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      一種升壓素溶液的提取工藝的制作方法

      文檔序號(hào):11107742閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種升壓素溶液的提取工藝,其具體步驟如下:

      ⑴原料提取:垂體后葉粉中加入醋酸,攪拌提取,過(guò)濾;濾餅中再次加入醋酸,攪拌提取,過(guò)濾;合并兩次濾液;

      ⑵除蛋白:溶液攪拌加熱至一定溫度,保溫一段時(shí)間,冷卻至室溫;

      ⑶樹脂交換:先用平衡液(1×10-4mol/L的NaOH溶液中加入酸調(diào)節(jié)pH值)平衡離子交換樹脂柱,然后進(jìn)行洗脫,收集洗脫液,將洗脫液在280nm下進(jìn)行紫外檢測(cè),吸光值在原有吸光值上升時(shí)收集升壓素,在收集升壓素的同時(shí),不斷用酸調(diào)節(jié)收集液的PH值,當(dāng)吸光值為降至0.4時(shí),停止收集;

      ⑷超濾:將收集的上述升壓素用超濾器超濾,收集濾液;

      ⑸制備型高效液相粗分離純化:將步驟⑷中的濾液用0.45μm的濾膜過(guò)濾,然后使用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行粗分離純化,具體步驟包括:5a.平衡制備柱;5b.將步驟⑷超濾后的升壓素溶液上樣;5c.平衡制備柱;5d.用流動(dòng)相洗脫樣品,收集分離純化的粗分液;

      ⑹制備型高效液相精制:將步驟⑸中的升壓素溶液稀釋,使用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行精制純化,精制的步驟具體包括:6a.平衡制備柱;6b.將稀釋后的升壓素溶液上樣;6c.平衡制備柱;6d.用流動(dòng)相進(jìn)行洗脫,收集成分峰;

      ⑺濃縮:將精制后的升壓素溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,濃縮至原體積的2/3以下,加入乙醇溶液,搖勻后繼續(xù)濃縮至原體積的2/3以下,再加入乙醇溶液,搖勻后繼續(xù)濃縮至原體積的2/3以下,收集濃縮后的升壓素溶液,用適量注射用水分三次洗滌濃縮圓底燒瓶,并入濃縮液中混合均勻,得升壓素溶液。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑴中醋酸溶液的濃度為0.2%~0.3%;第一次加入的醋酸溶液的量為20~30mL/g垂體后葉干粉量;第二次加入的醋酸溶液的量為10~20mL/g垂體后葉干粉量;提取的溫度為45~55℃。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑵中的加熱溫度為95~100℃;保溫時(shí)間為10~20min。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑶平衡液的配制中調(diào)節(jié)PH所用的酸為醋酸,調(diào)節(jié)PH值為3.5~4.5;用0.1~0.3M的氯化鈉溶液來(lái)洗脫;在收集升壓素的過(guò)程中調(diào)節(jié)pH值所用的酸為醋酸,調(diào)節(jié)PH值為3.5~4.0。

      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑷中的超濾膜截留分子量為10000道爾頓。

      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑸中的制備色譜柱為C18柱;流動(dòng)相為:0.2M磷酸三乙胺緩沖液-乙腈(80~90:20~10);檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;步驟5a和5c中平衡制備柱用的平衡液均為0.2M磷酸三乙胺緩沖液。

      7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑹中的制備色譜柱為C18柱;流動(dòng)相為:0.5%醋酸溶液-乙腈(比例為75~85:25~15);檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;步驟6a和6c中平衡制備柱用的平衡液均為2%醋酸溶液。

      8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種升壓素溶液的提取工藝,其特征在于步驟⑺減壓濃縮過(guò)程中水浴溫度38~40℃,真空壓力為0.07~0.10MPa,加入的乙醇溶液的濃度為95%。

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