本申請是申請日為2008年5月3日，申請?zhí)枮?01210272198.x，發(fā)明名稱為“結(jié)合細(xì)胞內(nèi)prl-1多肽或prl-3多肽的抗體”的發(fā)明專利申請的分案申請。本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域、細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域、分子生物學(xué)領(lǐng)域及生物化學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明還涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及疾病尤其是癌癥的治療和診斷，以及用于這樣的用途的組合物。
背景技術(shù)：
：：癌癥是全世界的一個(gè)嚴(yán)重健康問題。在2007年，據(jù)估計(jì)全世界有760萬人死于癌癥。例如在英國，癌癥每年造成126,000人死亡。四分之一的人死于癌癥。已知用于癌癥的治療法包括外科手術(shù)、化學(xué)療法和放射療法。如果發(fā)現(xiàn)地夠早，許多癌癥可以被治愈。100年之前，德國化學(xué)家保羅·奧利克(paulehrlich)提出了抗體作為“魔方”的觀念?？贵w能夠以特殊的方式識(shí)別及結(jié)合它們的抗原，因此是用于經(jīng)免疫系統(tǒng)識(shí)別及破壞惡性細(xì)胞的理想制劑。由于這個(gè)原因，抗體構(gòu)成了一類發(fā)展最為快速的人類癌癥療法。大量潛在的癌癥或腫瘤標(biāo)記物以及癌癥抗原已經(jīng)在文獻(xiàn)中被鑒定，并且已經(jīng)開發(fā)出對抗它們中的一些的抗體治療物。例如，已知的癌癥治療物赫賽汀(herceptin)(曲妥珠單抗(trastuzumab))是一種能殺死her2陽性癌細(xì)胞的單克隆抗體。赫賽汀可結(jié)合癌細(xì)胞上的her2(人表皮生長因子受體2)抗原。同樣，貝伐單抗(bevacizumab)(阿瓦斯汀tm(avastintm))是一種靶向血管內(nèi)皮生長因子(vegf)的單克隆抗體，vegf是一種參與新血管形成的生長因子。通過抑制血管發(fā)生，貝伐單抗可阻止腫瘤細(xì)胞接收穩(wěn)定的血液供應(yīng)，從而防止接收腫瘤存活需要的氧和營養(yǎng)物。然而，抗體治療對于不同癌癥的適應(yīng)性不是普遍的。妨礙抗體治療普遍應(yīng)用的一個(gè)限制是抗體分子較大的體積，并因此不能通過質(zhì)膜或細(xì)胞膜。在不進(jìn)行改良的情況下，抗體(包括單克隆抗體)通常僅適宜于靶向位于宿主細(xì)胞表面或外部的癌癥抗原14-15。在以上的實(shí)例中，her2受體位于細(xì)胞表面，因此是赫賽汀進(jìn)行抗體結(jié)合可及的。同樣，vegf被分泌到血液中，能夠被貝伐單抗結(jié)合。prl是一類細(xì)胞內(nèi)c末端異戊二烯化的蛋白質(zhì)。缺乏異戊二烯化信號(hào)的prl突變形式一般位于核內(nèi)16-17。通過em免疫金標(biāo)記顯示prl-1和prl-3定位于質(zhì)膜和早期內(nèi)體的內(nèi)葉(innerleaflet)18。prl-3和prl-1的過表達(dá)已被表明與多種人癌癥相關(guān)3-12,19。prl-1和prl-3已知與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。已經(jīng)知道，大多數(shù)癌癥患者死于轉(zhuǎn)移，而非死于他們的原發(fā)疾病。迫切需要防止癌癥轉(zhuǎn)移的有效方法。迄今為止抗體還沒有被用于靶向細(xì)胞內(nèi)抗原或癌癥標(biāo)記物，這是因?yàn)榭贵w無法通過細(xì)胞膜，因而無法接近抗原。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明人現(xiàn)已證明，針對prl-1和prl-3的抗體可意外地結(jié)合至它們的細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)。根據(jù)文獻(xiàn)中的提示，以前從未認(rèn)為可能用抗體靶向細(xì)胞內(nèi)prl以消除癌細(xì)胞和癌癥轉(zhuǎn)移，這是因?yàn)閜rl的細(xì)胞內(nèi)定位。本發(fā)明人已表明實(shí)際情況不是這樣，并提供抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體用作癌癥治療劑，尤其是癌癥轉(zhuǎn)移的治療劑。li等人(2005)描述了prl-1和prl-3特異性單克隆抗體的產(chǎn)生。然而，這些抗體的序列以及這些抗體的可變區(qū)序列還沒有被公開。而且，產(chǎn)生這些抗體的雜交瘤在當(dāng)時(shí)并不為公眾可及，并且迄今為止也不為公眾可及。從而，在li等人(2005)中描述的抗體迄今為止公眾也無法獲得。再者，考慮到prl-1和prl-3的細(xì)胞內(nèi)定位，沒有說明所述抗體可用于治療癌癥。本發(fā)明人公開了兩種針對prl-1的小鼠單克隆抗體(269和223)以及一種針對prl-3的小鼠單克隆抗體(318)的可變區(qū)。本發(fā)明人公開了抗-prl-1抗體269和抗-prl-3抗體318的結(jié)合表位。本發(fā)明人還公開了產(chǎn)生這些抗體的方法，以及制備具有與這些抗體相同或相似結(jié)合性質(zhì)的抗體的方法，這些方法的每一種迄今為止均是不可能的。根據(jù)本發(fā)明的第1方面，本發(fā)明人提供了一種能夠結(jié)合至prl-1多肽或prl-3多肽的抗體，其中所述抗體能夠結(jié)合與抗體269、抗體223或抗體318或者它們的變體、同系物、衍生物或片段結(jié)合的表位。所述抗體能夠結(jié)合至與抗體269結(jié)合的prl-1多肽上的表位。所述抗體可包括能夠結(jié)合至表位tyknmr和/或tlnkfi的抗-prl1抗體，或者它的變體、同系物、衍生物或片段。所述抗體能夠結(jié)合至與抗體223或抗體318結(jié)合的prl-3多肽上的表位。所述抗體可包括能夠結(jié)合至表位kakfyn和/或hthktr的抗-prl3抗體，或者它的變體、同系物、衍生物或片段。所述抗體可包含單克隆抗體269的可變區(qū)(seqidno:2、seqidno:4)、單克隆抗體223的可變區(qū)(seqidno:6、seqidno:8)或單克隆抗體318的可變區(qū)(seqidno:10、seqidno:12)。根據(jù)本發(fā)明的第2方面，提供了一種抗體，所述抗體包含單克隆抗體269的可變區(qū)(seqidno:2、seqidno:4)或者它的能結(jié)合prl-1的變體、同系物、衍生物或片段。根據(jù)本發(fā)明的第3方面，本發(fā)明人提供了一種抗體，所述抗體包含單克隆抗體223的可變區(qū)(seqidno:6、seqidno:8)或者它的能結(jié)合prl-1的變體、同系物、衍生物或片段。根據(jù)本發(fā)明的第4方面，本發(fā)明人提供了一種抗體，所述抗體包含單克隆抗體318的可變區(qū)(seqidno:10、seqidno:12)或者它的能結(jié)合prl-3的變體、同系物、衍生物或片段。所述抗體能夠結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)prl-1多肽或prl-3多肽。所述抗體能夠通過細(xì)胞質(zhì)膜。所述抗體能夠結(jié)合并抑制prl-1或prl-3的生物活性，優(yōu)選蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp)活性。所述抗體能夠防止癌癥轉(zhuǎn)移，所述癌癥優(yōu)選結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、陰莖癌、子宮頸癌、腦癌、食道癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、卵巢淋巴瘤和皮膚黑色素瘤。所述癌癥可包括表達(dá)prl-1或prl-3的癌癥。所述抗體可包括單克隆抗體或人源化單克隆抗體。作為本發(fā)明的第5方面，提供了一種包含如前述的抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體的結(jié)合物。根據(jù)本發(fā)明的第6方面，本發(fā)明人提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含這樣的抗體或結(jié)合物，以及可藥用的賦形劑、稀釋劑或載體。本發(fā)明在第7方面中提供了一種能夠結(jié)合至prl-1或prl-3的抗體，用于一種癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移的治療方法或預(yù)防方法中，所述抗體可包括如前述的抗體、如上文列出的結(jié)合物或如上文列出的藥物組合物。所述方法可包括將癌細(xì)胞暴露于所述抗體或結(jié)合物。所述方法可包括將治療有效量的所述抗體、結(jié)合物或組合物給予患有或疑似患有癌癥的個(gè)體。所述癌癥可包括轉(zhuǎn)移癌。所述癌癥可為表達(dá)prl-1或prl-3的癌癥。所述癌癥可包括結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、陰莖癌、子宮頸癌、腦癌、食道癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、卵巢淋巴瘤和皮膚黑色素瘤。治療個(gè)體中的轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目與未治療個(gè)體相比可減少至少50％。它可減少至少60％。它可減少低至少70％。它可減少至少80％。治療個(gè)體中的轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目與未治療的個(gè)體相比可減少至少90％。根據(jù)本發(fā)明的第8方面，提供了一種如上文列出的抗體、一種如所述的結(jié)合物或一種如所述的藥物組合物，用于癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移的診斷方法中。根據(jù)本發(fā)明的第9方面，本發(fā)明人提供了一種診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包含這樣的抗體、這樣的結(jié)合物或這樣的藥物組合物以及在癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移的診斷中使用的說明書。根據(jù)本發(fā)明的第10方面，本發(fā)明人提供了一種多肽，所述多肽包含選自以下的序列：seqidno:2、seqidno:4、seqidno:6、seqidno:8、seqidno:10或seqidno:12，或者它們能夠結(jié)合prl的變體、同系物、衍生物或片段。根據(jù)本發(fā)明的第11方面，提供了一種核酸，所述核酸包含能夠編碼如上文列出的分子的序列，例如選自以下的序列：seqidno:1、seqidno:3、seqidno:5、seqidno:7、seqidno:9和seqidno:11或者它們能夠編碼具有prl結(jié)合活性的多肽的變體、同系物、衍生物或片段。作為本發(fā)明的第12方面，本發(fā)明人提供了一種包含或轉(zhuǎn)化有這樣的核酸序列的細(xì)胞，或者這樣的細(xì)胞的后代。根據(jù)本發(fā)明的第13方面，本發(fā)明人提供了一種產(chǎn)生如所述的抗體的方法，所述方法包括提供一種這樣的細(xì)胞并從所述細(xì)胞表達(dá)所述抗體。根據(jù)本發(fā)明的第14方面，本發(fā)明人提供了一種在個(gè)體中診斷癌癥例如轉(zhuǎn)移癌的方法，所述方法包括將來自所述個(gè)體的生物樣品暴露于如上文列出的抗體，并檢測所述抗體和prl-1多肽或prl-3多肽的結(jié)合情況。根據(jù)本發(fā)明的第15方面，提供了一種在患有或疑似患有癌癥的個(gè)體中治療或者預(yù)防癌癥例如轉(zhuǎn)移癌的方法，所述方法包括給予所述個(gè)體治療有效量的如所述的抗體、如所述的結(jié)合物或如所述的組合物。所述方法可包含如上述任一段中列出的特征。根據(jù)本發(fā)明的第16方面，本發(fā)明人提供了一種在患有或疑似患有癌癥的個(gè)體中治療或預(yù)防癌癥例如轉(zhuǎn)移癌的方法，所述方法包括通過如所述的方法在所述個(gè)體中診斷癌癥，并通過如所述的方法治療所述個(gè)體。根據(jù)本發(fā)明的第17方面，本發(fā)明人提供了一種檢測轉(zhuǎn)移細(xì)胞的方法，所述方法包括將候選細(xì)胞暴露于如上述的抗體，并檢測所述細(xì)胞的prl-1多肽或prl-3多肽表達(dá)情況。根據(jù)本發(fā)明的第18方面，本發(fā)明人提供了一種產(chǎn)生轉(zhuǎn)移瘤動(dòng)物模型的方法，所述方法包括：(a)將多個(gè)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞例如表達(dá)prl-1或prl-3的癌細(xì)胞給予第一動(dòng)物；(b)使所述細(xì)胞在所述第一動(dòng)物中發(fā)展成轉(zhuǎn)移瘤；(c)從所述第一動(dòng)物提取轉(zhuǎn)移瘤并從所述轉(zhuǎn)移瘤獲得細(xì)胞系；并(d)將所述細(xì)胞系的多個(gè)細(xì)胞給予第二動(dòng)物。根據(jù)本發(fā)明的第19方面，本發(fā)明人提供了一個(gè)通過一種這樣的方法得到的動(dòng)物模型。根據(jù)本發(fā)明的第20方面，本發(fā)明人提供了通過一種這樣的方法產(chǎn)生的動(dòng)物模型或者如上文列出的動(dòng)物模型作為轉(zhuǎn)移瘤模型的用途。根據(jù)本發(fā)明的第21方面，本發(fā)明人提供了一種包括以下步驟的方法：提供如所述的抗體，并使所述抗體結(jié)合至prl-1多肽或prl-3多肽?？墒顾隹贵w結(jié)合至表達(dá)prl-1多肽或prl-3多肽的細(xì)胞。所述prl-1可包括細(xì)胞內(nèi)prl-1多肽。所述prl-3多肽可包括細(xì)胞內(nèi)prl-3多肽。除非另外指出，否則本發(fā)明的實(shí)施將運(yùn)用化學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)、重組dna和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力所能及的。這些技術(shù)在文獻(xiàn)中有說明。例如，參見j.sambrook,e.f.fritsch,andt.maniatis,1989,molecularcloning：alaboratorymanual,secondedition,books1-3,coldspringharborlaboratorypress；ausubel,f.m.etal.(1995andperiodicsupplements；currentprotocolsinmolecularbiology,ch.9,13,and16,johnwiley&sons,newyork,n.y.)；b.roe,j.crabtree,anda.kahn,1996,dnaisolationandsequencing：essentialtechniques,johnwiley&sons；j.m.polakandjameso’d.mcgee,1990,insituhybridization：principlesandpractice；oxforduniversitypress；m.j.gait(editor),1984,oligonucleotidesynthesis：apracticalapproach,irlpress；d.m.j.lilleyandj.e.dahlberg,1992,methodsofenzymology：dnastructureparta：synthesisandphysicalanalysisofdnamethodsinenzymology,academicpress；usingantibodies：alaboratorymanual：portableprotocolno.ibyedwardharlow,davidlane,edharlow(1999,coldspringharborlaboratorypress,isbn0-87969-544-7)；antibodies：alaboratorymanualbyedharlow(editor),davidlane(editor)(1988,coldspringharborlaboratorypress,isbn0-87969-314-2),1855.handbookofdrugscreening,editedbyramakrishnaseethala,prabhavathib.fernandes(2001,newyork,ny,marceldekker,isbn0-8247-0562-9)；和labref：ahandbookofrecipes,reagents,andotherreferencetoolsforuseatthebench,editedjaneroskamsandlindarodgers,2002,coldspringharborlaboratory,isbn0-87969-630-3。這些一般性文本的每一篇都通過引用的方式納入本文。附圖說明圖1.快速形成侵襲性(aggressive)肺腫瘤轉(zhuǎn)移的七步動(dòng)物模型。1.如以前的描述8，產(chǎn)生50％細(xì)胞表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的cho穩(wěn)定混合池。2.經(jīng)尾靜脈將1×106的這種細(xì)胞注射至裸鼠的循環(huán)系統(tǒng)中。3.在注射后3周時(shí)分離單個(gè)的egfp-prl-3或egfp-prl-1肺腫瘤。4.在培養(yǎng)皿中切割并剁碎所述腫瘤以產(chǎn)生同質(zhì)的表達(dá)egfp-prl的細(xì)胞系(at-3或at-1)。5.將1×106個(gè)at-3細(xì)胞或at-1細(xì)胞經(jīng)裸鼠的尾靜脈注射至循環(huán)系統(tǒng)中。6.未處理組：未處理、pbs或無關(guān)小鼠抗體。7.將以at-3細(xì)胞注射的小鼠用腹水或純igg形式的prl-3mab克隆#223或#318處理，而將以at-1細(xì)胞注射的小鼠以pbs處理或者以prl-1mab克隆269腹水處理。圖2.prl-3和prl-1mab特異性地抑制它們各自的轉(zhuǎn)移性肺腫瘤形成。a.將1×106個(gè)at3細(xì)胞(圖1中描述)經(jīng)尾靜脈注射至裸鼠中。小鼠是未處理的(a，n＝10)或pbs-處理的(b，n＝10)，或者被以兩種無關(guān)抗體處理(c，n＝5；d，n＝5)。prl-3mab223是以純igg(e)或腹水(g)的形式經(jīng)尾靜脈給予；prl-3mab318是以純igg(f)或腹水(h)的形式經(jīng)尾靜脈給予。在接種at3細(xì)胞后第3、6和9天注射所述不同的抗體。在注射后第15天切下肺并在熒光顯微鏡下照相以顯示gpf-陽性的轉(zhuǎn)移瘤。圖像a、b、e和f為雌性小鼠的肺。圖像c、d、g和h為雄性小鼠的肺。b.a中的腫瘤總數(shù)目被認(rèn)為是每組腫瘤損害的平均數(shù)(y軸)，x軸顯示經(jīng)不同處理的不同組小鼠。以at-3細(xì)胞注射的小鼠的結(jié)果顯示于第1-7列。以at-1細(xì)胞注射的小鼠以pbs或以抗prl-1的mab269處理(第8-9列)。n＝每組中的小鼠數(shù)目。圖3.prl-1mab特異性地抑制prl-1轉(zhuǎn)移瘤，但不抑制prl-3轉(zhuǎn)移瘤；而prl-3mab特異性地抑制prl-3轉(zhuǎn)移瘤，但不抑制prl-1轉(zhuǎn)移瘤。在第1天，本發(fā)明人將表達(dá)egfp-prl-1或egfp-prl-3的一百萬個(gè)癌細(xì)胞(at-1或at-3)經(jīng)其尾靜脈注射至每只小鼠中。然后將小鼠分組，在注射癌細(xì)胞后第3、6和9天經(jīng)它們的尾靜脈分別接受pbs、兔prl抗體、prl-1mab或prl-3mab。在第15天，將來自攜帶表達(dá)egfp-prl-1的at-1癌細(xì)胞的小鼠的肺(圖：a-d)或來自攜帶表達(dá)egfp-prl-3的at-3癌細(xì)胞的小鼠的肺(e-h)切下并拍照。肺中的prl-1和prl-3轉(zhuǎn)移瘤不能被模擬品pbs處理阻斷(a、e)，但都可以被兔抗體(b、f)有效阻斷。prl-1mab可抑制prl-1過表達(dá)的腫瘤的形成(c)，但當(dāng)prl-3過表達(dá)時(shí)不抑制腫瘤的形成(g)。類似地，prl-3mab可抑制prl-3過表達(dá)的轉(zhuǎn)移瘤的形成(h)，但在prl-1過表達(dá)時(shí)不抑制轉(zhuǎn)移瘤的形成(d)。因此，這些各個(gè)prl-mab分別在對表達(dá)其靶抗原的細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移瘤形成進(jìn)行阻斷中是特異性的。圖4.prl-3mab可有效地阻斷a2780prl-3-陽性癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成；但對于ct26prl-3陰性癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成沒有效應(yīng)。a.a2780細(xì)胞而非ct26細(xì)胞表達(dá)內(nèi)源的prl-3。通過蛋白質(zhì)印跡法分析從ct26小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系和a2780人卵巢癌細(xì)胞系制備的細(xì)胞裂解物，以檢測prl-3。將gapdh用作上樣對照。b.prl-3抗體處理不影響接種癌細(xì)胞后2周時(shí)ct26prl-3陰性細(xì)胞的肺腫瘤形成。對所有主要組織檢查腫瘤形成情況。對處理小鼠(圖a)和未處理小鼠(圖b)的動(dòng)物總體形態(tài)以及切下的肺拍照。在所有肺中觀測到了廣泛的腫瘤形成，由黑色箭頭標(biāo)出。c.prl-3抗體處理可抑制接種癌細(xì)胞后1個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定中的病理表觀及a2780prl-3陽性細(xì)胞的腫瘤形成。對所有主要組織檢查腫瘤形成情況。對動(dòng)物總體形態(tài)以及從未處理動(dòng)物切下的腫瘤(由黑色箭頭標(biāo)出)拍照。在處理小鼠中沒有觀測到腫瘤。圖5.通過間接免疫熒光法顯示at-3癌細(xì)胞和親本cho細(xì)胞中的抗體攝取。a.egfp-prl-3在所有非透化at-3細(xì)胞中表達(dá)，這是通過egfp檢測的(a、d)。一些細(xì)胞被prl-3mab完全標(biāo)記19(圖b、e中白色箭頭標(biāo)出)；40％的非透化細(xì)胞被prl-3mab部分地標(biāo)記為紅色；所述被內(nèi)化的抗體似乎以極化的方式分布于細(xì)胞端部(f中單頭箭頭標(biāo)出)并且一些分布在膜突出物中(f中雙頭箭頭標(biāo)出)；而剩下的細(xì)胞保持未標(biāo)記(c和f，僅綠色的細(xì)胞)。b.to-pro-3碘化物被用于將每個(gè)親本cho細(xì)胞的dna染色為藍(lán)色。能夠攝取小鼠抗-gs28抗體的活細(xì)胞(10-20％)呈現(xiàn)綠色(a、b和c)。血清過夜饑餓的大多數(shù)活細(xì)胞(60-70％)能夠攝取小鼠抗-gs28抗體，呈現(xiàn)為綠色(d、e和f)。白色箭頭標(biāo)出不能攝取抗體的一些細(xì)胞(或許處于細(xì)胞周期的某些階段)。尺度條，20μm。圖6.正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中一般的抗體攝取現(xiàn)象通過雙染色的間接免疫熒光法顯示：a.將小鼠抗-gs28抗體(紅色)和兔抗-pten抗體(綠色)添加至非透化mcf-10a正常細(xì)胞。b.將小鼠抗-gs28抗體(紅色)和兔抗-p53抗體(綠色)添加至非透化mcf-7癌細(xì)胞。c.將小鼠抗-gs28抗體(紅色)和兔抗-p53抗體(綠色)添加至16小時(shí)血清饑餓的非透化mcf-7細(xì)胞。將to-pro-3碘化物用于染色dna(藍(lán)色)。尺度條，20μm。圖7.prl-3和prl-1在多種人癌癥中過表達(dá)。a.將prl-3mab(克隆223或318)用于檢查prl-3在多個(gè)人癌癥樣品中的表達(dá)情況。prl-3過表達(dá)的實(shí)例出現(xiàn)于人結(jié)腸(26/158例，a)、乳腺(19/96例，b)、食道(2/13例，c)、肺(d，虛線右手邊上方的吸煙沉淀物被染色為黑色)、陰莖(e)和宮頸癌(f)。所述prl-3陽性信號(hào)通過用3,3'-二氨基聯(lián)苯胺色原(dab)的免疫組織化學(xué)法被顯示為褐色。所有圖像的放大倍數(shù)都是×400。b.將prl-1mab(克隆269)用于檢查prl-1在多個(gè)人癌癥樣品中的表達(dá)情況。顯示了prl-1在人結(jié)腸(8/128例，a，×200放大倍數(shù))、腦(5/20例，b，×200)和食道(1/13例，c，×400)中過表達(dá)的實(shí)例。圖8.prl-3和prl-1嵌合mab僅特異性地與它們各自的抗原作用。a.所示的模型顯示了構(gòu)建嵌合mab的主要步驟梗概。b.通過if，在過表達(dá)egfp-prl-3的dld-1細(xì)胞上測試了prl-3嵌合mab(#318)(a)，并表明所述prl-3嵌合mab能識(shí)別這些細(xì)胞中的egfp-prl-3(b)。合并的圖像顯示于c中。類似地，還在過表達(dá)egfp-prl-1的dld-1人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞上測試了prl-1嵌合mab(#269)(d)，并表明所述prl-1mab能識(shí)別這些細(xì)胞中的egfp-prl-1(e)。合并的圖像顯示于f中。尺度條，20μm。c.通過蛋白質(zhì)印跡分析，在源自過表達(dá)egfp-prl-3的dld-1細(xì)胞(第1道)、過表達(dá)myc-prl-3(第2道)、myc-prl-1(第3道)或myc-prl-2(第4道)的cho細(xì)胞的4份細(xì)胞裂解物上評估了所述prl-3嵌合mab。prl-3嵌合mab僅與egfp-prl-3和myc-prl-3作用，而不與myc-prl-1和myc-prl-2作用。d.在3種gst-prl蛋白質(zhì)上評估了所述prl-1嵌合mab：gst-prl-1(第1道)、gst-prl-2(第2道)和gst-prl-3(第3道)。prl-1嵌合mab僅與gst-prl-1作用，但不與gst-prl-2和gst-prl-3作用。圖9.prl-3嵌合mab顯著地抑制表達(dá)內(nèi)源性prl-3的a2780細(xì)胞和hct116細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成，但不抑制不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的dld-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。a.從過表達(dá)egfp-prl-3的hct116、a2780、dld-1癌細(xì)胞和dld-1細(xì)胞提取總細(xì)胞裂解物。所述內(nèi)源性prl-3蛋白在hct116和a2780被檢測到，但未在在dld-1細(xì)胞中被檢測到。所述外源性egfp-prl-3僅在第4道被檢測到。對于b、c和d：在第1天經(jīng)尾靜脈以1×106個(gè)癌細(xì)胞注射裸鼠。所述小鼠被給予prl-3嵌合mab(處理的)或pbs(未處理的)。當(dāng)未處理小鼠嚴(yán)重患病時(shí)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)的時(shí)長被確定并結(jié)束。在每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)拍照片。b.hct116細(xì)胞的處理，左為處理的小鼠，右為未處理的小鼠。c.a2780細(xì)胞的處理，左為處理的小鼠，右為未處理的小鼠。d.a.dld-1細(xì)胞的處理，左為處理的小鼠，右為未處理的小鼠；b.表達(dá)egfp-prl-3的dld-1細(xì)胞的處理，左為未處理的小鼠，右為處理的小鼠。圖10.prl-3可增強(qiáng)肺轉(zhuǎn)移瘤形成和血液循環(huán)中的癌細(xì)胞存活。a.顯示了來自處理小鼠和未處理小鼠的肺切片。在熒光顯微鏡下，多個(gè)微腫瘤(以micro-t標(biāo)出)出現(xiàn)在來自未處理小鼠的肺切片中，但很少出現(xiàn)在來自處理小鼠的肺切片中。b.將從處理小鼠和未處理小鼠的尾靜脈得到的血液樣品涂于載玻片上，并在熒光顯微鏡下檢查egfp-prl-3癌細(xì)胞。箭頭標(biāo)示出了egfp-prl-3陽性的癌細(xì)胞。圖11.prl-3嵌合抗體可有效地抑制表達(dá)內(nèi)源性prl-3的b16f0細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成，但不抑制不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的b16f10細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。a.從b16f0和b16f10癌細(xì)胞制備總細(xì)胞裂解物。所述內(nèi)源性prl-3蛋白僅在b16f0細(xì)胞被檢測到，但未在b16f10細(xì)胞中被檢測到。b.在嵌合mab處理后第1天以1×106個(gè)b16f0細(xì)胞注射裸鼠。左側(cè)顯示處理的小鼠，右側(cè)顯示未處理的小鼠。腫瘤出現(xiàn)于未處理的小鼠的腎上腺、肝、骨和腹部中。prl-3mab可消除處理小鼠大多數(shù)組織中的腫瘤形成。c.在第1天以1×106個(gè)b16f10細(xì)胞注射裸鼠。上圖顯示處理的小鼠，下圖顯示未處理的小鼠。數(shù)十個(gè)肺轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn)于處理小鼠中和未處理小鼠中。