本申請是申請日為2011年05月04日、中國申請?zhí)枮?01180022404.5、發(fā)明名稱為“結(jié)合csf1r的抗體”的發(fā)明申請的分案申請。

本申請要求2010年5月4日提交的美國臨時申請no.61/331,177的權(quán)益，所述美國臨時申請在此以引用的方式全部并入本文以用于任何目的。

提供了結(jié)合csf1r的抗體。還提供了能夠形成結(jié)合csf1r的抗體的抗體重鏈和輕鏈。此外，提供了包含一個或多個特定的互補決定區(qū)(cdr)的抗體、重鏈和輕鏈。提供了編碼針對csf1r的抗體的多核苷酸。還提供了編碼抗體重鏈或輕鏈的多核苷酸。提供了使用針對csf1r的抗體的治療方法。這些方法包括但不限于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)缺失和多發(fā)性硬化癥的方法。

背景

集落刺激因子1受體(本文中稱為csf1r；本領(lǐng)域還稱為fms、fim2、c-fms和cd115)是一種帶有n端胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)和具有酪氨酸激酶活性的c端胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的單程跨膜受體。csf1或白細胞介素34配體(本文中稱為il34；lin等,science320:807-11(2008))與csf1r的配體結(jié)合導致受體二聚化、csf1r蛋白酪氨酸激酶活性上調(diào)、csf1r酪氨酸殘基磷酸化和下游信號傳導事件。csf1和il34兩者都刺激單核細胞存活、增殖以及分化成巨噬細胞。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多腫瘤細胞分泌csf1，csf1通過csf1r活化單核細胞/巨噬細胞。已經(jīng)證明腫瘤內(nèi)的csf1水平與腫瘤內(nèi)的腫瘤相關(guān)性巨噬細胞(tam)水平有關(guān)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)高水平的tam與較差的患者預(yù)后有關(guān)。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，例如在小鼠的人乳癌異種移植物中，csf1促進腫瘤生長和發(fā)展成轉(zhuǎn)移。參見，例如paulus等,cancerres.66:4349-56(2006)。此外，csf1r似乎在骨轉(zhuǎn)移(bonemetastasis)的溶骨性骨破壞(osteolyticbonedestruction)中作為抑制該破壞的受體酪氨酸激酶活性小分子抑制劑發(fā)揮作用。參見，例如ohno等,mol.cancerther.5:2634-43(2006)。

還發(fā)現(xiàn)csf1和其受體涉及各種炎癥性和自體免疫性疾病。參見，例如hamilton,nat.rev.8:533-44(2008)。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)來自患有類風濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)的滑膜內(nèi)皮細胞產(chǎn)生csf1，表明csf1和其受體在該疾病中具有作用。用抗體阻斷csf1r活性在關(guān)節(jié)炎小鼠模型中產(chǎn)生積極的臨床效果，包含骨和軟骨的破壞減少以及巨噬細胞數(shù)減少。參見，例如kitaura等,j.clin.invest.115:3418-3427(2005)。

成熟分化的骨髓系細胞如巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和破骨細胞促進各種疾病(如類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥和骨質(zhì)缺失疾病)的病理學。分化的骨髓系細胞來源于周邊血液單核細胞中間體。csf1r刺激促進單核細胞從骨髓前體的發(fā)育，促進單核細胞增殖和存活以及促進周邊血液單核細胞分化成分化的骨髓系細胞如巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和破骨細胞。因此，csf1r刺激促進分化的骨髓系細胞的增殖、存活、活化和成熟，且在病理學環(huán)境中，csf1r刺激促進分化的骨髓系細胞介導疾病病理學的能力。

csf1r信號傳導的其它拮抗劑因此將可用于治療各種csf1r相關(guān)性疾病，如癌癥、炎癥性病狀和自體免疫性疾病。

概述

本發(fā)明人發(fā)明了一組針對人csf1r胞外結(jié)構(gòu)域(csf1recd)的新抗體(包括人源化抗體)。fab噬菌體展示庫由經(jīng)過人csf1recd-fc融合蛋白免疫的小鼠脾臟制的。通過淘選該庫分離出表達與csf-1recd-fc結(jié)合的fab的1056個噬菌體克隆。當1056個fab被表達為純化的蛋白質(zhì)時，發(fā)現(xiàn)668個與csf1recd結(jié)合。在所述668個結(jié)合fab中，只有121個fab阻斷csf1和/或il34與csf1r的結(jié)合。這些fab中只有33個同時阻斷csf1和il34與csf1r的結(jié)合。通過測序，所述33個fab代表19組獨特的序列。選擇對人csf1recd具有低于納摩爾濃度親和力的11個fab來制備嵌合抗體用于進一步研究。基于人和食蟹猴csf1r結(jié)合親和力、對csf1和il34與csf1r結(jié)合的阻斷以及對配體誘導的csf1r磷酸化的抑制，選擇三個嵌合抗體用于人源化，并且基于這三個嵌合抗體制備了十六個人源化抗體。

十六個人源化抗體中的十四個對人csf1recd保持低于納摩爾濃度的結(jié)合親和力。參見，例如表5。這些人源化抗體同時阻斷配體csf1和il34與人csf1r的結(jié)合，并且許多還同時阻斷csf1和il34與食蟹猴csf1r的結(jié)合。參見，例如表4。

對于治療性藥物開發(fā)，與人和食蟹猴抗原兩者的結(jié)合具有相似的親和力的抗體是有利的。選擇所述三個嵌合抗體選用于人源化部分是因為它們對人和食蟹猴csf1recd具有相似的結(jié)合親和力。然而，人源化之后，嵌合抗體之一(0302)的大部分人源化型式失去了對食蟹猴csf1recd的顯著結(jié)合親和力，不過它們保持對人csf1recd的強結(jié)合親和力。參見，例如表3。0301和0311的人源化型式對人和食蟹猴csf1recd都保持相似的強結(jié)合，其中對兩個物種的結(jié)合親和力差異小于約2倍。

基于csf1r結(jié)合親和力、配體抑制和免疫原性潛力，選擇三個人源化抗體用于其它研究。所述三個人源化抗體是來源于人源化之后未顯著喪失食蟹猴csf1r結(jié)合親和力的兩個嵌合抗體。這三個人源化抗體抑制人csf1r的配體誘導的磷酸化，并且還阻斷原代人單核細胞中的配體誘導的增殖和存活反應(yīng)。參見，例如表6和7，以及圖10和11。因此，這些抗體可用于治療涉及例如原代人單核細胞中的配體誘導的增殖和存活反應(yīng)的疾病。

用抗csf1r抗體阻斷csf1r誘導的反應(yīng)應(yīng)該抑制分化的骨髓系細胞的增殖、存活、活化、成熟，并且減弱其介導疾病病理學的能力。此外，用抗csf1r抗體阻斷csf1r誘導的反應(yīng)應(yīng)該抑制周邊血液單核細胞中間體分化成分化的骨髓系細胞，降低介導病理學的分化的骨髓系細胞的數(shù)目。

因此，本文中描述的人源化抗csf1r抗體可用于通過抑制分化的骨髓系細胞介導疾病病理學的能力來治療具有顯著癥狀的慢性疾病。所述人源化抗體還可用于通過在疾病的緩解階段期間抑制從周邊血液單核細胞分化而來的新病理學介導性骨髓系細胞的發(fā)育，由此降低病理學介導性細胞的數(shù)目和其新的形成，從而治療性質(zhì)上為復(fù)發(fā)和緩解型的慢性疾病。

在一些實施方案中，提供包含重鏈和輕鏈的分離的抗體，其中所述抗體與csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，所述重鏈和/或輕鏈具有以下結(jié)構(gòu)。

在一些實施方案中，重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些實施方案中，輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。在一些實施方案中，重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列，并且輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列。

在一些實施方案中，hccdr1、hccdr2和hccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:15、16和17；(b)seqidno:21、22和23；以及(c)seqidno:27、28和29。在一些實施方案中，lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

在一些實施方案中，重鏈包含hccdr1、hccdr2和hccdr3，其中所述hccdr1、hccdr2和hccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:15、16和17；(b)seqidno:21、22和23；以及(c)seqidno:27、28和29；并且輕鏈包含lccdr1、lccdr2和lccdr3，其中所述lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

在一些實施方案中，提供分離的抗體，其中所述抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含與seqidno:9具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:10具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(b)包含與seqidno:11具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:12具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(c)包含與seqidno:13具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:14具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(d)包含與seqidno:39具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(e)包含與seqidno:40具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(f)包含與seqidno:41具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(g)包含與seqidno:39具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(h)包含與seqidno:40具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(i)包含與seqidno:41具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；以及(j)包含與seqidno:42具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(k)包含與seqidno:42具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(l)包含與seqidno:42具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(m)包含與seqidno:43具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(n)包含與seqidno:43具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(o)包含與seqidno:43具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(p)包含與seqidno:44具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(q)包含與seqidno:44具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；(r)包含與seqidno:45具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈；或(s)包含與seqidno:45具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少95％、至少97％、至少99％或100％同一性的序列的輕鏈。

在一些實施方案中，提供分離的抗體，其中所述抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含具有seqidno:15的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:16的序列的hccdr2和具有seqidno:17的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:18的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:19的序列的lccdr2和具有seqidno:20的序列的lccdr3的輕鏈；(b)包含具有seqidno:21的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:22的序列的hccdr2和具有seqidno:23的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:24的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:25的序列的lccdr2和具有seqidno:26的序列的lccdr3的輕鏈；或(c)包含具有seqidno:27的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:28的序列的hccdr2和具有seqidno:29的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:30的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:31的序列的lccdr2和具有seqidno:32的序列的lccdr3的輕鏈。

在一些實施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)包含seqidno:53的序列的重鏈和包含seqidno:60的序列的輕鏈；(b)包含seqidno:53的序列的重鏈和包含seqidno:61的序列的輕鏈；或(c)包含seqidno:58的序列的重鏈和包含seqidno:65的序列的輕鏈。在一些實施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：(a)由seqidno:53的序列組成的重鏈和由seqidno:60的序列組成的輕鏈；(b)由seqidno:53的序列組成的重鏈和由seqidno:61的序列組成的輕鏈；或(c)由seqidno:58的序列組成的重鏈和由seqidno:65的序列組成的輕鏈。

在一些實施方案中，抗體是人源化抗體。在一些實施方案中，抗體選自fab、fv、scfv、fab’和(fab’)2。在一些實施方案中，抗體是嵌合抗體。在一些實施方案中，抗體選自iga、igg和igd。在一些實施方案中，抗體是igg。在一些實施方案中，抗體是igg4。在一些實施方案中，抗體是在至少一個igg4重鏈恒定區(qū)中包含s241p突變的igg4。

在一些實施方案中，抗體與人csf1r結(jié)合和/或與食蟹猴csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，抗體阻斷配體與csf1r的結(jié)合。在一些實施方案中，抗體阻斷csf1和/或il34與csf1r的結(jié)合。在一些實施方案中，抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化。在一些實施方案中，抗體抑制csf1和/或il34誘導的csf1r磷酸化。在一些實施方案中，抗體與人csf1r結(jié)合的親和力(kd)小于1nm。在一些實施方案中，抗體抑制在csf1或il34存在下的單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)。

在一些實施方案中，提供包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。

在一些實施方案中，提供分離的核酸，其中所述分離的核酸包含編碼上述重鏈的多核苷酸序列。在一些實施方案中，分離的核酸編碼上述輕鏈。在一些實施方案中，分離的核酸編碼上述重鏈和上述輕鏈。在一些實施方案中，提供組合物，其中所述組合物包含含有編碼上述重鏈的多核苷酸序列的第一核酸，以及含有編碼上述輕鏈的多核苷酸序列的第二核酸。在一些實施方案中，提供包含上述核酸或組合物的宿主細胞。在一些實施方案中，宿主細胞是真核宿主細胞。在一些實施方案中，宿主細胞是哺乳動物宿主細胞。在一些實施方案中，宿主細胞選自cho細胞、293細胞、nso細胞和per.c6細胞。在一些實施方案中，宿主細胞是293-6e細胞或dg44細胞。

在一些實施方案中，提供治療疾病的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，提供治療多發(fā)性硬化癥的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，提供治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，提供治療溶骨性骨質(zhì)缺失(osteolyticboneloss)的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，所述溶骨性骨質(zhì)缺失選自骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失和類風濕性關(guān)節(jié)炎誘導的骨質(zhì)缺失。在一些實施方案中，提供治療癌癥的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。在一些實施方案中，所述癌癥選自乳癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、鱗狀細胞癌、葡萄膜黑色素瘤、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、腦癌、胰腺癌、頭頸癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金病(hodgkin’sdisease)、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、星形細胞瘤、胃癌和肺腺癌。

在一些實施方案中，提供治療炎癥性病狀的方法，所述方法包括對患者施用包含結(jié)合csf1r的抗體的藥物組合物。

在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的抗體和包含結(jié)合csf1r的抗體的組合物，用于在人或動物的治療方法中使用。在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的抗體和包含結(jié)合csf1r的抗體的組合物，用于在人或動物的類風濕性關(guān)節(jié)炎治療方法中使用。在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的抗體和包含結(jié)合csf1r的抗體的組合物，用于在人或動物的多發(fā)性硬化癥治療方法中使用。在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的抗體和包含結(jié)合csf1r的抗體的組合物，用于在人或動物的癌癥治療方法中使用。在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的抗體和包含結(jié)合csf1r的抗體的組合物，用于在人或動物的炎癥性病狀治療方法中使用。

本申請涉及下述實施方案。

1.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％同一性的序列，并且其中所述抗體與集落刺激因子1受體(csf1r)結(jié)合。

2.如實施方案1所述的抗體，其中所述重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少95％同一性的序列。

3.如實施方案1所述的抗體，其中所述重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少97％同一性的序列。

4.如實施方案1所述的抗體，其中所述重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少99％同一性的序列。

5.如實施方案1所述的抗體，其中所述重鏈包含選自seqidno:9、11、13和39至45的序列。

6.如實施方案1至5中任一項所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％同一性的序列。

7.如實施方案1至5中任一項所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少95％同一性的序列。

8.如實施方案1至5中任一項所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少97％同一性的序列。

9.如實施方案1至5中任一項所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少99％同一性的序列。

10.如實施方案1至5中任一項所述的抗體，其中所述輕鏈包含選自seqidno:10、12、14和46至52的序列。

11.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％同一性的序列，并且其中所述抗體與集落刺激因子1受體(csf1r)結(jié)合。

12.如實施方案11所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少95％同一性的序列。

13.如實施方案11所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少97％同一性的序列。

14.如實施方案11所述的抗體，其中所述輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少99％同一性的序列。

