第二次重懸，離心取沉淀，然后用含有濃度為45～55mmol/L的三羥甲基氨基甲烷(Tris)和18～22mmol/L EDTA、pH7.5～8.5的混合溶液進行第三次菌體重懸，制得菌懸液；然后提取DNA，制得基因組DNA；

(2)以步驟(1)制得的基因組DNA為模板，分別用權(quán)利要求1所述的GH2家族特異引物和GH42家族特異引物進行PCR擴增，制得擴增產(chǎn)物lacgh2和lacgh42；

(3)將步驟(2)制得的擴增產(chǎn)物lacgh2和lacgh42經(jīng)BamH I和Xhol I雙酶切后，與同樣經(jīng)BamH I和Xhol I雙酶切的質(zhì)粒表達載體pET30a連接，制得重組表達載體，然后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，篩選轉(zhuǎn)化成功的菌群，制得乳糖酶工程菌資源庫。

3.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(1)中，提取DNA的步驟如下：

向菌懸液中按0.8～1.2mg/mL的比例加入溶菌酶，按0.08～0.12mg/mL的比例加入蛋白酶K以及按質(zhì)量百分比濃度0.8～1.2％的比例加入十二烷基硫酸鈉(SDS)，35～38℃保溫25～40min裂解細胞；然后8000～12000rpm離心8～15min，收集上清液，按體積比25:24的比例加入苯酚/氯仿溶液，離心去除沉淀，上清液中加入8～10倍體積無水乙醇，取沉淀，用體積濃度為70％的乙醇沖洗后，即得。

4.如權(quán)利要去3所述的建立方法，其特征在于，所述苯酚/氯仿溶液為苯酚與氯仿按體積比1:1的比例混合的混合液。

5.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(2)中，PCR擴增體系如下，總體系50μl:

PCR擴增程序如下：

94℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸2min，35個循環(huán)；72℃終延伸10min。

6.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(3)中，雙酶切體系如下，總體系20μl:

7.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(3)中，大腸桿菌為大腸桿菌E.coli BL21。

8.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(3)中，轉(zhuǎn)化條件為：

將感受態(tài)細胞與重組表達載體混合后，置于冰上25～35min；然后迅速放入40～45℃水浴鍋內(nèi)1～2min，進行熱擊轉(zhuǎn)化后置于冰上1.5～2.5min；加入2倍體積以上的LB液體培養(yǎng)基，放到搖床上35～38℃振蕩培養(yǎng)40～50min。

9.如權(quán)利要去2所述的建立方法，其特征在于，所述步驟(3)中，篩選步驟如下：

將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌E.coli BL21涂布于含有50μg/mL的卡那霉素的LB固體培養(yǎng)基中，35～38℃培養(yǎng)12～14h，選取白色光滑菌落，即得。

10.權(quán)利要求2構(gòu)建的乳糖酶工程菌資源庫在篩選特異乳糖酶中的應(yīng)用。