圖12.抗-prl3抗體318可結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的和外部化的/分泌的prl-3多肽。a.細(xì)胞內(nèi)prl3，b.gapdh對照，c.外部化的/分泌的prl-3多肽。圖13.抗-prl1抗體269和抗-prl3抗體318的表位作圖。a.通過蛋白質(zhì)印跡顯示的抗-prl1抗體269結(jié)合的肽。b.通過蛋白質(zhì)印跡顯示的抗-prl3抗體318結(jié)合的肽。具體實(shí)施方式抗-prl抗體本文實(shí)施例描述了抗prl蛋白的抗體(即抗-prl抗體)的形成和生產(chǎn)。這些抗-prl抗體能夠結(jié)合prl-1或prl-3，優(yōu)選細(xì)胞內(nèi)prl-1或prl-3。單克隆抗體和人源化單克隆抗體兩者以及它們的性質(zhì)都詳述于本文和實(shí)施例。所述抗體包括能夠結(jié)合至prl-1的單克隆抗體269。所述抗體還包括能夠結(jié)合至prl-3的單克隆抗體223和單克隆抗體318。這些抗體中每一種的人源化形式也被公開。為了避免歧義，除非在上下文中另外指出，否則在本文中如果提及一個(gè)特別的抗體命名，那么將認(rèn)為這包括提及了小鼠單克隆抗體(由一種雜交瘤分泌)以及它的人源化形式。因此，例如，如果抗體269被提及，則這包括單克隆抗體269(即小鼠雜交瘤分泌的被命名為269的抗體)以及人源化單克隆抗體269。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過本文中公開的信息并應(yīng)用本發(fā)明人亦詳述的分子生物學(xué)技術(shù)，可產(chǎn)生本文中描述的特定抗體?；诖四康模景l(fā)明人公開了單克隆抗體269、單克隆抗體223和單克隆抗體318的可變區(qū)序列。本發(fā)明人還公開了這些可變區(qū)的變體、同系物、片段和衍生物。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用這些序列信息可產(chǎn)生包含這些可變區(qū)或它們的變體、同系物、片段和衍生物的抗體。本發(fā)明人還公開了用于表達(dá)這些單克隆抗體的核酸構(gòu)建體的序列。這些構(gòu)建體的序列能夠產(chǎn)生具有與269、223或318相同的序列的單克隆抗體。本發(fā)明人還公開了269、223和318的變體、同系物、片段和衍生物。最后，本發(fā)明人公開了能夠表達(dá)所述人源化單克隆抗體269、223或318的構(gòu)建體的序列。本發(fā)明人描述了從以所述構(gòu)建體以及這些人源化構(gòu)建體的變體、同系物、片段和衍生物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞表達(dá)所需抗體的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用這些序列和表達(dá)方法可容易地轉(zhuǎn)染相關(guān)的宿主細(xì)胞，并使它們表達(dá)整個(gè)單克隆的或者人源化的抗-prl-1抗體和抗-prl3抗體，或者它們的變體、同系物、片段和衍生物。本發(fā)明人還提供了一般具有prl結(jié)合活性的多肽。這些多肽包括抗-prl抗體，例如抗-prl-1抗體和抗-prl3抗體。所述prl結(jié)合多肽可具有與所述單克隆抗體269、223和318相同或相似的一種或多種性質(zhì)。為了方便之目的，所述多肽將被統(tǒng)稱為“抗-prl抗體”。讀者有能力構(gòu)建這樣的結(jié)合分子，即這些分子可以不是(或者可以不被記述為)抗體或免疫球蛋白，但具有如本文所述的抗-prl結(jié)合活性。因此，只要前后文允許，術(shù)語“抗-prl抗體”應(yīng)被認(rèn)為包括任何分子，只要這種分子能夠結(jié)合prl。這些分子不僅可包括抗體和免疫球蛋白，還可包括多肽、小分子，并且可通過本領(lǐng)域中已知的多種方法進(jìn)行鑒定，例如通過就prl結(jié)合活性篩選合適的文庫進(jìn)行鑒定。所述抗-prl抗體(包括prl結(jié)合分子)可具有與所述單克隆抗體269、223和318相似或相同的性質(zhì)。這些相似或相同的性質(zhì)可具體包括結(jié)合性質(zhì)。所述抗-prl抗體一般能夠結(jié)合至prl多肽，例如prl-1和prl-3。因此，術(shù)語“抗-prl抗體”將被認(rèn)為包括單克隆抗體269、223和318(以及它們的人源化對應(yīng)物)。還包括包含抗體269、223或318的可變區(qū)或者其變體、同系物、片段和衍生物的多肽。如果上下文允許，該術(shù)語還應(yīng)被認(rèn)為包括是指抗-prl抗體的變體、同系物、片段和衍生物。prl1和prl3表位所述抗-prl抗體可具有與269、223或318相同或相似的結(jié)合特異性、結(jié)合親和性和/或結(jié)合親和性。所述抗-prl抗體可特異性地結(jié)合至抗體269結(jié)合的表位、抗體223結(jié)合的表位或抗體318結(jié)合的表位。確定具體抗體結(jié)合的表位的方法在本領(lǐng)域中是已知的。這種表位作圖方法記載于例如hansonetal.,(2006).respiratoryresearch,7:126中。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠形成抗體并就具體的性質(zhì)對其進(jìn)行篩選。一種這樣的方法的詳細(xì)描述顯示于實(shí)施例27中。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能容易鑒定可結(jié)合于與269、223和318所結(jié)合表位相同的表位的抗-prl抗體。實(shí)施例27顯示，抗-prl1抗體269可結(jié)合于表位tyknmr和tlnkfi。因此，本發(fā)明人提供了諸如能結(jié)合序列tyknmr的抗-prl1抗體的抗-prl抗體。本發(fā)明人還提供了諸如能夠結(jié)合tlnkfi的抗-prl1抗體的抗-prl抗體。所述抗-prl抗體可以有能力同時(shí)結(jié)合這兩個(gè)序列。再者，實(shí)施例27顯示，抗-prl3抗體可結(jié)合表位kakfyn和hthktr。因此，本發(fā)明人提供了諸如能結(jié)合序列kakfyn的抗-prl3抗體的抗-prl抗體。本發(fā)明人還提供了諸如能夠結(jié)合hthktr的抗-prl3抗體的抗-prl抗體。所述抗-prl抗體可以有能力同時(shí)結(jié)合這兩個(gè)序列。所述抗-prl抗體可包含抗體269的可變區(qū)、抗體223的可變區(qū)或抗體318的可變區(qū)，它們中的每個(gè)均在下文中詳述。它們可以在單個(gè)抗體分子中包含相同的或不同的可變區(qū)。它們可包含一個(gè)可變區(qū)，或者多于一個(gè)可變區(qū)。因此，本發(fā)明人使得本領(lǐng)域技術(shù)人員有能力產(chǎn)生具有與抗體269、223或318有相同或相似結(jié)合反應(yīng)性的任何數(shù)目的抗體。這種抗體可包括序列完整或基本完整的抗體(即重鏈和輕鏈)，或者它們可以包括完整抗體的片段(例如fv、f(ab')和f(ab')2片段，或者單鏈抗體(scfv))。所述抗體還可包括包含所述抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的融合蛋白或合成蛋白，如下文中的詳述。還顯而易見的是，可以就所需的性質(zhì)例如降低的宿主反應(yīng)性、減少的排斥反應(yīng)等設(shè)計(jì)這些抗體。所述設(shè)計(jì)可包括“人源化”，本發(fā)明人使用該術(shù)語指在抗體序列例如小鼠抗體序列中納入(或替換)有一個(gè)或多個(gè)人殘基或序列?！叭嗽椿痹诒疚纳舷挛闹邪ā扒逗稀笨贵w，其中所述抗體包含不連續(xù)部分的小鼠和人序列，例如所述可變區(qū)中的一個(gè)或兩個(gè)都包含小鼠序列，而所述抗體分子的剩余部分(例如恒定區(qū))包含人序列。在這些嵌合抗體中，例如小鼠抗體或大鼠抗體的完整可變區(qū)可以同人恒定區(qū)一起表達(dá)。這提供了這樣一種具有人效應(yīng)物功能的嵌合抗體，并且還降低了由鼠fc區(qū)引起的免疫原性(hama)。一般而言，“嵌合抗體”可以指這樣的一種抗體，即該抗體具有由源自鼠免疫球蛋白基因的核苷酸序列編碼的重鏈或輕鏈，以及由源自人免疫球蛋白基因的核苷酸序列編碼的重鏈或輕鏈?！叭嗽椿边€包括cdr移植的或重構(gòu)的抗體。因此，它包括更不連續(xù)水平的設(shè)計(jì)，例如其中小鼠可變區(qū)已被突變來包括人殘基從而降低免疫原性的抗體。在這樣的抗體中，僅來自嚙齒動(dòng)物抗體v區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)可以與來自人v區(qū)的框架區(qū)結(jié)合。這樣的抗體與嵌合抗體相比應(yīng)該更加人源化，并且免疫原性更低。通常，所述抗-prl抗體在許多狀態(tài)下都能夠結(jié)合至prl多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合環(huán)境包括細(xì)胞內(nèi)狀態(tài)。也就是說，所述抗-prl抗體能夠結(jié)合至完整細(xì)胞或非透化細(xì)胞中的prl多肽。這樣的非透化細(xì)胞可包括這樣的細(xì)胞，即所述細(xì)胞未暴露于或者基本未暴露于透化劑例如洗滌劑(如tritonx-100)或毛地黃皂苷(digitonin)中。如本文描述的抗-prl-3抗體能夠結(jié)合至以下情況下的prl-3，即所述prl-3在細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞膜內(nèi)或者被包裹在細(xì)胞中。類似地，如本文大體描述的，prl-1多肽在細(xì)胞內(nèi)部組成的環(huán)境中可被抗-prl-1抗體結(jié)合。所述抗-prl-1抗體和抗-prl3抗體具體地能夠結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)prl-1多肽或prl-3多肽。所述細(xì)胞內(nèi)prl多肽可以與一種或多種細(xì)胞結(jié)構(gòu)相關(guān)聯(lián)，所述細(xì)胞結(jié)構(gòu)例如細(xì)胞膜的內(nèi)葉、細(xì)胞器、細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、核膜等。所述prl多肽可位于核內(nèi)。在這其中的每種情況中，所述抗-prl抗體能夠結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中的prl多肽。所述抗-prl抗體能夠以多種方式結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中的prl多肽。所述抗-prl抗體能夠通過質(zhì)膜。它能夠以別的方式接近所述prl多肽的結(jié)合區(qū)，例如通過細(xì)胞攝取。它可以通過任何方式被內(nèi)化或被易位或者另外被送遞至細(xì)胞中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述結(jié)合條件包括細(xì)胞外條件。所述抗-prl抗體因此能夠在細(xì)胞外環(huán)境中結(jié)合至它的同系prl多肽。所述抗-prl抗體因此能夠在細(xì)胞外結(jié)合至prl多肽。換句話說，本文描述的抗-prl-1抗體能夠在prl-1在細(xì)胞外時(shí)與之結(jié)合。類似地，如本文大體描述的，prl-3多肽在細(xì)胞內(nèi)部之外的環(huán)境中可被抗-prl-3抗體結(jié)合。所述抗-prl抗體能夠結(jié)合至分泌的prl-1多肽或prl-3多肽(視情況而定)。所述prl-1多肽或prl-3多肽可包括循環(huán)的prl-1多肽或prl-3多肽。所述抗-prl抗體能夠結(jié)合至外部的或外化的prl多肽。它們可結(jié)合至血液循環(huán)中的分泌的prl多肽。所述抗-prl抗體及其靶標(biāo)之間的結(jié)合可以是更強(qiáng)的或更弱的、短暫的、半永久的或永久性的。所述抗-prl抗體與所述prl多肽的結(jié)合可發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)。這樣的結(jié)合可使所述prl多肽的活性失活、被抑制或降低。所述結(jié)合可中和prl的活性。所述活性可包括由所述prl多肽引起的或與之相關(guān)的任何生物活性。所述活性可包括與另一種蛋白例如下游蛋白或因子的結(jié)合?？?prl抗體與prl多肽的結(jié)合可使下游蛋白或因子的活性失活、被抑制或降低。所述活性可包括與其他細(xì)胞的通訊，所述細(xì)胞例如循環(huán)系統(tǒng)中的轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞。因此，所述抗-prl抗體可中和血液循環(huán)中的prl多肽，以阻止prl-磷酸酶與下游因子結(jié)合，或者阻止它們與循環(huán)系統(tǒng)中的其他細(xì)胞通訊。所述活性可包括生物化學(xué)活性或病原性活性。所述生物化學(xué)活性可包括催化活性。所述催化活性可包括磷酸酶活性。所述活性可包括生長調(diào)節(jié)活性、癌活性、致癌活性或轉(zhuǎn)移活性。所述單克隆抗體269、223和318可用于治療人或其他動(dòng)物中的疾病。本發(fā)明人在實(shí)施例中表明這些抗-prl抗體具有抗癌活性。具體地，實(shí)施例表明，所述抗-prl抗體能夠阻止癌腫瘤的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。實(shí)施例9記載了prl過表達(dá)腫瘤在小鼠中的生成，并提供了一個(gè)用于轉(zhuǎn)移和癌癥治療的動(dòng)物模型。實(shí)施例10-12表明，與未用抗-prl抗體處理的動(dòng)物相比，以抗-prl抗體處理的動(dòng)物顯示了顯著更低的轉(zhuǎn)移性肺腫瘤。具體地，所述處理動(dòng)物顯示出比未處理動(dòng)物少約90％的腫瘤。所述抗-prl抗體能夠結(jié)合prl多肽并阻斷其活性，盡管該prl多肽定位在細(xì)胞內(nèi)。本發(fā)明人的研究代表了通過使用抗各自的磷酸酶(盡管它們定位于細(xì)胞內(nèi))的單克隆抗體可有效地(約90％)阻斷轉(zhuǎn)移的首批例證。本發(fā)明人還表明，抗-prl-3單克隆抗體可有效地阻斷表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的人卵巢癌細(xì)胞系a2780的轉(zhuǎn)移瘤形成。因此，本發(fā)明人提供了抗-prl抗體在疾病例如癌癥治療或預(yù)防中的用途。所述癌癥可包括轉(zhuǎn)移癌。所述抗-prl抗體可被用作藥物或治療劑以治療癌癥例如已形成腫瘤的轉(zhuǎn)移。它們可被用于預(yù)防癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移。可治愈或可預(yù)防的癌癥可包括這樣的癌癥，即該癌癥與prl蛋白的表達(dá)或過表達(dá)有關(guān)。所述prl蛋白可以是其家族的一個(gè)相關(guān)成員。本發(fā)明人以此表示，通過抗-prl-1抗體例如269或具有相似或相同性質(zhì)的抗體，與prl-1蛋白的表達(dá)或過表達(dá)相關(guān)的癌癥是可以治愈的或可以預(yù)防的。類似地，通過抗-prl-3抗體例如223或318或者具有相似或相同性質(zhì)的抗體，與prl-3的表達(dá)或過表達(dá)相關(guān)的癌癥是可以治愈的或可以預(yù)防的。所述癌癥可包括多種癌癥的任一種，例如結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、陰莖癌、子宮頸癌、腦癌、食道癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、卵巢淋巴瘤和皮膚黑色素瘤。所述治療通常可包括將癌細(xì)胞或疑似為癌細(xì)胞的細(xì)胞與抗-prl抗體相接觸。可將所述細(xì)胞暴露于抗-prl-1抗體?？蓪⑺┞队诨蛄硗獗┞队诳?prl-3抗體?？蓪⑺瑫r(shí)暴露于抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體。在這種情況下，可將所述細(xì)胞同時(shí)暴露于兩種抗體，或者依次暴露于各抗體。可將該暴露重復(fù)數(shù)次。可以使用任何的量或相對量及任何的暴露時(shí)間的任何組合的抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體。因此，本發(fā)明人提供了如上述的抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體的結(jié)合物在治療疾病例如癌癥中的用途。所述細(xì)胞可是單個(gè)細(xì)胞，或者它可以在細(xì)胞塊例如癌細(xì)胞塊或腫瘤細(xì)胞塊中。所述細(xì)胞可位于生物體的體內(nèi)。所述生物體可以是已知患有癌癥的生物體，或者可能是疑似患有癌癥的生物體。所述治療可包括將所述一種或多種抗體給予所述生物體。如上文，可給予單獨(dú)一種抗體，或者可給予抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體的結(jié)合物。如上述，所述給予可以是同時(shí)的或序貫的。因此，所述治療可包括將抗-prl-1抗體與抗-prl-3抗體同時(shí)地或序貫地給予所述個(gè)體。如下文中更詳述的，所述抗-prl抗體通常包括能夠結(jié)合至prl分子的任何免疫球蛋白。prl-1下文從omim條目601585修改而來。prl-1也被稱為蛋白酪氨酸磷酸酶，4a型，1；ptp4a1，肝再生磷酸酶1，ptp(caax1)。prl-1的染色體定位在基因圖譜座位6q12。涉及生長、分化和代謝的細(xì)胞過程經(jīng)常部分地被蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化調(diào)節(jié)。蛋白酪氨酸磷酸酶(ptp)水解酪氨酸殘基的磷酸單酯，全都共有一個(gè)活性位點(diǎn)基序，并被分成3類。這3類包括受體樣ptp、細(xì)胞內(nèi)ptp和雙特異性ptp，所述雙特異性ptp不但可以脫去酪氨酸的磷酸，而且可以脫去絲氨酸殘基和蘇氨酸殘基的磷酸。diamondetal.1994,cell.biol.14:3752-3762描述了一種來自再生的大鼠肝的ptp，這種ptp是第四類的一成員。該基因被命名為prl1，是許多立即早期基因中的一種，主要在核內(nèi)表達(dá)。prl1在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的過表達(dá)導(dǎo)致了表型的轉(zhuǎn)變，這表明它可能在腫瘤發(fā)生中起到某些作用。通過使用體外異戊二烯化篩查，catesetal.,1996,cancerlett.110:49-55分離了2種編碼prl1同系物的cdna(被命名為ptp(caax1)和ptp(caax2)(prl2；601584))，所述prl1同系物被哺乳動(dòng)物的法尼基:蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶體外法尼基化。這些ptp在上皮細(xì)胞中的過表達(dá)引起培養(yǎng)細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變和裸鼠中的腫瘤生長。這些作者得出結(jié)論，ptp(caax1)和ptp(caax2)代表異戊二烯化的致瘤ptp的一個(gè)新類。pengetal.1998,j.biol.chem.273:17286-17295報(bào)道，人ptp(caax1)基因(即prl1)包含6個(gè)外顯子并含有2個(gè)啟動(dòng)子。預(yù)測的小鼠、大鼠和人prl1蛋白是相同的。zengetal.1998,biochem.biophys.res.commun.244:421-427確定，人prl1和prl2蛋白具有87％的氨基酸序列同一性。pengetal.(1998)通過fish將prl1基因定位至6q12。如果使用術(shù)語“prl-1”，那么它將被認(rèn)為是指任何的prl-1序列，包括prl-1蛋白或prl-1核酸，以及它們的任何片段、變體同系物、衍生物或變體。prl-1的性質(zhì)和活性被記載于本文中，例如在參考文獻(xiàn)中。[從omim修改的內(nèi)容結(jié)束]小鼠和人prl-1蛋白被記載于zengetal(1998)，見上文。prl-1序列本文描述的方法和組合物利用了prl-1多肽，所述prl-1多肽在下文中詳述。如本文中使用的，術(shù)語“prl-1”意欲指如下表d1中列出的序列。表d1.prl-1序列“prl-1多肽”可包括人prl-1多肽或者由人prl-1多肽組成，例如具有unigene登記號(hào)nm_003463.3的序列。還包括了任一、一些或全部的這些多肽的同系物變體和衍生物。例如，prl-1可包括登記號(hào)u84411.1的unigene。prl-3下文從omim條目606449修改而來。prl-3也被稱為蛋白酪氨酸磷酸酶，4a型，3；ptp4a3。prl-3的染色體定位在基因圖譜座位8q24.3。蛋白激酶在心臟中調(diào)節(jié)收縮、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝和基因表達(dá)。磷酸酶除了在脫磷酸化中起作用外，還參與至心臟肥大和心臟功能障礙中。通過數(shù)據(jù)庫搜索和對心臟cdna庫的篩查，matteretal.2001,biochem.biophys.res.commun.283:1061-1068鑒定了一種編碼ptp4a3的cdna，他們將其命名為prl3。該推定的prl3蛋白與prl1(ptp4a1；601585)是76％相同的，與小鼠prl3是96％相同的。rna印跡分析顯示了大約2.3kb的prl3轉(zhuǎn)錄物主要在心臟和骨骼肌中表達(dá)，在胰臟中表達(dá)較低。這種表達(dá)模式不同于prl1和prl2(ptp4a2；601584)的更廣泛表達(dá)。原位雜交分析將prl3的表達(dá)定位于心肌細(xì)胞。tris甘氨酸凝膠分析表明prl3表達(dá)為22-kd的蛋白。功能和突變分析表明，磷酸切割依賴于prl3的cys104。prl3的過表達(dá)導(dǎo)致了細(xì)胞生長的提高。蛋白質(zhì)印跡分析顯示了p130cas(bcar1；602941)響應(yīng)血管緊張素ⅱ(106150)脫磷酸化，這表明了prl3在調(diào)節(jié)由血管緊張素ⅱ誘導(dǎo)的短暫細(xì)胞內(nèi)鈣中起作用。為了了解轉(zhuǎn)移的分子基礎(chǔ)，sahaetal.2001,science294:1343-1346比較了轉(zhuǎn)移結(jié)腸直腸癌和原發(fā)癌、良性結(jié)腸直腸腫瘤和正常結(jié)腸直腸上皮的全基因表達(dá)譜。prl3在所研究的18個(gè)癌癥轉(zhuǎn)移中的每個(gè)中均以高水平表達(dá)，但在非轉(zhuǎn)移腫瘤和正常結(jié)腸直腸上皮中以較低水平表達(dá)。在所檢查的12個(gè)轉(zhuǎn)移的3個(gè)中，多拷貝的prl3基因出現(xiàn)在位于染色體8q24.3處的小擴(kuò)增子中。saha等人(2001)得出這樣的結(jié)論，prl3基因?qū)τ诮Y(jié)腸直腸癌癥轉(zhuǎn)移是重要的。使用斯坦福g3輻射雜交板(stanfordg3radiationhybridpanel)和數(shù)據(jù)庫序列分析，saha等人(2001)將prl3基因作譜于標(biāo)記物145.20附近。prl3基因還緊密連接于標(biāo)記物shgc-22154，shgc-22154位于8q24.3，距8q端粒大約3mb。[從omim修改的內(nèi)容結(jié)束]小鼠和人prl-3蛋白被詳細(xì)記載于lietal(2005),clincancerres；11:2195-204。prl-3序列本文描述的方法和組合物利用了prl-3多肽，所述prl-3多肽在下文中詳述。如本文中使用的，術(shù)語“prl-3”意欲是指如下表d2中列出的序列?！皃rl-3多肽”可包括人prl-3多肽或者由人prl-3多肽組成，例如具有unigene登記號(hào)af041434.1的序列。還包括了任一、一些或全部的這些多肽的同系物變體和衍生物。例如，prl-3可包括登記號(hào)bc066043.1的unigene。prl-1多肽和prl-3多肽prl-1多肽和prl-3多肽可被用于多種方法中，例如用于產(chǎn)生或篩查抗-prl-1劑和抗-prl-3劑，例如特異性prl-1結(jié)合劑和prl-3結(jié)合劑，尤其是抗-prl抗體。這些在下文中進(jìn)一步詳述?？梢詸z測prl-1多肽和prl-3多肽的表達(dá)，用于診斷或檢測癌癥，尤其是乳腺癌?！岸嚯摹笔侵赴ㄟ^肽鍵或修飾肽鍵即肽電子等排體彼此連接的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸的任何肽或蛋白質(zhì)。“多肽”既指通常稱為肽、寡肽或寡聚物的短鏈，也指通常稱為蛋白質(zhì)的較長鏈。多肽可包含20種基因編碼氨基酸以外的氨基酸?！岸嚯摹卑ㄍㄟ^自然過程如翻譯后加工，或者通過本領(lǐng)域中公知的化學(xué)修飾技術(shù)修飾的氨基酸序列。這樣的修飾被詳細(xì)記載于基礎(chǔ)教科書和更詳細(xì)的專著，以及分卷的研究文獻(xiàn)中。修飾可發(fā)生在多肽的任何位置，包括肽骨架、氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端。應(yīng)理解相同類型的修飾可以相同或不同的程度存在于給定多肽的數(shù)個(gè)位點(diǎn)處。而且，給定多肽可包含多種類型的修飾。多肽可由于遍在蛋白化作用而具有分支，而且它們也可以是具有或沒有分支的環(huán)狀。環(huán)狀、分支和分支環(huán)狀多肽可以由翻譯后自然過程或者通過合成方法產(chǎn)生。修飾可包括乙?；?、?；dp-核糖基化、酰胺化、黃素的共價(jià)附著、血紅素部分的共價(jià)附著、核苷酸或核苷酸衍生物的共價(jià)附著、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價(jià)附著、磷脂酰肌醇的共價(jià)附著、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫甲基、共價(jià)交聯(lián)形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ羧化、糖基化、gpi錨形成、羥化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯化、外消旋、硒?；⒘蛩猁}化、轉(zhuǎn)運(yùn)rna介導(dǎo)的氨基酸至蛋白質(zhì)的添加諸如精氨?；氨樵诘鞍谆⒁娎鏿roteins-structureandmolecularproperties,2nded.,t.e.creighton,w.h.freemanandcompany,newyork,1993andwold,f.,posttranslationalproteinmodifications:perspectivesandprospects,pgs.1-12inposttranslationalcovalentmodificationofproteins,b.c.johnson,ed.,academicpress,newyork,1983；seifteretal.,"analysisforproteinmodificationsandnonproteincofactors",methenzymol(1990)182:626-646andrattanetal,"proteinsynthesis:posttranslationalmodificationsandaging",annnyacadsci(1992)663:48-62。術(shù)語“多肽”包括本領(lǐng)域中已知的多種合成肽變體，例如反向釋放d肽(retroinversodpeptide)。所述肽可以是抗原決定簇和/或t細(xì)胞表位。所述肽可以在體內(nèi)是免疫原性的。所述肽能夠在體內(nèi)誘導(dǎo)抗體被中和。正如適用于prl-1和prl-3那樣，所產(chǎn)生的氨基酸序列可具有一種或多種活性，例如與prl-1多肽或prl-3多肽(如人prl-1多肽或prl-3多肽)相同的生物活性。例如，與在正常乳腺細(xì)胞中相比，prl-1或prl-3同系物在癌細(xì)胞中的表達(dá)水平可升高。具體而言，術(shù)語“同系物”意在涵蓋結(jié)構(gòu)和/或功能方面的同一性，前提是所得到的氨基酸序列具有prl-1或prl-3活性。就序列同一性(即相似性)而言，可有至少70％，例如至少75％，例如至少85％，例如至少90％的序列同一性?？捎兄辽?5％，例如至少98％的序列同一性。這些術(shù)語還涵蓋由為所述prl-1核酸或prl-3核酸序列的等位基因變異體的氨基酸得到的多肽。在提及多肽諸如prl-1和prl-3的“活性”或“生物學(xué)活性”時(shí)，這些術(shù)語意指prl-1和prl-3的代謝或生理功能，包括類似的活性或改善的活性或者不想要的副作用降低的這些活性。還包括prl-1和prl-3的抗原性和免疫原性活性。這些活性的實(shí)例以及測定和定量這些活性的方法在本領(lǐng)域中是已知的，并且被詳細(xì)記載于本文的其他地方?？贵w如果上下文允許，本文中使用的術(shù)語“抗體”和“免疫球蛋白”可互換使用。這些術(shù)語包括抗體分子的這樣的蛋白水解切割部分或重組制備部分的片段，即這些片段能夠選擇性地與prl-1或prl-3或者它們的表位相互作用，或者識(shí)別之，所述表位例如被269結(jié)合的prl-1的表位或被223或318結(jié)合的prl-3的表位。prl-1的表位包括tyknmr和tlnkfi。prl-3的表位包括kakfyn和hthktr。這種水解和/或重組片段的非限制性實(shí)例包括fab、f(ab')2、fab'、fv片段，以及包含通過肽連接子結(jié)合的vl和vh區(qū)的單鏈抗體(scfv)。這些fv可以共價(jià)地或非共價(jià)地連接，以形成具有兩個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的抗體。