15.如實施方案11所述的抗體，其中所述輕鏈包含選自seqidno:10、12、14和46至52的序列。

16.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述重鏈包含：(i)包含選自seqidno:15、21和27的序列的重鏈(hc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:16、22和28的序列的hccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:17、23和29的序列的hccdr3，其中所述抗體與csf1r結(jié)合。

17.如實施方案16所述的抗體，其中所述hccdr1、hccdr2和hccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:15、16和17；(b)seqidno:21、22和23；以及(c)seqidno:27、28和29。

18.如實施方案16或?qū)嵤┓桨?7所述的抗體，其中所述輕鏈包含：(i)包含選自seqidno:18、24和30的序列的輕鏈(lc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:19、25和31的序列的lccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:20、26和32的序列的lccdr3。

19.如實施方案18所述的抗體，其中所述lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

20.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述輕鏈包含：(i)包含選自seqidno:18、24和30的序列的輕鏈(lc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:19、25和31的序列的lccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:20、26和32的序列的lccdr3；并且其中所述抗體與csf1r結(jié)合。

21.如實施方案20所述的抗體，其中所述lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

22.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含與seqidno:9具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:10具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(b)包含與seqidno:11具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:12具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(c)包含與seqidno:13具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:14具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(d)包含與seqidno:39具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(e)包含與seqidno:40具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(f)包含與seqidno:41具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(g)包含與seqidno:39具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(h)包含與seqidno:40具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(i)包含與seqidno:41具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少95％同一性的序列的輕鏈；以及

(j)包含與seqidno:42具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(k)包含與seqidno:42具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(l)包含與seqidno:42具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(m)包含與seqidno:43具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(n)包含與seqidno:43具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(o)包含與seqidno:43具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(p)包含與seqidno:44具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(q)包含與seqidno:44具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少95％同一性的序列的輕鏈；

(r)包含與seqidno:45具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少95％同一性的序列的輕鏈；或

(s)包含與seqidno:45具有至少95％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少95％同一性的序列的輕鏈。

23.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含與seqidno:9具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:10具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(b)包含與seqidno:11具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:12具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(c)包含與seqidno:13具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:14具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(d)包含與seqidno:39具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(e)包含與seqidno:40具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(f)包含與seqidno:41具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(g)包含與seqidno:39具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(h)包含與seqidno:40具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(i)包含與seqidno:41具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少97％同一性的序列的輕鏈；以及

(j)包含與seqidno:42具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(k)包含與seqidno:42具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(l)包含與seqidno:42具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(m)包含與seqidno:43具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(n)包含與seqidno:43具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(o)包含與seqidno:43具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(p)包含與seqidno:44具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(q)包含與seqidno:44具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少97％同一性的序列的輕鏈；

(r)包含與seqidno:45具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少97％同一性的序列的輕鏈；或

(s)包含與seqidno:45具有至少97％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少97％同一性的序列的輕鏈。

24.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含與seqidno:9具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:10具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(b)包含與seqidno:11具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:12具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(c)包含與seqidno:13具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:14具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(d)包含與seqidno:39具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(e)包含與seqidno:40具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(f)包含與seqidno:41具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:46具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(g)包含與seqidno:39具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(h)包含與seqidno:40具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(i)包含與seqidno:41具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:47具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(j)包含與seqidno:42具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(k)包含與seqidno:42具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(l)包含與seqidno:42具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(m)包含與seqidno:43具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:48具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(n)包含與seqidno:43具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:49具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(o)包含與seqidno:43具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:50具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(p)包含與seqidno:44具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(q)包含與seqidno:44具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少99％同一性的序列的輕鏈；

(r)包含與seqidno:45具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:51具有至少99％同一性的序列的輕鏈；或

(s)包含與seqidno:45具有至少99％同一性的序列的重鏈和包含與seqidno:52具有至少99％同一性的序列的輕鏈。

25.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含seqidno:9的序列的重鏈和包含seqidno:10的序列的輕鏈；

(b)包含seqidno:11的序列的重鏈和包含seqidno:12的序列的輕鏈；

(c)包含seqidno:13的序列的重鏈和包含seqidno:14的序列的輕鏈；

(d)包含seqidno:39的序列的重鏈和包含seqidno:46的序列的輕鏈；

(e)包含seqidno:40的序列的重鏈和包含seqidno:46的序列的輕鏈；

(f)包含seqidno:41的序列的重鏈和包含seqidno:46的序列的輕鏈；

(g)包含seqidno:39的序列的重鏈和包含seqidno:47的序列的輕鏈；

(h)包含seqidno:40的序列的重鏈和包含seqidno:47的序列的輕鏈；

(i)包含seqidno:41的序列的重鏈和包含seqidno:47的序列的輕鏈；以及

(j)包含seqidno:42的序列的重鏈和包含seqidno:48的序列的輕鏈；

(k)包含seqidno:42的序列的重鏈和包含seqidno:49的序列的輕鏈；

(l)包含seqidno:42的序列的重鏈和包含seqidno:50的序列的輕鏈；

(m)包含seqidno:43的序列的重鏈和包含seqidno:48的序列的輕鏈；

(n)包含seqidno:43的序列的重鏈和包含seqidno:49的序列的輕鏈；

(o)包含seqidno:43的序列的重鏈和包含seqidno:50的序列的輕鏈；

(p)包含seqidno:44的序列的重鏈和包含seqidno:51的序列的輕鏈；

(q)包含seqidno:44的序列的重鏈和包含seqidno:52的序列的輕鏈；

(r)包含seqidno:45的序列的重鏈和包含seqidno:51的序列的輕鏈；或

(s)包含seqidno:45的序列的重鏈和包含seqidno:52的序列的輕鏈。

26.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含具有seqidno:15的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:16的序列的hccdr2和具有seqidno:17的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:18的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:19的序列的lccdr2和具有seqidno:20的序列的lccdr3的輕鏈；

(b)包含具有seqidno:21的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:22的序列的hccdr2和具有seqidno:23的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:24的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:25的序列的lccdr2和具有seqidno:26的序列的lccdr3的輕鏈；或

(c)包含具有seqidno:27的序列的重鏈(hc)cdr1、具有seqidno:28的序列的hccdr2和具有seqidno:29的序列的hccdr3的重鏈，以及包含具有seqidno:30的序列的輕鏈(lc)cdr1、具有seqidno:31的序列的lccdr2和具有seqidno:32的序列的lccdr3的輕鏈。

27.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)包含seqidno:53的序列的重鏈和包含seqidno:60的序列的輕鏈；

(b)包含seqidno:53的序列的重鏈和包含seqidno:61的序列的輕鏈；或

(c)包含seqidno:58的序列的重鏈和包含seqidno:65的序列的輕鏈。

28.一種分離的抗體，包含重鏈和輕鏈，其中所述抗體包含：

(a)由seqidno:53的序列組成的重鏈和由seqidno:60的序列組成的輕鏈；

(b)由seqidno:53的序列組成的重鏈和由seqidno:61的序列組成的輕鏈；或

(c)由seqidno:58的序列組成的重鏈和由seqidno:65的序列組成的輕鏈。

29.如實施方案1至28中任一項所述的抗體，其中所述抗體與人csf1r結(jié)合。

30.如實施方案1至29中任一項所述的抗體，其中所述抗體與食蟹猴csf1r結(jié)合。

31.如實施方案1至30中任一項所述的抗體，其中所述抗體阻斷配體與csf1r結(jié)合。

32.如實施方案1至31中任一項所述的抗體，其中所述抗體阻斷csf1與csf1r結(jié)合。

33.如實施方案1至32中任一項所述的抗體，其中所述抗體阻斷il34與csf1r結(jié)合。

34.如實施方案1至33中任一項所述的抗體，其中所述抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化。

35.如實施方案1至34中任一項所述的抗體，其中所述抗體抑制csf1誘導的csf1r磷酸化。

36.如實施方案1至35中任一項所述的抗體，其中所述抗體抑制il34誘導的csf1r磷酸化。

37.如實施方案1至36中任一項所述的抗體，其中所述抗體是嵌合抗體。

38.如實施方案1至36中任一項所述的抗體，其中所述抗體是人源化抗體。

39.如實施方案1至38中任一項所述的抗體，其中所述抗體選自fab、fv、scfv、fab’和(fab’)2。

40.如實施方案1至38中任一項所述的抗體，其中所述抗體選自iga、igg和igd。

41.如實施方案40所述的抗體，其中所述抗體是igg。

42.如實施方案41所述的抗體，其中所述抗體是igg4。

43.如實施方案42所述的抗體，其中所述抗體在至少一個igg4重鏈恒定區(qū)中包含s241p突變。

44.如實施方案1至43中任一項所述的抗體，其中所述抗體以小于1nm的親和力(kd)與人csf1r結(jié)合。

45.如實施方案1至44中任一項所述的抗體，其中所述抗體抑制csf1或il34存在下的單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)。

46.一種藥物組合物，包含如實施方案1至45中任一項所述的抗體。

47.一種分離的核酸，包含編碼與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的多核苷酸序列。

48.如實施方案47所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少95％同一性。

49.如實施方案47所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少97％同一性。

50.如實施方案47所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少99％同一性。

51.如實施方案47所述的核酸，其中所述氨基酸序列選自seqidno:9、11、13和39至45。

52.如實施方案45至51中任一項所述的核酸，其中所述核酸還包含編碼與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的多核苷酸序列。

53.如實施方案52所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少95％同一性。

54.如實施方案52所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少97％同一性。

55.如實施方案52所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少99％同一性。

56.如實施方案52所述的核酸，其中所述氨基酸序列選自seqidno:10、12、14和46至52。

57.一種分離的核酸，包含編碼與選自10、12、14和46至52的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的多核苷酸序列。

58.如實施方案57所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自10、12、14和46至52的序列具有至少95％同一性。

59.如實施方案57所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自10、12、14和46至52的序列具有至少97％同一性。

60.如實施方案57所述的核酸，其中所述氨基酸序列與選自10、12、14和46至52的序列具有至少99％同一性。

61.如實施方案57所述的核酸，其中所述氨基酸序列選自10、12、14和46至52。

62.一種組合物，包含第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸選自如實施方案47至51所述的核酸，并且其中所述第二核酸選自如實施方案57至61所述的核酸。

63.一種分離的核酸，包含編碼重鏈的多核苷酸序列，其中所述重鏈包含：(i)包含選自seqidno:15、21和27的序列的重鏈(hc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:16、22和28的序列的hccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:17、23和29的序列的hccdr3。

64.如實施方案63所述的核酸，其中所述hccdr1、hccdr2和hccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:15、16和17；(b)seqidno:21、22和23；以及(c)seqidno:27、28和29。

65.如實施方案63或?qū)嵤┓桨?4所述的核酸，其中所述核酸還包含編碼輕鏈的多核苷酸序列，其中所述輕鏈包含：(i)包含選自seqidno:18、24和30的序列的輕鏈(lc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:19、25和31的序列的lccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:20、26和32的序列的lccdr3。

66.如實施方案65所述的核酸，其中所述lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

67.一種分離的核酸，包含編碼輕鏈的多核苷酸序列，其中所述輕鏈包含：(i)包含選自seqidno:18、24和30的序列的輕鏈(lc)cdr1；(ii)包含選自seqidno:19、25和31的序列的lccdr2；以及(iii)包含選自seqidno:20、26和32的序列的lccdr3。

68.如實施方案67所述的核酸，其中所述lccdr1、lccdr2和lccdr3包含選自以下序列的一組序列：(a)seqidno:18、19和20；(b)seqidno:24、25和26；以及(c)seqidno:30、31和32。

69.一種組合物，包含第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸選自如實施方案63和64所述的核酸，并且其中所述第二核酸選自如實施方案67和68所述的核酸。

70.一種分離的核酸，包含第一多核苷酸序列和第二多核苷酸序列，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列分別編碼如實施方案22至28中任一項所述的抗體的重鏈和輕鏈。

71.一種組合物，包含第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸包含第一多核苷酸序列并且所述第二核酸包含第二多核苷酸序列，其中所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列分別編碼如實施方案22至28中任一項所述的抗體的重鏈和輕鏈。

72.一種宿主細胞，包含如實施方案47至61、63至68和70中任一項所述的核酸。

73.一種宿主細胞，包含如實施方案60或?qū)嵤┓桨?9或?qū)嵤┓桨?1所述的組合物。

74.如實施方案72或73所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是真核宿主細胞。

75.如實施方案74所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是哺乳動物宿主細胞。

76.如實施方案75所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞選自cho細胞、293細胞、nso細胞和per.c6細胞。

77.如實施方案76所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是293-6e細胞或dg44細胞。

78.一種治療多發(fā)性硬化癥的方法，所述方法包括對患者施用如實施方案46所述的藥物組合物。

79.一種治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的方法，所述方法包括對患者施用如實施方案46所述的藥物組合物。

80.一種治療溶骨性骨質(zhì)缺失的方法，所述方法包括對患者施用如實施方案46所述的藥物組合物。

81.如實施方案80所述的方法，其中所述溶骨性骨質(zhì)缺失選自骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失和類風濕性關(guān)節(jié)炎誘導的骨質(zhì)缺失。

82.一種治療癌癥的方法，所述方法包括對患者施用如實施方案46所述的藥物組合物。

83.如實施方案82所述的方法，其中所述癌癥選自乳癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、鱗狀細胞癌、葡萄膜黑色素瘤、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌、子宮頸癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、腦癌、胰腺癌、頭頸癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金病、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、星形細胞瘤、胃癌和肺腺癌。

附圖簡述

圖1展示如實施例4中所討論的人源化抗體ab1至ab16各自的人源化重鏈可變區(qū)的比對。加方框的殘基是人受體序列中變回相應(yīng)小鼠殘基的氨基酸。

圖2展示如實施例4中所討論的人源化抗體ab1至ab16各自的人源化輕鏈可變區(qū)的比對。加方框的氨基酸是人受體序列中變回相應(yīng)小鼠殘基的殘基。

圖3展示如實施例5中所描述的某些人源化抗體與人csf1recd結(jié)合的結(jié)合曲線。圖3小圖a展示親本嵌合抗體(cab)0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的結(jié)合曲線。圖3小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的結(jié)合曲線。圖3小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的結(jié)合曲線。

圖4展示如實施例5中所描述的某些人源化抗體與食蟹猴csf1recd結(jié)合的結(jié)合曲線。圖4小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的結(jié)合曲線。圖4小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的結(jié)合曲線。圖4小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的結(jié)合曲線。

圖5展示如實施例5中所描述的某些人源化抗體與小鼠csf1recd結(jié)合的結(jié)合曲線。圖5小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的結(jié)合曲線。圖5小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的結(jié)合曲線。圖5小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的結(jié)合曲線。

