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      對(duì)HLA?A2呈遞的WT1肽特異的T細(xì)胞受體樣抗體的制作方法

      文檔序號(hào):11095898閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,包含以下之一:

      (A)(i)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:2、3和4的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:8、9和10的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (ii)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:20、21和22的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:26、27和28的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (iii)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:38、39和40的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:44、45和46的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (iv)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:56、57和58的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:62、63和64的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (v)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:74、75和76的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:80、81和82的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;或

      (vi)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:92、93和94的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:98、99和100的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;或

      (B)分別包含選自SEQ ID NOS:14和16;32和34;50和52;68和70;86和88;以及104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL;或

      (C)選自SEQ ID NOS:18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。

      2.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,包含:

      (A)重鏈(HC)可變區(qū),其包含分別含有選自SEQ ID NOS:(i)2、3、和4;(ii)20、21和22;(iii)38、39和40;(iv)56、57和58;(v)74、75和76;和(vi)92、93和94的氨基酸序列HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3;和

      (B)輕鏈(LC)可變區(qū),其包含分別含有選自SEQ ID NOS:(i)8、9和10;(ii)26、27和28;(iii)44、45和46;(iv)62、63和64;(v)80、81和82;和(vi)98、99和100的氨基酸序列LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

      3.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,包含分別含有選自SEQ ID NOS:(i)14和16;(ii)32和34;(iii)50和52;(iv)68和70;(v)86和88;和(vi)104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL。

      4.分離的抗體或其抗原結(jié)合片段,包含選自SEQ ID NOS:18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。

      5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體,其中抗體包含人可變區(qū)構(gòu)架區(qū)。

      6.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體,其中抗體是完全的人抗體。

      7.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體,其中所述抗體與結(jié)合于HLA-A2的WT1肽特異性結(jié)合。

      8.權(quán)利要求7所述的抗體,其中所述WT1肽具有氨基酸序列RMFPNAPYL。

      9.權(quán)利要求7所述的抗體,其中所述HLA-A2是HLA-A0201。

      10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的抗體,其中所述抗體的抗原結(jié)合片段是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或單鏈Fv(scFv)。

      11.與治療劑綴合的權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的抗體。

      12.權(quán)利要求11所述的抗體,其中所述治療劑是藥物、毒素、放射性同位素、蛋白質(zhì)或肽。

      13.分離的核酸,其編碼權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體。

      14.分離的核酸,其包含:

      (A)(i)選自SEQ ID NOS:5、6和7;23、24和25;41、42和43;58、59和60;77、78和79;以及95、96和97的第一、第二和第三核苷酸序列;和

      (ii)選自SEQ ID NOS:11、12和13;29、30和31;47、48和49;65、66和67;83、84和85;以及101、102和103的第四、第五和第六核苷酸序列;或

      (B)選自SEQ ID NOS:15和17;33和35;51和53;69和71;87和89;以及105和107的第一和第二核苷酸序列;或

      (C)選自SEQ ID NOS:19、37、55、73、91和109的核苷酸序列。

      15.分離的核酸,其包含:

      (A)選自SEQ ID NOS:(i)5、6和7;(ii)23、24和25;(iii)41、42和43;(iv)58、59和60;(v)77、78和79;和(vi)95、96和97的第一、第二和第三核苷酸序列;和

      (B)選自SEQ ID NOS:(vii)11、12和13;(viii)29、30和31;(ix)47、48和49;(x)65、66和67;(xi)83、84和85;和(xii)101、102和103的第四、第五和第六核苷酸序列。

      16.權(quán)利要求15所述的核酸,其中所述第一、第二和第三核苷酸序列分別編碼抗體的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,并且所述第四、第五和第六核苷酸序列分別編碼所述抗體的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。

      17.分離的核酸,分別包含選自SEQ ID NOS:(i)15和17;(ii)33和35;(iii)51和53;(iv)69和71;(v)87和89;以及(vi)105和107的第一和第二核苷酸序列。