本發(fā)明人以“scfv分子”表示vh和vl配對區(qū)通過靈活的寡肽連接的分子。涉及保持了其特異性結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段合成的一般性技術(shù)綜述見winter&milstein(1991)nature349,293-299。完整抗體和f(ab')2片段是“二價(jià)物”。本發(fā)明人以“二價(jià)物”表示所述抗體和f(ab')片段具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。相反，fab、fv、scfv和dab是僅具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的一價(jià)物。所述抗-prl抗體可包括解離速率(offrate)為10-2s-1-10-4s-1的高親和性抗體。所述解離速率可以為約2×10-4s-1。本文中使用的術(shù)語“解離速率”是指抗體例如本文公開的抗-prl抗體的離解速率(koff)。解離速率可使用biaevaluation軟件(pharmacia)測量。低解離速率是需要的，這是因?yàn)樗煞从砯ab片段對于抗原的親和性。術(shù)語“親和性”以抗體例如抗-prl抗體的離解速率或解離速率(koff)定義。所述解離速率越低，則抗體例如抗-prl抗體具有的對抗原例如prl-1或prl-3的親和性就越高。所述抗-prl抗體可包括肽本身或者可形成融合蛋白的一部分。本文描述的抗-prl抗體包括任何具有prl-1或prl-3結(jié)合活性的抗體，所述結(jié)合活性為例如結(jié)合至細(xì)胞內(nèi)prl-1或prl-3的能力，或者結(jié)合至與269、223或318結(jié)合的相同表位(包括tyknmr、tlnkfi、kakfyn和hthktr)(視情況而定)的能力。所述抗-prl抗體還包括小鼠的、人源化的或人的整個(gè)或完整抗體，例如抗體衍生物和生物學(xué)活性片段。它們可包括這樣的具有prl-1或prl-3結(jié)合活性的抗體片段，即所述抗體片段具有氨基酸置換或者具有糖分子或其他分子粘附于氨基酸官能團(tuán)等。所述抗-prl抗體可包括分離的抗體或純化的抗體。它可以從任何合適的天然源或非天然源得到或由其產(chǎn)生，或者它可以是合成的抗-prl抗體、半合成的抗-prl抗體、衍生的抗-prl抗體或重組抗-prl抗體。如果所述抗-prl抗體為非天然的抗-prl抗體，那么它可包括至少一部分通過重組dna技術(shù)制備的抗-prl抗體，或者通過化學(xué)合成技術(shù)產(chǎn)生的抗-prl抗體，或者它們的組合。本文中使用的術(shù)語“衍生物”包括經(jīng)化學(xué)修飾的抗-prl抗體。例如，示例性的這種修飾可以是以烷基、?；虬被鎿Q氫。所述抗-prl抗體的序列可以與天然存在形式的序列相同，或者它可以是其變體、同系物、片段或衍生物。抗體可變區(qū)本文使用的術(shù)語“可變區(qū)”是指輕鏈(vl)和重鏈(vh)的可變區(qū)或域，所述可變區(qū)或域可包含所述抗體對prl-1或prl-3(或者變體、同系物、片段或衍生物)(視情況而定)的結(jié)合識(shí)別特異性決定簇和總親和性決定簇。每對輕鏈(vl)和重鏈(vh)的可變域參與至抗原識(shí)別并形成抗原結(jié)合位點(diǎn)。輕鏈域和重鏈域具有相同的整體結(jié)構(gòu)，并且每個(gè)域具有4個(gè)框架(fr)區(qū)，所述框架區(qū)的序列相對保守，由3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)連接。所述fr區(qū)保持可變域的結(jié)構(gòu)完整性。所述cdr是可變域中介導(dǎo)抗原結(jié)合的多肽區(qū)段。本文使用的術(shù)語“恒定區(qū)”是指抗體(或者變體、同系物、片段或衍生物)這樣的輕鏈域(cl)和重鏈域(ch)，即所述輕鏈域(cl)和重鏈域(ch)提供了結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和其他生物學(xué)功能，例如抗體鏈關(guān)聯(lián)、分泌、經(jīng)胎盤移動(dòng)性和互補(bǔ)結(jié)合，但不參與結(jié)合prl-1或prl-3表位。恒定區(qū)基因的氨基酸序列和相應(yīng)外顯子序列將依賴于它所源自的物種。然而，對于一物種中的具體恒定區(qū)來說，導(dǎo)致同種異型的氨基酸序列的變化是相對有限的?！巴N異型”是可區(qū)分等位基因的抗原決定簇(或者表位)。每條鏈的可變區(qū)通過連接性多肽序列與恒定區(qū)相接。所述連接序列由輕鏈基因中的“j”序列以及重鏈基因中的“d”序列和“j”序列的聯(lián)合序列編碼?？贵w269、223和318：可變區(qū)序列抗體269單克隆抗體269可變區(qū)重鏈的核酸序列如下(seqidno：1)：gggaattcatgaaatgcagctgggttattctcttcctgttttcagtaactgcaggtgtccactcccaggtccagtttcagcagtctggggctgaactggcaaaacctggggcctcagtgaagatgtcctgcaaggcttctggctacacttttactagttatcggatgcactgggtaaaacagaggcctggacagggtctggaatggattggatacattaatcctagcactggttatactgagtacaatcagaagttcaaggacaaggccacattgactgcagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactgagcagcctgacatctgaggactctgcagtctattactgttcaagctatggtaacttcggctactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagagagtcagtccttcccaaatgtcttccccctcgtaagcttggga單克隆抗體269可變區(qū)重鏈的氨基酸序列如下(seqidno：2)：efmkcswvilflfsvtagvhsqvqfqqsgaelakpgasvkmsckasgytftsyrmhwvkqrpgqglewigyinpstgyteynqkfkdkatltadkssstaymqlssltsedsavyycssygnfgywgqgttltvssesqsfpnvfplvslg單克隆抗體269可變區(qū)輕鏈的核酸序列如下(seqidno：3)：ctgtctactgctctctggtgagagtcagtctcacttgtcgggcaagtcaggacattggtagtagcttaaactggcttcagcagaaagcagatggaaccattaaacgcctgatctatgccacatccagtttagattctggtgtccccaaaaggttcagtggcagtaggtctgggtcagattattctctcaccatcagcagccttgagtctgaagattttgtagactattactgtctacaatatgctagttctccgtggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaacgggctgatgctgcacctcactggagatcctgcagatcacgcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatct單克隆抗體269可變區(qū)輕鏈的氨基酸序列如下(seqidno：4)：vycslvrvsltcrasqdigsslnwlqqkadgtikrliyatssldsgvpkrfsgsrsgsdysltisslesedfvdyyclqyasspwtfgggtkleikradaaphwrscrsrelwlhhlssssrhlmss抗體223單克隆抗體223可變區(qū)重鏈的核酸序列如下(seqidno：5)：gggaattcatggaatggagctgggttattctcttcctcctgtcaataattgcaggtgtccattgccaggtccagctgcagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaggatatcctgcaaggcttctggctacaccttcacaagctactatatacactgggtgaagcagaggcctggacagggacttgagtggattggatggatttatcctggaaatgttaatactgagtacaatgagaagttcaggggcaaggccacactgactgcagacaaatcctccagcacagcctacatgcagctcagcagcctgacctctgaggactctgcggtctatttctgtgcaagtgaggagaggaattacccctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgcagccaaaacgacacccccacccgtctatcccttggtccctggaagcttggga單克隆抗體223可變區(qū)重鏈的氨基酸序列如下(seqidno：6)：efmewswvilfllsiiagvhcqvqlqqsgpelvkpgasvrisckasgytftsyyihwvkqrpgqglewigwiypgnvnteynekfrgkatltadkssstaymqlssltsedsavyfcaseernypwfaywgqgtlvtvsaakttpppvyplvpgslg單克隆抗體223可變區(qū)輕鏈的核酸序列如下(seqidno：7)：tgggaattcatggagacagacacactcctgctatgggtgctgctgctctgggttccaggctccactggtgacattgtgctgacccaatctccagcttctttggctgtgtctctagggcagagggccaccatctcctgcaaggccagccaaagtgttgaagatgatggtgaaaattatatgaactggtaccaacagaaaccaggacagtcacccaaactcctcatctatgctgcatccaatctagaatctgggatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcaaagtaatgaggatccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccagtaagcttggg單克隆抗體223可變區(qū)輕鏈的氨基酸序列如下(seqidno：8)：wefmetdtlllwvlllwvpgstgdivltqspaslavslgqratisckasqsveddgenymnwyqqkpgqspklliyaasnlesgiparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqqsnedpftfgsgtkleikradaaptvsifppssklg抗體318單克隆抗體318可變區(qū)重鏈的核酸序列如下(seqidno：9)：gggaattcatggaatggagctgggttttcctcttcctcctgtcaataattgcaggtgtccattgccaggtccagctgcagcagtctggacctgagctggtgaagcctggggcttcagtgaggatatcctgcaaggcttctggctacaccttcacaaactactatatgcactgggtgaagcagaggcctggacagggacttgagtggattggatggatttatcctggaaatgttaatacttattacaatgagaagttcagggcaaggccacactgactgcagacaaatcctccagcacagcctacatgcagctcagcagcctgacctctgaggactctgcggtctatttctgtgcaagtgaggagagaattacccctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgcagccaaaacgacacccccatccgtctatcccctggtccctggaagcttggga單克隆抗體318可變區(qū)重鏈的氨基酸序列如下(seqidno：10)：efmewswvflfllsiiagvhcqvqlqqsgpelvkpgasvrisckasgytftnyymhwvkqrpgqglewigwiypgnvntyynekfrarph.lqtnppaqptcssaa.plrtlrsisvqvrrelplvcllgprdsghclcsqndtpirlspgpwklg單克隆抗體318可變區(qū)輕鏈的核酸序列如下(seqidno：11)：actagtcgacatggagtcagacacactgctgttatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacattgtgctgacacagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaacgggctgatgctgcaccaactgtatccatcttcccaccatccataagcttggga單克隆抗體318可變區(qū)輕鏈的氨基酸序列如下(seqidno：12)：lvdmesdtlllwvlllwvpgstgdivltqspaslavslgqratisyrasksvstsgysymhwnqqkpgqpprlliylvsnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqhireltrseggpswk根據(jù)本文描述的方法和組合物，可通過本領(lǐng)域中已知的方法從這些可變區(qū)序列生成抗-prl1抗體和抗-prl3抗體。例如，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的重組基因工程技術(shù)，可將所述重鏈和輕鏈序列重組成為選擇抗體的恒定序列。恒定區(qū)序列是本領(lǐng)域中已知的，并且可從多個(gè)數(shù)據(jù)庫獲得，所述數(shù)據(jù)庫例如imgt/ligm-db數(shù)據(jù)庫(記載于giudicellietal，2006，nucleicacidsresearch34(databaseissue)：d781-d784andlefrancetal(1995)ligm-db/imgt：anintegrateddatabaseofigandtcr，partoftheimmunogeneticsdatabase.annalsofthenewyorkacademyofsciences764(1)，47-47doi：10.1111/j.1749-6632.1995.tb55805.x)和imgt/gene-db數(shù)據(jù)庫(記載于giudicellietal，2005，nucleicacidsres.2005jan1；33(databaseissue)：d256-61)。imgt/ligm-db和imgt/gene-db是位于www.ebi.ac.uk/imgt/的immunogeneticsdatabase的一部分。用于將可變區(qū)與給定序列和恒定區(qū)結(jié)合以產(chǎn)生完整抗體的方法是本領(lǐng)域中已知的，并被記載于例如實(shí)施例16和hansonetal.，(2006).respiratoryresearch，7：126中。完整抗體的片段例如fv、f(ab′)和f(ab′)2片段或者單鏈抗體(scfv)可通過本領(lǐng)域中已知的方法產(chǎn)生。例如，使用文獻(xiàn)中公開的序列和方法，可將具有上文所示序列的抗體318可變區(qū)的重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因地融合至小鼠igg恒定區(qū)序列，以產(chǎn)生小鼠單克隆抗-prl-3抗體。類似地，318可變區(qū)可與人igg抗體的恒定區(qū)重組地表達(dá)，以產(chǎn)生一種人源化的抗-prl-3抗體。223抗體和269抗體的可變區(qū)可以被設(shè)計(jì)來與小鼠或人igg恒定區(qū)在一起，以產(chǎn)生能夠結(jié)合至prl-1多肽的小鼠單克隆抗體或人源化抗體。檢測和診斷方法對prl-1和prl-3表達(dá)的檢測prl-1和prl-3在癌癥組織中的表達(dá)與正常組織相比是上調(diào)的。因此，本發(fā)明人提供了一種診斷癌癥包括轉(zhuǎn)移性、侵襲性或侵入性(invasive)癌癥的方法，包括在個(gè)體的細(xì)胞或組織中檢測prl-1和prl-3的表達(dá)調(diào)節(jié)，例如prl-1和prl-3表達(dá)的上調(diào)。所述方法可包括使用本文中描述的抗-prl抗體。所述抗-prl抗體可用于免疫測定中，以檢測和測定生物樣品中prl-1或prl-3的量，從而提供prl-1或prl-3在所述樣品所來源的細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體中的表達(dá)水平的指標(biāo)。免疫測定包括elisa、蛋白質(zhì)印跡等，并且應(yīng)用它們評估prl-1和prl-3表達(dá)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。對prl-1和prl-3表達(dá)、活性和量的檢測可用于提供一種確定細(xì)胞增殖狀態(tài)的方法。因此，增殖細(xì)胞與正常細(xì)胞相比具有較高水平的prl-1和prl-3表達(dá)、活性或量。類似地，非增殖細(xì)胞與正常細(xì)胞相比具有低水平的prl-1和prl-3表達(dá)、活性或量。這樣的檢測還可用于確定細(xì)胞是否會(huì)變成侵入性的或侵襲性的。因此，在細(xì)胞中檢測到高水平的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性可指示所述細(xì)胞可能是或者可變成侵襲性的、轉(zhuǎn)移性的或侵入性的。類似地，如果細(xì)胞具有低水平的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性，那么所述細(xì)胞不是或者可能不是侵襲性的、轉(zhuǎn)移性的或侵入性的。應(yīng)了解，由于prl-1和prl-3的水平會(huì)隨腫瘤的侵襲性變化，因此對prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性的檢測還可用于預(yù)測癌癥個(gè)體的存活率，即高水平的prl-1和prl-3指示較低的存活率或幾率，低水平的prl-1和prl-3指示較高的存活率或幾率，這兩種情況均是與具有正常水平prl-1和prl-3的個(gè)體或同類種群相比較。對prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性的檢測因此可用作一種癌癥患者的預(yù)后方法。對prl-1和prl-3表達(dá)、量或水平的檢測可用于確定一種具體的療法在癌癥個(gè)體中成功的可能性。它可用于一種確定腫瘤在個(gè)體中是否是或者是否可能是一種侵入瘤或轉(zhuǎn)移瘤的方法中。本文中描述的診斷方法可與所述治療方法結(jié)合。因此，本發(fā)明人提供了一種在個(gè)體中治療、預(yù)防或緩解癌癥的方法，所述方法包括在所述個(gè)體的細(xì)胞中檢測prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性的調(diào)節(jié)，并基于所述腫瘤的侵襲性將合適的治療物給予所述個(gè)體。一般而言，將物理檢查x-射線用于檢測癌癥。一般采取腫瘤的活檢組織，用于診斷癌癥的組織病理學(xué)檢查。對prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性的檢測可與標(biāo)準(zhǔn)組織病理學(xué)方法一塊用于診斷癌癥，或者進(jìn)一步確認(rèn)癌癥的診斷。這在組織病理學(xué)分析不能產(chǎn)生一個(gè)清晰的結(jié)果時(shí)可能是特別有用的。如下文進(jìn)一步詳述的，可檢測prl-1和prl-3多肽及prl-1和prl-3核酸在樣品中的存在和量。因此，通過包括以下步驟的方法可診斷與prl-1和prl-3相關(guān)的疾病(包括癌癥)：從源自受試者的樣品確定prl-1和prl-3多肽或者prl-1和prl-3mrna表達(dá)、量或活性的非正常降低或升高，例如表達(dá)、量或活性的升高。所述樣品可包括來自患有或疑似患有這樣的疾病的生物體或個(gè)體的細(xì)胞樣品或組織樣品，即該疾病與升高的、降低的或者要不然異常的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性有關(guān)，包括表達(dá)、量或活性的水平或模式的空間變化或時(shí)間變化。prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性在患有或疑似患有這種疾病的生物體中的水平或模式可用于與表達(dá)、量或活性在正常生物體中的水平或模式比較，作為一種診斷疾病的方法。所述樣品可包括來自患有或疑似患有癌癥的個(gè)體的細(xì)胞樣品或組織樣品，例如相關(guān)的組織樣品或細(xì)胞樣品。在一些實(shí)施方案中，在所述樣品中檢測到水平升高的prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性。prl-1和prl-3的水平與正常細(xì)胞或已知不是癌癥的細(xì)胞相比可提高至一個(gè)顯著的程度。這種細(xì)胞可獲自被試驗(yàn)的個(gè)體或其他個(gè)體，例如那些與所述試驗(yàn)個(gè)體在年齡、體重、生活方式等上匹配的個(gè)體。在一些實(shí)施方案中，prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性的水平升高10％、20％、30％或40％，或者升高更多。在一些實(shí)施方案中，prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性的水平升高45％或更多，例如50％或更多，這通過cdna雜交判斷。如本領(lǐng)域中已知的以及下文中進(jìn)一步詳述的，prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性可以多種方式檢測。一般而言，在來自個(gè)體的組織樣品中測量prl-1和prl-3的量，并將該量與來自未感染個(gè)體的樣品比較。除了可以檢測prl-1和prl-3多肽的水平，還可以檢測prl-1和prl-3核酸的水平。對prl-1和prl-3的量、活性或表達(dá)的檢測可用于對癌癥分級(jí)。例如，高水平的prl-1和prl-3量、活性或表達(dá)可指示一種侵襲性的、侵入性的或轉(zhuǎn)移性的癌。類似地，低水平的prl-1和prl-3量、活性或表達(dá)可指示一種非侵襲性的、非侵入性的或非轉(zhuǎn)移性的癌。這種分級(jí)體系可與已確立的分級(jí)體系結(jié)合使用?？墒褂枚喾N不同技術(shù)確定prl-1和prl-3基因表達(dá)的水平。對rna水平的prl-1和prl-3表達(dá)的測量可以在rna水平檢測prl-1和prl-3的基因表達(dá)。因此在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明人公開了一種通過以下方式在一個(gè)樣品中檢測包括prl-1和prl-3核酸的核酸存在情況的方法：將所述樣品與對所述prl-1和prl-3核酸特異的至少一種核酸探針接觸，并對所述樣品監(jiān)測prl-1和prl-3核酸的存在情況。例如，所述核酸探針可特異性地結(jié)合至prl-1和prl-3核酸或其一部分，并且還可檢測兩種被檢測物之間的結(jié)合情況和所述復(fù)合物自身的存在情況。prl-1和prl-3表達(dá)的rna檢測可用于補(bǔ)充多肽表達(dá)測定，如下文所述，所述多肽表達(dá)測定可應(yīng)用本文所述的抗-prl抗體。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，可以在一個(gè)樣品中測量prl-1和prl-3mrna形式的prl-1和prl-3核酸的量。prl-1和prl-3mrna的測定可通過原位雜交、rna印跡和反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。核酸序列的鑒定可通過原位雜交、dna印跡、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、使用特異性引物的pcr擴(kuò)增和dna芯片分析。(kawasaki,1990；sambrook,1992；lichteretal,1990；oritaetal,1989；fodoretal.,1993；peaseetal.,1994)?？梢允褂胷na提取技術(shù)從細(xì)胞提取prl-1和prl-3rna，所述rna提取技術(shù)包括例如酸性酚/異硫氰酸胍提取(rnazolb；biogenesis)或者rneasyrna制備試劑盒(qiagen)。利用核糖核酸雜交的一般性測定形式包括核連綴分析(nuclearrun-onassay)、rt-pcr和rna酶保護(hù)測定(meltonetal.,nuc.acidsres.12:7035)?？杀粦?yīng)用的檢測方法包括放射性標(biāo)記、酶標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、熒光標(biāo)記和其他合適的標(biāo)記。這些方法中的每種均允許進(jìn)行定量測定，并且這些方法是本領(lǐng)域中熟知的。因此，可使用任何本領(lǐng)域中熟知的多核苷酸定量方法測量rna水平的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性的降低或升高。來自prl-1和prl-3序列的任何合適探針例如合適的人prl-1和prl-3序列的任何部分可用作探針。用于設(shè)計(jì)prl-1和prl-3探針的序列可包括登記號(hào)nm_015472的序列或其部分。一般而言，使用rt-pcr來擴(kuò)增rna靶標(biāo)。在該方法中，使用反轉(zhuǎn)錄酶來將rna轉(zhuǎn)換成互補(bǔ)dna(cdna)，然后可擴(kuò)增cdna以有利于檢測。許多dna擴(kuò)增方法是已知的，它們中的大多數(shù)依賴于酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或自主序列復(fù)制)或者來自對其中克隆它的載體的全部或部分的復(fù)制。許多靶標(biāo)和信號(hào)擴(kuò)增方法已在文獻(xiàn)中有記載，例如這些方法的一般性綜述見landegren,u.etal.,science242:229-237(1988)和lewis,r.,geneticengineeringnews10:1,54-55(1990)。例如，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可應(yīng)用于檢測prl-1和prl-3mrna?！熬酆厦告?zhǔn)椒磻?yīng)”或“pcr”是一種核酸擴(kuò)增方法，記載于美國專利4,683,195、4,683,202等。在診斷中，pcr可用于擴(kuò)增任何已知的核酸(moketal.,1994,gynaecologiconcology52:247-252)。自主序列復(fù)制(3sr)是tas的一種變化形式，它涉及經(jīng)以下途經(jīng)的核酸模板等溫?cái)U(kuò)增：由酶混合物和合適的寡核苷酸引物介導(dǎo)的反轉(zhuǎn)錄酶(rt)、聚合酶和核酸酶活性的連續(xù)循環(huán)(guatellietal.,1990,proc.natl.acad.sci.usa87:1874)。連接擴(kuò)增反應(yīng)或連接擴(kuò)增體系使用dna連接酶和4種寡核苷酸——每條靶鏈2種。該技術(shù)記載于wu,d.y.andwallace,r.b.,1989,genomics4:560。在qβ復(fù)制酶技術(shù)中，將復(fù)制單鏈rna的噬菌體qβ的rna復(fù)制酶用于擴(kuò)增靶dna，如lizardietal.,1988,bio/technology6:1197所記載的。pcr過程基本包括：(1)處理提取的dna以形成單鏈的互補(bǔ)鏈；(2)添加一對寡核苷酸引物，其中該對引物的一個(gè)引物與所述序列有義鏈的一部分基本互補(bǔ)，每對引物的另一個(gè)引物與同一序列互補(bǔ)反義鏈的不同部分基本互補(bǔ)；(3)使所述配對的引物與所述互補(bǔ)序列退火；(4)同時(shí)從每個(gè)引物的3'端延伸所述退火引物，以合成一個(gè)與同每個(gè)引物退火的鏈互補(bǔ)的延伸產(chǎn)物，其中所述延伸產(chǎn)物在從所述互補(bǔ)物分離后作為模板，用于為每對引物的另一個(gè)引物合成延伸產(chǎn)物；(5)從所述模板分離所述延伸產(chǎn)物，以產(chǎn)生單鏈的分子；及(6)通過重復(fù)至少一次所述退火、延伸和分離步驟擴(kuò)增所述單鏈分子?？蓱?yīng)用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(rt-pcr)。還可使用定量rt-pcr。這些pcr技術(shù)在本領(lǐng)域中是熟知的，并且可應(yīng)用來自prl-1和prl-3序列的任何合適的引物。還可利用另一種擴(kuò)增技術(shù)。例如，滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(lizardietal.,1998,natgenet19:225)是一種商業(yè)化的擴(kuò)增技術(shù)(rcattm)，該技術(shù)由dna聚合酶驅(qū)動(dòng)并且可在等溫條件下以線性動(dòng)力學(xué)或幾何動(dòng)力學(xué)復(fù)制環(huán)形的寡核苷酸探針。另一種技術(shù)——鏈置換擴(kuò)增(sda；walkeretal.,1992,proc.natl.acad.sci.usa80:392)開始于特定靶標(biāo)所特有的明確確定的序列。對多肽水平的prl-1和prl-3表達(dá)的測量可以在多肽水平檢測prl-1和prl-3的表達(dá)。因此，在又一個(gè)實(shí)施方案中，可以通過在一個(gè)樣品中檢測prl-1和prl-3多肽的存在或量而檢測prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性。這一點(diǎn)可通過使用結(jié)合prl-1和prl-3多肽的分子實(shí)現(xiàn)。