圖6展示如實施例6中所描述的某些人源化抗體對csf1誘導的csf1r磷酸化的抑制。圖6小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的阻斷曲線。圖6小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的阻斷曲線。圖6小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的阻斷曲線。

圖7展示如實施例7中所描述的某些人源化抗體對il34誘導的csf1r磷酸化的抑制。圖7小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的阻斷曲線。圖7小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的阻斷曲線。圖7小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的阻斷曲線。

圖8展示如實施例7中所描述的某些人源化抗體對人csf1與食蟹猴csf1recd結(jié)合的阻斷。圖8小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的阻斷曲線。圖8小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的阻斷曲線。圖8小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的阻斷曲線。

圖9展示如實施例7中所描述的某些人源化抗體對人il34與食蟹猴csf1recd結(jié)合的阻斷。圖9小圖a展示親本cab0301和人源化抗體(huab)0301.1、0301.2、0302.3、0301.4、0301.5和0301.6(分別是h0301-l0h0、h0301-l0h1、h0301-l0h2、h0301-l1h0、h0301-l1h1和h0301-l1h2)的阻斷曲線。圖9小圖b展示親本cab0302和人源化抗體(huab)0302.1、0302.2、0302.3、0302.4、0302.5和0302.6(分別是h0302-l0h1、h0302-l1h1、h0302-l2h1、h0302-l0h2、h0302-l1h2和h0302-l2h2)的阻斷曲線。圖9小圖c展示親本cab0311和人源化抗體(huab)0311.1、0311.2、0311.3和0311.4(分別是h0311-l0h1、h0311-l1h1、h0311-l0h2和h0311-l1h2)的阻斷曲線。

圖10展示如實施例9中所描述的人源化抗體0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1對表達人csf1r的cho細胞中csf1-(a)和il34-(b)誘導的csf1r磷酸化的阻斷。

圖11展示如實施例10中所描述的人源化抗體0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1對csf1-(a)和il34-(b)誘導的單核細胞增殖/存活反應(yīng)的阻斷。

圖12小圖a-c展示如實施例11中所描述，使用來自三個不同供體的單核細胞時，人源化抗體0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1不刺激原代單核細胞增殖或存活。

詳細描述

提供了包括施用針對csf1r的新穎抗體的治療疾病的方法。所有所述抗體都對人csf1recd的結(jié)合親和力小于2nm，并且除兩個之外的所有人源化抗體對人csf1recd都具有低于納摩爾濃度的結(jié)合親和力。此外，所述新抗體同時阻斷csf1和il34與人csf1r的結(jié)合，并且抑制人csf1r的配體誘導的磷酸化。許多新抗體還阻斷csf1和il34與食蟹猴csf1r的結(jié)合，這有利于體內(nèi)實驗從而有助于抗csf1r抗體治療劑的開發(fā)。因此，所述新抗體非常適于在治療上用于人疾病，包括但不限于癌癥、自體免疫性疾病和炎癥性病狀。

本文中使用的章節(jié)標題只是用于組織上的目的，而不應(yīng)解釋為限制所描述的標的物。

定義

除非另外定義，否則結(jié)合本發(fā)明使用的科學和技術(shù)術(shù)語將具有一般技術(shù)人員通常所理解的含義。此外，除非上下文另有要求，否則單數(shù)術(shù)語將包括復(fù)數(shù)并且復(fù)數(shù)術(shù)語將包括單數(shù)。

結(jié)合重組dna、寡核苷酸合成、組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)、酶反應(yīng)和純化技術(shù)使用的示例性技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的。許多這些技術(shù)和程序例如描述于sambrook等molecularcloning:alaboratorymanual(第二版,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1989))等中。此外，用于化學合成、化學分析、藥物制劑、配制和遞送以及患者治療的示例性技術(shù)也是本領(lǐng)域已知的。

在本申請中，除非另外說明，否則“或”的使用意謂“和/或”。在多個從屬權(quán)利要求的上下文中，“或”的使用只是選擇性地回引一個以上前述獨立或從屬權(quán)利要求。此外，除非另外明確說明，否則如“元件”或“組分”等術(shù)語同時涵蓋包含一個單元的元件和組分以及包含一個以上亞單元的元件和組分。

除非另外指出，否則按照本公開使用的以下術(shù)語應(yīng)理解為具有以下含義：

術(shù)語“核酸分子”和“多核苷酸”可以互換使用，并且是指核苷酸的聚合物。這些核苷酸的聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸，并且包括但不限于dna、rna和pna?！昂怂嵝蛄小笔侵笜?gòu)成核酸分子或多核苷酸的線性核苷酸序列。

術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用，是指氨基酸殘基的聚合物，并且不限于最小長度。這些氨基酸殘基的聚合物可以含有天然或非天然氨基酸殘基，并且包括但不限于肽、寡肽、氨基酸殘基的二聚體、三聚體和多聚體。所述定義同時涵蓋全長蛋白質(zhì)和其片段。所述術(shù)語還包括多肽的表達后修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙?；?、磷酸化等。此外，出于本發(fā)明的目的，“多肽”是指包括對天然序列的修飾如缺失、添加和取代(在性質(zhì)上通常是保守的)的蛋白質(zhì)，只要所述蛋白質(zhì)保持希望的活性即可。這些修飾可以是有意的(如通過定點誘變)，或者可以是偶然的(如通過產(chǎn)生蛋白質(zhì)的宿主的突變或由于pcr擴增導致的差錯)。

術(shù)語“csf1r”在本文中是指全長csf1r，其包括n端ecd、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，有或沒有n端前導序列。在一些實施方案中，所述csf1r是具有seqidno:1或seqidno:2的氨基酸序列的人csf1r。

本文中使用的術(shù)語“csf1r胞外結(jié)構(gòu)域”(“csf1recd”)是指缺乏胞內(nèi)和跨膜結(jié)構(gòu)域的csf1r多肽。csf1recd包括能夠結(jié)合csf1r和/或il34的全長csf1recd和csf1recd片段。人全長csf1recd在本文中定義為包含seqidno:2的氨基酸1至512(即包括前導序列)或氨基酸20至512(即缺乏前導序列)的二者之一。在一些實施方案中，人csf1recd片段包含seqidno:2的氨基酸20至506(參見seqidno:5)。在一些實施方案中，人csf1r片段結(jié)束于氨基酸507、508、509、510或511。在一些實施方案中，cynocsf1recd包含seqidno:7的序列(具有前導序列)或seqidno:7的氨基酸20至506(無前導序列)。

本文中使用的術(shù)語“抗體”是指包含重鏈的至少互補決定區(qū)(cdr)1、cdr2和cdr3以及輕鏈的至少cdr1、cdr2和cdr3的分子，其中所述分子能夠與抗原結(jié)合。術(shù)語抗體包括但不限于能夠結(jié)合抗原的片段，如fv、單鏈fv(scfv)、fab、fab’和(fab’)2。術(shù)語抗體還包括但不限于嵌合抗體、人源化抗體和各種物種(如小鼠、人、食蟹猴等)的抗體。

在一些實施方案中，抗體包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗體包含至少一個含有重鏈可變區(qū)和重鏈恒定區(qū)的至少一部分的重鏈，以及至少一個含有輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的至少一部分的輕鏈。在一些實施方案中，抗體包含兩個重鏈，其中各重鏈包含重鏈可變區(qū)和重鏈恒定區(qū)的至少一部分，以及兩個輕鏈，其中各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的至少一部分。本文中使用的單鏈fv(scfv)或包含例如含有所有6個cdr(三個重鏈cdr和三個輕鏈cdr)的單個多肽鏈的任何其它抗體被認為具有重鏈和輕鏈。在這些實施方案的一些中，重鏈是包含三個重鏈cdr的抗體區(qū)域并且輕鏈是包含三個輕鏈cdr的抗體區(qū)域。

本文中使用的術(shù)語“重鏈可變區(qū)”是指包含重鏈cdr1、框架(fr)2、cdr2、fr3和cdr3的區(qū)域。在一些實施方案中，重鏈可變區(qū)還包含fr1的至少一部分和/或fr4的至少一部分。在一些實施方案中，重鏈cdr1對應(yīng)于kabat殘基26至35；重鏈cdr2對應(yīng)于kabat殘基50至65；并且重鏈cdr3對應(yīng)于kabat殘基95至102。參見，例如kabatsequencesofproteinsofimmunologicalinterest(1987和1991,nih,bethesda,md.)；以及圖1。在一些實施方案中，重鏈cdr1對應(yīng)于kabat殘基31至35；重鏈cdr2對應(yīng)于kabat殘基50至65；并且重鏈cdr3對應(yīng)于kabat殘基95至102。參見上文。

本文中使用的術(shù)語“重鏈恒定區(qū)”是指包含至少三個重鏈恒定結(jié)構(gòu)域(ch1、ch2和ch3)的區(qū)域。非限制性示例重鏈恒定區(qū)包括γ、δ和α。非限制性示例重鏈恒定區(qū)還包括ε和μ。各重恒定區(qū)對應(yīng)于抗體同種型。例如，包含γ恒定區(qū)的抗體是igg抗體，包含δ恒定區(qū)的抗體是igd抗體，并且包含α恒定區(qū)的抗體是iga抗體。此外，包含μ恒定區(qū)的抗體是igm抗體，并且包含ε恒定區(qū)的抗體是ige抗體。某些同種型可以進一步再分成亞類。例如，igg抗體包括但不限于igg1(包含γ1恒定區(qū))、igg2(包含γ2恒定區(qū))、igg3(包含γ3恒定區(qū))和igg4(包含γ4恒定區(qū))抗體；iga抗體包括但不限于iga1(包含α1恒定區(qū))和iga2(包含α2恒定區(qū))抗體；并且igm抗體包括但不限于igm1和igm2。

在一些實施方案中，重鏈恒定區(qū)包含為抗體帶來希望的特性的一個或多個突變(或取代)、添加或缺失。非限制性示例突變是igg4絞鏈區(qū)(在恒定結(jié)構(gòu)域ch1和ch2之間)中的s241p突變，它將igg4基元cpscp改變?yōu)閏ppcp，cppcp與igg1中的對應(yīng)基元相似。在一些實施方案中，該突變產(chǎn)生更穩(wěn)定的igg4抗體。參見，例如angal等,mol.immunol.30:105-108(1993)；bloom等,prot.sci.6:407-415(1997)；schuurman等,mol.immunol.38:1-8(2001)。

本文中使用的術(shù)語“重鏈”是指至少包含重鏈可變區(qū)(有或沒有前導序列)的多肽。在一些實施方案中，重鏈包含重鏈恒定區(qū)的至少一部分。本文中使用的術(shù)語“全長重鏈”是指包含重鏈可變區(qū)和重鏈恒定區(qū)(有或沒有前導序列)的多肽。

本文中使用的術(shù)語“輕鏈可變區(qū)”是指包含輕鏈cdr1、框架(fr)2、cdr2、fr3和cdr3的區(qū)域。在一些實施方案中，輕鏈可變區(qū)還包含fr1和/或fr4。在一些實施方案中，輕鏈cdr1對應(yīng)于kabat殘基24至34；輕鏈cdr2對應(yīng)于kabat殘基50至56；并且輕鏈cdr3對應(yīng)于kabat殘基89至97。參見，例如kabatsequencesofproteinsofimmunologicalinterest(1987和1991,nih,bethesda,md.)；以及圖1。

本文中使用的術(shù)語“輕鏈恒定區(qū)”是指包含輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域(cl)的區(qū)域。非限制性示例輕鏈恒定區(qū)包括λ和κ。

本文中使用的術(shù)語“輕鏈”是指至少包含輕鏈可變區(qū)(有或沒有前導序列)的多肽。在一些實施方案中，輕鏈包含輕鏈恒定區(qū)的至少一部分。本文中使用的術(shù)語“全長輕鏈”是指包含輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)(有或沒有前導序列)的多肽。

本文中使用的“嵌合抗體”是指包含至少一個來自第一物種(如小鼠、大鼠、食蟹猴等)的可變區(qū)和至少一個來自第二物種(如人、食蟹猴等)的恒定區(qū)的抗體。在一些實施方案中，嵌合抗體包含至少一個小鼠可變區(qū)和至少一個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，嵌合抗體包含至少一個食蟹猴可變區(qū)和至少一個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，嵌合抗體的所有可變區(qū)都是來自第一物種并且嵌合抗體的所有恒定區(qū)都是來自第二物種。

本文中使用的“人源化抗體”是指其中非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少一個氨基酸已經(jīng)置換為來自人可變區(qū)的相應(yīng)氨基酸的抗體。在一些實施方案中，人源化抗體包含至少一個人恒定區(qū)或其片段。在一些實施方案中，人源化抗體是fab、scfv、(fab’)2等。

本文中使用的“cdr移植抗體”是指其中第一(非人)物種的互補決定區(qū)(cdr)已經(jīng)被移植到第二(人)物種的框架區(qū)(fr)上的人源化抗體。

本文中使用的“人抗體”是指在人體中產(chǎn)生的抗體、在包含人免疫球蛋白基因的非人動物中產(chǎn)生的抗體(如)以及使用體外方法(如噬菌體展示，其中抗體譜是基于人免疫球蛋白序列)選擇的抗體。

術(shù)語“前導序列”是指促進多肽自哺乳動物細胞分泌的位于多肽n端的氨基酸殘基序列。前導序列可以在多肽從哺乳動物細胞輸出時被裂解，從而形成成熟蛋白質(zhì)。前導序列可以是天然或合成的，并且它們可以與它們所連接的蛋白質(zhì)異源或同源。示例性前導序列包括但不限于抗體前導序列，例如seqidno：3和4的氨基酸序列，它們分別對應(yīng)于人輕鏈和重鏈前導序列。非限制性示例前導序列還包括來自異源蛋白質(zhì)的前導序列。在一些實施方案中，抗體缺乏前導序列。在一些實施方案中，抗體包含至少一個前導序列，其可以選自天然抗體前導序列和異源前導序列。

術(shù)語“載體”用于描述可以被工程化從而容納克隆多核苷酸或可以在宿主細胞中增殖的多核苷酸的多核苷酸。載體可以包括一個或多個以下元件：復(fù)制起點、一個或多個調(diào)節(jié)目標多肽表達的調(diào)控序列(例如啟動子和/或增強子)和/或一個或多個選擇性標記基因(例如抗生素抗性基因和可以在比色測定中使用的基因，例如β-半乳糖苷酶)。術(shù)語“表達載體”是指用于在宿主細胞中表達目標多肽的載體。

“宿主細胞”是指可以是或已經(jīng)是載體或分離的多核苷酸的接受者的細胞。宿主細胞可以是原核細胞或真核細胞。示例性真核細胞包括哺乳動物細胞如靈長類或非靈長類動物細胞；真菌細胞如酵母菌；植物細胞；以及昆蟲細胞。非限制性示例哺乳動物細胞包括但不限于nso細胞、細胞(crucell)以及293和cho細胞及其衍生物，分別如293-6e和dg44細胞。