      18.權(quán)利要求17所述的核酸,其中所述第一核苷酸序列編碼抗體的VH,并且所述第二核苷酸序列編碼抗體的VL

      19.分離的核酸,其包含選自SEQ ID NOS:19、37、55、73、91和109的核苷酸序列。

      20.權(quán)利要求19所述的核酸,其中所述核酸編碼scFv。

      21.載體,其包含權(quán)利要求13至20中任一項(xiàng)所述的核酸。

      22.細(xì)胞,其包含權(quán)利要求13至20中任一項(xiàng)所述的核酸。

      23.權(quán)利要求22所述的細(xì)胞,其中所述細(xì)胞在其表面上表達(dá)權(quán)利要求1至4所述的抗體。

      24.一種用于檢測完整細(xì)胞或組織中WT1的方法,所述方法包括:

      (A)使細(xì)胞或組織與結(jié)合于HLA-A2的WT1肽特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段接觸,其中所述抗體包含可檢測標(biāo)記物;

      (B)通過測量與所述細(xì)胞或組織結(jié)合的可檢測標(biāo)記物的量,確定與所述細(xì)胞或組織結(jié)合的抗體的量,其中結(jié)合的抗體的量表示所述細(xì)胞或組織中WT1的量。

      25.權(quán)利要求24所述的方法,其中抗體與結(jié)合于HLA-A2的具有氨基酸序列RMFPNAPYL(SEQ ID NO:1)的WT1肽特異性結(jié)合。

      26.權(quán)利要求25所述的方法,其中WT1肽結(jié)合于HLA-A0201。

      27.權(quán)利要求24所述的方法,其中抗體是包含以下之一的分離抗體或其抗原結(jié)合片段:

      (A)(i)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:2、3和4的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:8、9和10的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (ii)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:20、21和22的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:26、27和28的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (iii)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:38、39和40的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:44、45和46的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (iv)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:56、57和58的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:62、63和64的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;

      (v)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:74、75和76的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:80、81和82的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;或

      (vi)重鏈(HC)可變區(qū)和輕鏈(LC)可變區(qū),所述重鏈(HC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:92、93和94的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3,所述輕鏈(LC)可變區(qū)包含分別含有氨基酸序列SEQ ID NOS:98、99和100的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3;或

      (B)分別包含選自SEQ ID NOS:14和16;32和34;50和52;68和70;86和88;以及104和106的第一和第二氨基酸序列的VH和VL;或

      (C)選自SEQ ID NOS:18、36、54、72、90和108的氨基酸序列。

      28.試劑盒,其包含權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體。

      29.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體的用途,用于治療WT1陽性疾病。

      30.藥物組合物,其包含權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體和可藥用載體。

      31.用于治療患有WT1陽性疾病的受試者的方法,所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。

      32.權(quán)利要求31所述的方法,其中WT1陽性疾病是慢性白血病或急性白血病或WT1+癌癥。

      33.權(quán)利要求31所述的方法,其中WT1陽性疾病選自慢性髓細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤(MM)、急性淋巴母細(xì)胞白血病(ALL)、急性髓樣/骨髓性白血病(AML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、間皮瘤、卵巢癌、胃腸道癌、乳腺癌、前列腺癌和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。

      34.權(quán)利要求34所述的方法,其中所述抗體是具有與之連接的細(xì)胞毒部分的綴合物。

      35.用于治療患有WT1陽性疾病的受試者的方法,包括向所述受試者施用治療有效量的權(quán)利要求13至20中任一項(xiàng)所述的核酸。

      36.權(quán)利要求35所述的方法,其中WT1陽性疾病是慢性白血病、急性白血病或WT+癌癥。

      37.權(quán)利要求35所述的方法,其中WT1陽性疾病選自慢性髓細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、急性淋巴母細(xì)胞白血病(ALL)、急性髓樣/骨髓性白血病(AML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、間皮瘤、卵巢癌、胃腸道癌、乳腺癌、前列腺癌和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。

      38.權(quán)利要求13至20中任一項(xiàng)所述的核酸的用途,用于治療WT1陽性疾病。

      39.藥物組合物,包含權(quán)利要求13至20中任一項(xiàng)所述的核酸。

      40.用于殺死WT1+細(xì)胞的方法,所述方法包括:

      將細(xì)胞與結(jié)合于HLA-A2的WT1肽特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段接觸。

      41.權(quán)利要求40所述的方法,其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有與之連接的細(xì)胞毒部分。

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