直接或間接結(jié)合于prl-1和prl-3多肽以檢測其存在情況的合適分子/制劑包括天然存在的分子例如肽和蛋白質(zhì)(例如抗體)，或者它們可以是合成的分子。因此，本發(fā)明人公開了一種通過以下方式檢測prl-1和prl-3多肽存在情況的方法：將一個(gè)細(xì)胞樣品與一種能夠結(jié)合所述多肽的抗體接觸，及監(jiān)測所述樣品的所述多肽的存在情況。例如，可以使用本文描述的抗-prl-1抗體和抗-prl-3抗體檢測所述prl-1和prl-3多肽。這樣的抗體可通過本文中詳述的方法制備。在一個(gè)具體的實(shí)例中，抗-prl-1抗體可包括能夠結(jié)合至與單克隆抗體269所結(jié)合表位相同的表位的抗體。這可包括單克隆抗體269本身、包含抗體269可變區(qū)的抗體或者人源化的單克隆抗體269。類似地，抗-prl-3抗體可包括能夠結(jié)合至與單克隆抗體223或318所結(jié)合表位相同的表位的抗體。這可包括單克隆抗體223或318本身、包含抗體223或318可變區(qū)的抗體或者人源化的單克隆抗體223或318。該測定可方便地通過以下方式取得：監(jiān)測所述抗體和所述多肽之間形成的復(fù)合物的存在情況，或者監(jiān)測所述多肽和所述抗體之間的結(jié)合情況。檢測兩個(gè)實(shí)體之間的結(jié)合情況的方法在本領(lǐng)域中是已知的，包括fret(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)、表面等離子體共振等。標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)例如上述的免疫印跡可用于檢測與相同細(xì)胞群中未處理的細(xì)胞相比prl-1和prl-3蛋白的水平改變?；虮磉_(dá)的確定還可通過檢測prl-1和prl-3多肽翻譯后加工或prl-1和prl-3核酸轉(zhuǎn)錄后修飾的變化。例如，可測量prl-1和prl-3多肽的差異磷酸化、prl-1和prl-3多肽的切割情況，或者prl-1和prl-3rna的可變剪接等?？墒褂脤Ｓ械牡鞍诇y定或技術(shù)例如2d聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測基因產(chǎn)物例如prl-1和prl-3多肽的表達(dá)水平以及它們的翻譯后修飾水平。可用于確定來自宿主的樣品中的prl-1和prl-3蛋白水平的測定技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。通過本領(lǐng)域中已知的任何方法可測定抗體的免疫特異性結(jié)合?？墒褂玫拿庖邷y定包括但不限于使用例如以下技術(shù)的競爭性和非競爭性測定體系：蛋白質(zhì)印跡、放射免疫測定、elisa、夾心免疫測定(sandwichimmunoassays)、免疫沉淀測定、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀素反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測定、凝集測定、補(bǔ)體結(jié)合測定、免疫放射性測定、熒光免疫測定和蛋白a免疫測定。這些測定在本領(lǐng)域中是常規(guī)的(例如，見ausubeletal.,eds,1994,currentprotocolsinmolecularbiology,vol.1,johnwiley&sons,inc.,newyork，該文獻(xiàn)通過引用的方式全文納入本文)。對標(biāo)本測定多肽/蛋白可通過免疫組織化學(xué)染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色(通常見stitesandterr,basicandclinicalimmunology,appletonandlange,1994)、elisa、ria、免疫印跡、蛋白質(zhì)印跡法、免疫沉淀、功能測定和蛋白截短檢測。其他測定方法包括放射免疫測定、競爭性結(jié)合測定、蛋白質(zhì)印跡分析和elisa測定。elisa測定是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。多克隆抗體和單克隆抗體都可用于所述測定中。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，只要合適，可以使用其他免疫測定，例如放射免疫測定(ria)?？捎玫拿庖邷y定廣泛地記載于專利和科學(xué)文獻(xiàn)中。例如，見美國專利3,791,932、3,839,153、3,850,752、3,850,578、3,853,987、3,867,517、3,879,262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5,011,771和5,281,521，以及sambrooketal,1992。診斷試劑盒本發(fā)明人還提供了用于在個(gè)體中檢測癌癥或者在個(gè)體中檢測癌癥易感性的診斷試劑盒。所述診斷試劑盒可包含通過本文中描述的任何方法檢測prl-1或prl-3在所述個(gè)體中的表達(dá)、量或活性的工具。因此，所述診斷試劑盒可包含以下抗體中的一種或多種：抗-prl抗體、能夠結(jié)合至與單克隆抗體269、223或318所結(jié)合表位相同的表位的抗體、單克隆抗體269、包含抗體269可變區(qū)的抗體或人源化的單克隆抗體269；單克隆抗體223、包含抗體223可變區(qū)的抗體或人源化的單克隆抗體223；單克隆抗體318、包含抗體318可變區(qū)的抗體或人源化的單克隆抗體318。所述診斷試劑盒可包含使用說明書或其他指示物。所述診斷試劑盒還可包含用于治療或預(yù)防乳腺癌的工具例如本文中描述的任一組合物，或者本領(lǐng)域中已知用于治療乳腺癌的任何工具。具體而言，所述可包含如所述的抗-prl1抗體或抗-prl3抗體(例如通過篩查得到的)。預(yù)防和治療方法本發(fā)明人公開了一種治療與過量的prl-1和prl-3表達(dá)或活性有關(guān)的異常病癥例如癌癥的方法。防止癌癥(即預(yù)防)的方法也適當(dāng)?shù)夭捎孟嗤蛳嗨频姆椒?。通常而言，本發(fā)明人的方法涉及通過調(diào)節(jié)(例如下調(diào))細(xì)胞中prl-1和prl-3的表達(dá)、量或活性而操作癌細(xì)胞。所述方法可涉及破壞或消除癌細(xì)胞。所述癌細(xì)胞可包括表達(dá)prl-1和/或prl-3的癌細(xì)胞。所述癌細(xì)胞可以是與非癌細(xì)胞相比過表達(dá)prl-1和/或prl-3的細(xì)胞。本發(fā)明人的方法可包括將一名患者暴露于抗-prl抗體，例如抗-prl-1抗體和/或抗-prl-3抗體。所述抗-prl-1抗體可包括人源化的抗-prl-1抗體；同樣所述抗-prl-3抗體可包括人源化的抗-prl-3抗體。所述癌細(xì)胞可來自prl-1和/或prl-3陽性癌癥患者。因此，本發(fā)明人的方法可包括從prl-3/-1陽性癌癥患者消除過表達(dá)prl-1和/或prl-3的癌細(xì)胞。因此，本發(fā)明人的方法可包括，使用人源化的rl-3/-1抗體從prl-3/-1陽性癌癥患者消除過表達(dá)prl-1和/或prl-3的細(xì)胞。在所述操作步驟之前或之后可進(jìn)行一個(gè)步驟，即在細(xì)胞中檢測受調(diào)節(jié)的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性。所述檢測步驟可檢測上調(diào)的或下調(diào)的prl-1和prl-3表達(dá)、量或活性。如本文別處詳述的，可使用任何調(diào)節(jié)或下調(diào)prl-1和prl-3的方法。具體地，所述方法可包括將所述細(xì)胞暴露于能夠特異性地結(jié)合至prl-1或prl-3的抗-prl-1抗體或抗-prl-3抗體?？?prl抗體及給予它們的方法詳細(xì)記載于本文的別處。根據(jù)本發(fā)明人的方法，由于所述操作，所述癌細(xì)胞變成非癌性的，或者所述侵入或轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞變成非侵入的或非轉(zhuǎn)移的。所述癌癥可具體地包括選自以下的諸如侵入癌或轉(zhuǎn)移癌等的癌癥：結(jié)腸直腸癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、陰莖癌、子宮頸癌、腦癌、食道癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、卵巢淋巴瘤和皮膚黑色素瘤。由于prl-1和prl-3與癌癥的侵襲性和侵入性相關(guān)，因此可以在患有癌癥的個(gè)體的細(xì)胞中、在癌細(xì)胞或非癌細(xì)胞中檢測prl-1和prl-3的水平，并評估所述癌癥的侵襲性。與正常細(xì)胞相比高水平的prl-1和prl-3的量、表達(dá)或活性指示侵襲性癌或侵入性癌，因此需要并可選用更強(qiáng)或更激烈的療法。類似地，低水平可指示一種更低侵襲性或侵入性的療法。本文描述的所述方法可用于任何prl-1和prl-3相關(guān)疾病的一般性治療。prl-1和prl-3相關(guān)疾病包括增殖性疾病，特別包括癌癥。例如，prl-1和prl-3相關(guān)疾病可包括轉(zhuǎn)移性癌、侵入性癌或侵襲性癌。本文描述的方法和組合物適宜于使得實(shí)施治療的個(gè)體中的一個(gè)可測量的判據(jù)與沒有接受所述治療的個(gè)體相比得到提高。為此，可指定多種判據(jù)，這些判據(jù)可反映患者的癌癥的進(jìn)展或健康。有用的判據(jù)可包括腫瘤大小、腫瘤尺寸、腫瘤的最大尺寸、腫瘤數(shù)目、腫瘤標(biāo)記物的存在(例如甲胎蛋白)、轉(zhuǎn)移的程度或數(shù)目等。因此，作為一個(gè)實(shí)例，所治療的個(gè)體可顯示腫瘤大小或數(shù)目的減小或減少，這可通過合適的測定或試驗(yàn)測得。例如，所治療的個(gè)體與沒有被治療的個(gè)體相比，可顯示在以下方面減小或減少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更高：具體腫瘤的腫瘤大小和/或腫瘤數(shù)目。例如，如果與疾病相關(guān)的病癥相對于對照被顯著抑制(即50％或更高)，那么prl-1和prl-3相關(guān)疾病可被定義為“得到治療”。所述抑制可以是相對于對照至少75％，例如相對于對照90％、95％或100％。所述病癥可包括細(xì)胞增殖，或者可包括細(xì)胞周期時(shí)間、細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲力、腫瘤形成、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤擴(kuò)散等。本發(fā)明人使用術(shù)語“治療”是指，還包括預(yù)防或緩解癌癥。術(shù)語增殖障礙以廣義應(yīng)用于本文中，包括任何需要控制細(xì)胞周期的障礙。具體而言，增殖障礙包括惡性障礙和腫瘤前期障礙。本文描述的方法和組合物涉及治療或診斷諸如以下的腺癌時(shí)特別有用：小細(xì)胞肺癌、腎癌、子宮癌、前列腺癌(prostratecancer)、膀胱癌、卵巢癌、結(jié)腸癌和乳腺癌。例如，可治愈的惡性腫瘤包括急性和慢性白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、肉瘤例如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、淋巴管肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌(bronchogeniccarcinoma)、絨毛膜癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、膽管癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎癌、宮頸癌、睪丸腫瘤、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、髓母細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、腦脊膜瘤(menangioma)、黑色素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。涉及使用抗-prl抗體進(jìn)行治療的抗體方法可與用于治療這樣的障礙的其他方法結(jié)合，所述其他方法包括表達(dá)抗本文所述prl-1和prl-3多核苷酸的反義構(gòu)建體，并將它們給予腫瘤細(xì)胞以抑制基因功能并阻止腫瘤細(xì)胞的生長或發(fā)展。反義構(gòu)建體可用于抑制基因功能，以阻止增殖細(xì)胞的生長或發(fā)展。與有義核酸或mrna互補(bǔ)的反義構(gòu)建體——即核酸例如rna構(gòu)建體——詳細(xì)記載于美國專利6,100,090(moniaetal.)和neckersetal.,1992,critrevoncog3(1-2):175-231中，這些文本的教導(dǎo)通過引用的方式具體地納入本文。在一個(gè)具體的實(shí)例中，可通過完全或部分地降低prl-1和prl-3的量、表達(dá)或活性(例如通過能夠結(jié)合并破壞prl-1和prl-3mrna的sirna)治療或預(yù)防癌癥。rna干擾(rnai)是一種由直接引入雙鏈rna(dsrna)誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(ptgs)的方法，并且作為在多種生物體中敲除特定基因的表達(dá)的有用工具出現(xiàn)。rnai記載于fireetal.,nature391:806-811(1998)。其他ptgs方法是已知的，包括例如導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因或病毒。一般而言，在ptgs中，沉默的基因的轉(zhuǎn)錄物被合成但不積聚，這是因?yàn)樗豢焖俚亟到?。ptgs方法包括rnai記載于例如ambion.com萬維網(wǎng)網(wǎng)站的目錄“/hottopics/”中的在“rnai”文件中。合適的rnai方法在本文中有描述。一種這樣的方法涉及導(dǎo)入sirna(小干擾rna)?，F(xiàn)在的模型表明，這些21-23個(gè)核苷酸的dsrna可誘導(dǎo)ptgs。用于設(shè)計(jì)有效sirna的方法記載于例如上述的ambion網(wǎng)站。rna前體例如短發(fā)夾rna(shrna)也可以由全部或部分的所述prl-1和prl-3核酸序列編碼?；蛘撸p鏈(ds)rna是一種在多種生物中干擾基因表達(dá)的有力方式，最近已表明其可應(yīng)用于哺乳動(dòng)物(wiannyandzernicka-goetz,2000,natcellbiol2:70-75)?？蓪⑴cprl-1和prl-3多肽的序列對應(yīng)的雙鏈rna導(dǎo)入至候選生物的卵母細(xì)胞和細(xì)胞或者在這樣的細(xì)胞中表達(dá)，以干擾prl-1和prl-3的活性。調(diào)節(jié)prl-1和prl-3基因表達(dá)的其他方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括顯性負(fù)突變方法。同時(shí)，這些方法可與使用抗-prl抗體的抗體療法結(jié)合。因此，另一種方法是使用這樣的本文中prl-1和prl-3多肽的無功能變體，即該變體與內(nèi)源性基因產(chǎn)物競爭，導(dǎo)致功能抑制。prl-1和prl-3基因表達(dá)還可以通過以下方式調(diào)節(jié)：引入抑制基因表達(dá)或功能活性的肽或小分子。這樣的肽或小分子可與抗-prl抗體結(jié)合給予，用于治療癌癥例如轉(zhuǎn)移癌。因此，可將通過測定被鑒定為結(jié)合至prl-1和prl-3多肽或調(diào)節(jié)例如下調(diào)prl-1和prl-3多肽的量、活性或表達(dá)的化合物給予腫瘤細(xì)胞或增殖細(xì)胞，以阻止prl-1和prl-3多肽的功能。這種化合物可以這樣的量與一種可藥用的載體同時(shí)給藥，即該量可有效下調(diào)prl-1和prl-3的表達(dá)或活性，或者通過激活或下調(diào)控制prl-1和prl-3的表達(dá)、活性或量的第二信號(hào)，從而緩解所述異常病癥。或者，基因療法還可被應(yīng)用于控制受試者中相關(guān)細(xì)胞例如癌細(xì)胞的prl-1和prl-3的內(nèi)源性產(chǎn)生。例如，可設(shè)計(jì)一種編碼prl-1和prl-3sirna或其一部分的多核苷酸，用于在復(fù)制缺陷性反轉(zhuǎn)錄病毒載體中表達(dá)，如下文詳述。然后可將所述反轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)構(gòu)建體分離，并導(dǎo)入至一種轉(zhuǎn)導(dǎo)有包含編碼抗-prl-1和prl-3sirna的rna的反轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體的包裝細(xì)胞中，使得所述包裝細(xì)胞在此時(shí)可產(chǎn)生包含所需序列的感染性病毒顆粒。可將這些生產(chǎn)細(xì)胞給予一名受試者，用于在體內(nèi)設(shè)計(jì)細(xì)胞，并在體內(nèi)調(diào)節(jié)prl-1和prl-3多肽的表達(dá)?；虔煼ǖ木C述見humanmoleculargenetics,tstrachanandapread,biosscientificpublishersltd(1996)中第20章genetherapyandothermoleculargenetic-basedtherapeuticapproaches(及其中引用的參考文獻(xiàn))。在一些實(shí)施方案中，prl-1和prl-3的水平在癌細(xì)胞中是降低的。而且，在這樣的實(shí)施方案中，治療可靶向或者專門針對這樣的癌細(xì)胞。prl-1和prl-3的表達(dá)可僅特異性地在疾病細(xì)胞(即那些癌性細(xì)胞)中降低，而在其他非疾病細(xì)胞中不顯著。在這些方法中，prl-1和prl-3的表達(dá)在其他細(xì)胞(即不是癌細(xì)胞的細(xì)胞)中不顯著降低。因此，在這樣的實(shí)施方案中，prl-1和prl-3的水平在處理過程中或之后與非癌細(xì)胞中的保持相同或相似。多肽序列應(yīng)理解本文公開的多肽序列不限于本文中列出的具體序列，而且視情況還包括從任何來源得到的同源序列，例如相關(guān)細(xì)胞的同系物、來自其他物種的同系物以及它們的變體或衍生物，條件是它們具有抗-prl抗體的至少一種所述生物活性。本公開內(nèi)容因此涵蓋了本文列出的氨基酸序列的變體、同系物或衍生物，以及由本文公開的核苷酸序列編碼的氨基酸序列的變體、同系物或衍生物。這樣的序列統(tǒng)稱為“抗-prl抗體”序列。生物活性在一些實(shí)施方案中，視情況所述序列具有抗-prl抗體的至少一種生物活性。所述生物活性可包括免疫學(xué)活性。所述抗-prl抗體可具有與抗體269、223或318或者它們的人源化形式相同或相似的免疫學(xué)活性。本發(fā)明人以“免疫學(xué)活性”指抗-prl抗體的這樣的能力，即在合適的動(dòng)物或細(xì)胞中與prl-1或prl-3抗原結(jié)合時(shí)誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)。所述生物活性可包括抗原結(jié)合活性。所述抗-prl抗體可結(jié)合至prl-1或它的表位。所述抗-prl抗體可結(jié)合至抗體269結(jié)合的相同表位。所述抗-prl抗體可結(jié)合至prl-3或它的表位。所述抗-prl抗體可結(jié)合至抗體223結(jié)合的相同表位或抗體318結(jié)合的相同表位。所述抗-prl抗體可以相同、降低或升高的親和力或親合力結(jié)合至所述抗原或表位。例如，所述抗-prl抗體視情況可以與同族抗體(cognateantibody)(例如269、223或318或者它們?nèi)嗽椿膶?yīng)物)相比以至少10％，例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的親和力或親合力結(jié)合至所述抗原或表位。所述活性可包括抑制癌癥活性，這例如通過腫瘤大小或腫瘤數(shù)目的減少測量；或者包括抑制轉(zhuǎn)移活性，例如通過實(shí)施例中描述的測定測量。所述減少或抑制可通過以下途徑方便地測定：在一個(gè)測驗(yàn)動(dòng)物中引起腫瘤發(fā)生，將所述抗-prl抗體給予所述動(dòng)物并與沒有被治療的相似對照動(dòng)物比較確定所述抗-prl抗體的效應(yīng)。實(shí)施例詳細(xì)描述了這種測定。所述抗-prl抗體所具有的腫瘤抑制活性或轉(zhuǎn)移抑制活性與所述同族抗體的相同，或者較之更低或更高。例如，所述抗-prl抗體的效果視情況可以為所述同族抗體(例如269、223或318或者它們?nèi)嗽椿膶?yīng)物)的至少10％，例如20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。本發(fā)明人以此表示，如果所述同族抗體能夠?qū)⒛[瘤數(shù)目減少90％(見實(shí)施例)(與未治療的動(dòng)物相比)，那么所述抗-prl抗體能夠?qū)⒛[瘤數(shù)目減少90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％等。還可以使用檢測抗體事件的其他測定來替代本文所述測定，或者除此之外，還可使用檢測抗體事件的其他測定。同系物所公開的抗-prl抗體多肽包括從任何來源得到的同源序列，所述任何來源例如相關(guān)的病毒蛋白/細(xì)菌蛋白、細(xì)胞同系物和合成多肽，以及它們的變體或衍生物。因此，多肽還包括那些編碼來自其他物種的抗-prl抗體的同系物的多肽，所述其他物種包括諸如哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大鼠或兔)等的動(dòng)物，特別是人。在本文的上下文中，同源序列或同系物被認(rèn)為包括這樣的氨基酸序列，即該氨基酸序列與相關(guān)多肽序列例如本文中列出的序列在至少30，例如50、70、90或100個(gè)氨基酸的氨基酸水平上是至少60、70、80或90％相同的，例如是至少95或98％相同的。在本文的上下文中，同源序列被認(rèn)為包括這樣的氨基酸序列，即該氨基酸序列與相關(guān)多肽的序列在例如至少15、25、35、50或100，例如200、300、400或500個(gè)氨基酸的氨基酸水平上是至少15、20、25、30、40、50、60、70、80或90％相同的，例如是至少95或98％相同的。雖然還可以相似性(即具有相似化學(xué)性質(zhì)/功能的氨基酸殘基)考慮同源性，但在本文的上下文中，同源性可以序列同一性表示。例如，序列同一性可針對相關(guān)序列的全長即針對相關(guān)基因的整個(gè)長度的或全長的序列確定。同源性比較可通過肉眼進(jìn)行，或者更通常借助容易獲得的序列比較程序。這些市售的計(jì)算機(jī)程序可計(jì)算兩個(gè)或多個(gè)序列之間的同源性百分比?？梢詫B續(xù)序列計(jì)算同源性百分比，即將一個(gè)序列與另一個(gè)序列進(jìn)行比對，并將一個(gè)序列中的每個(gè)氨基酸直接與另一個(gè)序列的對應(yīng)氨基酸進(jìn)行比較，每次比較一個(gè)殘基。這稱作“無缺口”比對。一般，這種無缺口比對只針對相對短數(shù)目的殘基(例如少于50個(gè)連續(xù)氨基酸)進(jìn)行。雖然這是非常簡單且可靠的方法，但它沒有考慮到以下問題，例如，在原本相同的一對序列中，一個(gè)插入或缺失將使后面的氨基酸殘基被比對出局，從而有可能在整體比對時(shí)造成同源性百分比大大降低。因此，大多數(shù)序列比較方法被設(shè)計(jì)來產(chǎn)生這樣的最佳比對，即所述比對考慮到可能的插入和缺失，而不過度處罰整體同源性得分。這一點(diǎn)可通過在序列對比中插入“缺口”使得局部同源性最大化實(shí)現(xiàn)。然而，這些更復(fù)雜的方法給存在于比對中的每個(gè)缺口分配“缺口罰分”，使得對于相同數(shù)目的相同氨基酸，具有盡可能少的缺口的序列比對——反映兩個(gè)比較序列之間有更高相關(guān)性——較具有許多缺口的比對，將獲得更高的分?jǐn)?shù)。通常使用“仿射缺口分值(affinegapcost)”，它對缺口的存在處以相對高的分值，并對該缺口中的每個(gè)后續(xù)殘基處以較低的罰分。這是最常用的缺口評分體系。較高的缺口罰分理所當(dāng)然將產(chǎn)生具有較少缺口的優(yōu)化比對。大多數(shù)比對程序允許修改缺口罰分。然而，在利用這種軟件進(jìn)行序列比較時(shí)，可以使用缺省值。例如，在利用gcgwisconsinbestfit軟件包(見下文)時(shí)，氨基酸序列的缺省缺口罰分是一個(gè)缺口-12分及每個(gè)延伸-4分。對最大同源性百分比的計(jì)算因此首先需要在考慮缺口罰分的情況下產(chǎn)生最佳比對。適于實(shí)施這種比對的計(jì)算機(jī)程序是gcgwisconsinbestfit軟件包(universityofwisconsin,u.s.a.；devereuxetal.,1984,nucleicacidsresearch12:387)。能實(shí)施序列比較的其他軟件的實(shí)例包括但不限于blast軟件包(見ausubeletal.,1999ibid-chapter18)、fasta(atschuletal.,1990,j.mol.biol.,403-410)和geneworks的比較工具套件。blast和fasta都能進(jìn)行脫機(jī)和在線搜索(見ausubeletal.,1999ibid,第7-58至7-60頁)?？墒褂胓cgbestfit程序。雖然最終的同源性百分比可就同一性進(jìn)行測量，但比對過程本身通常并不是以全或無配對比較為基礎(chǔ)的。實(shí)際上，通常使用分級(jí)相似性得分矩陣(scaledsimilarityscorematrix)，它基于化學(xué)相似性或進(jìn)化距離給每個(gè)成對比較分配得分。這種矩陣的一種常用實(shí)例是blosum62矩陣——blast程序組的缺省矩陣。gcgwisconsin程序通常使用公用的缺省值或定制符號(hào)比較表(如果有提供)(進(jìn)一步詳情見用戶手冊)。對于gcg程序包，可使用公用缺省值；而在其他軟件的情況下，可使用缺省矩陣，例如blosum62。一旦該軟件產(chǎn)生了最佳比對，就使得計(jì)算同源性百分比例如序列同一性百分比成為可能。該軟件通常將此作為序列比較的一部分，并產(chǎn)生數(shù)字化的結(jié)果。變體和衍生物術(shù)語“變體”或“衍生物”在述及本文所述的氨基酸序列時(shí)包括一個(gè)(或多個(gè))氨基酸對所述序列的任何置換、變異、修飾、替代，一個(gè)(或多個(gè))氨基酸從所述序列的任何缺失或者向所述序列的任何添加。所產(chǎn)生的氨基酸序列可基本保持與未改變序列相同的活性，例如至少具有與顯示于本文例如序列表中的抗-prl抗體多肽相同的活性。因此，可保持所述序列的關(guān)鍵特征——即如別處所述的，結(jié)合于prl多肽的能力或減少腫瘤的活性。具有顯示于實(shí)施例中的氨基酸序列的多肽或其片段或同系物可被修飾，用于本文所述的方法和組合物中。一般地，進(jìn)行修飾而保持所述序列的生物學(xué)活性?？蛇M(jìn)行例如從1、2或3至10、20或30個(gè)取代的氨基酸取代，條件是所述修飾的序列保持未改變序列的生物學(xué)活性。氨基酸取代可包括非天然類似物的使用，例如是為了提高治療性給予的多肽的血漿半衰期?？?prl抗體的天然變體可能包含保守的氨基酸置換。保守置換可根據(jù)例如下表定義。在第二列同一格中的氨基酸例如在第三列同一行中的氨基酸可以互相置換：片段本文公開并用作標(biāo)記物的多肽還包括上述全長多肽或其變體的片段，包括序列表中所列序列的片段。多肽還包括任何抗-prl抗體多肽全長序列的片段。片段可包含至少一個(gè)表位。鑒定表位的方法是本領(lǐng)域中熟知的。片段一般包含至少6個(gè)氨基酸，例如至少10、20、30、50或100，或者更多個(gè)氨基酸。所述抗-prl抗體蛋白及其等位基因變體和物種變體的多肽片段可包含一個(gè)或多個(gè)(例如5、10、15或20)置換、缺失或插入，包括保守置換。如果發(fā)生置換、缺失和/或插入，那么例如在不同物種中，改變了序列表中顯示的例如至少50％、40％或20％的氨基酸殘基?？赏ㄟ^重組的方式制備抗-prl抗體及它們的片段、同系物、變體和衍生物。然而，還可以通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知技術(shù)的合成方式例如固相合成制備它們。所述蛋白還可被產(chǎn)生為融合蛋白，例如是為了幫助提取和純化。融合蛋白配對物的實(shí)例包括谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(gst)、6×his、gal4(dna結(jié)合和/或轉(zhuǎn)錄激活域)和β-半乳糖苷酶。還可方便地在所述融合蛋白配對物和所需蛋白序列之間包括一個(gè)蛋白水解切割位點(diǎn)，以使得融合蛋白序列可被去除。所述融合蛋白可以是這樣的，即它不阻礙所需序列蛋白的功能。蛋白還可以通過純化來自動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞提取物得到。本文公開的抗-prl抗體多肽、變體、同系物、片段和衍生物可以是基本分離的形式。需理解的是，這樣的多肽可與不干擾所述蛋白的預(yù)定目的的載體或稀釋劑混合，并且這樣的多肽仍被認(rèn)為是基本分離的。抗-prl抗體變體、同系物、片段或衍生物還可以是基本純化的形式，在這種情況下一般將在一個(gè)制劑中包含所述蛋白，其中所述制劑中的所述蛋白超過90％例如95％、98％或99％。本公開的抗-prl抗體多肽、變體、同系物、片段和衍生物可以一種顯示標(biāo)記物標(biāo)記。所述顯示標(biāo)記物可以是可檢測所述多肽等的任何合適的標(biāo)記物。合適的標(biāo)記物包括放射性同位素例如125i、酶、抗體、多核苷酸和連接子例如生物素。標(biāo)記的多肽可用于診斷方法例如免疫測定中，以確定樣品中多肽的量。