本文中使用的術(shù)語“分離的”是指已經(jīng)與至少一些組分分離的分子，通常該分子與這些組分一起在自然界中被發(fā)現(xiàn)。例如，當多肽與至少一些產(chǎn)生它的細胞中的組分分離時，該多肽稱為“分離的”。當多肽在表達之后被細胞分泌時，從產(chǎn)生它的細胞通過物理方式分離含有所述多肽的上清液被認為是“分離”所述多肽。類似地，當多核苷酸不是在自然界中通常在其中發(fā)現(xiàn)該多核苷酸的更大的多核苷酸(例如基因組dna或線粒體dna，在dna多核苷酸的情況下)的一部分時，或與產(chǎn)生它的細胞中的至少一些組分分離(例如在rna多核苷酸的情況下)時，該多核苷酸被稱為“分離的”。因此，只要多核苷酸沒有在自然界中的載體中被發(fā)現(xiàn)，包含于宿主細胞內(nèi)的該載體中的dna多核苷酸就可以稱為“分離的”。

術(shù)語“受試者”和“患者”在本文中可互換使用，是指人。在一些實施方案中，還提供治療其它哺乳動物的方法，這些哺乳動物包括但不限于嚙齒動物、猿、貓、犬、馬、牛、豬、羊、山羊、哺乳類實驗動物、哺乳類農(nóng)場動物、哺乳類競賽動物和哺乳類寵物。

術(shù)語“類風濕性關(guān)節(jié)炎”(“ra”)是指主要特征為關(guān)節(jié)內(nèi)層(滑膜)炎癥的慢性自體免疫性疾病，它可以導致關(guān)節(jié)損傷，從而產(chǎn)生慢性疼痛、功能喪失和殘疾。因為ra可以影響身體的多種器官(包括皮膚、肺和眼睛)，所以它被稱為全身性疾病。

術(shù)語“多發(fā)性硬化癥”(“ms”)是指cns的慢性、自體免疫性、脫髓鞘疾病，其中身體產(chǎn)生針對產(chǎn)生髓鞘的細胞的抗體和白血球。當髓鞘發(fā)炎、損傷并且從神經(jīng)纖維脫離時，就出現(xiàn)“脫髓鞘”。

術(shù)語“癌癥”是指與不受控的細胞增殖、無限制的細胞生長和減少的細胞凋亡有關(guān)的增殖性病癥。癌癥包括但不限于乳癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、甲狀腺癌、食道癌、黑色素瘤、濾泡性淋巴瘤、葡萄膜黑色素瘤、腦癌、頭頸癌、肺腺癌，包括但不限于結(jié)腸癌、心臟腫瘤、胰腺癌、成視網(wǎng)膜細胞瘤、成膠質(zhì)細胞瘤、腸癌、睪丸癌、胃癌、成神經(jīng)細胞瘤、粘液瘤、肌瘤、淋巴瘤、內(nèi)皮瘤、成骨細胞瘤、破骨細胞瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、腺瘤、卡波西肉瘤(kaposi'ssarcoma)、卵巢癌、白血病(包括急性白血病(例如急性淋巴細胞性白血病、急性髓細胞性白血病，包括原始粒細胞性、早幼粒細胞性、粒單核細胞性、單核細胞性和紅白血病))和慢性白血病(例如慢性髓細胞性(粒細胞性)白血病和慢性淋巴細胞性白血病)、骨髓增生異常綜合征真性紅細胞增多癥、淋巴瘤(例如霍奇金病、非霍奇金病)、多發(fā)性骨髓瘤、瓦氏巨球蛋白血癥(waldenstrom'smacroglobulinemia)、重鏈疾病、以及實體腫瘤，包括但不限于肉瘤和癌瘤，如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤(ewing'stumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝細胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎癌、威爾姆氏腫瘤(wilm'stumor)、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細胞瘤、髓母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤和腦膜瘤。術(shù)語“轉(zhuǎn)移”和“癌轉(zhuǎn)移”在本文中可互換使用，是指癌細胞擴散到其它組織的能力。例如，“轉(zhuǎn)移至骨骼”是指包括但不限于乳癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、甲狀腺癌和黑色素瘤在內(nèi)的某些癌癥類型轉(zhuǎn)移至骨骼的能力。

本文中使用的術(shù)語“溶骨病癥”是指由破骨細胞(它是負責骨吸收的細胞)活性升高引起的任何病狀。術(shù)語“骨溶解”和“溶骨性骨質(zhì)缺失”可以互換使用，是指與溶骨病癥有關(guān)的破骨細胞介導的骨吸收或骨質(zhì)缺失。溶骨病癥可能在有發(fā)展溶骨病癥傾向的受試者中出現(xiàn)，或其可能在患有通過刺激破骨細胞活性而引起或促成溶骨病癥的疾病的受試者中出現(xiàn)。在本發(fā)明的示例性實施方案中，溶骨病癥可以包括溶骨性骨質(zhì)缺失和癌癥轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失。在本發(fā)明的其它示例性實施方案中，溶骨性骨病癥包括代謝性骨骼疾病，包括內(nèi)分泌病，如皮質(zhì)醇過多癥、性腺功能減退、原發(fā)性或繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進和甲狀腺功能亢進；飲食缺乏，包括佝僂病、軟骨病、壞血病和營養(yǎng)不良；骨質(zhì)疏松；藥物使用，包括糖皮質(zhì)激素(糖皮質(zhì)激素誘導的骨質(zhì)疏松)、肝素和酒精；慢性疾病，包括吸收不良綜合征；慢性腎衰竭，包括腎性骨營養(yǎng)不良；慢性肝病，包括肝性骨營養(yǎng)不良；遺傳性疾病，包括成骨不全和高胱氨酸尿癥；以及與關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、纖維性結(jié)構(gòu)不良、牙周病和佩吉特氏病(paget'sdisease)有關(guān)的骨骼炎癥。

術(shù)語“轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失”和“癌癥轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失”在本文中可互換使用，是指由癌細胞向骨骼轉(zhuǎn)移引起的骨溶解或溶骨性骨質(zhì)缺失。術(shù)語“癌癥轉(zhuǎn)移誘導的破骨細胞活化”在本文中用于指轉(zhuǎn)移至骨骼的癌細胞誘導破骨細胞活化的能力。

術(shù)語“腫瘤”在本文中用于指顯示異常高水平的增殖和生長的一群細胞。腫瘤可以是良性、惡性前或惡性的；惡性腫瘤細胞是癌性的。腫瘤細胞可以是實體腫瘤細胞或白血病腫瘤細胞。術(shù)語“腫瘤生長”在本文中用于指引起腫瘤尺寸相應(yīng)增大的構(gòu)成腫瘤的細胞的增殖或生長。術(shù)語“csfir依賴性腫瘤生長”在本文中用于指為了腫瘤細胞增殖或生長，腫瘤細胞需要csfir介導的功能。

本文中使用的“治療”涵蓋在哺乳動物(包括人)中的用于疾病的治療劑的任何施用或應(yīng)用，并且包括抑制疾病或疾病的發(fā)展、抑制或減緩疾病或其發(fā)展、阻止其發(fā)展、部分或完全減輕疾病或治愈疾病，例如，通過引起退化，或恢復(fù)或修復(fù)喪失、丟失或缺損的功能；或刺激低效的過程。

術(shù)語“抑制”是指任何表型特征的減少或終止或指該特征的發(fā)生率、程度或可能性的降低或終止。

“可藥用的載劑”是指無毒固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、囊封材料、制劑輔助劑，或本領(lǐng)域中用于與治療劑一起使用共同構(gòu)成用于對受試者施用的“藥物組合物”的常規(guī)載劑?？伤幱玫妮d劑在所使用的劑量和濃度下對接受者是無毒的并且與制劑的其它成分相容?？伤幱玫妮d劑適合于所使用的制劑。例如，如果要口服施用治療劑，那么載劑可以是凝膠膠囊。如果要皮下注射施用治療劑，那么載劑理想地對皮膚沒有刺激性并且不會引起注射部位反應(yīng)。

抗csf1r抗體

本發(fā)明人發(fā)明了針對csf1r的一組新抗體。抗csf1r抗體包括但不限于人源化抗體、嵌合抗體、小鼠抗體、人抗體和包含本文中討論的重鏈和/或輕鏈cdr的抗體。

示例性人源化抗體

在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的人源化抗體。人源化抗體適用作治療性分子，因為人源化抗體減少或消除人對非人抗體的免疫反應(yīng)(如人抗小鼠抗體(hama)反應(yīng))，這可以產(chǎn)生對抗體治療劑的免疫反應(yīng)并且降低治療劑的有效性。

非限制性示例人源化抗體包括本文中描述的ab1至ab16。非限制性示例人源化抗體還包括包含選自ab1至ab16的抗體的重鏈可變區(qū)和/或選自ab1至ab16的抗體的輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例人源化抗體包括包含選自seqidno:39至45的重鏈可變區(qū)和/或選自seqidno:46至52的輕鏈可變區(qū)的抗體。示例性人源化抗體還包括但不限于包含選自0301、0302和0311的抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3和/或輕鏈cdr1、cdr2和cdr3的人源化抗體。

在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含選自0301、0302和0311的抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3和/或輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。非限制性示例人源化抗csf1r抗體包括包含選自以下序列的重鏈cdr1、cdr2和cdr3的組的抗體：seqidno:15、16和17；seqidno:21、22和23；以及seqidno:27、28和29。非限制性示例人源化抗csf1r抗體還包括選自以下序列的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3的組的抗體：seqidno:18、19和20；seqidno:24、25和26；以及seqidno:30、31和32。

非限制性示例人源化抗csf1r抗體包括包含表1中的重鏈cdr1、cdr2和cdr3以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3的組的抗體(展示seqidno；序列請參見表8)。表1的每行展示示例性抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。

表1：重鏈和輕鏈cdr

其它示例性人源化抗體

在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈，并且其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈，并且其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈；以及含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合csf1r。

如本文中所使用，特定多肽是否例如與氨基酸序列具有至少95％同一性可以使用例如計算機程序來確定。當確定特定序列是否例如與參比序列具有95％同一性時，同一性百分比是在參比氨基酸序列的全長上來計算。

在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含至少一個本文中討論的cdr。即，在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含選自本文中討論的重鏈cdr1、本文中討論的重鏈cdr2、本文中討論的重鏈cdr3、本文中討論的輕鏈cdr1、本文中討論的輕鏈cdr2和本文中討論的輕鏈cdr3的至少一個cdr。此外，在一些實施方案中，人源化抗csf1r抗體包含至少一個基于本文中討論的cdr的突變型cdr，其中所述突變型cdr包含相對于本文中討論的cdr的1、2、3或4個氨基酸取代。在一些實施方案中，一個或多個所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對特定的cdr序列選擇一個或多個合適的保守氨基酸取代，其中所述合適的保守氨基酸取代預(yù)計不會顯著地改變包含所述突變型cdr的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性人源化抗csf1r抗體還包括與本文中描述的抗體競爭結(jié)合csf1r的抗體。因此，在一些實施方案中，提供與選自fab0301、0302和0311以及這些fab的二價(即具有兩個重鏈和兩個輕鏈)抗體型式的抗體競爭結(jié)合csf1r的人源化抗csf1r抗體。

示例性人源化抗體恒定區(qū)

在一些實施方案中，本文中描述的人源化抗體包含一個或多個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自iga、igg和igd的同種型。在一些實施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實施方案中，本文中描述的人源化抗體包含人igg恒定區(qū)。在一些實施方案中，本文中描述的人源化抗體包含人igg4重鏈恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，本文中描述的人源化抗體在人igg4恒定區(qū)中包含s241p突變。在一些實施方案中，本文中描述的人源化抗體包含人igg4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

重鏈恒定區(qū)的選擇可以決定抗體在體內(nèi)是否將具有效應(yīng)功能。在一些實施方案中，這些效應(yīng)功能包括抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(adcc)和/或補體依賴性細胞毒性(cdc)，并且可以導致殺滅與抗體結(jié)合的細胞。在一些治療方法(包括一些癌癥的治療方法)中，細胞殺滅可能是希望的，例如，當抗體與支持腫瘤維持或生長的細胞結(jié)合時?？赡苤С帜[瘤維持或生長的示例性細胞包括但不限于腫瘤細胞本身、有助于血管結(jié)構(gòu)向腫瘤募集的細胞以及提供支持或促進腫瘤生長或腫瘤存活的配體、生長因子或反受體的細胞。在一些實施方案中，當希望有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg1重鏈或人igg3重鏈的抗csf1r抗體。

在一些治療方法中，效應(yīng)功能可能是不希望的。例如，在一些實施方案中，可能希望在ms和/或ra和/或骨溶解的治療中使用的抗體不具有效應(yīng)功能。因此，在一些實施方案中，針對癌癥治療開發(fā)的抗csf1r抗體可能不適于在ms和/或ra和/或骨溶解的治療中使用。因此，在一些實施方案中，在ms和/或ra和/或骨溶解的治療中使用缺乏顯著的效應(yīng)功能的抗csf1r抗體。在一些實施方案中，用于治療ms和/或ra和/或骨溶解的抗csf1r抗體包含人igg4或igg2重鏈恒定區(qū)。在一些實施方案中，igg4恒定區(qū)包含s241p突變。

抗體可以通過任何方法人源化。人源化的非限制性示例方法包括例如美國專利no.5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370；jones等,nature321:522-525(1986)；riechmann等,nature332:323-27(1988)；verhoeyen等,science239:1534-36(1988)和美國公布no.us2009/0136500中描述的方法。

如上所述，人源化抗體是其中非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少一個氨基酸已置換為來自人框架區(qū)中的相應(yīng)位置的氨基酸的抗體。在一些實施方案中，非人可變區(qū)的框架區(qū)中的至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少10個、至少11個、至少12個、至少15個或至少20個氨基酸置換為來自一個或多個人框架區(qū)中的一個或多個相應(yīng)位置的氨基酸。

在一些實施方案中，用于取代的一些相應(yīng)的人氨基酸是來自不同人免疫球蛋白基因的框架區(qū)。即，在這些實施方案的一些中，一個或多個非人氨基酸可以置換為來自第一人抗體的人框架區(qū)或由第一人免疫球蛋白基因編碼的相應(yīng)氨基酸，一個或多個非人氨基酸可以置換為來自第二人抗體的人框架區(qū)或由第二人免疫球蛋白基因編碼的相應(yīng)氨基酸，一個或多個非人氨基酸可以置換為來自第三人抗體的人框架區(qū)或由第三人免疫球蛋白基因編碼的相應(yīng)氨基酸等。此外，在一些實施方案中，用于在單個框架區(qū)(例如fr2)中取代的所有相應(yīng)人氨基酸無需來自相同的人框架。然而，在一些實施方案中，用于取代的所有相應(yīng)人氨基酸是來自相同的人抗體或由相同的人免疫球蛋白基因編碼。

在一些實施方案中，通過用相應(yīng)的人框架區(qū)置換一個或多個完整的框架區(qū)來將抗體人源化。在一些實施方案中，選擇與所置換的非人框架區(qū)具有最高水平的同源性的人框架區(qū)。在一些實施方案中，這種人源化抗體是cdr移植的抗體。

在一些實施方案中，繼cdr移植之后，一個或多個框架氨基酸被變回小鼠框架區(qū)中的相應(yīng)氨基酸。在一些實施方案中，進行這種“回復(fù)突變”以保留似乎促進一個或多個cdr的結(jié)構(gòu)和/或可能涉及抗原接觸和/或似乎涉及抗體的整體結(jié)構(gòu)完整性的一個或多個小鼠框架氨基酸。在一些實施方案中，繼cdr移植之后，對抗體的框架區(qū)進行十個或十個以下、九個或九個以下、八個或八個以下、七個或七個以下、六個或六個以下、五個或五個以下、四個或四個以下、三個或三個以下、兩個或兩個以下、一個或零個回復(fù)突變。

在一些實施方案中，人源化抗體還包含人重鏈恒定區(qū)和/或人輕鏈恒定區(qū)。

示例性嵌合抗體

在一些實施方案中，抗csf1r抗體是嵌合抗體。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含至少一個非人可變區(qū)和至少一個人恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，抗csf1r抗體的所有可變區(qū)都是非人可變區(qū)，并且抗csf1r抗體的所有恒定區(qū)都是人恒定區(qū)。在一些實施方案中，嵌合抗體的一個或多個可變區(qū)是小鼠可變區(qū)。嵌合抗體的人恒定區(qū)無需具有與其所置換的非人恒定區(qū)(如果有)相同的同種型。嵌合抗體例如在美國專利no.4,816,567；和morrison等proc.natl.acad.sci.usa81:6851-55(1984)中論述。

非限制性示例嵌合抗體包括含有選自0301、0302和0311的抗體的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的嵌合抗體。其它非限制性示例嵌合抗體包括含有選自0301、0302和0311的抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3和/或輕鏈cdr1、cdr2和cdr3的嵌合抗體。

非限制性示例嵌合抗csf1r抗體包括含有以下重鏈及輕鏈可變區(qū)對的抗體：seqidno:9和10；seqidno:11和12；以及seqidno:13和14。

非限制性示例抗csf1r抗體包括含有上表1中所示的一組重鏈cdr1、cdr2和cdr3以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3的抗體。

其它示例性嵌合抗體

在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈，其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈，其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈；以及含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合csf1r。

在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含至少一個本文中討論的cdr。即，在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含選自本文中討論的重鏈cdr1、本文中討論的重鏈cdr2、本文中討論的重鏈cdr3、本文中討論的輕鏈cdr1、本文中討論的輕鏈cdr2和本文中討論的輕鏈cdr3的至少一個cdr。此外，在一些實施方案中，嵌合抗csf1r抗體包含至少一個基于本文中討論的cdr的突變型cdr，其中所述突變型cdr包含相對于本文中討論的cdr的1、2、3或4個氨基酸取代。在一些實施方案中，一個或多個所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對特定的cdr序列選擇一個或多個合適的保守氨基酸取代，其中所述合適的保守氨基酸取代預(yù)計不會顯著地改變包含所述突變型cdr的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性嵌合抗csf1r抗體還包括與本文中描述的抗體競爭結(jié)合csf1r的嵌合抗體。因此，在一些實施方案中，提供與選自fab0301、0302和0311以及這些fab的二價(即具有兩個重鏈和兩個輕鏈)抗體型式的抗體競爭結(jié)合csf1r的嵌合抗csf1r抗體。

示例性嵌合抗體恒定區(qū)

在一些實施方案中，本文中描述的嵌合抗體包含一個或多個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自iga、igg和igd的同種型。在一些實施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實施方案中，本文中描述的嵌合抗體包含人igg恒定區(qū)。在一些實施方案中，本文中描述的嵌合抗體包含人igg4重鏈恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，本文中描述的嵌合抗體在人igg4恒定區(qū)中包含s241p突變。在一些實施方案中，本文中描述的嵌合抗體包含人igg4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

如上所述，是否希望有效應(yīng)功能可能取決于計劃應(yīng)用抗體的特定治療方法。因此，在一些實施方案中，當希望有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg1重鏈恒定區(qū)或人igg3重鏈恒定區(qū)的嵌合抗csf1r抗體。在一些實施方案中，當希望沒有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg4或igg2重鏈恒定區(qū)的嵌合抗csf1r抗體。

示例性人抗體

人抗體可以通過任何合適的方法來制備。非限制性示例方法包括在包含人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因小鼠中制備人抗體。參見，例如jakobovits等,proc.natl.acad.sci.usa90:2551-55(1993)；jakobovits等,nature362:255-8(1993)；lonberg等,nature368:856-9(1994)；以及美國專利no.5,545,807；6,713,610；6,673,986；6,162,963；5,545,807；6,300,129；6,255,458；5,877,397；5,874,299和5,545,806。

非限制性示例方法還包括使用噬菌體展示庫制備人抗體。參見，例如hoogenboom等,j.mol.biol.227:381-8(1992)；marks等,j.mol.biol.222:581-97(1991)；以及pct公布no.wo99/10494。

在一些實施方案中，人抗csf1r抗體與具有seqidno:1的序列的多肽結(jié)合。示例性人抗csf1r抗體還包括與本文中描述的抗體競爭結(jié)合csf1r的抗體。因此，在一些實施方案中，提供與選自fab0301、0302和0311以及這些fab的二價(即具有兩個重鏈和兩個輕鏈)抗體型式的抗體競爭結(jié)合csf1r的人抗csf1r抗體。

在一些實施方案中，人抗csf1r抗體包含一個或多個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自iga、igg和igd的同種型。在一些實施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實施方案中，本文中描述的人抗體包含人igg恒定區(qū)。在一些實施方案中，本文中描述的人抗體包含人igg4重鏈恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，本文中描述的人抗體在人igg4恒定區(qū)中包含s241p突變。在一些實施方案中，本文中描述的人抗體包含人igg4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

在一些實施方案中，當希望有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg1重鏈恒定區(qū)或人igg3重鏈恒定區(qū)的人抗csf1r抗體。在一些實施方案中，當希望沒有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg4或igg2重鏈恒定區(qū)的人抗csf1r抗體。

其它示例性抗csf1r抗體

示例性抗csf1r抗體還包括但不限于包含例如本文中描述的一個或多個cdr序列的小鼠、人源化、人、嵌合和工程化抗體。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的重鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的輕鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的重鏈可變區(qū)和本文中描述的輕鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的重鏈cdr1、cdr2和cdr3。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含本文中描述的重鏈cdr1、cdr2和cdr3以及本文中描述的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和0311的抗體的重鏈可變區(qū)。非限制性示例抗csf1r抗體還包括含有選自人源化抗體ab1至ab16的抗體的重鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例抗csf1r抗體包括包含含有選自seqidno:9、11、13和39至45的序列的重鏈可變區(qū)的抗體。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和311的抗體的輕鏈可變區(qū)。非限制性示例抗csf1r抗體還包括含有選自人源化抗體ab1至ab16的抗體的輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例抗csf1r抗體包括包含含有選自seqidno:10、12、14和46至52的序列的輕鏈可變區(qū)的抗體。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和0311的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。非限制性示例抗csf1r抗體還包括含有選自人源化抗體ab1至ab16的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的抗體。非限制性示例抗csf1r抗體包括含有以下重鏈及輕鏈可變區(qū)對的抗體：seqidno:9和10；seqidno:11和12；以及seqidno:13和14；seqidno:39和40；seqidno:41和42；seqidno:43和44；seqidno:45和46；seqidno:47和48；seqidno:49和50；以及seqidno:51和52。非限制性示例抗csf1r抗體還包括含有以下重鏈及輕鏈對的抗體：seqidno:33和34；seqidno:35和36；以及seqidno:37和38。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和0311的抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3。非限制性示例抗csf1r抗體包括含有選自以下序列的重鏈cdr1、cdr2和cdr3組的抗體：seqidno:15、16和17；seqidno:21、22和23；以及seqidno:27、28和29。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和0311的抗體的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。非限制性示例抗csf1r抗體包括含有選自以下序列的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3組的抗體：seqidno:18、19和20；seqidno:24、25和26；以及seqidno:30、31和32。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自fab0301、0302和0311的抗體的重鏈cdr1、cdr2和cdr3以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。

非限制性示例抗csf1r抗體包括含有上表1中所示的重鏈cdr1、cdr2和cdr3和輕鏈cdr1、cdr2和cdr3組的抗體。

其它示例性抗體

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈，其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈，其中所述抗體結(jié)合csf1r。在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含含有與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的重鏈；以及含有與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列的輕鏈；其中所述抗體結(jié)合csf1r。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含至少一個本文中討論的cdr。即，在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含選自本文中討論的重鏈cdr1、本文中討論的重鏈cdr2、本文中討論的重鏈cdr3、本文中討論的輕鏈cdr1、本文中討論的輕鏈cdr2和本文中討論的輕鏈cdr3的至少一個cdr。此外，在一些實施方案中，抗csf1r抗體包含至少一個基于本文中討論的cdr的突變型cdr，其中所述突變性cdr包含相對于本文中討論的cdr的1、2、3或4個氨基酸取代。在一些實施方案中，一個或多個所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對特定的cdr序列選擇一個或多個合適的保守氨基酸取代，其中所述合適的保守氨基酸取代預(yù)計不會顯著地改變包含所述突變型cdr的抗體的結(jié)合性質(zhì)。

示例性抗csf1r抗體還包括與本文中描述的抗體競爭結(jié)合csf1r的抗體。因此，在一些實施方案中，提供與選自fab0301、0302和0311和這些fab的二價(即具有兩個重鏈和兩個輕鏈)抗體型式的抗體競爭結(jié)合csf1r的抗csf1r抗體。

示例性抗體恒定區(qū)

在一些實施方案中，本文中描述的抗體包含一個或多個人恒定區(qū)。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自iga、igg和igd的同種型。在一些實施方案中，人輕鏈恒定區(qū)具有選自κ和λ的同種型。在一些實施方案中，本文中描述的抗體包含人igg恒定區(qū)。在一些實施方案中，本文中描述的抗體包含人igg4重鏈恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，本文中描述的抗體在人igg4恒定區(qū)中包含s241p突變。在一些實施方案中，本文中描述的抗體包含人igg4恒定區(qū)和人κ輕鏈。

如上所述，是否希望有效應(yīng)功能可能取決于計劃應(yīng)用抗體的特定治療方法。因此，在一些實施方案中，當希望有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg1重鏈恒定區(qū)或人igg3重鏈恒定區(qū)的抗csf1r抗體。在一些實施方案中，當希望沒有效應(yīng)功能時，選擇包含人igg4或igg2重鏈恒定區(qū)的抗csf1r抗體。

示例性抗csf1r重鏈可變區(qū)

在一些實施方案中，提供抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)是小鼠可變區(qū)、人可變區(qū)或人源化可變區(qū)。

抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)包含重鏈cdr1、fr2、cdr2、fr3和cdr3。在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)更包含重鏈fr1和/或fr4。非限制性示例重鏈可變區(qū)包括但不限于具有選自seqidno:9、11、13和39至45的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自seqidno:15、21和27的序列的cdr1。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自seqidnos:16、22和28的序列的cdr2。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈可變區(qū)包含含有選自seqidno:17、23和29的序列的cdr3。

非限制性示例重鏈可變區(qū)包括但不限于含有選自以下序列的cdr1、cdr2和cdr3組的重鏈可變區(qū)：seqidno:15、16和17；seqidno:21、22和23；以及seqidno:27、28和29。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈包含與選自seqidno:9、11、13和39至45的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列，其中所述重鏈與輕鏈一起能夠形成結(jié)合csf1r的抗體。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈包含至少一個本文中討論的cdr。即，在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈包含選自本文中討論的重鏈cdr1、本文中討論的重鏈cdr2和本文中討論的重鏈cdr3的至少一個cdr。此外，在一些實施方案中，抗csf1r抗體重鏈包含至少一個基于本文中討論的cdr的突變型cdr，其中所述突變型cdr包含相對于本文中討論的cdr的1、2、3或4個氨基酸取代。在一些實施方案中，一個或多個所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對特定的cdr序列選擇一個或多個合適的保守氨基酸取代，其中所述合適的保守氨基酸取代預(yù)計不會顯著地改變包含所述突變型cdr的重鏈的結(jié)合性質(zhì)。

在一些實施方案中，重鏈包含重鏈恒定區(qū)。在一些實施方案中，重鏈包含人重鏈恒定區(qū)。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)具有選自iga、igg和igd的同種型。在一些實施方案中，人重鏈恒定區(qū)是igg恒定區(qū)。在一些實施方案中，重鏈包含人igg4重鏈恒定區(qū)。在這些實施方案的一些中，人igg4重鏈恒定區(qū)包含s241p突變。

在一些實施方案中，當希望有效應(yīng)功能時，重鏈包含人igg1或igg3重鏈恒定區(qū)。在一些實施方案中，當不太希望有效應(yīng)功能時，重鏈包含人igg4或igg2重鏈恒定區(qū)。

示例性抗csf1r輕鏈可變區(qū)

在一些實施方案中，提供抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)。在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)是小鼠可變區(qū)、人可變區(qū)或人源化可變區(qū)。

抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)包含輕鏈cdr1、fr2、cdr2、fr3和cdr3。在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)更包含輕鏈fr1和/或fr4。非限制性示例輕鏈可變區(qū)包括具有選自seqidno:10、12、14和46至52的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自seqidno:18、24和30的序列的cdr1。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自seqidno:19、25和31的序列的cdr2。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈可變區(qū)包含含有選自seqidno:20、26和32的序列的cdr3。

非限制性示例輕鏈可變區(qū)包括但不限于含有選自以下序列的cdr1、cdr2和cdr3組的輕鏈可變區(qū)：seqidno:18、19和20；seqidno:24、25和26；以及seqidno:30、31和32。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈包含與選自seqidno:10、12、14和46至52的序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的可變區(qū)序列，其中所述輕鏈與重鏈一起能夠形成結(jié)合csf1r的抗體。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈包含至少一個本文中討論的cdr。即，在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈包含選自本文中討論的輕鏈cdr1、本文中討論的輕鏈cdr2和本文中討論的輕鏈cdr3的至少一個cdr。此外，在一些實施方案中，抗csf1r抗體輕鏈包含至少一個基于本文中討論的cdr的突變型cdr，其中所述突變型cdr包含相對于本文中討論的cdr的1、2、3或4個氨基酸取代。在一些實施方案中，一個或多個所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對特定的cdr序列選擇一個或多個合適的保守氨基酸取代，其中所述合適的保守氨基酸取代預(yù)計不會顯著地改變包含所述突變型cdr的輕鏈的結(jié)合性質(zhì)。