還可使用標(biāo)準(zhǔn)方案將多肽或標(biāo)記多肽用于血清或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫測定中，用于檢測與動(dòng)物和人中的所述多肽的免疫反應(yīng)性。本文公開的抗-prl抗體多肽、變體、同系物、片段和衍生物(任選被標(biāo)記的)還可被固定于一種固相物，例如免疫測定孔或量桿(dipstick)的表面?？蓪⑦@樣的標(biāo)記的和/或固定的多肽與合適的試劑、對照物、說明書等包裝于合適容器中的試劑盒中。這樣的多肽和試劑盒可用于通過免疫測定檢測針對所述多肽或它們的等位基因變體或物種變體的抗體的方法中。免疫測定方法是本領(lǐng)域中熟知的，并通常包括：(a)提供一種包含可被所述蛋白的抗體結(jié)合的表位的多肽；(b)將一個(gè)生物樣品與所述多肽在可形成抗體-抗原復(fù)合物的條件下與所述多肽孵育；及(c)確定包含所述多肽的抗體-抗原復(fù)合物是否形成。本文公開的抗-prl抗體多肽、變體、同系物、片段和衍生物可用于體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)體系中，以研究它們對應(yīng)的基因及其同系物在細(xì)胞功能(包括它們在疾病中的功能)中的作用。例如，可將截短的或修飾的多肽導(dǎo)入細(xì)胞，以破壞細(xì)胞中正常出現(xiàn)的功能。可通過由重組表達(dá)載體原位表達(dá)所述多肽將所述多肽導(dǎo)入所述細(xì)胞(見下文)。所述表達(dá)載體任選可攜帶一個(gè)可誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，以控制所述多肽的表達(dá)。預(yù)計(jì)使用合適的宿主細(xì)胞例如昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞可提供這樣的翻譯后修飾(例如肉豆蔻酰化、糖基化、截短、脂質(zhì)化(lapidation)及酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸的磷酸化)，因?yàn)檫@可能是賦予重組表達(dá)產(chǎn)物最佳的生物活性所需的。其中表達(dá)本文公開的抗-prl抗體多肽、變體、同系物、片段和衍生物的這樣的細(xì)胞培養(yǎng)體系可用于測定體系中，以鑒定干擾或增強(qiáng)所述細(xì)胞中的所述多肽的功能的候選物質(zhì)。多核苷酸序列可變區(qū)、單克隆抗體序列和人源化抗體序列可包括多核苷酸。這些可包括dna或rna。它們可以是單鏈的或雙鏈的。它們還可以是其中包含合成核苷酸或修飾核苷酸的多核苷酸。多種不同類型的寡核苷酸修飾在本領(lǐng)域中是已知的。這些可包括甲基膦酸酯和硫代磷酸酯骨架，在該分子的3’端和/或5’端添加吖啶或聚賴氨酸鏈?；诒疚牡哪康模枰斫饪赏ㄟ^本領(lǐng)域中已有的任何方法修飾本文描述的多核苷酸。進(jìn)行這樣的修飾的目的是增強(qiáng)多核苷酸的體內(nèi)活性或生命周期。如果所述多核苷酸是雙鏈的，那么所述雙鏈體的兩條鏈、任一條鏈或其結(jié)合物可被本文公開的方法和組合物涵蓋。如果所述多核苷酸是單鏈的，需要理解還包括該多核苷酸的互補(bǔ)序列。變體、衍生物和同系物本文使用的術(shù)語“變體”、“同系物”或“衍生物”在述及本文描述的核苷酸序列時(shí)，包括一個(gè)(或多個(gè))核苷酸對所述序列的任何置換、變異、修飾、替代，一個(gè)(或多個(gè))核苷酸從所述序列的任何缺失或者像所述序列的任何添加。所產(chǎn)生的序列能夠編碼本文別處描述的具有prl結(jié)合活性的多肽。如上文指出的，就序列同一性而言，“同系物”與一條相關(guān)序列具有例如至少5％的同一性、至少10％的同一性、至少15％的同一性、至少20％的同一性、至少25％的同一性、至少30％的同一性、至少35％的同一性、至少40％的同一性、至少45％的同一性、至少50％的同一性、至少55％的同一性、至少60％的同一性、至少65％的同一性、至少70％的同一性、至少75％的同一性、至少80％的同一性、至少85％的同一性、至少90％的同一性或至少95％的同一性?？捎兄辽?5％的同一性，例如至少96％的同一性，例如至少97％的同一性，例如至少98％的同一性，例如至少99％的同一性?？扇缟鲜鲞M(jìn)行核苷酸同源性比較。諸如上文所述的gcgwisconsinbestfit程序的序列比較程序可基于這一目的使用。在缺省得分矩陣中，每個(gè)相同核苷酸的匹配分值為10，每個(gè)錯(cuò)配的分值為-9。對于每個(gè)核苷酸而言，缺省缺口形成罰分為-50，缺省缺口延伸罰分為-3。雜交本發(fā)明人還描述了這樣的核苷酸序列，即所述核苷酸序列能夠選擇性雜交本文給出的任一序列例如269、223和318可變區(qū)、抗體和人源化抗體或者它們的任何變體、片段或衍生物，或者能夠選擇性雜交上述任一序列的互補(bǔ)序列。核苷酸序列的長度可為至少15個(gè)核苷酸，例如長度為至少20、30、40或50個(gè)核苷酸。本文使用的術(shù)語“雜交”不僅包括如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)中進(jìn)行的擴(kuò)增過程外，還包括“核酸鏈通過堿基配對與互補(bǔ)鏈連接的過程”。能夠與本文給出的核苷酸序列或者與它們的互補(bǔ)序列選擇性雜交的多核苷酸通常與本文給出的相應(yīng)核苷酸序列在至少20，例如至少25或30，如至少40、60或100或者更多個(gè)連續(xù)核苷酸的區(qū)域上是至少70％，例如至少80％或90％且例如至少95％或98％同源的。術(shù)語“可選擇性雜交的”是指用作探針的多核苷酸在靶多核苷酸以顯著高于背景的水平與所述探針雜交的條件下使用。背景雜交的出現(xiàn)是由于存在于例如被篩選的cdna或基因組dna文庫中的其他多核苷酸。在該事件中，背景是指由所述探針和所述文庫的非特異性dna成員之間的互相作用產(chǎn)生的信號(hào)水平，該水平與用靶dna出現(xiàn)的特異性相互作用的強(qiáng)度相比小10倍，例如小100倍。例如，可通過用32p放射性標(biāo)記探針測量相互作用的強(qiáng)度。雜交條件是基于核酸結(jié)合復(fù)合物的熔解溫度(tm)，如bergerandkimmel(1987,guidetomolecularcloningtechniques,methodsinenzymology,vol152,academicpress,sandiegoca)中所教導(dǎo)，并且賦予如下文說明的一個(gè)確定“嚴(yán)格度”。最大嚴(yán)格度一般出現(xiàn)在約tm-5℃(比探針的tm低5℃)；高嚴(yán)格度在tm下約5℃-10℃；中等嚴(yán)格度在tm下約10℃-20℃；并且低嚴(yán)格度在tm下約20℃-25℃。如本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解的，最大嚴(yán)格度雜交可用于鑒定或檢測相同的多核苷酸序列，而中等(或低)嚴(yán)格度雜交可用于鑒定或檢測相似或相關(guān)的多核苷酸序列。本發(fā)明人公開了一種在嚴(yán)格條件(例如65℃和0.1×ssc{1×ssc＝0.15mnacl、0.015m檸檬酸三鈉，ph7.0})下可雜交核酸或者它的片段、同系物、變體或衍生物的核苷酸序列。如果多核苷酸是雙鏈的，那么所述雙鏈體的兩條鏈、任一條鏈或其結(jié)合物被本公開涵蓋。如果所述多核苷酸是單鏈的，需要理解該多核苷酸的互補(bǔ)序列也被公開和涵蓋?？梢远喾N方式得到與本文公開的序列非100％同源但落入本公開范圍內(nèi)的多核苷酸。本文描述的序列的其他變體可通過例如探測從一組個(gè)體例如來自不同人群的個(gè)體制備的dna文庫得到。另外，可得到其他的病毒/細(xì)菌或細(xì)胞同系物特別是出現(xiàn)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如大鼠、小鼠、牛和靈長類細(xì)胞)中的細(xì)胞同系物，并且這樣的同系物及其片段通常能夠選擇性地與本發(fā)明序列表中所示的序列雜交。這樣的序列的得到可通過探測從其他動(dòng)物物種制備的cdna文庫或來自其他動(dòng)物的基因組dna文庫，或者在中至高嚴(yán)格度下以包含所公開序列的全部或一部分的探針探測這樣的文庫。本文描述的多核苷酸可用于產(chǎn)生一種引物，例如pcr引物、另一擴(kuò)增反應(yīng)的引物、通過例如使用放射性或非放射性標(biāo)記物的常規(guī)方式以顯示標(biāo)記物標(biāo)記的探針，或者可將所述多核苷酸克隆至載體中。這樣的引物、探針和其他片段的長度為至少15，例如至少20，例如至少25、30或40個(gè)核苷酸，并且也被本文中使用的術(shù)語多核苷酸所涵蓋。片段的長度可少于500、200、100、50或20個(gè)核苷酸。多核苷酸例如dna多核苷酸和探針可重組地、合成地或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的任何方法產(chǎn)生。還可通過標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)克隆它們。引物通常通過合成的方式產(chǎn)生，涉及每次一個(gè)核苷酸逐步制造所需的核酸序列。使用自動(dòng)化技術(shù)實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的技術(shù)在本領(lǐng)域中是容易獲得的。一般使用重組方法例如使用pcr(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))克隆技術(shù)產(chǎn)生較長的多核苷酸。這涉及，制備針對需要克隆的序列側(cè)翼區(qū)的一對引物(例如約15-30個(gè)核苷酸)；將所述引物與從動(dòng)物細(xì)胞或人細(xì)胞得到的mrna或cdna接觸；在擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域的條件下進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；分離擴(kuò)增片段(例如通過在瓊脂糖凝膠上純化所述反應(yīng)混合物)；以及回收所擴(kuò)增的dna?？蓪⒁镌O(shè)計(jì)成包含合適的限制酶識(shí)別位點(diǎn)，使得可將所擴(kuò)增的dna克隆至合適的克隆載體中。prl多肽和核酸如前文段落列出的，可類似地定義prl-1和prl-3多肽的同系物、變體、衍生物和片段。如果上下文允許，那么提及prl-1多肽將認(rèn)為包括提及prl-1多肽的同系物、變體、衍生物或片段。類似地，提及prl-3多肽將認(rèn)為包括提及prl-3多肽的同系物、變體、衍生物或片段。類似地，如果上下文允許，那么提及prl-1核酸將認(rèn)為包括提及prl-1核酸的同系物、變體、衍生物或片段。類似地，提及prl-3核酸將認(rèn)為包括提及prl-3核酸的同系物、變體、衍生物或片段?？?prl抗體的產(chǎn)生可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的重組dna方法或合成肽化學(xué)方法產(chǎn)生所述抗-prl抗體。作為示例，可通過本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)合成所述抗-prl抗體，作為示例的有"solidphasepeptidesynthesis:apracticalapproach"e.athertonandr.c.sheppard,irlpress,oxfordengland。類似地，可合成多個(gè)片段，然后將它們連接以形成較大的片段。還可以在特定位點(diǎn)對這些合成的肽片段進(jìn)行氨基酸置換，以在體外和體內(nèi)測試活性?？稍跇?biāo)準(zhǔn)的微量化學(xué)設(shè)備中合成所述抗-prl抗體，并以hplc和質(zhì)譜檢驗(yàn)純度。肽合成的方法、hplc純化和質(zhì)譜是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所述抗-prl抗體還可以在體外和體內(nèi)條件下在這樣的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞中表達(dá)，即在該細(xì)胞中納入有本文描述的dna序列(例如可變區(qū)序列(variablesequence))或其等位基因變體，并且該細(xì)胞可用于癌癥相關(guān)疾病的預(yù)防和/或治療。術(shù)語“載體”包括表達(dá)載體和轉(zhuǎn)化載體。術(shù)語“表達(dá)載體”是指一種能夠在體內(nèi)或體外表達(dá)的構(gòu)建體。術(shù)語“轉(zhuǎn)化載體”是指一種能夠從一個(gè)物種轉(zhuǎn)移至另一個(gè)物種的構(gòu)建體?？捎糜诒磉_(dá)的載體包括重組病毒載體，尤其是重組反轉(zhuǎn)錄病毒載體(rrv)例如慢病毒載體、腺病毒載體，包括反轉(zhuǎn)錄病毒載體的組合。術(shù)語“重組反轉(zhuǎn)錄病毒載體”(rrv)所指的載體具有足夠的反轉(zhuǎn)錄病毒遺傳信息，以在存在包裝組件的情況下使rna基因組包裝成能夠感染靶細(xì)胞的病毒顆粒。對所述靶細(xì)胞的感染包括反轉(zhuǎn)錄及整合進(jìn)入所述靶細(xì)胞基因組中。rrv可攜帶待通過該載體送遞至所述靶細(xì)胞中的非病毒的編碼序列。rrv在終靶細(xì)胞中不能獨(dú)立復(fù)制而產(chǎn)生感染性反轉(zhuǎn)錄病毒顆粒。rrv通常缺少功能性gagpol和/或env基因和/或其他復(fù)制必需基因?？墒褂玫妮d體包括重組痘病毒載體例如禽痘病毒(fpv)、昆蟲痘病毒、疫苗病毒例如nyvac、金絲雀痘病毒、mva或其他非復(fù)制病毒載體體系，例如wo9530018中所述的那些?？稍O(shè)計(jì)痘病毒用于重組基因表達(dá)及在雙免疫治療方法中用作重組活疫苗。使用減毒活病毒例如作為送遞運(yùn)載體和/或以載體為基礎(chǔ)的候選疫苗的病毒的基本原理來自它們誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)的能力。如上文列出的，所述病毒載體能夠被應(yīng)用為送遞運(yùn)載體和以載體為基礎(chǔ)的候選疫苗，這是因?yàn)樗鼈兊慕M成性蛋白的免疫原性，所述組成性蛋白可作為佐劑來增強(qiáng)免疫反應(yīng)，從而使得所需的核苷酸序列(noi)例如編碼抗-prl抗體的核苷酸序列有更大免疫原性。痘病毒疫苗接種策略已使用重組技術(shù)以將noi引入痘病毒基因組中。如果noi整合至病毒dna中非病毒生命周期必需的位點(diǎn)，那么新產(chǎn)生的重組痘病毒有可能是感染性的，也就是說感染外來細(xì)胞，從而表達(dá)所整合的noi。以該方式制備的重組痘病毒可用作活疫苗，用于預(yù)防和/或治療病理性和感染性疾病和/或癌癥。痘病毒載體送遞體系的其他要求包括好的免疫原性和安全性。mva是一種具有良好的安全記錄的復(fù)制受損疫苗株。在大多數(shù)細(xì)胞類型和正常的人組織中，mva不復(fù)制。有限的mva復(fù)制出現(xiàn)在少量轉(zhuǎn)化細(xì)胞類型例如bhk21細(xì)胞中。carroll等人(1997vaccine15:387-394)已表明，重組mva在產(chǎn)生保護(hù)性cd8+t細(xì)胞反應(yīng)方面與傳統(tǒng)的重組疫苗載體同樣好，并且可有效地替代更常使用的可復(fù)制性疫苗病毒。源自mva的疫苗病毒株或者具有使mva特別適宜用于疫苗中的mva性質(zhì)的獨(dú)立開發(fā)的毒株同樣適宜用作送遞運(yùn)載體。所需核苷酸序列和需要其表達(dá)的核苷酸序列可被可操作地連接至轉(zhuǎn)錄單元。本文所述的術(shù)語“轉(zhuǎn)錄單元”是這樣的核酸區(qū)域，即其包含編碼序列及用于實(shí)現(xiàn)這些編碼序列獨(dú)立于任何其他編碼序列表達(dá)的信號(hào)。因此，每個(gè)轉(zhuǎn)錄單元通常至少包含一個(gè)啟動(dòng)子、一個(gè)任選的增強(qiáng)子和一個(gè)多腺苷酸化信號(hào)。以本領(lǐng)域的正常含義使用術(shù)語“啟動(dòng)子”，例如rna聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。啟動(dòng)子可包含增強(qiáng)子元件。術(shù)語“增強(qiáng)子”包括這樣的dna序列，即該dna序列可結(jié)合于轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合體的其他蛋白組件，并因此有利于它關(guān)聯(lián)的啟動(dòng)子所指向轉(zhuǎn)錄的起始。術(shù)語“細(xì)胞”包括任何適合的生物。所述細(xì)胞可包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如人細(xì)胞。術(shù)語“轉(zhuǎn)化細(xì)胞”是指一種具有修飾的基因結(jié)構(gòu)的細(xì)胞。例如，如本文中所述的，在將一種載體例如表達(dá)載體導(dǎo)入至一個(gè)細(xì)胞中時(shí)，該細(xì)胞具有修飾的基因結(jié)構(gòu)。術(shù)語“生物”包括任何適合的生物。所述生物包括哺乳動(dòng)物，例如人。本文的術(shù)語“轉(zhuǎn)基因生物”是指一種包含修飾的基因結(jié)構(gòu)的生物。例如，在將一種載體例如表達(dá)載體導(dǎo)入至一個(gè)生物中時(shí)，該生物具有修飾的遺傳結(jié)構(gòu)。抗體表達(dá)本發(fā)明人還描述了一種方法，包括以本文描述的一條或多條(aorthe)核苷酸序列轉(zhuǎn)化一種宿主細(xì)胞，所述核苷酸序列例如269、223或318可變區(qū)；抗體序列；或者人源化的抗體序列。本發(fā)明人還提供了一種方法，包括在適合由一條或多條這樣的核苷酸序列編碼的抗-prl抗體表達(dá)的條件下培養(yǎng)一種轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞——該細(xì)胞轉(zhuǎn)化有所述核苷酸序列。本發(fā)明人還提供了一種方法，包括在適合由一條或多條這樣的核苷酸序列編碼的抗-prl抗體表達(dá)的條件下培養(yǎng)一種轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞——該細(xì)胞轉(zhuǎn)化有所述核苷酸序列；然后從所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述抗-prl抗體。因此，編碼抗-prl抗體、融合蛋白或其功能性等價(jià)物的核苷酸序列可用于產(chǎn)生指導(dǎo)其在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)的重組dna分子。作為示例，可在重組的大腸桿菌、酵母或哺乳動(dòng)物表達(dá)體系中產(chǎn)生抗-prl抗體，并以柱色譜法純化。在某些情況下，使用抗體片段比使用整個(gè)抗體有優(yōu)勢。大小較小的片段使得可快速清除，并且可導(dǎo)致腫瘤與非腫瘤比率的改善。fab、fv和scfv抗體片段都可以在大腸桿菌中表達(dá)并從大腸桿菌分泌，因此使得可產(chǎn)生大量這樣的片段。編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列可被可操作地連接至一條能夠在適合的宿主細(xì)胞中指導(dǎo)編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列表達(dá)的啟動(dòng)子序列。在插入至所述宿主細(xì)胞時(shí)，可在適合的條件下培養(yǎng)所述轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，直到所述抗-prl抗體達(dá)到足夠的水平，然后可將所述細(xì)胞裂解并分離所述抗-prl抗體?？稍谶m宜由所述細(xì)胞培養(yǎng)物表達(dá)所述抗-prl抗體并從此細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述抗-prl抗體的的條件下培養(yǎng)以編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。依賴于所使用的序列和/或載體，由重組細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白可以被分泌或者可以被包含在細(xì)胞內(nèi)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解的，包含的表達(dá)載體編碼抗-prl抗體的核苷酸序列可被設(shè)計(jì)來具有信號(hào)序列，所述信號(hào)序列指導(dǎo)編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列分泌通過具體的原核生物或真核生物細(xì)胞膜。其他重組構(gòu)建法可將編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列連接至編碼有助于可溶性蛋白純化的多肽結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列(krolldjetal(1993)dnacellbiol12:441-453，亦見下文對包含融合蛋白的載體的討論)。所述抗-prl抗體還可表達(dá)為一種添加一個(gè)或多個(gè)另外的多肽域以促進(jìn)蛋白純化的重組蛋白。這樣的純化促進(jìn)域包括但不限于金屬螯合肽，例如使得可在固定金屬上純化的組氨酸-色氨酸組件(porathj(1992)proteinexprpurif3:263-281)、使得可在固定的免疫球蛋白上純化的蛋白a域和在flags延伸/親和純化體系中使用的域(immunexcorp,seattle,wa)。在純化域和所述抗-prl抗體之間包含可切割連接子序列例如因子xa或腸激酶(invitrogen,sandiego,ca)可用于促進(jìn)純化?？稍O(shè)計(jì)本文描述的核苷酸序列，以基于多種原因改變一條或者多條編碼抗-prl抗體的序列，包括但不限于這樣的改變，即修飾所述基因產(chǎn)物的克隆、加工和/或表達(dá)。例如，可以使用本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)例如定點(diǎn)誘變引入突變，以插入新限制性位點(diǎn)、以改變糖基化模式或者以改變密碼子偏好。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可將一條或者多條編碼天然的、修飾的或重組的抗-prl抗體的核苷酸序列連接至一條異源序列，以編碼一種融合蛋白。作為示例，可產(chǎn)生這樣的融合蛋白，即該融合蛋白包含所述抗-prl抗體或其酶活性片段或衍生物，其連接有一種親和標(biāo)簽例如谷胱甘肽-s-轉(zhuǎn)移酶(gst)、生物素、his6、ac-myc標(biāo)簽(見emrichetal1993biocembiophysrescommun197(1):21220)、血凝素(ha)(如wilsonetal1984cell37767中所述)或flag表位(fordetal1991proteinexprpurifapr；2(2):95-107)。所述融合的重組蛋白可包含抗原性輔蛋白，例如gst、β-半乳糖苷酶或脂蛋白d(來自流感嗜血桿菌(haemophilusinfluenzae)，是相對較大的輔蛋白)，它們可增溶(solubilise)并有利于融合蛋白的產(chǎn)生和純化?；蛘撸鋈诤系鞍卓砂d體蛋白，例如牛血清白蛋白(bsa)或鑰孔戚血藍(lán)蛋白(klh)。在某些實(shí)施方案中，所述標(biāo)記物序列可包含一個(gè)6組氨酸肽，這提供在pqe載體(qiageninc)中并記載于gentzetal(1989pnas86:821-824)。這樣的融合蛋白易于在酵母培養(yǎng)物中表達(dá)(如mitchelletal1993yeast5:715-723中所述的)，并可容易地通過親和色譜法純化。還可將融合蛋白設(shè)計(jì)成包含位于編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列和所述異源蛋白序列之間的切割位點(diǎn)，使得所述抗-prl抗體可從異源部分切割及純化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可使用結(jié)合的整個(gè)融合蛋白進(jìn)行靶蛋白的測定?；蛘?，從提供對免疫系統(tǒng)的一般性刺激的意義上說，所述輔蛋白可作為一種佐劑。所述輔蛋白可連接至第一蛋白的氨基端或羧基端。雖然標(biāo)記基因表達(dá)的存在/不存在均可表明抗-prl抗體的核苷酸序列也存在，但是應(yīng)確認(rèn)它的存在和表達(dá)。例如，如果將編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列插入至標(biāo)記基因序列中，那么可通過不存在所述標(biāo)記基因的功能對包含所述抗-prl抗體編碼區(qū)的重組細(xì)胞進(jìn)行鑒定?；蛘?，可將標(biāo)記基因與編碼抗-prl抗體的核苷酸序列串聯(lián)放置，并受控于單個(gè)啟動(dòng)子。標(biāo)記基因針對誘導(dǎo)或選擇的表達(dá)通常還指示所述抗-prl抗體的表達(dá)。定量具體分子表達(dá)的其他方法包括放射性標(biāo)記核苷酸(melbypcetal1993jimmunolmethods159:235-44)或生物素標(biāo)記核苷酸(duplaacetal1993analbiochem229-36)、對照核酸的共擴(kuò)增及實(shí)驗(yàn)結(jié)果可插入其上的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過以elisa形式進(jìn)行測定可加速多個(gè)樣品的定量，其中所需的抗-prl抗體以多個(gè)稀釋度呈現(xiàn)，并且光譜光度測量反應(yīng)或熱測量反應(yīng)可快速地給出定量值?？梢赃M(jìn)行或使用的抗-prl抗體核苷酸序列改變包括不同核苷酸殘基的缺失、插入或置換，結(jié)果生成了編碼相同的或功能等價(jià)的抗-prl抗體的核苷酸序列。作為示例，所表達(dá)的抗-prl抗體可具有產(chǎn)生沉默變化并形成功能等價(jià)抗-prl抗體的氨基酸殘基缺失、插入或置換?；跉埢臉O性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/或兩親性方面的相似性，可謹(jǐn)慎地進(jìn)行氨基酸置換，條件是所述抗-prl抗體的結(jié)合親和性被保持。例如，負(fù)電荷氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電荷的氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；及具有類似親水值且具有不帶電荷極性頭部的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。還可應(yīng)用藉此可在體內(nèi)調(diào)節(jié)本文所述編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列的基因治療。例如，表達(dá)調(diào)節(jié)可通過給予這樣的化合物實(shí)現(xiàn)，即這些化合物可結(jié)合于編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列或者與編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列相關(guān)的控制區(qū)或其相應(yīng)的rna轉(zhuǎn)錄物，以改變轉(zhuǎn)錄或翻譯的速率。作為示例，本文所述的編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列可處于表達(dá)調(diào)節(jié)元件(通常為啟動(dòng)子或者啟動(dòng)子和增強(qiáng)子)的表達(dá)控制之下。所述增強(qiáng)子和/或啟動(dòng)子可優(yōu)先在缺氧、缺血或低葡萄糖環(huán)境下有活性，使得編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列優(yōu)先在具體所需的組織中表達(dá)，例如在腫瘤細(xì)胞或腫瘤塊的環(huán)境中表達(dá)。因此，可減少或消除編碼所述抗-prl抗體的核苷酸序列對被治療個(gè)體的任何顯著生物學(xué)效應(yīng)或有害效應(yīng)。賦予表達(dá)調(diào)節(jié)的增強(qiáng)子元件或其他元件可以多拷貝出現(xiàn)。啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子可有組成性效果，或者它們的活性可以是限制于組織或時(shí)間的。限制于組織的合適啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的實(shí)例有那些在腫瘤細(xì)胞中有高度活性的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子，例如來自muc1基因、cea基因或stv抗原基因的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。限制于時(shí)間的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子的實(shí)例有那些對缺血和/或缺氧反應(yīng)的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子，例如缺氧反應(yīng)元件或agrp78和agrp94基因的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子。甲胎蛋白(afp)啟動(dòng)子也是一種腫瘤特異性啟動(dòng)子。另一個(gè)啟動(dòng)子-增強(qiáng)子組合為人巨細(xì)胞病毒(hcmv)主要立即早期(majorimmediateearly)(mie)啟動(dòng)子/增強(qiáng)子組合。啟動(dòng)子可以是組織特異的。