在一些實施方案中，輕鏈包含人輕鏈恒定區(qū)。在一些實施方案中，人輕鏈恒定區(qū)選自人κ和人λ輕鏈恒定區(qū)。

其它示例性csf1r結(jié)合分子

在一些實施方案中，提供結(jié)合csf1r的其它分子。這些分子包括但不限于非典型構(gòu)架，如抗運載蛋白(anti-calins)、粘附素(adnectins)、錨蛋白(ankyrin)重復(fù)序列等。參見，例如hosse等,prot.sci.15:14(2006)；fiedler,m.和skerra,a.,“non-antibodyscaffolds,”在handbookoftherapeuticantibodiesdubel,s.編著，wiley-vch,weinheim,germany,2007中的第467-499頁。

抗csf1r抗體的示例性性質(zhì)

在一些實施方案中，具有上述結(jié)構(gòu)的抗體以小于1nm的結(jié)合親和力(kd)與csf1r結(jié)合，阻斷csf1和/或il34與csf1r的結(jié)合，并且抑制csf1和/或il34誘導的csf1r磷酸化。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體與csf1r的胞外結(jié)構(gòu)域(csf1r-ecd)結(jié)合。在一些實施方案中，抗csf1r抗體對csf1r的結(jié)合親和力(kd)小于1nm、小于0.5nm、小于0.1nm或小于0.05nm。在一些實施方案中，抗csf1r抗體具有介于0.01和1nm之間、介于0.01和0.5nm之間、介于0.01和0.1nm之間、介于0.01和0.05nm之間或介于0.02和0.05nm之間的kd。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體阻斷配體與csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，抗csf1r抗體阻斷csf1與csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，抗csf1r抗體阻斷il34與csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，抗csf1r抗體同時阻斷csf1和il34與csf1r結(jié)合。在一些實施方案中，阻斷配體結(jié)合的抗體與csf1r的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。當使用實施例7中描述的測定，抗體使配體與csf1r的可檢測的結(jié)合的量降低至少50％時，該抗體被認為“阻斷配體與csf1r結(jié)合”。在一些實施方案中，使用實施例7中描述的測定，抗體使配體與csf1r的可檢測的結(jié)合的量降低至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在這些實施方案的一些中，據(jù)稱抗體阻斷配體結(jié)合的至少50％、至少60％、至少70％等。

在一些實施方案中，抗csf1r抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化。在一些實施方案中，抗csf1r抗體抑制csf1誘導的csf1r磷酸化。在一些實施方案中，抗csf1r抗體抑制il34誘導的csf1r磷酸化。在一些實施方案中，抗csf1r抗體同時抑制csf1誘導和il34誘導的csf1r磷酸化。當使用實施例6中描述的測定，抗體使可檢測的配體誘導的csf1r磷酸化的量降低至少50％時，該抗體被認為“抑制配體誘導的csf1r磷酸化”。在一些實施方案中，使用實施例6中描述的測定，抗體使可檢測的配體誘導的csf1r磷酸化的量降低至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在這些實施方案的一些中，據(jù)稱抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化的至少50％、至少60％、至少70％等。

在一些實施方案中，抗體抑制csf1和/或il34存在下的單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)。當使用實施例10中描述的測定，抗體使csf1和/或il34存在下的單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)的量降低至少50％時，該抗體被認為“抑制單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)”。在一些實施方案中，使用實施例10中描述的測定，抗體使csf1和/或il34存在下的單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)的量降低至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在這些實施方案的一些中，抗體據(jù)稱抑制單核細胞增殖和/或存活反應(yīng)的至少50％、至少60％、至少70％等。

示例性抗體偶聯(lián)物

在一些實施方案中，抗csf1r抗體與標記物和/或細胞毒性劑偶聯(lián)。本文中使用的標記物是有助于檢測抗體和/或有助于檢測抗體所結(jié)合的分子的部分。非限制性示例標記物包括但不限于放射性同位素、熒光基團、酶基團、化學發(fā)光基團、生物素、表位標簽、金屬結(jié)合標簽等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)計劃的應(yīng)用選擇合適的標記物。

本文中使用的細胞毒性劑是降低一種或多種細胞的增殖能力的部分。當細胞增殖的可能性降低時，例如，因為細胞經(jīng)歷細胞凋亡或以其它方式死亡，細胞未能通過細胞周期和/或未能分裂、細胞分化等，細胞就具有降低的增殖能力。非限制性示例細胞毒性劑包括但不限于放射性同位素、毒素和化學治療劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)計劃的應(yīng)用選擇合適的細胞毒性劑。

在一些實施方案中，標記物和/或細胞毒性劑在體外使用化學方法與抗體偶聯(lián)。偶聯(lián)的非限制性示例化學方法在本領(lǐng)域是已知的，并且包括可從例如thermoscientificlifescienceresearchproduces(先前為pierce；rockford,il)、prozyme(hayward,ca)、sacriantibodyservices(calgary,canada)、abdserotec(raleigh,nc)等購得的服務(wù)、方法和/或試劑。在一些實施方案中，當標記物和/或細胞毒性劑是多肽時，標記物和/或細胞毒性劑可以與至少一個抗體鏈由同一表達載體表達，以產(chǎn)生包含與抗體鏈融合的標記物和/或細胞毒性劑的多肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)計劃的應(yīng)用選擇用于將標記物和/或細胞毒性劑與抗體偶聯(lián)的合適的方法。

示例性前導序列

為了大量地表達和分泌一些分泌型蛋白質(zhì)，可能需要來自異源蛋白質(zhì)的前導序列。在一些實施方案中，前導序列選自seqidno:3和4，它們分別是輕鏈和重鏈前導序列。在一些實施方案中，使用異源前導序列可能是有利的，原因在于在分泌過程中在er中除去前導序列時所得成熟多肽可以保持不變。為了表達和分泌一些蛋白質(zhì)，可能需要添加異源前導序列。

某些示例性前導序列序列描述于例如由新加坡國立大學(nationaluniversityofsingapore)的生物化學系維護的在線前導序列數(shù)據(jù)庫(onlineleadersequencedatabase)中。參見choo等，bmcbioinformatics,6:249(2005)；以及pct公布no.wo2006/081430。

編碼抗csf1r抗體的核酸分子

提供包含編碼抗csf1r抗體的一個或多個鏈的多核苷酸的核酸分子。在一些實施方案中，核酸分子包含編碼抗csf1r抗體的重鏈或輕鏈的多核苷酸。在一些實施方案中，核酸分子同時包含編碼抗csf1r抗體的重鏈的多核苷酸和編碼抗csf1r抗體的輕鏈的多核苷酸。在一些實施方案中，第一核酸分子包含編碼重鏈的第一多核苷酸并且第二核酸分子包含編碼輕鏈的第二多核苷酸。

在這些實施方案的一些中，重鏈和輕鏈是由一個核酸分子表達或由兩個單獨的核酸分子表達為兩個單獨的多肽。在一些實施方案中，如當抗體是scfv時，單個多核苷酸編碼同時包含連接在一起的重鏈和輕鏈的單個多肽。

在一些實施方案中，編碼抗csf1r抗體的重鏈或輕鏈的多核苷酸包含編碼前導序列的核苷酸序列，所述前導序列在被翻譯時，位于重鏈或輕鏈的n端。如上所述，前導序列可以是天然重鏈或輕鏈前導序列，或者可以是另一異源前導序列。

核酸分子可以使用本領(lǐng)域慣用的重組dna技術(shù)來構(gòu)建。在一些實施方案中，核酸分子是適于在所選擇的宿主細胞中表達的表達載體。

抗csf1r抗體表達和制備

載體

提供包含編碼抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈的多核苷酸的載體。還提供包含編碼抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈的多核苷酸的載體。這些載體包括但不限于dna載體、噬菌體載體、病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等。在一些實施方案中，載體包含編碼重鏈的第一多核苷酸序列和編碼輕鏈的第二多核苷酸序列。在一些實施方案中，重鏈和輕鏈由載體表達為兩個單獨的多肽。在一些實施方案中，重鏈和輕鏈被表達為單個多肽的一部分，例如，當抗體是scfv時。

在一些實施方案中，第一載體包含編碼重鏈的第一多核苷酸并且第二載體包含編碼輕鏈的第二多核苷酸。在一些實施方案中，第一載體和第二載體以相似的量(如相似的摩爾量或相似的質(zhì)量量)轉(zhuǎn)染到宿主細胞中。在一些實施方案中，介于5:1和1:5之間的摩爾或質(zhì)量比的第一載體和第二載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞中。在一些實施方案中，使用介于1:1和1:5之間的質(zhì)量比的編碼重鏈的載體和編碼輕鏈的載體。在一些實施方案中，使用1:2的質(zhì)量比的編碼重鏈的載體和編碼輕鏈的載體。

在一些實施方案中，選擇經(jīng)過優(yōu)化以供在cho或cho來源的細胞中或在nso細胞中表達多肽的載體。示例性的這些載體描述于例如runningdeer等,biotechnol.prog.20:880-889(2004)中。

在一些實施方案中，選擇載體用于在動物(包括人)中體內(nèi)表達抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈。在這些實施方案的一些中，多肽的表達是受到以組織特異性方式起作用的啟動子的控制。例如，肝臟特異性啟動子描述于例如pct公布no.wo2006/076288號中。

宿主細胞

在各種實施方案中，抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈可以在原核細胞(如細菌細胞)中表達；或在真核細胞(如真菌細胞(如酵母菌)、植物細胞、昆蟲細胞和哺乳動物細胞)中表達。該表達可以例如根據(jù)本領(lǐng)域已知的程序進行?？梢杂糜诒磉_多肽的示例性真核細胞包括但不限于cos細胞(包括cos7細胞)；293細胞(包括293-6e細胞)；cho細胞(包括cho-s和dg44細胞)；細胞(crucell)；以及nso細胞。在一些實施方案中，抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈可以在酵母菌中表達。參見，例如美國公布no.us2006/0270045a1。在一些實施方案中，基于對抗csf1r重鏈和/或抗csf1r輕鏈進行希望的翻譯后修飾的能力選擇特定的真核宿主細胞。例如，在一些實施方案中，cho細胞產(chǎn)生的多肽比在293細胞中產(chǎn)生的相同多肽具有更高水平的唾液酸化。

向希望的宿主細胞中引入一種或多種核酸可以通過任何方法實現(xiàn)，包括但不限于磷酸鈣轉(zhuǎn)染、deae-葡聚糖介導的轉(zhuǎn)染、陽離子脂質(zhì)介導的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導、感染等。非限制性示例方法描述于例如sambrook等,molecularcloning,alaboratorymanual,第三版，coldspringharborlaboratorypress(2001)中。根據(jù)任何合適的方法，核酸可以短暫地或穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染于希望的宿主細胞中。

在一些實施方案中，根據(jù)任何合適的方法，可以在已經(jīng)工程化或轉(zhuǎn)染有編碼多肽的一種或多種核酸分子的動物中體內(nèi)制備一種或多種多肽。

抗csf1r抗體的純化

抗csf1r抗體可以通過任何合適的方法來純化。這些方法包括但不限于使用親和基質(zhì)或疏水性相互作用色譜法。合適的親和配體包括csf1recd和結(jié)合抗體恒定區(qū)的配體。例如，蛋白質(zhì)a、蛋白質(zhì)g、蛋白質(zhì)a/g或抗體親和柱可以用于結(jié)合恒定區(qū)和純化抗csf1r抗體。疏水性相互作用色譜法例如丁基或苯基柱也可以適于純化一些多肽。純化多肽的許多方法在本領(lǐng)域是已知的。

抗csf1r抗體的無細胞制備

在一些實施方案中，抗csf1r抗體是在無細胞系統(tǒng)中制備。非限制性示例無細胞系統(tǒng)描述于例如sitaraman等,methodsmol.biol.498:229-44(2009)；spirin,trendsbiotechnol.22:538-45(2004)；endo等,biotechnol.adv.21:695-713(2003)中。

治療組合物和方法

使用抗csf1r抗體治療疾病的方法

提供用于在人或動物的治療方法中使用的本發(fā)明的抗體和包含本發(fā)明抗體的組合物。還提供包括施用抗csr1r抗體的治療疾病的方法。可以用抗csf1r抗體治療的非限制性示例疾病包括但不限于ra、ms、癌癥、轉(zhuǎn)移誘導的溶骨性骨質(zhì)缺失、溶骨病癥和高血鈣誘導的骨質(zhì)缺失。

在一些實施方案中，提供包括施用抗csf1r抗體的治療炎癥性病狀的方法。在一些實施方案中，炎癥性病狀選自牛皮癬、sle(狼瘡)、copd、特應(yīng)性皮炎和動脈粥樣硬化、巨噬細胞活化綜合征和組織細胞增多癥x。

在一些實施方案中，提供包括施用抗csf1r抗體的治療炎癥性病狀的方法，其中所述炎癥性病狀選自：增生性血管疾病、急性呼吸窘迫綜合征、細胞因子介導的毒性、白細胞介素-2毒性、闌尾炎、消化性、胃和十二指腸潰瘍、腹膜炎、胰腺炎、潰瘍性、偽膜性、急性和缺血性結(jié)腸炎、憩室炎、會厭炎、失弛緩癥、膽管炎、膽囊炎、肝炎、炎癥性腸病、克羅恩氏病(crohn'sdisease)、腸炎、惠普爾氏病(whipple'sdisease)、哮喘、過敏癥、過敏性休克、免疫復(fù)合物病、器官缺血、再灌注損傷、器官壞死、枯草熱、膿毒癥、敗血病、內(nèi)毒素休克、惡病質(zhì)、高熱、嗜酸粒細胞性肉芽腫、肉芽腫病、結(jié)節(jié)病、膿毒性流產(chǎn)、附睪炎、陰道炎、前列腺炎、尿道炎、支氣管炎、肺氣腫、鼻炎、囊性纖維化、肺炎、肺泡炎、細支氣管炎、咽炎、胸膜炎、鼻竇炎、流感、呼吸道合胞病毒感染、皰疹感染、hiv感染、乙肝病毒感染、丙肝病毒感染、散播性菌血癥、登革熱(denguefever)、念珠菌病、瘧疾、絲蟲病、阿米巴病、包蟲囊腫、燒傷、皮炎、皮肌炎、曬傷、蕁麻疹、疣、風疹塊、血管炎、脈管炎、心內(nèi)膜炎、動脈炎、動脈粥樣硬化、血栓性靜脈炎、心包炎、心肌炎、心肌缺血、結(jié)節(jié)性動脈周圍炎、風濕熱、阿爾茨海默氏病(alzheimer’sdisease)、乳糜瀉、充血性心力衰竭、腦膜炎、腦炎、腦梗塞、腦栓塞、格林-巴利綜合征(guillain-barresyndrome)、神經(jīng)炎、神經(jīng)痛、脊髓損傷、麻痹、葡萄膜炎、關(guān)節(jié)炎性皮疹、關(guān)節(jié)痛、骨髓炎、筋膜炎、佩吉特氏病(paget’sdisease)、痛風、牙周病、滑膜炎、重癥肌無力、甲狀腺炎、全身性紅斑狼瘡、古德帕斯丘氏綜合征(goodpasture’ssyndrome)、貝赫切特氏綜合征(behcets’ssyndrome)、同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、強直性脊柱炎、伯格氏病(berger’sdisease)、1型糖尿病、2型糖尿病、伯格氏病、瑞特氏綜合征(retier’ssyndrome)和霍奇金病，或在治療與這些病狀有關(guān)的炎癥中。