也就是說，它們可以是能夠在一種組織中驅(qū)動(dòng)編碼抗-prl抗體的核苷酸序列轉(zhuǎn)錄，而在其他組織類型中基本保持“沉默”。術(shù)語“組織特異的”所指啟動(dòng)子的活性并不是局限于單一組織類型，而是仍然顯示以下選擇性：該啟動(dòng)子可在一組組織中是有活性的，并且在另一組中是低活性的或沉默的。這樣的啟動(dòng)子的一個(gè)所需特征是，它們在不存在激活的缺氧調(diào)節(jié)增強(qiáng)子元件的條件下，乃至在靶組織中也具有相對低的活性。實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的方式是，使用在缺氧情況下抑制所選啟動(dòng)子活性的“沉默”元件。術(shù)語“缺氧”是指這樣的狀態(tài)，即在該狀態(tài)下一個(gè)具體的器官或組織接受到不足的氧氣供給。通過操作啟動(dòng)子區(qū)，可對受具體啟動(dòng)子控制且一條或多條編碼抗-prl抗體的核苷酸序列進(jìn)行表達(dá)水平的調(diào)節(jié)。例如，啟動(dòng)子區(qū)中的不同域可具有不同的基因調(diào)節(jié)活性。這些不同區(qū)功能的評估一般使用這樣的載體構(gòu)建體，即這些構(gòu)建體具有特定區(qū)域缺失的所述啟動(dòng)子的不同變體(即缺失分析)。例如，該方法可用于鑒定能夠賦予組織特異性的最小區(qū)域或者賦予缺氧敏感性的最小區(qū)域?？墒褂蒙鲜龅脑S多組織特異性啟動(dòng)子。在大多數(shù)情況下，可將這些啟動(dòng)子分離為適合克隆至選擇載體中的常規(guī)限制消化片段。或者，可使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分離啟動(dòng)子片段?？赏ㄟ^在引物的5'端整合限制位點(diǎn)而促進(jìn)所擴(kuò)增片段的克隆。結(jié)合治療本文所述的抗-prl抗體可與用于疾病的治療的其他組合物和步驟結(jié)合使用。作為示例，所述抗-prl抗體還可以與疾病例如癌癥的常規(guī)治療結(jié)合使用。例如，可以外科手術(shù)、放射或化學(xué)療法與一種抗-prl抗體結(jié)合治療腫瘤，或者可在隨后對患者給予一種抗-prl抗體，以擴(kuò)大微轉(zhuǎn)移的休眠并穩(wěn)定任何殘余的原發(fā)腫瘤?？蓪⑺隹?prl抗體與一種治療有效的制劑同時(shí)送遞至相同位置。或者，可將所述抗-prl抗體與所述治療有效的制劑在不同時(shí)刻送遞至不同位置。甚至可將所述抗-prl抗體和所述治療有效的制劑在相同送遞載體中送遞，用于癌癥的預(yù)防和/或治療?？?prl抗體可與細(xì)胞毒性劑結(jié)合使用，用于血管發(fā)生和/或癌癥的預(yù)防和/或治療。連接至抗-prl抗體、抗-prl抗體抗血清、抗-prl抗體受體激動(dòng)劑和拮抗劑的細(xì)胞毒性劑例如蓖麻毒蛋白可提供一種破壞表達(dá)prl-1或prl-3的細(xì)胞的工具。這些細(xì)胞可出現(xiàn)在許多部位，包括但不限于微轉(zhuǎn)移和原發(fā)腫瘤。抗-prl抗體可在基因治療中與前藥激活酶結(jié)合使用。除了在靶組織中選擇性表達(dá)之外或者替代在靶組織中選擇性表達(dá)，所述抗-prl抗體(還)可與其他分子結(jié)合使用，例如這樣的一種或多種前藥激活酶，即該一種或多種前藥激活酶在所述個(gè)體被以所述一種或多種酶所作用的一種或多種前藥治療之前沒有顯著效應(yīng)或無有害效應(yīng)。在存在所述前藥激活酶的情況下，以所述合適前藥對個(gè)體的有效治療可引起腫瘤生長或存活減少的增加?？蓪⑶八幖せ蠲杆瓦f至腫瘤部位，用于癌癥的治療。在每種情況下，將合適的前藥與所述合適的前藥激活酶結(jié)合用于治療患者。將合適的前藥與載體聯(lián)合給予。前藥的實(shí)例包括：磷酸依托泊甙(與堿性磷酸酶，senteretal1988procnatlacadsci85:4842-4846)；5-氟胞嘧啶(與胞嘧啶脫氨酶，mullenetal1994cancerres54:1503-1506)；阿霉素-n-對羥基苯氧乙酰胺(與青霉素v酰胺酶，kerretal1990cancerimmunolimmunother31:202-206)；對-n-雙(2-氯乙基)氨基苯甲酰谷氨酸酯(與羧肽酶g2)；頭孢菌素氮芥氨基甲酸酯(與β-內(nèi)酰胺酶)；sr4233(與p450還原酶)；更昔洛韋(ganciclovir)(與hsv胸苷激酶，borrellietal1988procnatlacadsci85:7572-7576)；芥前藥與硝基還原酶(friedloselal1997jmedchem40:1270-1275)和環(huán)磷酰胺(與p450，chenetal1996cancerres56:1331-1340)。前藥激活酶的實(shí)例包括可激活5-氟-脲嘧啶前藥希羅達(dá)(capcetabine)和氟鐵龍(furtulon)的胸苷磷酸化酶；來自單純皰疹病毒的可激活更昔洛韋的胸苷激酶；可激活一種前藥例如環(huán)磷酰胺成dna損傷劑的細(xì)胞色素p450；及可激活5-氟胞嘧啶的胞嘧啶脫氨酶?？墒褂靡环N人來源的酶。其他合適的分子包括那些應(yīng)用于治療和/或診斷的分子，例如但不限于以下物質(zhì)的編碼序列：細(xì)胞因子、趨化因子、激素、抗體、設(shè)計(jì)的免疫球蛋白樣分子、單鏈抗體、融合蛋白、酶、免疫共刺激分子、免疫調(diào)節(jié)分子、反義rna、靶蛋白的反式顯性負(fù)突變體、毒素、有條件的毒素、抗原、腫瘤抑制蛋白和生長因子、膜蛋白、血管活性蛋白和肽、抗病毒蛋白和核酶以及它們的衍生物(例如與一種相關(guān)的報(bào)告物組)。當(dāng)被包括時(shí)，這樣的編碼序列一般可以被可操作地連接至例如一個(gè)或多個(gè)特定細(xì)胞類型中的合適的啟動(dòng)子(它可以是驅(qū)動(dòng)核酶表達(dá)的啟動(dòng)子)，或者一個(gè)或多個(gè)不同啟動(dòng)子。所述分子可以是一種從細(xì)胞分泌的蛋白。或者，所述分子不被分泌，而在細(xì)胞內(nèi)有活性。在任何一種情況下，所述分子均可被證明為一種旁觀者效應(yīng)物或一種遠(yuǎn)程旁觀者效應(yīng)物；即在一個(gè)細(xì)胞中產(chǎn)生所述表達(dá)產(chǎn)物會(huì)導(dǎo)致具有共同表型的其他相關(guān)細(xì)胞被殺死，不管鄰近的還是遠(yuǎn)距離的(例如轉(zhuǎn)移的)。在癌癥的治療或預(yù)防中使用的合適分子包括這樣的蛋白(或編碼蛋白的核酸)，即它們可破壞靶細(xì)胞(例如核糖體毒素)，作為腫瘤抑制劑(例如野生型p53)、抗腫瘤免疫機(jī)制的激活劑(例如細(xì)胞因子、共刺激分子和免疫球蛋白)、血管發(fā)生的抑制劑；或者它們可提供升高的藥物敏感性(例如前藥激活酶)，通過天然效應(yīng)細(xì)胞間接地刺激靶細(xì)胞破壞(例如，刺激免疫系統(tǒng)的強(qiáng)抗原)或?qū)⑶绑w物質(zhì)轉(zhuǎn)換成可破壞靶細(xì)胞的毒性物質(zhì)(例如前藥激活酶)。編碼的蛋白還可以破壞旁觀者腫瘤細(xì)胞(例如與分泌的抗腫瘤抗體-核糖體毒素融合蛋白)，間接地刺激旁觀者腫瘤細(xì)胞的破壞(例如刺激免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子或引起局部血管阻塞的促凝血蛋白)或者將前體物質(zhì)轉(zhuǎn)換成可破壞旁觀者腫瘤細(xì)胞的毒性物質(zhì)(例如一種可將一種前藥活化成分散性藥物的酶)。可將干擾腫瘤持久性細(xì)胞基因的表達(dá)的反義轉(zhuǎn)錄物或核酶(例如在伯基特淋巴瘤中抗異常myc的轉(zhuǎn)錄物，或者在慢性髓細(xì)胞樣白血病中抗bcr-abl的轉(zhuǎn)錄物)送遞，以增強(qiáng)抗-prl抗體的癌細(xì)胞殺傷功能或轉(zhuǎn)移阻止功能。還考慮到這樣的分子的結(jié)合使用?？扇毖跽{(diào)節(jié)的治療分子的實(shí)例見pct/gb95/00322(wo-a-9521927)?？?prl抗體綴合物以本文所述的抗-prl抗體靶向表達(dá)prl-1或prl-3抗原的細(xì)胞可有利于開發(fā)調(diào)節(jié)表達(dá)prl-1或prl-3的細(xì)胞的活性的藥物?？珊铣刹煌目?prl抗體用于多項(xiàng)應(yīng)用中，所述應(yīng)用包括但不限于將一種抗-prl抗體與細(xì)胞毒性劑連接用于靶向殺傷可結(jié)合抗-prl抗體的細(xì)胞?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)方法將本文所述的抗-prl抗體與其他分子偶聯(lián)?？梢远喾N技術(shù)將所述抗-prl抗體的氨基端和羧基端進(jìn)行同位素標(biāo)記和非同位素標(biāo)記，例如使用常規(guī)技術(shù)的放射性標(biāo)記(酪氨酸殘基-氯胺t.iodogen.乳過氧化物酶；賴氨酸殘基-bolton-hunter試劑)。這些偶聯(lián)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。偶聯(lián)技術(shù)的選擇是基于氨基酸上可用的功能基團(tuán)，包括但不限于氨基、巰基(sulfhydral)、羧基、酰胺、酚和咪唑。用于實(shí)現(xiàn)這些偶聯(lián)的多種制劑包括戊二醛、重氮化聯(lián)苯胺、碳二亞胺、對苯醌等?；诙囗?xiàng)應(yīng)用，可將所述抗-prl抗體化學(xué)地偶聯(lián)至同位素、酶、載體蛋白、細(xì)胞毒性劑、熒光分子及其他化合物。使用適合于特異性反應(yīng)的不同技術(shù)可確定偶聯(lián)反應(yīng)的效力。例如，使用高度特異性活性的氯胺t和na125i可完成以125i對prl-1多肽或prl-3多肽進(jìn)行放射性標(biāo)記。以偏硫代硫酸鈉(sodiummetabisulfite)終止該反應(yīng)，并將該混合物在一次性柱上脫鹽。從所述柱洗脫所述標(biāo)記的抗體，并收集流分。從每個(gè)流分取等份樣品，在伽瑪計(jì)數(shù)儀(gammacounter)中測量放射性。通過這種方式，未反應(yīng)的na125i可與所述標(biāo)記的prl-1多肽或prl-3多肽分離。儲(chǔ)存具有最高特異性放射性的肽流分，用于后續(xù)的應(yīng)用，例如分析與抗-prl抗體結(jié)合的能力。通過如下技術(shù)，使用以具有短生命期同位素標(biāo)記的抗-prl抗體使得可在體內(nèi)定量地顯示prl-1或prl-3結(jié)合部位：放射自顯影技術(shù)、現(xiàn)代放射顯影技術(shù)或其他膜結(jié)合技術(shù)例如正電子成像術(shù)，目的是以抗-prl抗體結(jié)合部位定位腫瘤。該應(yīng)用可提供重要的診斷和研究工具。在其他實(shí)施方案中，可將所述抗-prl抗體偶聯(lián)至閃爍顯像放射性標(biāo)記物、細(xì)胞毒性化合物或放射性同位素、用于將非毒性前藥轉(zhuǎn)換成細(xì)胞毒性藥物的酶、用于為將所形成的綴合物靶向至結(jié)腸腫瘤而活化免疫系統(tǒng)的化合物或者細(xì)胞刺激性化合物。這樣的綴合物具有一個(gè)由抗-prl抗體組成的“結(jié)合部分”和一個(gè)由放射性標(biāo)記物、毒素或酶組成的“功能部分”。另外可單獨(dú)使用所述抗體，目的只是阻斷所述prl-1或prl-3抗原的活性，尤其是通過物理地干涉它對另一種化合物的結(jié)合。可將所述綴合物的結(jié)合部分和功能部分(如果也是肽或多肽)通過任何交聯(lián)多肽的常規(guī)方式連接在一塊，所述方式例如那些已在o'sullivanetal(anal.biochem1979:100,100-108)中大體描述的。例如，一個(gè)部分可富含硫醇基團(tuán)，并且另一個(gè)部分與能夠與這些硫醇基團(tuán)反應(yīng)的雙功能劑反應(yīng)，所述雙功能劑例如碘乙酸的n-羥基琥珀酰亞胺酯(nhia)或n-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(spdp)。以例如間馬來酰亞胺苯甲酰-n-羥基琥珀酰亞胺酯得到的酰胺和硫醚鍵在體內(nèi)一般比二硫鍵更穩(wěn)定?；蛘撸绻鼋Y(jié)合部分包含糖(例如對于抗體或某些抗體片段情況將如此)，那么可使用ep0088695中的連接技術(shù)經(jīng)該糖部分將所述功能部分連接。所述綴合物的功能部分可以是一種用于將非毒性前藥轉(zhuǎn)換成毒性藥物的酶，例如bagshawe及其同事的綴合物(bagshawe(1987)br.1.cancer56,531；bagshaweetal(br.1.cancer1988:58,700)；wo88/07378)或氰化物釋放體系(wo91/11201)。當(dāng)將所述抗-prl抗體綴合物用于診斷時(shí)，它的功能部分可包含一種用于閃爍顯像研究的放射性原子或者可由這樣的原子組成，例如锝99m(99mtc)或碘-123(123i)，或者一種用于核磁共振(nmr)成像(也被稱為磁共振成像，mri)的自旋標(biāo)記物，例如碘-123、碘-313、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓錳或鐵。當(dāng)被用于一種用于選擇性破壞腫瘤的化合物中時(shí)，所述抗-prl抗體可包含一種發(fā)出足夠破壞鄰近細(xì)胞的能量的高放射性原子例如碘-131、錸-186、錸-188、釔-90或鉛-212，或者一種細(xì)胞毒化合物例如甲氨蝶呤、阿霉素(adriamicin)、長春花生物堿(長春新堿、長春堿、依托泊苷)、柔紅霉素或其他插入劑。放射性標(biāo)記物或其他標(biāo)記物可以已知的方式整合于所述抗-prl抗體綴合物中。例如，所述肽可以被生物合成，或者可通過使用合適氨基酸前體例如包括氟-19替換氫的化學(xué)氨基酸合成法進(jìn)行合成。標(biāo)記物例如99mtc、123i、186rh、188rh和111in可經(jīng)肽中的半胱氨酸殘基連接。釔-90可經(jīng)賴氨酸殘基連接?？捎胕odogen法(frakeretal(1978)biochem.biophys.res.commun.80:49-57)整合碘-123。"monoclonalantibodiesinimmunoscinigraphy"(chatal,crcpress1989)詳細(xì)描述了其他方法。可能不需要整個(gè)酶都存在于所述綴合物中，但理所當(dāng)然必須存在催化部分。可使用所謂的“抗體酶(abzyme)”，其中抗-prl抗體被制成一種參與人們希望催化的反應(yīng)中的化合物，通常為反應(yīng)中間體狀態(tài)。然后，所形成的抗體可對所述反應(yīng)發(fā)揮酶的功能?？赏ㄟ^尺寸排阻色譜法或親和色譜法純化所述綴合物，并測試其雙生物活性?？墒褂靡环N采用固定抗原的酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)并在一種活細(xì)胞放射免疫測定中測量所述抗原免疫反應(yīng)性?？墒褂冕槍Ζ?葡萄糖苷酶的酶測定，使用吸光度在葡萄糖水解時(shí)會(huì)變化的底物，例如onpg(對硝基苯基-β-d-吡喃葡萄糖苷)，其釋放可在405nm以光譜光度計(jì)測量的2-硝基酚。可以通過以下方式測試所述綴合物在體外的穩(wěn)定性：先在37℃的血清中孵育，然后進(jìn)行尺寸排阻fplc分析。通過在注入所述綴合物后多個(gè)時(shí)間分析血清，可在小鼠中以相同方式測試在體內(nèi)的穩(wěn)定性。另外，可以在綴合之前以125i放射性標(biāo)記所述抗-prl抗體并以131i放射性標(biāo)記所述酶，并且可以確定所述綴合物、游離抗-prl抗體和游離酶在動(dòng)物例如小鼠中的生物分布?；蛘?，可通過重組dna技術(shù)將所述綴合物產(chǎn)生為一種融合化合物，藉此dna段包含編碼所述綴合物兩部分的各自區(qū)域，這兩個(gè)區(qū)域相互毗連或者被編碼不破壞所述綴合物的所需性質(zhì)的連接子肽的區(qū)域隔開?？深A(yù)見地，所述化合物的兩個(gè)功能部分可全部地或部分地重疊。然后，將該dna在合適的宿主中以已知的方式表達(dá)。診斷試劑盒本發(fā)明人還公開了用于在生物流體和組織中檢測及測量prl-1或prl-3以及用于在組織中定位prl-1或prl-3的診斷方法和試劑盒。還可將抗-prl抗體用于診斷方法和試劑盒中，以檢測及定量能夠結(jié)合prl-1或prl-3的抗體。這些試劑盒使得可檢測prl-1或prl-3，prl-1或prl-3在某些情況下可指示原位原發(fā)腫瘤的微轉(zhuǎn)移的擴(kuò)散。具有這樣的循環(huán)抗-prl-1抗體或抗-prl-3抗體的患者更可能形成腫瘤和癌癥，并且更可能在治療后或在緩解期后復(fù)發(fā)癌癥。還考慮了用于測量prl-1或prl-3的試劑盒。具有高效價(jià)和特異性的抗-prl抗體可用于開發(fā)使用簡單的用于快速、可靠、敏感和特異地測量及定位血漿、尿、組織提取物中及在細(xì)胞培養(yǎng)物中的prl-1或prl-3的試劑盒。這些測定試劑盒包括但不限于以下技術(shù)：競爭性及非競爭性測定，放射免疫測定，生物發(fā)光及化學(xué)發(fā)光測定，熒光測定，夾心測定，免疫放射測定，斑點(diǎn)印跡，酶聯(lián)測定包括elisa，用于快速監(jiān)測尿或血液的微滴定板、抗體包被的條帶或量桿，以及免疫細(xì)胞化學(xué)法。對于每個(gè)試劑盒，確立測定的范圍、敏感性、精度、可靠性、特異性和再現(xiàn)性。在位移或活性的標(biāo)準(zhǔn)曲線上20％、50％和80％的點(diǎn)處建立測定內(nèi)差異和測定間差異。在研究中和臨床中通常使用的測定試劑盒的一個(gè)實(shí)例是放射免疫測定(ria)試劑盒。在成功進(jìn)行抗-prl抗體的放射性碘標(biāo)記和純化后，將具有最高效價(jià)的抗血清以多個(gè)稀釋度添加至這樣的試管中，即這些試管包含在合適的緩沖劑體系中相對恒定量的放射性，例如10,000cpm。其他試管中包含緩沖劑或免疫前血清，用于確定非特異性結(jié)合。在4℃下孵育24小時(shí)后，添加蛋白a并將這些試管搖晃，在室溫下孵育90分鐘并在4℃下以大約2000-2500×g離心，以沉淀抗血清與標(biāo)記抗-prl抗體結(jié)合的復(fù)合物。通過抽吸除去上清并在伽瑪計(jì)數(shù)儀中對沉淀物的放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)。將這樣的抗血清稀釋液進(jìn)一步表征，即在減去非特異性結(jié)合后該抗血清稀釋液結(jié)合大約10-40％的標(biāo)記抗-prl抗體。免疫組織化學(xué)試劑盒還可用于在組織和細(xì)胞中定位prl-1或prl-3。該免疫組織化學(xué)試劑盒提供說明書、抗-prl抗體以及可能的封閉血清和連接至熒光分子例如異硫氰酸熒光素或連接至用于顯示第一抗血清的某一其他試劑的第二抗血清。免疫組織化學(xué)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。該免疫組織化學(xué)試劑盒使得可使用光學(xué)顯微術(shù)和電子顯微術(shù)定位組織切片和培養(yǎng)細(xì)胞中的prl-1或prl-3。這可基于研究目的和臨床目的使用。例如，對腫瘤進(jìn)行活檢，或者將其收集并以切片機(jī)切成組織切片，以檢查產(chǎn)生prl-1或prl-3的部位?；谠\斷和可能的治療目的，這些信息可用于癌癥的檢測和治療中。藥物組合物所述抗-prl抗體可有效地治療癌癥相關(guān)疾病。本發(fā)明人公開了一種以有效量的本文所述的抗-prl抗體治療癌癥相關(guān)疾病的方法。使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的配制方法，可將所述抗-prl抗體提供為可藥用的組合物中的分離的和基本上純化的蛋白和蛋白片段?？梢运幬锝M合物的形式給予所述抗-prl抗體。這樣的藥物組合物可包括治療有效量的抗-prl抗體和合適的賦形劑、稀釋劑或載體。具體而言，可通過例如注射(經(jīng)例如靜脈)至患者體內(nèi)，將所述抗-prl抗體導(dǎo)入患者的循環(huán)系統(tǒng)中。適宜于非消化道給藥的制劑包括水性的及非水性的無菌注射溶液，所述溶液可包含抗氧劑、緩沖劑、抑菌劑和使所述制劑與預(yù)定受者的血液等滲的溶質(zhì)；并且所述制劑還包括可包含助懸劑和增稠劑的水性的及非水性的無菌懸浮液。所述制劑可以存在于單劑量或多劑量的包裝體中，例如密封的安瓿和玻璃小瓶中，并且可以被保存于冷凍干燥(凍干的)條件下，僅需要在臨使用前加入無菌的液體載體例如注射用水?？蓮那笆鲱悇e的無菌粉劑、顆粒劑和片劑即興制備注射溶液和懸液?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)途徑給予這些組合物。所述途徑包括但不限于：口服、直腸途徑、眼部途徑(包括玻璃體內(nèi)或前房內(nèi))、鼻部途徑、局部途徑(包括含服和舌下途徑)、子宮內(nèi)途徑、陰道途徑或非消化道途徑(包括皮下途徑、腹膜內(nèi)途徑、肌內(nèi)途徑、靜脈內(nèi)途徑、真皮內(nèi)途徑、顱內(nèi)途徑、氣管內(nèi)途徑和硬腦膜外途徑)、透皮途徑、腹膜內(nèi)途徑、顱內(nèi)途徑、腦室內(nèi)途徑、腦內(nèi)途徑、陰道內(nèi)途徑、子宮內(nèi)途徑或非消化道途徑(例如靜脈內(nèi)途徑、椎管內(nèi)途徑、皮下途徑或肌內(nèi)途徑)。所述抗-prl抗體制劑可以方便地為以單位劑量形式給出，并可通過常規(guī)的制藥技術(shù)制備。這樣的技術(shù)包括這樣的步驟，即建立活性成分和一種或多種藥物載體或賦形劑的聯(lián)系。通常，所述制劑的制備可通過使活性成分與液體載體和/或固體載體微細(xì)粉末建立均一密切的聯(lián)系，然后如果需要?jiǎng)t將產(chǎn)品定型。另外，可將所述抗-prl抗體整合至可生物降解的聚合物中，使得可持續(xù)釋放所述化合物，所述聚合物被植入至需要送遞藥物的區(qū)域附近例如腫瘤部位附近，或者所述聚合物被植入使得所述抗-prl抗體全身性地緩慢釋放?？缮锝到獾木酆衔锛捌鋺?yīng)用詳細(xì)記載于例如bremetal(1.neurosurg199174:441-446)。還可將滲透性微泵用于控制高濃度的抗-prl抗體從插管送遞至所需部位，例如直接至轉(zhuǎn)移生長部位或至供給該腫瘤血液的血管。所述抗-prl抗體可與這樣的細(xì)胞毒性劑連接，即這些細(xì)胞毒性劑以被設(shè)計(jì)成最大送遞的方式注入至所需部位。例如，連接蓖麻毒蛋白的高親和性抗-prl抗體被從插管送遞至供給靶部位血液的血管或直接至靶位。這樣的制劑還可以通過偶聯(lián)于注入插管的滲透泵的受控方式被送遞。優(yōu)選的單位劑量制劑包含被給予成分的每日劑量或單位、每日亞劑量(如本文上文所述)或其一個(gè)合適部分。應(yīng)理解除了所述成分(尤其上文提及的)外，本文所述的制劑還可包含在本領(lǐng)域中常規(guī)的考慮到所關(guān)注制劑類型的其他制劑?？梢匀魏魏线m的方式給予所述抗-prl抗體綴合物，通常在標(biāo)準(zhǔn)的稀釋劑和載體的無菌、無熱源制劑例如等滲鹽水(在靜脈注射時(shí))中以非消化道途徑給予，例如以靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)途徑給予。一旦所述抗-prl抗體綴合物已結(jié)合至靶細(xì)胞并且(根據(jù)需要)被從血流中清除(這通常會(huì)花一天左右)，給予前藥(通常以單注入劑量)，或者對腫瘤進(jìn)行成像。如果需要，因?yàn)樗隹?prl抗體綴合物可能是免疫原性的，所以可加入環(huán)孢菌素或其他免疫抑制藥，以為治療提供更長的時(shí)間，但通常情況下不需要這樣做。本文所述的抗-prl抗體的劑量將依賴于疾病狀態(tài)或者正在治療的病癥和其他臨床因素，例如人或動(dòng)物的體重和狀況以及給予所述化合物的途徑。依賴于所述抗-prl抗體在具體動(dòng)物或人中的半衰期，可以在一日數(shù)次至一周一次之間給予所述抗-prl抗體。需要理解本文所述的方法和組合物可人用和獸用。本文所述的方法考慮單次給藥，以及同時(shí)的或經(jīng)延長時(shí)間的多次給藥。可以常規(guī)的方式優(yōu)化給予所述抗-prl抗體綴合物和前藥的時(shí)機(jī)，這是因?yàn)榫Y合物的腫瘤/正常組織比值(至少在靜脈內(nèi)送遞后)在約4-6天后最高，然而在此時(shí)結(jié)合于腫瘤的綴合物的絕對量(以注入劑量每克的百分?jǐn)?shù)表示)低于前期。因此，給予所述抗-prl抗體綴合物和前藥之間的最佳間隔將是酶的腫瘤濃度峰值與腫瘤和正常組織之間最大分布比之間的折中值。所述抗-prl抗體綴合物的劑量可由醫(yī)生根據(jù)通常的標(biāo)準(zhǔn)選擇。至少在應(yīng)用靶向的酶例如β-葡萄糖苷酶及靜脈內(nèi)苦杏仁苷作為毒性前藥的方法的情況下，每平方米體表面積1-50次0.1-10.0克的日劑量，優(yōu)選1.0-5.0g/m2可能是合適的。對于口服治療，每日3次0.05-10.0g，優(yōu)選1.0-5.0g的劑量進(jìn)行1-50天可能是合適的?？梢勒照５臉?biāo)準(zhǔn)類似地選擇所述抗-prl抗體綴合物的劑量，尤其是參考腫瘤的類型、階段和部位，以及患者體重。治療的持續(xù)時(shí)間將部分地依賴于任何對所述抗-prl抗體綴合物的免疫反應(yīng)的速度和范圍。疾病例如以藥物組合物形式的本文描述的抗-prl抗體可用于癌癥的治療。對于本文而言，術(shù)語“癌癥”可包含以下的任何一種或多種：急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、急性髓細(xì)胞樣白血病(aml)、腎上腺皮質(zhì)癌、肛門癌、膀胱癌、血癌、骨癌、腦腫瘤、乳腺癌、女性生殖系統(tǒng)的癌癥、男性生殖系統(tǒng)的癌癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、宮頸癌、兒童橫紋肌肉瘤、兒童肉瘤、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)、急性髓細(xì)胞樣白血病(cml)、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜肉瘤、食道癌、眼癌、膽囊癌、胃癌、胃腸道癌、毛細(xì)胞性白血病、頭頸癌、肝細(xì)胞癌、何杰金病(hodgkin’sdisease)、喉咽癌、卡波氏肉瘤(kaposi’ssarcoma)、腎癌、喉癌、白血病、白血病、肝癌、肺癌、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、惡性胸腺瘤、黑色素瘤、間皮瘤、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓瘤、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、非何杰金淋巴瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、垂體瘤、漿細(xì)胞腫瘤、原發(fā)性cns淋巴瘤、前列腺癌、直腸癌、呼吸系統(tǒng)癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、唾液腺癌、皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、胃癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、泌尿系統(tǒng)癌癥、子宮肉瘤、陰道癌、血管系統(tǒng)癌、waldenstrom氏巨球蛋白血癥(waldenstrom’smacroglobulinemia)和腎母細(xì)胞瘤(wilms’tumor)。例如以藥物組合物形式的本文描述的抗-prl抗體可用于癌癥相關(guān)障礙的治療。這樣的障礙包括但不限于：實(shí)體瘤；血液生腫瘤例如白血??；腫瘤轉(zhuǎn)移；良性腫瘤例如血管瘤、聽神經(jīng)瘤、神經(jīng)纖維瘤、沙眼和化膿性肉芽腫；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；銀屑病；眼部血管發(fā)生疾病例如糖尿病性視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、黃斑變性、角膜移植排斥反應(yīng)、新生血管性青光眼、晶狀體后纖維組織增生、虹膜紅變；奧斯勒-韋伯綜合征(osler-webersyndrome)；心肌血管發(fā)生；斑塊新生血管形成；毛細(xì)血管擴(kuò)張癥；血友病關(guān)節(jié)病變(hemophiliacjoint)；血管纖維瘤；傷口肉芽形成；冠狀動(dòng)脈側(cè)枝；腦部側(cè)支動(dòng)靜脈畸形；缺血性肢血管發(fā)生；新生血管性青光眼；晶狀體后纖維組織增生；糖尿病新生血管形成；螺桿菌相關(guān)疾?。还钦?；血管發(fā)生；造血作用；排卵；月經(jīng)；以及胎盤形成。實(shí)施例實(shí)施例1.細(xì)胞系：cho-k1、a2780和ct26cho-k1細(xì)胞、a2780人卵巢癌細(xì)胞和ct26小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞購自atcc(manassas,va)。實(shí)施例2.穩(wěn)定表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的cho細(xì)胞混合池的生成穩(wěn)定表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的cho細(xì)胞混合池的生成如以前的研究中的描述8。簡而言之，將細(xì)胞在補(bǔ)充10％胎牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)并在1mg/mlg418中選擇20-30天。然后將細(xì)胞(106個(gè)細(xì)胞/ml)通過facsvantage,semode(bectondickinson)進(jìn)行egfp分揀，并在培養(yǎng)物中再培養(yǎng)以建立穩(wěn)定的細(xì)胞混合池。實(shí)施例3.穩(wěn)定表達(dá)egfp-prl-3的at-3細(xì)胞或穩(wěn)定表達(dá)egfp-prl-1的at-1細(xì)胞的生成為了得到egfp-prl-3或egfp-prl-1腫瘤，將每只8周齡裸鼠(jacksonlabs,usa)經(jīng)尾靜脈注入表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的細(xì)胞(5×105)。在尾靜脈注入3周后將小鼠處死。取出攜帶egfp-prl-3或egfp-prl-1腫瘤的肺。在熒光顯微鏡(zeiss,m2bioquad)下將各個(gè)egfp-prl腫瘤切開。為了生成源自這些腫瘤的細(xì)胞系，在無菌條件下將每個(gè)egfp-prl腫瘤在pbs中洗滌2次。將腫瘤切成小塊并在37℃和5％co2下培養(yǎng)于rpmi1640、10％fbs和1％抗生素(sigma)中。at-3腫瘤細(xì)胞系源自egfp-prl-3腫瘤；而at-1腫瘤細(xì)胞系源自egfp-prl-1腫瘤。將細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶處理并以1:3的比例分至新的培養(yǎng)皿中。通過間接免疫熒光法確認(rèn)同質(zhì)表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的腫瘤細(xì)胞系。實(shí)施例4.特異性prl-3mab克隆223、318和prl-1mab克隆269的生成這些抗體的生成如下(亦見參考文獻(xiàn)19)：使用來自stemcelltechnologies,inc.(vancouver,britishcolumbia,canada)的clonacell-hy克隆試劑盒生成雜交瘤。步驟依照廠商的說明書。簡而言之，進(jìn)行以下步驟：(a)分別以gst-小鼠全prl-1或prl-3融合蛋白免疫balb/c小鼠；(b)培養(yǎng)balb/c親代骨髓瘤細(xì)胞sp2/0；(c)從免疫的小鼠制備balb/c小鼠脾細(xì)胞；(d)融合脾細(xì)胞與sp2/0細(xì)胞；及(e)選擇并表征雜交瘤克隆。兩個(gè)對照腹水：1.來自抗人血型糖蛋白a的雜交瘤6a7m的腹水(獲自atcc)。2.抗gs28高爾基復(fù)合體標(biāo)記物的腹水。實(shí)施例5.實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定參考了參考文獻(xiàn)20。所有動(dòng)物研究都得到了新加坡分子和細(xì)胞生物學(xué)研究所審查委員會(huì)(reviewboardoftheinstituteofmolecularandcellbiology,singapore)的批準(zhǔn)。本發(fā)明人遵照animalfacilitycenteroftheagencyforscience,technologyandresearch(a*star),singapore的方針5,8,19。在第1天通過其尾靜脈以1百萬個(gè)癌細(xì)胞注射裸鼠。處理小鼠每周2次經(jīng)尾靜脈給予prl-mab。實(shí)施例6.蛋白質(zhì)印跡分析詳細(xì)步驟記載于參考文獻(xiàn)19中。實(shí)施例7.表達(dá)egfp-prl-3的癌細(xì)胞的共聚焦顯微鏡成像和分析將at-3、at-1或親代cho細(xì)胞在蓋玻片上培養(yǎng)并以pbscm(包含1mmmgcl2和1mmcacl2的pbs)洗滌一次。然后在室溫下(rt，24℃)將細(xì)胞在2.7％低聚甲醛中固定20分鐘。在以pbscm洗滌2次后，將細(xì)胞以pbscm中的0.12％皂苷透化15分鐘(對于非透性化細(xì)胞省略該步驟)，并與prl-3mab孵育。將細(xì)胞以pbscm輕輕洗滌3次，并在rt下以與得克薩斯紅(texasred)(sigma)綴合的抗-小鼠igg抗體孵育4小時(shí)。以熒光顯微鏡直接觀察at-3或at-1細(xì)胞為綠色。為了檢查攝入活的親代cho細(xì)胞中的抗體，首先在4℃下將細(xì)胞與小鼠抗-gs28抗體孵育2小時(shí)。將細(xì)胞以pbscm輕輕洗滌3次，然后在室溫下(rt，24℃)在0.6％低聚甲醛中固定20分鐘。將所述細(xì)胞在rt下以與fitc(sigma)綴合的抗小鼠igg抗體孵育4小時(shí)。將to-pro-3碘化物用于將每個(gè)親代cho細(xì)胞的dna染色成藍(lán)色。以zeisslsm510imagebrowser進(jìn)行共聚焦成像。實(shí)施例8.免疫組織化學(xué)法(ihc)本發(fā)明人使用單克隆的小鼠抗-prl-3抗體(克隆223或318)或小鼠抗-prl-1抗體(克隆269)(1:300的稀釋度)和vectastainabc試劑盒-過氧化物酶兔iggpk-4001(ortonsouthgate,peterborough,england)進(jìn)行ihc實(shí)驗(yàn)，研究了來自cybrdi(frederick,maryland)的人結(jié)腸癌標(biāo)本和乳腺癌標(biāo)本中的prl-3和prl-1蛋白表達(dá)。人低密度和高密度多惡性腫瘤陣列(ts42040704)和(ts43040303)購自biogenex(sanramon,ca)。將福爾馬林固定、石蠟包埋的切片在54℃下烘烤10分鐘，然后在新鮮二甲苯中除蠟5分鐘(2×)。將切片依次用100％、95％、80％和75％乙醇、pbs(每次變化維持2分鐘)再水化，然后于0.01m檸檬酸鈉(ph6.0)緩沖物中處理，之后由抗原提取2100-retrieverpickcelllaboratories(amsterdam,northholland,1098sm,nl)處理15分鐘。將切片在冷卻器中冷卻4個(gè)小時(shí)。以pbs洗滌切片3次(每次5分鐘)，轉(zhuǎn)移至0.6％h2o2的pbs中避光20分鐘。將切片以pbs洗滌數(shù)次，并在24℃下在pbs-0.2％吐溫20中處理20分鐘。依照廠商的說明書進(jìn)行封閉步驟和抗體孵育。實(shí)施例9.可使侵襲性轉(zhuǎn)移性肺腫瘤快速形成的動(dòng)物模型本實(shí)施例描述了小鼠中過表達(dá)prl的腫瘤的生成，并提供了用于后續(xù)prl癌癥治療的動(dòng)物模型。參照圖1。首先，將裸鼠用作體內(nèi)“細(xì)胞分選器”以選擇具有高轉(zhuǎn)移活性的細(xì)胞。將1×106個(gè)表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的cho細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入至裸鼠的循環(huán)系統(tǒng)。在注入后3周在每只裸鼠的肺中形成了數(shù)十個(gè)轉(zhuǎn)移瘤或病灶。第二，然后將單個(gè)的這種肺轉(zhuǎn)移egfp-prl腫瘤切下并在培養(yǎng)皿中切碎，以建立更富有侵襲性和更同質(zhì)的表達(dá)egfp-prl-3的轉(zhuǎn)移細(xì)胞系(被稱作at-3)或表達(dá)egfp-prl-1的腫瘤細(xì)胞系(被稱作at-1)。第三，將1×106個(gè)at3或at1細(xì)胞經(jīng)尾靜脈再次注入至裸鼠中。第四，本發(fā)明人將小鼠分為非治療組或治療組，在接種所述腫瘤細(xì)胞后第3、6和9天經(jīng)尾靜脈注射給予不同的抗體。設(shè)計(jì)這樣的一種動(dòng)物模型，即其中過表達(dá)prl-3或prl-1的細(xì)胞快速地形成轉(zhuǎn)移瘤。以這樣的侵襲性轉(zhuǎn)移瘤作為背景，如果以抗-prl-mab的治療有效，那么能夠觀察到對致腫瘤性的任何抑制。本發(fā)明人的動(dòng)物模型再現(xiàn)了表達(dá)prl的細(xì)胞的侵襲性轉(zhuǎn)移活性，并可用于剖析在侵入或內(nèi)滲后出現(xiàn)的轉(zhuǎn)移事件。實(shí)施例10.prl-3mab或prl-1mab在小鼠中可以約90％的效力阻斷egfp-prl-3或egfp-prl-1轉(zhuǎn)移性肺腫瘤的形成在注入細(xì)胞后第15天，4組對照小鼠(圖2a，a，未處理的；b，pbs-處理的；c&d，兩種無關(guān)抗體)在它們的肺中顯示了大量廣泛分布的egfp-prl-3轉(zhuǎn)移瘤(約140-150個(gè)部位)。顯著地，接受以來自雜交瘤克隆223(圖2ae和g)或克隆318(圖2af和h)的純化igg或未純化腹水形式的3個(gè)劑量prl-3mab的其他4組小鼠在其肺中顯示了顯著減少的表達(dá)egfp-prl-3的腫瘤(約15-20部位)。類似地，prl-1mab顯著降低了源自接種表達(dá)egfp-prl-1的at-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成(圖2b，第9道)?？偟膩碚f，以prl單克隆抗體處理的小鼠(n＝40)與對照小鼠(n＝40)相比出現(xiàn)轉(zhuǎn)移性肺腫瘤被抑制約90％。已在心臟中檢測到了prl-3mrna(但非蛋白)5。就這一點(diǎn)而言，有必要強(qiáng)調(diào)的是，以prl-3mab處理的動(dòng)物沒有表現(xiàn)出明顯的心臟毒性或其他不良副作用。實(shí)施例11.prl-1mab可特異性地阻斷prl-1(但非prl-3)轉(zhuǎn)移瘤的形成，而prl-3mab可特異性地阻斷prl-3(但非prl-1)轉(zhuǎn)移瘤的形成該實(shí)施例證明了所述抗體效應(yīng)是特異性的。參考圖3。本發(fā)明人表明，表達(dá)prl-1和prl-3的細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移瘤形成不被模擬品pbs處理阻斷(a、e)，但可被兔prl抗體有效地阻斷(b、f)，這是由于所述兔抗體可與所有3種prl(prl-1、prl-2和prl-3)反應(yīng)。本發(fā)明人表明，prl-1mab可阻斷其中過表達(dá)prl-1(c)但非過表達(dá)prl-3(g)的肺轉(zhuǎn)移瘤形成。類似地，prl-3mab可抑制(減少腫瘤數(shù)目)其中過表達(dá)prl-3(h)但非過表達(dá)prl-1(d)的肺轉(zhuǎn)移瘤形成。實(shí)施例12.prl-3mab可有效抑制表達(dá)內(nèi)源性prl-3的a2780細(xì)胞但非不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的ct26細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成到目前為止，prl-mab治療的顯著有效性依賴于靶向具有高水平egfp-prl蛋白表達(dá)的細(xì)胞。然后，本發(fā)明進(jìn)行關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)，以評估所述抗體是否能夠阻斷天然表達(dá)prl-3蛋白的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。理想的用于本實(shí)驗(yàn)中的候選癌細(xì)胞系應(yīng)具有兩個(gè)性質(zhì)：1.天然表達(dá)的prl-3蛋白；2.能夠在小鼠中快速地導(dǎo)致轉(zhuǎn)移瘤形成。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)a2780人卵巢癌細(xì)胞系具有這兩個(gè)性質(zhì)，并確認(rèn)了a2780細(xì)胞天然地表達(dá)prl-3蛋白(圖4a，第2道)，這在以前被報(bào)道過9。同時(shí)，本發(fā)明人鑒定了一個(gè)不表達(dá)prl-3蛋白的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系ct26(圖4a，第1道)。ct26癌細(xì)胞系被選為本實(shí)驗(yàn)的陰性對照，這是因?yàn)樵诮臃N所述癌細(xì)胞后2周它在裸鼠肺中具有強(qiáng)的轉(zhuǎn)移活性(圖4b)?？深A(yù)計(jì)地，在接受ct26細(xì)胞的小鼠的處理組(圖4b，a)和未處理組(圖4b，b)不會(huì)有差異，都顯示體重減輕的病理表觀。與來自未處理小鼠的肺(圖4b，下圖b)相比，ct26細(xì)胞的侵襲性肺轉(zhuǎn)移瘤的快速形成不受prl-3mab的抑制(圖4b，下圖a)，這表明prl-mab不抑制其中不天然表達(dá)prl-3磷酸酶的肺轉(zhuǎn)移瘤的形成。相反，在接種表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的a2780人癌細(xì)胞后1個(gè)月，在處理的和未處理的小鼠之間出現(xiàn)了顯著差異。病理表觀(不健康及極瘦)以及a2780prl-3陽性細(xì)胞形成的多個(gè)腫瘤僅出現(xiàn)在未處理的小鼠中(圖4c，右側(cè))，而不出現(xiàn)在處理的小鼠中(圖4c，左側(cè))。所述處理的小鼠在更長的時(shí)間里保持健康。這些結(jié)果表明，prl-3mab能夠阻斷天然表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成，而對不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的癌細(xì)胞沒有效應(yīng)。實(shí)施例13.攝取各自的prl-抗體的表達(dá)prl-3或prl-1的細(xì)胞需要進(jìn)一步研究抗-prl抗體通過什么精確機(jī)制抑制腫瘤形成。為了確定腫瘤細(xì)胞是否攝取prlmab，本發(fā)明人使用間接免疫熒光法在過表達(dá)egfp-prl-3的非透化at-3細(xì)胞中檢查了prl-3mab染色。一些非透化at-3細(xì)胞表現(xiàn)出被prl-3mab完全染色(圖5a，圖b&e中白色箭頭指出)。40％的這些細(xì)胞被部分地染色為紅色，但>50％的所述細(xì)胞完全未被標(biāo)記(圖5a，b、e)，不同于透化at-3細(xì)胞100％呈現(xiàn)被抗-prl-3mab染色為紅色(圖5a、h)。這些數(shù)據(jù)表明，大的prlmab仍能夠部分地或完全地穿透至非透化癌細(xì)胞中。使用prl-1mab(克隆#269)和過表達(dá)egfp-prl-1的cho細(xì)胞得到類似的結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示)。為了進(jìn)一步確認(rèn)所述抗體能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，本發(fā)明人選擇高爾基器標(biāo)記物(gs28)的抗體，并表明gs28mab可穿透至培養(yǎng)物中的cho活細(xì)胞中(圖5b，a-c)。再者，血清饑餓過夜的多數(shù)活細(xì)胞(60-70％)顯示通過未知機(jī)制攝取小鼠抗-gs28抗體攝取的更高效力(圖5bd-f中綠色所示)。為了研究所述抗體的攝取是否是普遍的細(xì)胞現(xiàn)象，在2個(gè)其他細(xì)胞系上試驗(yàn)了3種prl-無關(guān)抗體。這些試驗(yàn)是小鼠抗-gs28抗體和兔抗-pten抗體在非透性化人乳房上皮細(xì)胞(mcf-10a)上的試驗(yàn)；以及小鼠抗-gs28抗體和兔抗-p53抗體在人乳腺癌細(xì)胞(mcf-7)上的試驗(yàn)。同時(shí)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)不管所述抗體來源是兔還是小鼠，都有一部分非透化細(xì)胞(約10％)顯示兩種抗體在同一細(xì)胞中的有效攝取(圖6a、b)。如果mcf-7細(xì)胞是血清饑餓過夜的，那么所述非透化mcf-7細(xì)胞能夠高效地?cái)z取gs28抗體和p53抗體(圖6c)。間接免疫熒光雙染色可顯示在正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中的抗體攝取是普遍現(xiàn)象?？贵w可被非透化細(xì)胞攝取，并且這一點(diǎn)可以被細(xì)胞的血清饑餓加強(qiáng)。這些結(jié)果表明，使用單克隆抗體療法也可以靶向細(xì)胞內(nèi)蛋白。實(shí)施例14.prl-3和prl-1的過表達(dá)與多種轉(zhuǎn)移癌有關(guān)為了評價(jià)prl-mab作為抗prl-3或prl-1相關(guān)癌癥的潛在藥物的臨床重要性及預(yù)后重要性，本發(fā)明人嘗試另外評估已知prl介導(dǎo)的癌癥的譜，所述癌癥包括結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、腦癌、卵巢癌、黑色素瘤和胃癌3-12,19。本發(fā)明人使用prl-3mab在人多種癌癥組織陣列上進(jìn)行免疫組織化學(xué)測定，發(fā)現(xiàn)prl-3蛋白在15％(26/158例)的結(jié)腸癌中上調(diào)，在16.5％(19/96例)的乳腺癌中上調(diào)，并在15％(2/13例)的食道癌中上調(diào)。prl-3的過表達(dá)與肺中的鱗狀細(xì)胞癌、陰莖癌和宮頸癌緊密相關(guān)。選擇的樣品顯示于圖7a中。prl-1蛋白在6.2％(8/128例)的結(jié)腸癌中、在20％(5/20例)的腦癌中及在7.6％(1/13例)的食道癌中過表達(dá)(圖7b)。在這些癌癥樣品中，prl-陽性信號(hào)主要位于質(zhì)膜和細(xì)胞質(zhì)。實(shí)施例15.討論(實(shí)施例1-實(shí)施例14)轉(zhuǎn)移是癌癥最為可怕的特征。本發(fā)明人和其他人已發(fā)現(xiàn)prl-3和prl-1的過量表達(dá)與人多種癌癥相關(guān)3-12,19。在本研究中，本發(fā)明人進(jìn)一步證明了prl-3蛋白在結(jié)腸癌、乳腺癌和食道癌中是上調(diào)的。prl-3的過表達(dá)與肺中的鱗狀細(xì)胞癌、陰莖癌和宮頸癌緊密相關(guān)。prl-1蛋白也在結(jié)腸癌、腦癌和食道癌中過表達(dá)。通過外源性試劑靶向過表達(dá)細(xì)胞內(nèi)prl的癌細(xì)胞以防止癌癥轉(zhuǎn)移是一項(xiàng)富有挑戰(zhàn)性的工作。單克隆抗體(mab)構(gòu)成了一類發(fā)展最為快速的人類療法，并且被證明是用于識(shí)別及破壞惡性細(xì)胞的制劑。為了阻斷prl介導(dǎo)的癌癥轉(zhuǎn)移，本發(fā)明人需要消除表達(dá)prl的癌細(xì)胞以阻止它們的進(jìn)一步擴(kuò)散。本發(fā)明人嘗試在小鼠中用單克隆抗體治療實(shí)現(xiàn)這個(gè)富有挑戰(zhàn)性的目標(biāo)。將培養(yǎng)的prl-腫瘤細(xì)胞經(jīng)小鼠尾直接導(dǎo)入至每只小鼠中，本發(fā)明人使用這樣的實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定在體內(nèi)檢查了癌細(xì)胞的生長和腫瘤形成。癌癥轉(zhuǎn)移的過程有4個(gè)主要的步驟。第一，癌細(xì)胞必須增強(qiáng)遷移能力，以脫離原發(fā)腫瘤并與其分離。第二，癌細(xì)胞需要進(jìn)入血液循環(huán)(內(nèi)滲)并在其中存活。第三，癌細(xì)胞應(yīng)該從血管中出來(外滲)，以到達(dá)新的器官。第四，癌細(xì)胞(種子)需要在所述遠(yuǎn)端器官(土壤)中存活，以成長為轉(zhuǎn)移瘤。本發(fā)明人通過將一百萬個(gè)egfp-prl-癌細(xì)胞經(jīng)尾靜脈直接注入至血管中，在所述內(nèi)滲步驟開始我們的轉(zhuǎn)移測定(圖1)。癌癥轉(zhuǎn)移過程是一漫長而艱難的進(jìn)程；據(jù)估計(jì)僅約0.01％的癌細(xì)胞(約100個(gè)腫瘤來自1×106個(gè)癌細(xì)胞)可成功地到達(dá)其最終目的地。在該實(shí)驗(yàn)結(jié)束之前，本發(fā)明人在未處理小鼠中觀察到約100-150個(gè)轉(zhuǎn)移性肺腫瘤(圖2a，a-d)，在以prl特異性mab處理的小鼠中觀察到約10-15個(gè)轉(zhuǎn)移性肺腫瘤(圖2a，e-h)。本發(fā)明人的研究代表了通過使用抗各自磷酸酶(盡管它們定位于細(xì)胞內(nèi))的mab在小鼠中有效阻斷(約90％)實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移的首批例證。本發(fā)明人另外表明，prl-mab對其自己的抗原是特異性的。prl-1mab可特異性地阻斷prl-1但非prl-3轉(zhuǎn)移瘤的形成；prl-3mab可特異性地阻斷prl-3但非prl-1轉(zhuǎn)移瘤的形成(圖3)。此外，本發(fā)明人證明，prl-3mab不阻斷其中不表達(dá)內(nèi)源性prl-3磷酸酶的ct26小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的腫瘤形成(圖4a、b)。有意義的是，本發(fā)明人表明，prl-3mab可有效地阻斷表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的人卵巢癌細(xì)胞系a2780的轉(zhuǎn)移瘤形成。有效抑制prl-3陽性的天然人癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成是重要的，這是因?yàn)檫@表明prl-3mab或其人源化的抗體可為治療與prl-3過表達(dá)相關(guān)的人癌癥的候選物。雖然比較prl-3抗體對a2780人卵巢癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)與其對小鼠ct26結(jié)腸癌細(xì)胞的無抑制效應(yīng)可表明所述抗體可靶向內(nèi)源表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞，但是需要應(yīng)用僅prl-3表達(dá)水平不同的同基因癌細(xì)胞的后續(xù)研究，以令人信服地證明這一點(diǎn)。有多種可能的機(jī)制可造成實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定中prl-3抗體介導(dǎo)的腫瘤形成的抑制。第一，所述抗體有可能進(jìn)入表達(dá)prl-3的細(xì)胞，以靶向細(xì)胞內(nèi)prl-3并中和其功能。培養(yǎng)物中部分表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞對抗-prl-3抗體的攝取及在血清饑餓時(shí)的抗體攝取增加似乎可支持這種作用模式。第二，少部分的prl-3可能被外部化并呈現(xiàn)于所述表達(dá)prl-3的細(xì)胞表面。抗體結(jié)合于暴露于表面的prl-3可觸發(fā)免疫反應(yīng)例如補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(cdc)、抗體依賴性細(xì)胞毒性(adcc)和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdcc)，以破壞癌細(xì)胞。第三，細(xì)胞內(nèi)prl-3可能被水解處理，并且抗原片段可能通過i類主要組織相容性抗原呈現(xiàn)于細(xì)胞表面，使得所述癌細(xì)胞變成細(xì)胞毒性t細(xì)胞的靶標(biāo)。為了了解這些prl-mab怎樣抑制由它們各自的細(xì)胞內(nèi)抗原驅(qū)動(dòng)的癌癥轉(zhuǎn)移的第一種可能性，本發(fā)明人提供了這樣的證據(jù)，即表達(dá)prl-3或prl-1的細(xì)胞對它們各自的prl抗體的攝取可能是一個(gè)普遍現(xiàn)象，原因是本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)prl無關(guān)的高爾基標(biāo)記物gs28的抗體可穿透至培養(yǎng)物的活cho細(xì)胞中，并且所述抗體的攝取可被所述細(xì)胞的血清饑餓增強(qiáng)(圖5b)。一個(gè)重要的問題是，所述抗體穿透是否特異性地出現(xiàn)在癌細(xì)胞中，或者還出現(xiàn)在未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞類型中，以及其他類型的抗體是否也能進(jìn)入細(xì)胞。在2個(gè)另外的細(xì)胞系上試驗(yàn)了三種prl無關(guān)抗體。這些試驗(yàn)是小鼠抗-gs28抗體和兔抗-pten抗體在非透化人乳房上皮細(xì)胞(mcf-10a)上的試驗(yàn)；以及小鼠抗-gs28抗體和兔抗-p53抗體在人乳腺癌細(xì)胞(mcf-7)上的試驗(yàn)。同時(shí)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)不管所述抗體來源是兔還是小鼠，都有一部分非透化細(xì)胞(約10％)顯示兩種抗體在相同細(xì)胞中的有效攝取(圖6a、b)。如果mcf-7細(xì)胞是血清饑餓過夜的，那么所述非透化mcf-7細(xì)胞能夠高效地?cái)z取gs28抗體和p53抗體(約70％，圖6c)。血清饑餓可用于將細(xì)胞阻止在g1期和g0期21?？赡艿那闆r是具體的細(xì)胞周期階段可加強(qiáng)細(xì)胞攝取抗體的能力。在體內(nèi)，癌細(xì)胞處于缺氧應(yīng)激和血清饑餓下，這些條件可能增強(qiáng)癌細(xì)胞攝取抗體的能力。這些結(jié)果表明了一個(gè)至今尚未認(rèn)識(shí)的普遍現(xiàn)象，即細(xì)胞能夠攝取抗體以中和細(xì)胞內(nèi)抗原。具體而言，本發(fā)明人已證明，在這些動(dòng)物中prl-3和prl-1抗體能夠特異性地靶向它們各自的細(xì)胞內(nèi)蛋白，并且在無可察覺副作用的情況下消除腫瘤形成。雖然在實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定中prl-3抗體抑制腫瘤形成的具體步驟仍需要后續(xù)研究來確定，但是本發(fā)明人的結(jié)果表明，撒播于肺或其他二級(jí)組織的單細(xì)胞(或由細(xì)胞簇組成的微轉(zhuǎn)移)可能是prl-3抗體的靶，這一點(diǎn)可由顯著減少的腫瘤團(tuán)數(shù)目反映。由于癌細(xì)胞撒播于二級(jí)組織中及從微轉(zhuǎn)移發(fā)展成宏轉(zhuǎn)移是癌癥擴(kuò)散中的主要限制步驟，所以以prl-3抗體靶向這些階段在臨床上可能與防止癌癥轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)。在本文中，本發(fā)明人提供證據(jù)證明，prl-3mab可正確地靶向有內(nèi)源性prl-3表達(dá)的腫瘤。最后，本發(fā)明人的數(shù)據(jù)表明，細(xì)胞內(nèi)蛋白也可以使用單克隆抗體治療進(jìn)行靶向，以消除轉(zhuǎn)移瘤形成。本發(fā)明人建議癌癥研究人員可考慮將大量的細(xì)胞內(nèi)癌蛋白作為抗癌癥治療中mab可能的靶標(biāo)來再次進(jìn)行評價(jià)。實(shí)施例16.特異性prl-3和prl-1小鼠/人嵌合mab(克隆#318、269)的生成對于prl-3嵌合mab，使用rneasyminikit(qiagen,cat#74104)從6×106個(gè)雜交瘤細(xì)胞(克隆#318)提取總rna。在rna提取過程中使用dnase。然后使用superscriptⅱrnaseh(invitrogen,cat18064-014)將rna反轉(zhuǎn)錄成cdna。將所產(chǎn)生的總cdna用作模板使用ig-primekits(novagen,cat#69831-3)進(jìn)行30個(gè)循環(huán)的pcr(95℃，54℃，72℃)，以生成“通用可變區(qū)”。以ta克隆試劑盒(invitrogen,part#45-0640)將pcr片段克隆至pcrⅱ-topo-vector中。將pcr片段以mfei和xhoi切割，然后插入至人igg1恒定區(qū)表達(dá)載體-pcmv-人igg1的各自位點(diǎn)中(18)，以將小鼠重鏈可變區(qū)(克隆#318)與人igg1恒定區(qū)連接起來。對于小鼠輕鏈可變區(qū)進(jìn)行類似的pcr過程，以包含apali和psti限制位點(diǎn)，用于pcr小鼠可變輕鏈(克隆#318)。將pcr片段以apali和psti切割，然后插入至包含克隆#318重鏈可變區(qū)的人igg1恒定區(qū)表達(dá)載體的各自位點(diǎn)中。將該完全構(gòu)建體短暫地轉(zhuǎn)染至以超低iggfbs(gibco，16250-078)培養(yǎng)的293t細(xì)胞中。從所述培養(yǎng)上清液中收獲所述嵌合mab，并以離心過濾裝置(millipore，cat#ufc900596)濃縮最高達(dá)40倍。通過間接免疫熒光法(if)和蛋白質(zhì)印跡分析試驗(yàn)嵌合mab的特異性。類似地，為了生成prl-1(克隆#269)輕鏈可變區(qū)的pcr片段，從雜交瘤細(xì)胞#269提取mrna，然后將所述mrna反轉(zhuǎn)錄成用于回收重鏈和輕鏈可變區(qū)編碼序列的cdna。為了生成prl-1輕鏈可變區(qū)的pcr片段，進(jìn)行如上述的類似步驟。實(shí)施例17.dld-1-egfp-prl-3腫瘤細(xì)胞系的生成dld-1結(jié)腸癌細(xì)胞來自atccccl-221(mannassas,va)。使用invitrogen(carlsbad,ca)的lipofectamine2000將egfp-prl-3表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染至dld-1細(xì)胞中。為了得到egfp-prl-3腫瘤，將每只8周齡裸鼠(jacksonlabs,usa)在裸鼠臀部注射以形成外植的腫瘤。在癌細(xì)胞接種后3周將小鼠處死。取出腫瘤并在熒光顯微鏡(zeiss,m2bioquad)下檢查。為了生成dld-1-egfp-prl-3腫瘤細(xì)胞系，將egfp-腫瘤在無菌條件下在pbs中洗滌2次；切成小塊并在37℃和5％co2下培養(yǎng)于rpmi1640、10％fbs和1％抗生素(sigma)中。將細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶處理并以1:3的比例分至新的培養(yǎng)皿中。通過間接免疫熒光法確認(rèn)同質(zhì)表達(dá)egfp-prl-3或egfp-prl-1的腫瘤細(xì)胞系。實(shí)施例18.細(xì)胞系：hct116(ccl-247)、dld-1(ccl-221)、b16f0(crl-6475)、b16f10(crl-6322)和a2780hct116(ccl-247)為人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系。