在一些實施方案中，提供包括施用抗csf1r抗體的治療癌癥的方法。在一些實施方案中，所述癌癥是分泌csf1的癌癥。在一些實施方案中，所述癌癥選自乳癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、腎癌、食道癌、鱗狀細胞癌、葡萄膜黑色素瘤、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌、子宮頸癌和卵巢癌的一種或多種癌癥。在一些實施方案中，抗csf1r抗體可用于治療選自肺癌、結(jié)腸直腸癌、腦癌、胰腺癌、頭頸癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金病、多發(fā)性骨髓瘤、黑色素瘤、星形細胞瘤、胃癌和肺腺癌的一種或多種癌癥。

施用途徑和載劑

在各種實施方案中，抗csf1r抗體可以通過各種途徑體內(nèi)施用，包括但不限于口服、動脈內(nèi)、腸胃外、鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、心臟內(nèi)、心室內(nèi)、氣管內(nèi)、口腔、直腸、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、局部、透皮和鞘內(nèi)施用，或另外通過植入或吸入施用。可以將主題組合物配制成固體、半固體、液體或氣體形式的制劑；包括但不限于片劑、膠囊、散劑、顆粒、軟膏劑、溶液、栓劑、灌腸劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑?？梢詫⒕幋a抗csf1r抗體的核酸分子涂在金微粒上并且通過如在文獻(參見，例如tang等,nature356:152-154(1992))中描述的粒子轟擊裝置或“基因槍”皮內(nèi)遞送。適當?shù)闹苿┖褪┯猛緩娇梢愿鶕?jù)計劃的應(yīng)用進行選擇。

在各種實施方案中，包含抗csf1r抗體的組合物以具有多種可藥用的載劑的制劑提供(參見，例如gennaro,remington:thescienceandpracticeofpharmacywithfactsandcomparisons:drugfactsplus,第20版,(2003)；ansel等,pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems,第7版,lippencottwilliamsandwilkins(2004)；kibbe等,handbookofpharmaceuticalexcipients,第3版,pharmaceuticalpress(2000))。有多種可藥用的載劑(其包括媒劑、佐劑和稀釋劑)可用。此外，多種可藥用的輔助物質(zhì)如ph值調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑等也是可用的。非限制性示例載劑包括鹽水、緩沖鹽水、右旋糖、水、甘油、乙醇和其組合。

在各種實施方案中，包含抗csf1r抗體的組合物可以通過將其溶解、懸浮或乳化于水性或非水性溶劑(如植物油或其它油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯或丙二醇)中；并且必要時可同常規(guī)添加劑如增溶劑、等滲劑、助懸劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑一起，來配制用于注射(包括皮下施用)。在各種實施方案中，組合物可以例如使用加壓的可接受的推進劑如二氯二氟甲烷、丙烷、氮氣等配制用于吸入。在各種實施方案中，也可以將組合物配制成緩釋微囊，如用生物可降解或非生物可降解聚合物配制。非限制性示例生物可降解制劑包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。非限制性示例非生物可降解制劑包括聚甘油脂肪酸酯。制備這些制劑的某些方法描述于例如ep1125584a1中。

還提供包含一個或多個容器的藥物包裝和試劑盒，所述容器各自含有一種或多種劑量的抗csf1r抗體。在一些實施方案中，提供單位劑量，其中所述單位劑量含有預(yù)定量的包含抗csf1r抗體的組合物(有或沒有一種或多種其它藥劑)。在一些實施方案中，該種單位劑量在用于注射的單次使用預(yù)裝填注射器中提供。在各種實施方案中，單位劑量中所含的組合物可以含有鹽水、蔗糖等；緩沖劑如磷酸鹽等；和/或配制成處于穩(wěn)定和有效的ph值范圍內(nèi)?；蛘撸谝恍嵤┓桨钢?，組合物可以作為凍干粉末提供，所述凍干粉末可以在添加適當?shù)囊后w(例如無菌水)時復(fù)原。在一些實施方案中，組合物包含抑制蛋白質(zhì)聚集的一種或多種物質(zhì)，包括但不限于蔗糖和精氨酸。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物包含肝素和/或蛋白多糖。

藥物組合物以有效治療或預(yù)防特定的適應(yīng)癥的量施用。治療有效量通常取決于所治療的受試者的體重、他或她的身體或健康狀況、待治療的病狀的程度或所治療的受試者的年齡。一般來講，抗csf1r抗體可以以每劑每公斤體重約10μg至每公斤體重約100mg范圍內(nèi)的量施用。在一些實施方案中，抗csf1r抗體可以以每劑每公斤體重約50μg至每公斤體重約5mg范圍內(nèi)的量施用。在一些實施方案中，抗csf1r抗體可以以每劑每公斤體重約100μg至每公斤體重約10mg范圍內(nèi)的量施用。在一些實施方案中，抗csf1r抗體可以以每劑每公斤體重約100μg至每公斤體重約20mg范圍內(nèi)的量施用。在一些實施方案中，抗csf1r抗體可以以每劑每公斤體重約0.5mg至每公斤體重約20mg范圍內(nèi)的量施用。

抗csf1r抗體組合物可以按需要對受試者施用。施用頻率可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員如主治醫(yī)師根據(jù)以下考慮因素來確定：所治療的病狀、所治療的受試者的年齡、所治療的病狀的嚴重程度、所治療的受試者的總體健康狀態(tài)等。在一些實施方案中，對受試者施用一次或多次有效劑量的抗csf1r抗體。在各種實施方案中，對受試者一月一次、一月一次以上(例如兩個月一次或三個月一次)施用有效劑量的抗csf1r抗體。在其他實施方案中，少于一月一次(例如兩周一次或每周一次)施用有效劑量的抗csf1r抗體。對受試者至少一次施用有效劑量的抗csf1r抗體。在一些實施方案中，可以多次施用有效劑量的抗csf1r抗體，包括持續(xù)至少一個月、至少六個月或至少一年的時期。

組合療法

抗csf1r抗體可以單獨施用或與其它治療方式一起施用。其可以在其它治療方式(例如手術(shù)、化學療法、放射療法或施用生物劑，如另一種治療性抗體)之前、基本上同時或之后提供。對于類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療，抗csf1r抗體可以與其它治療劑一起施用，這些治療劑例如有甲氨蝶呤、抗tnf劑如英利昔單抗(remicade)、阿達木單抗(humira)、戈利木單抗(simponi)和恩博(enbrel)；糖皮質(zhì)激素如潑尼松(prednisone)；來氟米特(leflunomide)；硫唑嘌呤(azothioprine)；jak抑制劑如cp590690；syk抑制劑如r788；抗il-6抗體；抗il-6r抗體；抗cd-20抗體；抗cd19抗體；抗gm-csf抗體；以及抗gm-csf-r抗體。對于多發(fā)性硬化癥的治療，抗csf1r抗體可以與其它治療劑一起施用，這些治療劑例如有干擾素α；干擾素β；潑尼松；抗α4整聯(lián)蛋白抗體如那他珠單抗(tysabri)；抗cd20抗體如美羅華(rituxan)；fty720(芬戈莫德(fingolimod))；以及克拉屈濱(cladribine)(leustatin)。

實施例

僅希望以下討論的實施例是本發(fā)明的示例并且無論如何不應(yīng)該認為對本發(fā)明構(gòu)成限制。不希望所述實施例表示以下實驗是進行的全部或唯一的實驗。雖然已經(jīng)努力確保所使用的數(shù)值(例如量、溫度等)的準確性，但是應(yīng)該容許有一些實驗誤差和偏差。除非另外指出，否則份數(shù)是重量份，分子量是重量平均分子量，溫度是攝氏度并且壓力是處于大氣壓或接近大氣壓。

實施例1：結(jié)合csf1r胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)的fab的選擇

將小鼠用人csf1r胞外結(jié)構(gòu)域fc融合體，hcsf1recd.506-fc(seqidno:6)免疫。從經(jīng)過免疫的小鼠分離脾臟，并且從脾細胞建立fab噬菌體展示庫。選擇表達fab的噬菌體用于與人csf1recd結(jié)合。從細菌中表達并純化來自陽性結(jié)合噬菌體的fab。選擇總共1056個fab克隆用于進一步分析。

針對結(jié)合人csf1recd、阻斷人csf1與人csf1recd結(jié)合以及阻斷人il34與人csf1recd結(jié)合的能力篩選fab。隨后對從該篩選選擇出的fab進行序列分析和集簇并且選擇某些獨特的fab。

針對結(jié)合人csf1recd的能力、結(jié)合食蟹猴csf1recd的能力以及結(jié)合小鼠csf1recd的能力進一步分析所述獨特的fab。還針對在csf1或il34存在下阻斷人csf1結(jié)合人csf1recd的能力和阻斷人il34結(jié)合人csf1recd的能力以及抑制配體誘導的csf1r磷酸化的能力分析fab。(數(shù)據(jù)未展示)。

實施例2：重構(gòu)(reformatting)抗csf1rfab以制備嵌合抗體

fab表征之后，選擇十一個fab用于重構(gòu)成嵌合抗體。各fab重構(gòu)成包含具有s241p突變的人igg4重鏈恒定區(qū)和人κ輕鏈恒定區(qū)的嵌合抗體。簡單地說，fabvh區(qū)被克隆到載體ptt5(biotechnologyresearchinstitute,montreal,canada；以及nationalresearchresearchcouncilofcanada,ottawa,canada)中并且由載體ptt5表達，所述載體ptt5經(jīng)修飾成含有小鼠igh前導序列(seqidno:4)和具有s241p突變的人igg4重鏈恒定區(qū)(seqidno:94)。fabvl區(qū)被克隆到載體ptt5中并且從載體ptt5中表達，所述載體ptt5經(jīng)修飾成含有小鼠igκ前導序列(seqidno:3)和人igκ輕鏈恒定區(qū)(seqidno:95)。以不導致將非抗體來源的氨基酸序列引入最終蛋白質(zhì)中的方式插入fabv區(qū)。

實施例3：嵌合抗體的表達和表征

基本上如以下實施例5中所描述，進行嵌合抗體的瞬時表達和純化。

針對與人、食蟹猴和小鼠csf1recd的結(jié)合對所述11個嵌合抗體進行測定。還針對在csf1或il34存在下阻斷人csf1結(jié)合人csf1recd的能力、阻斷人il34結(jié)合人csf1recd的能力、阻斷人csf1結(jié)合食蟹猴csf1recd的能力以及抑制配體誘導的csf1r磷酸化的能力對嵌合抗體進行測定。針對與細胞表面上的csf1r的結(jié)合進一步對嵌合抗體進行測定。最后，對嵌合抗體進行測定以確認它們在沒有配體存在下不誘導csf1r磷酸化。(數(shù)據(jù)未展示)。

實施例4：抗csf1r抗體的人源化

根據(jù)上述分析，選擇嵌合抗csf1r抗體0301、0302和0311用于人源化。通過改變重鏈及輕鏈可變區(qū)的框架區(qū)中的某些氨基酸殘基將抗體人源化。用于人源化的標準如先前例如在美國公布no.us2009/0136500中所描述。

對于cab0301，設(shè)計了三個人源化重鏈可變區(qū)和兩個人源化輕鏈可變區(qū)，總共六個人源化抗體，ab1至ab6。對于cab0302，設(shè)計了兩個人源化重鏈可變區(qū)和三個人源化輕鏈可變區(qū)，總共六個人源化抗體，ab7至ab12。對于cab0311，設(shè)計了兩個人源化重鏈可變區(qū)和兩個人源化輕鏈可變區(qū)，總共四個人源化抗體，ab13至ab16。

人源化重鏈可變區(qū)和人源化輕鏈可變區(qū)各自的序列與親本嵌合抗體可變區(qū)的序列和人受體可變框架區(qū)的序列的比對在圖1(重鏈)和2(輕鏈)中展示。人源化可變區(qū)序列中相對于人受體可變框架區(qū)的變化被框出。各可變區(qū)的各cdr在加方框的區(qū)域中展示，并且在加方框的序列上方標記為“cdr”。

以下表8展示抗體ab1至ab16的人源化重鏈和人源化輕鏈的完整序列。這些抗體各自的人源化重鏈和人源化輕鏈的名稱和seqidno:在表2中展示。

表2：ab1至ab16的人源化重鏈和輕鏈

實施例5：結(jié)合人和食蟹猴csf1recd而不結(jié)合小鼠csf1recd的人源化抗csf1r抗體

如下在cho細胞中瞬時表達16個人源化抗體。使用dna:pei比為1:5的聚亞乙基亞胺(pei)以1重鏈質(zhì)粒與2輕鏈質(zhì)粒的質(zhì)量比將cho-3e7細胞用個別重鏈及輕鏈表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。每次轉(zhuǎn)染使用的總dna是每毫升細胞1.5μg。

使用hitrap蛋白質(zhì)ahp柱(gehealthcare)從經(jīng)過轉(zhuǎn)染的細胞上清液中純化人源化抗體，隨后使用苯基hp柱(gehealthcare)進一步純化。將含有抗體的上清液裝載到預(yù)先用pbs/0.5mnacl平衡的hitrap蛋白質(zhì)ahp柱上。用10柱體積pbs/0.5mnacl洗滌裝載抗體的柱，并且用混合的0.1m甘氨酸(ph2.7)/0.5mnacl線性階段梯度直接洗脫至100μl的1mtris緩沖液(ph8.0)中。將含有抗體的洗脫液針對pbs進行透析，隨后添加2.4m(nh4)2so4(sigma)以獲得等于10mm磷酸鉀(ph7.0)/1.2m(nh4)2so4的電導率。隨后將抗體裝載到預(yù)先用10mm磷酸鉀(ph7.0)/1.2m(nh4)2so4平衡的1ml苯基hp柱(gehealthcare)上。用15柱體積10mm磷酸鉀(ph7.0)/1.2m(nh4)2so4洗滌裝載抗體的柱，并且用20柱體積10mm磷酸鉀(ph7.0)梯度洗脫。匯集含有抗體的洗脫份并且針對pbs進行透析。