dld-1(ccl-221)為人結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞系。b16f0(crl-6475)和b16f10(crl-6322)為兩個(gè)小鼠黑色素瘤細(xì)胞系。所有四個(gè)細(xì)胞系都購自atcc。a2780為人卵巢癌細(xì)胞系，購自ecacc(cat#93112519uk)。實(shí)施例19.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物參照文獻(xiàn)a19。所有動(dòng)物研究經(jīng)本發(fā)明人研究所審查委員會(huì)批準(zhǔn)。本發(fā)明人遵照animalfacilitycenteroftheagencyforscience,technologyandresearch(a*star),singapore的方針。使用8周的裸鼠(jacksonlabs,usa)。在第1天通過尾靜脈以1×106個(gè)癌細(xì)胞注入裸鼠的循環(huán)系統(tǒng)中。在第3天將嵌合mab給予處理小鼠尾靜脈中，或者將pbs給予非處理小鼠尾靜脈中。實(shí)施例20.特異性prl-3小鼠/人嵌合mab(克隆#318)的生成本發(fā)明人受到這樣的事實(shí)鼓勵(lì)，即prl-1和prl-3的小鼠mab可特異性地靶向它們各自的細(xì)胞內(nèi)prl磷酸酶，并抑制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的癌癥轉(zhuǎn)移(參考文獻(xiàn)a16)。在將實(shí)驗(yàn)室工作應(yīng)用于臨床的嘗試中，本發(fā)明人設(shè)計(jì)了一種抗prl-3的小鼠/人嵌合mab，以降低小鼠mab在人中可能的抗原性。成功地開發(fā)了所述prl-3嵌合mab，其中通過以重組dna技術(shù)進(jìn)行的對免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因融合(圖8a)，將人igg分子的恒定區(qū)(參考文獻(xiàn)a18)與小鼠prl-3mab克隆#318的可變區(qū)(重鏈和輕鏈)結(jié)合。將該表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染至表達(dá)猴病毒40t抗原的人胚胎腎細(xì)胞(293t)細(xì)胞中，以產(chǎn)生嵌合的prl-3mab，然后從培養(yǎng)基中收獲所述prl-3mab并進(jìn)一步濃縮40倍。實(shí)施例21.特異性prl-1小鼠-人嵌合mab(克隆#269)的生成本發(fā)明人以類似策略生成小鼠prl-1的重鏈和輕鏈可變區(qū)，然后分別插入至人igg表達(dá)載體的恒定區(qū)中(參考a18)，以生成嵌合的prl-1mab。實(shí)施例22.prl-3和prl-1嵌合mab可特異性地靶向它們的抗原通過進(jìn)行間接免疫熒光(if)(圖8b)和蛋白質(zhì)印跡分析(圖8c和圖8d)，確認(rèn)所述prl-3和prl-1嵌合mab對其抗原的特異性。這些數(shù)據(jù)表明，prl-3嵌合mab僅識(shí)別prl-3蛋白，但不識(shí)別prl-1蛋白和prl-2蛋白；而prl-1嵌合mab僅結(jié)合prl-1蛋白，但不識(shí)別prl-2蛋白和prl-3蛋白。實(shí)施例23.prl-3嵌合抗體可有效抑制表達(dá)內(nèi)源性prl-3的a2780細(xì)胞和hct116但不抑制不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的dld-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成進(jìn)行決定性實(shí)驗(yàn)以評估prl-3嵌合mab是否能靶向并阻斷源自天然表達(dá)prl-3蛋白的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。通過蛋白質(zhì)印跡分析就prl-3的表達(dá)對數(shù)十種癌細(xì)胞進(jìn)行了篩查。理想的用于本實(shí)驗(yàn)中的候選癌細(xì)胞系應(yīng)具有兩個(gè)性質(zhì)：1.天然表達(dá)的prl-3蛋白；2.能夠快速地導(dǎo)致轉(zhuǎn)移瘤形成。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)a2780人卵巢癌細(xì)胞系和hct116人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系具有這兩個(gè)性質(zhì)，并確認(rèn)了a2780細(xì)胞和hct116細(xì)胞天然地表達(dá)prl-3蛋白(圖9a，第1、2道)。a2780細(xì)胞以前被報(bào)道為prl-3陽性細(xì)胞系(參考文獻(xiàn)a4)。值得注意的，在接種hct116(n＝5)或a2780(n＝8)細(xì)胞后1個(gè)月，在prl-3嵌合mab處理的和未處理的小鼠之間出現(xiàn)了顯著差異。病理表觀(不健康及極瘦)僅出現(xiàn)在未處理的小鼠中(圖9b和圖9c，左側(cè))，而不出現(xiàn)在處理的小鼠中(圖9b和圖9c，右側(cè))。所述處理的小鼠在更長的時(shí)間里保持健康。這些結(jié)果表明，prl-3嵌合mab能夠阻斷天然表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。相反，本發(fā)明人鑒定了一個(gè)不表達(dá)prl-3蛋白的人結(jié)腸癌細(xì)胞系dld-1(圖9a，第3道)。dld-1細(xì)胞被作為本實(shí)驗(yàn)的陰性對照?？梢灶A(yù)計(jì)，在接受dld-1細(xì)胞的小鼠的處理組(圖9d，左側(cè))和未處理組(圖9d，右側(cè))之間不會(huì)有差異，在接種dld-1細(xì)胞后3.5個(gè)月都顯示健康表觀。明顯地，被設(shè)計(jì)來過表達(dá)egfp-prl-3的dld-1細(xì)胞在接種所述細(xì)胞后2個(gè)月能在小鼠中導(dǎo)致病理表型。多個(gè)微轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn)于攜帶這些表達(dá)外源性prl-3的癌細(xì)胞的裸鼠的肺中。egfp-prl-3陽性細(xì)胞在此時(shí)還出現(xiàn)在未處理小鼠的血液涂片中(圖10a，n＝5)；表明prl-3能延長血流中的細(xì)胞存活。相反，接受prl-3嵌合mab治療的小鼠在延長的時(shí)間中顯示了顯著不同的大小和健康表觀。微轉(zhuǎn)移瘤未出現(xiàn)在攜帶這些表達(dá)外源性prl-3的癌細(xì)胞的處理裸鼠的肺中。egfp-prl-3陽性細(xì)胞很少出現(xiàn)在所述處理小鼠的血液涂片(圖10b，n＝5)。這些結(jié)果表明，prl-3嵌合mab能夠阻斷天然表達(dá)內(nèi)源性prl-3或者表達(dá)外源設(shè)計(jì)的prl-3的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。重要地，所述抗體對不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的癌細(xì)胞無效應(yīng)。實(shí)施例24.prl-3嵌合抗體可有效地抑制表達(dá)內(nèi)源性prl-3的b16f0細(xì)胞但不抑制不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的b16f10細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成本發(fā)明人已證明，所述抗體能阻斷人癌細(xì)胞形成的轉(zhuǎn)移瘤。現(xiàn)在本發(fā)明人使用兩個(gè)小鼠黑色素瘤細(xì)胞系b16f0和b16f10，以進(jìn)行另外的mab處理。兩個(gè)細(xì)胞系在小鼠中都可快速地形成多個(gè)轉(zhuǎn)移瘤。對于攜帶表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的b16f0癌細(xì)胞的未處理小鼠(圖11a)，轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn)于腎上腺(箭頭指示)、肝、骨和腹部(圖11b，右側(cè))。同時(shí)，本發(fā)明人表明，所述嵌合mab能在處理小鼠的多個(gè)組織中有效消除轉(zhuǎn)移瘤形成(圖11b，左側(cè))。在平行對照實(shí)驗(yàn)中，數(shù)十個(gè)轉(zhuǎn)移瘤出現(xiàn)于攜帶不表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的b16f10癌細(xì)胞的未處理或處理的小鼠肺中(圖11a)，如可觀察到的，處理小鼠(圖11上圖)和未處理小鼠(下圖)之間的肺轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目無顯著差異。到目前為止，從prl-3嵌合mab對數(shù)個(gè)prl-3陽性及陰性癌細(xì)胞系治療得到的結(jié)果可表明，該治療有效性與所述轉(zhuǎn)移瘤形成是否由prl-3過表達(dá)導(dǎo)致是高度相關(guān)的。如果癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性質(zhì)不是由于prl-3過表達(dá)引起(b16f10細(xì)胞)，給予prl-3嵌合mab對阻斷腫瘤形成無效應(yīng)(圖11c)。實(shí)施例25.討論(實(shí)施例15-24)大多數(shù)癌癥患者死于轉(zhuǎn)移，而非死于其原發(fā)疾病。癌癥轉(zhuǎn)移是一種多步驟過程。癌癥轉(zhuǎn)移的第一個(gè)重要步驟涉及新生上皮細(xì)胞失去細(xì)胞-細(xì)胞粘附并獲得運(yùn)動(dòng)性，這些可驅(qū)動(dòng)癌細(xì)胞從腫瘤的原發(fā)位點(diǎn)脫離，并侵入至鄰近組織。第二個(gè)步驟需要癌細(xì)胞獲得進(jìn)入宿主血液循環(huán)(內(nèi)滲)的能力。這兩個(gè)最初的步驟可能會(huì)花很長時(shí)間來醞釀和完成。在這里，本發(fā)明人使用實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定(參考文獻(xiàn)a19)并以這樣的內(nèi)滲步驟開始我們的實(shí)驗(yàn)，即將1百萬個(gè)癌細(xì)胞通過小鼠尾靜脈直接注射至血液循環(huán)中(在第1天)，這可模擬剩余的轉(zhuǎn)移步驟。在第3天本發(fā)明人以prl-3嵌合mab處理所述動(dòng)物，然后每周兩次給予該mab。綜合以前的(參考文獻(xiàn)a16)和現(xiàn)在的抗體治療的結(jié)果，本發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)表明：1.癌癥轉(zhuǎn)移過程是一個(gè)漫長而艱難的進(jìn)程；以1百萬個(gè)癌細(xì)胞(種子)起始；在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，本發(fā)明人在未處理小鼠中觀察到約100個(gè)轉(zhuǎn)移性肺腫瘤，在以prl特異性mab處理的小鼠中觀察到約10-15個(gè)轉(zhuǎn)移性肺腫瘤(參考文獻(xiàn)a16)，這些數(shù)據(jù)反映出，估計(jì)僅約0.01％的癌細(xì)胞可成功地到達(dá)其最終目的地。2.同時(shí)在該研究中，與未處理小鼠的肺切片相比，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)來自處理小鼠的肺切片中的微腫瘤數(shù)量更少(圖10a)；表明所述mab能起到減少腫瘤數(shù)目但非大小的作用。3.治療有效性還與本發(fā)明人什么時(shí)間開始引入所述嵌合mab高度相關(guān)。如果處理不足夠早地開始，而是在接種癌細(xì)胞后延后1周，那么效果不如早處理(第3天)；這些結(jié)果暗示出，當(dāng)所述prl-3癌細(xì)胞仍在循環(huán)系統(tǒng)中移動(dòng)和流動(dòng)時(shí)，prl-3mab可能起到將之中和并清除的作用。延遲的治療可使癌細(xì)胞有機(jī)會(huì)通過血管(外滲)并達(dá)到遠(yuǎn)端器官進(jìn)行撒播；所述mab可能有很少的機(jī)會(huì)阻止prl-3陽性癌細(xì)胞外滲和撒播。這種假設(shè)被以下現(xiàn)象支持：dld-1-egfp-prl-3細(xì)胞更長時(shí)間地存在于未處理小鼠的循環(huán)系統(tǒng)中，以及這些細(xì)胞在接受mab處理的小鼠中的明顯減少。4.最重要地，prl-3嵌合抗體僅能有效地阻斷源自表達(dá)內(nèi)源性prl-3的癌細(xì)胞但不阻斷不表達(dá)內(nèi)源性prl-3的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤形成。因此，本發(fā)明人的prl-3mab處理對其自己的抗原是非常特異的。值得注意的，所述mab較好地通過血流、但不通過局部反應(yīng)發(fā)揮功能，本發(fā)明人通過在裸鼠臀部區(qū)域局部地注入1百萬個(gè)prl-3癌細(xì)胞生成外植腫瘤，然后從第3天開始每周2次在類似區(qū)域注入mab，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)所述mab無減小局部外植腫瘤大小的效應(yīng)(數(shù)據(jù)未顯示)。prl-3mab在實(shí)驗(yàn)性轉(zhuǎn)移測定中抑制prl-3介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移瘤形成的詳細(xì)細(xì)胞和分子機(jī)制現(xiàn)在是未知的，需要以后的研究來確定。prl-3嵌合mab在小鼠中能消除表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移瘤，這些結(jié)果是令人興奮的，并且提出一個(gè)在臨床中針對其他細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的概念。本發(fā)明人的研究可能開啟使用抗細(xì)胞內(nèi)癌基因產(chǎn)物的mab來治療多種癌癥和癌癥轉(zhuǎn)移的抗體治療的巨大的新機(jī)會(huì)。由于prl-1、prl-2和prl-3在多種癌中是過表達(dá)的，因此本發(fā)明人預(yù)計(jì)會(huì)廣泛需要可能作為對抗多種prl細(xì)胞內(nèi)磷酸酶相關(guān)腫瘤的新型醫(yī)藥先驅(qū)的prl嵌合mab。本發(fā)明人能夠選擇并治療在最先診斷出原發(fā)癌癥時(shí)將在短時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)-再現(xiàn)的一些類型的癌癥患者(例如：患胰腺癌的患者)。處理組和未處理組的患者之間的差異能夠揭示所述嵌合mab在短時(shí)間內(nèi)是否具有效應(yīng)。實(shí)施例26.抗-prl3抗體318可結(jié)合細(xì)胞內(nèi)prl3多肽及外化或分泌prl3多肽一個(gè)實(shí)驗(yàn)以如下進(jìn)行：1.在10cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)a2780、hct116、b16f0、b16f10細(xì)胞，每皿均至80％的匯合；2.pbs洗滌數(shù)次；3.將培養(yǎng)基(8ml)變成無fbs過夜；4.*第二天，收獲培養(yǎng)基并3k離心，棄沉淀，14k再次離心并保留上清液(*裂解來自所述皿的細(xì)胞，檢測每個(gè)細(xì)胞系的prl-3表達(dá)，圖12a)；5.使用gapdh作為細(xì)胞裂解物的蛋白上樣對照(圖12b)；6.在顯微鏡下檢測所述培養(yǎng)基，以確證沒有細(xì)胞在培養(yǎng)基中；7.濃縮培養(yǎng)基并對培養(yǎng)基中的分泌或外化prl-3跑sds凝膠(圖12c)。結(jié)果顯示于圖12中。圖12a.蛋白質(zhì)印跡證明，a2780、hct116和b16f0為3個(gè)表達(dá)內(nèi)源性prl-3蛋白的癌細(xì)胞系，而b16f10為不表達(dá)prl-3的癌細(xì)胞。圖12b.gapdh被用作蛋白上樣對照物。圖12c.對從4個(gè)癌細(xì)胞系收獲的4種培養(yǎng)基的蛋白質(zhì)印跡分析。prl-3磷酸酶被發(fā)現(xiàn)從b16f0細(xì)胞分泌至培養(yǎng)基中，而沒有發(fā)現(xiàn)prl-3磷酸酶從剩下的3種細(xì)胞中分泌出，這表明prl-3磷酸酶的分泌可能相關(guān)于細(xì)胞類型特異的現(xiàn)象。這些數(shù)據(jù)表明，prl-3在癌癥患者體內(nèi)可分泌于血流中。磷酸酶分泌在本發(fā)明人的文獻(xiàn)中從沒有被報(bào)道。實(shí)施例27.抗-prl1抗體和抗-prl3抗體的表位作圖對針對所述每種抗-prl抗體269和318的表位進(jìn)行如下的作圖。第一，本發(fā)明人排除在所有3種prl都相同的大多數(shù)氨基酸。第二，本發(fā)明人選擇在3種prl中不同的氨基酸序列。第三，針對這些特異性區(qū)域?qū)ｉT設(shè)計(jì)28條肽，這些肽之間因它們各自的抗體可結(jié)合于其自己的特異性抗原而可以彼此區(qū)分。本發(fā)明人專門設(shè)計(jì)28個(gè)prl-1、prl-2和prl-3特異性多肽斑點(diǎn)，并從genemedsynthesis,inc.(www.genemedsyn.com)訂購。所述28個(gè)肽斑點(diǎn)如以下表e1排列，該表e1還顯示將這些斑點(diǎn)對應(yīng)于圖13a和13b的每條多肽序列。參考編號(hào)abcdef1tyknmrtlnkfinkfieevceatydttlvekegihv2psnqivkdsnghnghrnnsyenmrtlnkftnkftee3vcdatydkapvekegihvppnqivrdtnghsyrhmr4tlstfistfiedvcevtydktplekdgitvkakfyn5ppgkvvyndpgskdphthhthktr表e1.就對抗-prl1抗體和抗-prl3抗體的表位結(jié)合情況測試的28條肽。該表顯示的圖譜代表每個(gè)斑點(diǎn)的排布。顯示了與圖13a和圖13b中斑點(diǎn)對應(yīng)的多肽序列。pvdf斑點(diǎn)印跡膜的步驟封閉膜1)以100％甲醇將膜預(yù)濕數(shù)秒鐘，直至它完全濕透時(shí)從不透明白色變成均勻半透明灰色。2)將所述膜在水中孵育45分鐘，以洗脫甲醇。3)在4℃下于3％bsa中搖晃封閉過夜。免疫染色1)在4℃下與prl-1抗體(圖13a中#269)或者與prl-3抗體(圖13b中#318)搖晃孵育過夜。2)以pbs吐溫-20洗滌4次，每次10分鐘。3)在室溫下與1∶1000的抗小鼠hrp抗體搖晃孵育2小時(shí)。4)以pbs吐溫-20洗滌4次，每次10分鐘。ecl顯像1)在室溫下與檢測劑孵育5分鐘。2)排空剩余的緩沖物，置于塑料/絲龍的套中。3)在暗室中顯像。結(jié)果結(jié)果顯示于圖13a和圖13b中。圖13a顯示了對prl-1(克隆#269)mab進(jìn)行表位作譜的蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果。兩個(gè)陽性斑點(diǎn)表明prl-1mab優(yōu)先結(jié)合于兩條多肽(1a，tyknmr；1b，tlnkfi)。圖13b顯示了對prl-3(克隆#318)mab進(jìn)行表位作譜的蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果。兩個(gè)陽性斑點(diǎn)表明prl-3mab優(yōu)先結(jié)合于兩條多肽(4f，kakfyn；5d，hthktr)。這些結(jié)果表明prl-1mab(克隆#269)和prl-3mab(克隆#318)可結(jié)合于由非線性序列形成的表位。參考文獻(xiàn)1.diamondrh，cressmande，laztm，etal.prl-1，auniquenuclearproteintyrosinephosphatase，affectscellgrowth.molcellbiol.1994；14：3752-62.2.wangj，kirbyce，herbstr.thetyrosinephosphataseprl-1localizestotheendoplasmicreticulumandthemitoticspindleandisrequiredfornormalmitosis.jbiolchem.2002；277：46659-68.3.rouleauc，roya，martints.etal.proteintyrosinephosphataseprl-3inmalignantcellsandendothelialcells：expressionandfunction.molcancerther.2006；5：219-29.4.wangq，holmsdir，powellsm，luql，waxmanj.analysisofstromal-epithelialinteractionsinprostatecanceridentifiesptpcaax2asapotentialoncogene.cancerletters2001；175：63-9.5.guok，lij，wanghh，etal.2006.prl-3initiatestumourangiogenesisbyrecruitingendothelialcellsinvitroandinvivo.cancerres.2006；66：9625-35.6.sahas，bardellia，buckhaultsp，etal.aphosphataseassociatedwithmetastasisofcolorectalcancer.science2001；294：1343-6.7.bardellia，sahas，sagerja，etal.prl-3expressioninmetastaticcancer.clincancerres2003；9：5607-15.8.zengq，dongjm，guok，etal.prl-3andprl-1promotecellmigration，invasion，andmetastasis.cancerres2003；63：2716-22.9.polatof，codegonia，fruscior，etal.prl-3phosphatasesisimplicatedinovariancancergrowth.clincancerres2005；11：6835-9.10.radkei，gottem，kerstingc，mattssonb，kiesell，wulfing，p.expressionandprognosticimpactoftheproteintyrosinephosphatasesprl-1，prl-2，andprl-3inbreastcancer.brjcancer2006；95：347-54.11.parkerbs，arganip，cookbp，etal.alterationsinvasculargeneexpressionininvasivebreastcarcinoma.cancerres2004；64：7857-66.12.miskadua，sembas，katoh，yokozakih.expressionofprl-3phosphataseinhumangastriccarcinomas：closecorrelationwithinvasionandmetastasis.pathobiology2004；71：176-84.13.wanghh，quahsy，dongjm，mansere，tangjp，zengq.prl-3down-regulatesptenexpressionandsignalsthroughpi3ktopromoteepithelial-mesenchymaltransition.cancerres2007；67：2922-6.14.imaik，takaokaa.comparingantibodyandsmall-moleculetherapiesforcancer.natrevcancer2006；6：714-27.15.bakerm.uppingtheanteonantibodies.naturetech.2005；23：1065-72.16.six，zengq，ngch，hongw，pallencj.interactionoffarnesylatedprl-2,aprotein-tyrosinephosphatase，withthebeta-subunitofgeranylgeranyltransferaseii.jbiolchem.2001；276：32875-82.17.wangj，kirbyce，herbstr.thetyrosinephosphataseprl-1localizestotheendoplasmicreticulumandthemitoticspindleandisrequiredfornormalmitosis.jbiolchem.2002；277：46659-68.18.zengq，six，horstmannh，xuy，hongw，pallencj.prenylation-dependentassociationofprotein-tyrosinephosphatasesprl-1，-2，-3withtheplasmamembraneandtheearlyendosome.jbiolchem.2000；275：21444-52.19.lij，guok，kohvwc.etal.generationofprl-3andprl-1specificmonoclonalantibodiesaspotentialdiagnosticmarkersforcancermetastases.clincancerres2005；11：2195-20420.brittaw，johanneslp，laurajv.breastcancermetastasis：markersandmodels.naturereviewcancer2005；5：591-602.21.coopers.reappraisalofserumstarvation，therestrictionpoint，g0，andg1phasearrestpoints.faseb2003；17333-40.al.darrellc.bessette&dexinqiu&catherinej.pallenprlptps：mediatorsandmarkersofcancerprogressioncancermetastasisrevdoi10.1007/s10555-008-9121-3a2.rouleauc，roya，martints.etal.proteintyrosinephosphataseprl-3inmalignantcellsandendothelialcells：expressionandfunction.molcancerther.2006；5：219-29.a3.sahas，bardellia，buckhaultsp，etal.aphosphataseassociatedwithmetastasisofcolorectalcancer.science2001；294：1343-6.a4.polatof，codegonia，fruscior，etal.prl-3phosphatasesisimplicatedinovariancancergrowth.clincancerres2005；11：6835-9.a5.radkei，gottem，kerstingc，mattssonb，kiesell，wulfing，p.expressionandprognosticimpactoftheproteintyrosinephosphatasesprl-1，prl-2，andprl-3inbreastcancer.brjcancer2006；95：347-54.6.peng，l.，ning，j.，meng，l.，&shou，c.(2004).theassociationoftheexpressionlevelofproteintyrosinephosphataseprl-3proteinwithlivermetastasisandprognosisofpatientswithcolorectalcancer.journalofcancerresearchandclinicaloncology，130，521-526.a7.miskad，u.a.，semba，s.，karo，h.，matsukawa，y.，kodama，y.，mizuuchi，e.，etal.(2007).highprl-3expressioninhumangastriccancerisamarkerofmetastasisandgradesofmalignancies：aninsituhybridizationstudy.virchowsarchiv，450，303-310.a8.sagerja，benvenutis，bardellia.prl-3，aphosphataseformetastasis？cancerbiology&therapy2004；3：952-3.a9.zengq，dongjm，guok，etal.prl-3andprl-1promotecellmigration，invasion，andmetastasis.cancerres2003；63：2716-22.a10.wuxp，zengh，zhangxm，etal.phosphataseofregeneratingliver-3promotesmotilityandmetastasisofmousemelanomacells.amjofpathol2004；164：2039-54.a11.wanghh，quahsy，dongjm，mansere，tangjp，zengq.prl-3down-regulatesptenexpressionandsignalsthroughpi3ktopromoteepithelial-mesenchymaltransition.cancerres2007；67：2922-6.al2.guok，lij，wanghh，etal.prl-3initiatestumourangioge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