如下測定人源化抗體以及其親本嵌合抗體(cab)與人、食蟹猴和小鼠csf1recd的結(jié)合。

人csf1r結(jié)合活性

用含1μg/ml重組hcsf1recd.506-fc(seqidno:6；fiveprimetherapeutics)或人m-csfrfc嵌合體(r&dsystems)的pbs涂布96孔透明底部elisa板過夜。次日早晨，用含0.05％tween20的pbs(pbst)將孔洗滌四次并且用blocker-blotto(pierce)阻斷。將50μl人源化抗體或親本嵌合抗體的0.5x連續(xù)稀釋液(從2000ng/ml開始，在blocker-blotto中1:1稀釋)添加至經(jīng)過csf1r涂布的孔中。在室溫(rt)下孵育90分鐘之后，用pbst將孔洗滌四次，并且向各孔中添加過氧化酶偶聯(lián)的山羊抗人κ輕鏈抗體(sigma)于blocker-blotto中的1:5000稀釋液。在室溫下孵育60分鐘之后，用pbst將孔洗滌四次，并且向各孔中添加50μl鄰苯二胺二鹽酸鹽過氧化酶底物(sigma)。在室溫下孵育30分鐘之后，直接在spectramaxplus分光光度計上用softmaxpro軟件(moleculardevices)讀取各孔的a450值。

該實驗的結(jié)果在圖3中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，所有人源化抗體都與人csf1recd結(jié)合。

食蟹猴csf1r結(jié)合曲線

除了透明底部elisa板的孔用2μg/ml重組cynocsf1recd-fc(fiveprimetherapeutics，seqidno:8，但是沒有19個氨基酸的前導序列)涂布過夜之外，如上對于人csf1r所述測定各人源化抗體與食蟹猴csf1recd結(jié)合的結(jié)合曲線。

該實驗的結(jié)果在圖4中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，所有人源化抗體都與食蟹猴csf1recd結(jié)合。

小鼠csf1r結(jié)合曲線

除了透明底部elisa板的孔用2μg/ml重組mcsf1recd-fc(fiveprimetherapeutics，seqidno:93)涂布過夜之外，如上對于人csf1r所述測定各人源化抗體與小鼠csf1recd結(jié)合的結(jié)合曲線。

該實驗的結(jié)果在圖5中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，人源化抗體或親本嵌合抗體都沒有檢測到與小鼠csf1recd結(jié)合。

ec50的計算

表3展示使用graphpadprism軟件(graphpadsoftware)的非線性回歸(曲線-擬合)分析算法計算的各人源化抗體與人csf1recd和食蟹猴csf1recd結(jié)合的ec50。因為沒有檢測到嵌合抗體與小鼠csf1recd的結(jié)合，所以不能從該數(shù)據(jù)計算出ec50。表3還包括對于親本嵌合抗體計算的ec50。

表3：人源化抗csf1r抗體的結(jié)合活性

實施例6：人源化抗csf1r抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化

csf1r在配體csf1或il34存在下磷酸化。如下測試人源化抗體以及其親本嵌合抗體(cab)抑制由任一配體誘導的csf1r磷酸化的能力。

抑制csf1誘導的磷酸化

將經(jīng)過csf1r(seqidno:2)轉(zhuǎn)染的cho細胞與各人源化抗體或親本嵌合抗體的連續(xù)稀釋液(從8μg/ml開始)在冰上一起孵育60分鐘，隨后向所述細胞中添加3.3nm人csf1(m-csf，r&dsystems)。(對于人源化抗體的0301系列，使用從2μg/ml人源化抗體和親本嵌合抗體開始的連續(xù)稀釋液。)將細胞在37℃下孵育3分鐘，并且隨后通過添加1/10x體積的10x細胞裂解緩沖液(cellsignalingtechnology)進行裂解。按照制造商的說明，使用人磷酸化m-csfrelisa試劑盒(r&dsystems)對細胞裂解物中磷酸化csf1r的量進行定量。

該實驗的結(jié)果在圖6小圖a至圖6小圖c中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，所有人源化抗體均能夠抑制人csf1誘導的人csf1recd的磷酸化。

抑制il34誘導的磷酸化

將經(jīng)過csf1r(seqidno:2)轉(zhuǎn)染的cho細胞與0.002至8μg/ml的各人源化抗體或親本嵌合抗體在冰上一起孵育60分鐘，隨后向所述細胞中添加3.3nm人il34(fiveprimetherapeutics；seqidno:68)。將細胞在37℃下孵育3分鐘，并且隨后通過添加1/10x體積的10x細胞裂解緩沖液(cellsignalingtechnology)進行裂解。按照制造商的說明，使用人磷酸化m-csfrelisa試劑盒(r&dsystems)對細胞裂解物中磷酸化csf1r的量進行定量。

該實驗的結(jié)果在圖7小圖a至圖7小圖c中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，所有人源化抗體均能夠抑制人il34誘導的人csf1r的磷酸化。

實施例7：人源化抗csf1r抗體阻斷人csf1和人il34與人和食蟹猴csf1r的結(jié)合

人csf1/csf1r阻斷活性

如下測試人源化抗體以及親本嵌合抗體(cab)阻斷人csf1與人和食蟹猴csf1recd結(jié)合的能力。

使用nh2-生物素標記試劑盒(dojindomoleculartechnologies)將重組人csf1(m-csf；r&dsystems)生物素化。按照制造商的說明，將100μl含1μg/ml生物素化csf1的pbst/0.1％bsa添加至預(yù)先用superblock阻斷緩沖液(pierce)阻斷的reacti-bind抗生蛋白鏈菌素涂布的板(pierce)的孔中。將50μl人源化抗體或親本嵌合抗體的0.5x連續(xù)稀釋液(從2000ng/ml開始)與含50ng/mlhcsf1recd.506-fc(seqidno:6；fiveprimetherapeutics)或50ng/mlcynocsf1recd-fc(fiveprimetherapeutics，seqidno:8，但是沒有19個氨基酸的前導序列)的100μlpbst/0.1％bsa一起在室溫下孵育90分鐘，隨后將所述混合物轉(zhuǎn)移至配體涂布的板的一個或多個孔中。在室溫下90分鐘之后，用pbst洗滌孔，并且向各孔中添加fc片段特異性過氧化酶偶聯(lián)的山羊抗人igg(jacksonimmunoresearch)于pbst/0.1％bsa中的1:5000稀釋液。在室溫下孵育60分鐘之后，用pbst/0.1％bsa洗滌孔，并且向各孔中添加鄰苯二胺二鹽酸鹽過氧化酶底物(sigma)。在室溫下孵育30分鐘之后，直接在spectramaxplus分光光度計上用softmaxpro軟件(moleculardevices)讀取各孔的a450值。

食蟹猴csf1r的該實驗的結(jié)果在圖8小圖a至圖8小圖c中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，基于fab0301和0311的所有人源化抗體均能夠阻斷人csf1與食蟹猴csf1recd結(jié)合。與cab0302的阻斷活性相比，基于fab0302的人源化抗體都沒有在該實驗中顯示類似的阻斷活性。

人il34/csf1r阻斷活性

測試人源化抗體阻斷人il34與人csf1recd結(jié)合的能力。除了使用nh2-生物素標記試劑盒(dojindomoleculartechnologies)將重組人il34(fiveprimetherapeutics；seqidno:68)生物素化之外，如上對于阻斷csf1所述測定各人源化抗體的阻斷活性，并且隨后按照制造商的說明，將100μl含1μg/ml生物素化重組il34的pbst/0.1％bsa添加至預(yù)先用superblock阻斷緩沖液(pierce)阻斷的reacti-bind抗生蛋白鏈菌素涂布的板(pierce)的孔中。

食蟹猴csf1r的該實驗的結(jié)果在圖9小圖a至圖9小圖c中展示。在所測試的濃度范圍內(nèi)，基于fab0301和0311的所有人源化抗體均能夠阻斷人il34與食蟹猴csf1recd結(jié)合。與cab0302的阻斷活性相比，基于fab0302的人源化抗體都沒有在該實驗中顯示類似的阻斷活性。

ic50的計算

表4展示使用graphpadprism軟件(graphpadsoftware)的非線性回歸(曲線-擬合)分析算法計算的各人源化抗體抑制配體誘導的csf1r磷酸化的ic50。表4還展示使用graphpadprism軟件(graphpadsoftware)的非線性回歸(曲線-擬合)分析算法計算的各人源化抗體阻斷配體與csf1recd結(jié)合的ic50。最后，表4展示各人源化抗體的輕鏈和重鏈的框架區(qū)中回復(fù)突變?yōu)橄鄳?yīng)小鼠氨基酸殘基的氨基酸的數(shù)目。例如，人源化抗體h0301l1h1在輕鏈框架區(qū)中具有一個回復(fù)突變?yōu)樾∈蟀被岬陌被岷驮谥劓溈蚣軈^(qū)中具有一個回復(fù)突變?yōu)樾∈蟀被岬陌被帷⒖紙D1和2，根據(jù)kabat編號，輕鏈框架中回復(fù)突變的氨基酸在框架1中的位置1，重鏈中回復(fù)突變的氨基酸在框架3中的位置71(參見圖1小圖b)。

表4：人源化抗csf1r抗體的阻斷活性

實施例8：人源化抗csf1r抗體結(jié)合常數(shù)

如下測定各人源化抗體與人csf1recd結(jié)合的ka、kd和kd。

使用biacoret100表面等離子元共振(spr)(gehealthcarelifesciences,piscataway,ny)測定抗csf1r人源化抗體與csf1recd的結(jié)合動力學。在150ru下使用人抗體捕捉試劑盒(gehealthcarelifesciences,piscataway,ny)將各人源化抗csf1r抗體捕捉于用抗人igg抗體固定的cm5傳感器芯片上，以便使hcsf1recd.506(seqidno:5)結(jié)合的rmax值為100ru。對于精確測定動力學值，推薦的rmax值小于150ru。使用含0.05％tween20的10mmhepes緩沖鹽水(ph7.4)(hps-p；gehealthcarelifesciences,piscataway,ny)作為操作和稀釋緩沖液。以六種濃度(90nm、30nm、10nm、3.33nm、1.11nm和0nm)注射hcsf1recd.506持續(xù)2分鐘，并且觀察解離5分鐘以測定人源化抗體/hcsf1recd結(jié)合動力學參數(shù)。使用biacoret100評估軟件包用1:1結(jié)合模型計算各fab針對人csf1recd的締合常數(shù)、解離常數(shù)、親和力和結(jié)合能力。

動力學測定的結(jié)果在表5中展示。

表5：人源化抗體對于人csf1r的結(jié)合親和力

除兩個之外的所有人源化抗體都顯示對人csf1recd具有低于納摩爾濃度的結(jié)合親和力，并且其余兩個人源化抗體顯示對人csf1recd的結(jié)合親和力小于2nm。

實施例9：人源化抗csf1r抗體阻斷配體誘導的磷酸化

基于以上數(shù)據(jù)，包括csf1r結(jié)合和配體抑制以及各人源化抗體的免疫原性的可能性，選擇三種人源化抗體用于進一步研究：0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1。

確認0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1各自與細胞表面上的csf1r結(jié)合之后(數(shù)據(jù)未展示)，測試各抗體阻斷cho細胞中配體誘導的csf1r磷酸化的能力，如實施例6中所描述。

該實驗的結(jié)果在圖10中展示。所測試的所有三種人源化抗體均阻斷cho細胞中csf1誘導的(a)和il34誘導的(b)csf1r磷酸化。表6展示各抗體阻斷配體誘導的csf1r磷酸化的ic50。

表6：人源化抗體的配體誘導的磷酸化阻斷ic50

實施例10：人源化抗csf1r抗體阻斷原代人單核細胞的配體誘導的增殖/存活反應(yīng)

如下測試人源化抗體0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1阻斷配體誘導的單核細胞增殖/存活反應(yīng)的能力。

根據(jù)制造商的說明，通過離心至ficoll-paque緩沖器(gehealthcarebio-sciences)上來從健康供體分離人周邊血液單核細胞(pbmc)。隨后通過離心至48.5％percoll^tm緩沖器(gehealthcarebio-sciences)上來從回收的pbmc部分分離周邊血液單核細胞。從percoll^tm緩沖器回收之后，在存在或不存在人源化抗體0301-l0h0、人源化抗體0301-l1h0或人源化抗體0311-l0h1的連續(xù)稀釋液的情況下，用162pm重組人csf1或1.6nm重組人il34(均來自r&dsystems)刺激純化的周邊血液單核細胞。在37℃下孵育48小時之后，按照制造商的說明使用試劑(promega)評價各個別培養(yǎng)物的相對細胞atp含量。在該測定中，相對細胞atp含量與培養(yǎng)物中的活細胞數(shù)目成正比，并且因此反映單核細胞增殖/存活反應(yīng)。

該實驗的結(jié)果在圖11中展示。所測試的所有三種人源化抗體在csf1(a)或il34(b)刺激之后均能夠阻斷單核細胞增殖/存活反應(yīng)。表7展示各抗體阻斷配體誘導的單核細胞增殖/存活反應(yīng)的ic50。表7中所示的值表示從所測試的三個不同原代供體觀察到的范圍。

表7：人源化抗體的單核細胞增殖/存活阻斷ic50

實施例11：人源化抗csf1r抗體不直接促進原代人單核細胞增殖或存活反應(yīng)

如下測試人源化抗體0301-l0h0、0301-l1h0和0311-l0h1直接刺激原代單核細胞增殖和/或存活的能力。

如實施例10中所述分離人周邊血液單核細胞。在沒有外源csf1或外源il34刺激存在下，將人源化抗體0301-l0h0、人源化抗體0301-l1h0或人源化抗體0311-l0h1的連續(xù)稀釋液添加至單核細胞中。在37℃下孵育48小時之后，如實施例10中使用celltiter試劑(promega)評價各個別培養(yǎng)物的相對atp含量。該實驗在來自三個不同供體的周邊血液單核細胞上進行。

該實驗的結(jié)果在圖12中展示。在所測試的任一原代單核細胞制劑中，人源化抗體均不刺激原代單核細胞增殖或存活。

序列表

表8提供本文中討論的某些序列。除非另外指出，否則展示的所有多肽和抗體都沒有前導序列。

表8：序列和描述