本發(fā)明屬于化合物藥物領(lǐng)域，具體涉及N-(4-取代苯基)-2-取代乙酰胺類化合物及其作為SIRT2蛋白抑制劑的用途。
背景技術(shù)：
：沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)相關(guān)蛋白(Sirtuin，SIRT)為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依賴的第III類組蛋白去乙酰化酶(HDAC)，可通過對(duì)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基進(jìn)行去乙?；揎椬饔脕碚{(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而參與機(jī)體代謝、細(xì)胞分化、凋亡以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等病理生理過程?；诎被嵝蛄械南嗨菩?，人類SIRT蛋白共分為四類，七種亞型，即SIRT1-SIRT7，其中，SIRT1-3屬于第一類，具有較強(qiáng)的脫乙?；饔?，也具有一定脫長(zhǎng)鏈脂肪酸酰化的作用；SIRT4，SIRT5分別屬于第二和第三類，SIRT6、SIRT7同屬于第四類，它們幾乎無脫乙酰化作用或只有極弱的脫乙?；饔?。盡管如此，因SIRT1-7分別位于不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，催化不完全相同的底物去?；活惖腟IRT蛋白也具有不同的催化作用和活性。據(jù)報(bào)道SIRT2在各種組織中表達(dá)，尤其是成人的大腦中表達(dá)量較高，可發(fā)揮重要的表觀遺傳調(diào)控作用。SIRT2主要位于細(xì)胞質(zhì)，其可通過催化轉(zhuǎn)錄因子和α-tubulin等的去乙?；饔枚{(diào)控細(xì)胞的分裂。另外，SIRT2可在細(xì)胞周期G2/M期不斷穿梭于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核之中，因此其除了催化非組蛋白α-tubulin,Foxo3a,eIF5a和p53等的去乙?；饔猛膺€可催化組蛋白H4的去乙酰化作用而調(diào)控基因的表達(dá)。近年來研究發(fā)現(xiàn)SIRT2活性失調(diào)與癌癥、炎癥和神經(jīng)退行性病變的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。Outeiro等人在帕金森細(xì)胞模型中發(fā)現(xiàn)抑制SIRT2可逆轉(zhuǎn)α-突觸核蛋白的毒性并改善包含物的形態(tài)學(xué)；Green團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)在阿爾茲海默癥的轉(zhuǎn)基因小鼠模型中SIRT2抑制劑煙酰胺可增加α-tubulin乙?；綇亩纳菩∈蟮恼J(rèn)知；另Lin及其同事通過研究證實(shí)在小鼠乳腺癌模型中選擇性SIRT2抑制劑TM可有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)，且表現(xiàn)出較低的毒性。綜上，SIRT2被認(rèn)為是腫瘤、神經(jīng)退行性等疾病的潛在治療靶點(diǎn)，新型高活性和選擇性SIRT2抑制劑的研究是如今藥物研究的熱點(diǎn)之一。然而，現(xiàn)有SIRT2抑制劑的數(shù)量仍然較少，難以滿足廣大患者的需求，因此，需要發(fā)明一類新的沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)蛋白的抑制劑，為廣大患者提供更多的用藥選擇。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一類新的具有藥用價(jià)值的N-(4-取代苯基)-2-取代乙酰胺類化合物：式Ⅰ所示的化合物。本發(fā)明提供的式Ⅰ所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物：其中，X選自Y選自R1、R2、R3分別獨(dú)立地選自H、羥基、鹵素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基或苯基；R4選自芳基、雜芳基、取代的芳基或取代的雜芳基；所述取代芳基和取代雜芳基的取代基，分別獨(dú)立地選自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基、鹵素、羥基、巰基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨?；?。進(jìn)一步的，R1、R3分別獨(dú)立地選自H、羥基、鹵素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基或C1～C4鹵代烷基；R2為H。進(jìn)一步的，R4選自苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、取代的苯基、取代的吡啶基、取代的呋喃基或取代的噻吩基；所述取代苯基、取代吡啶基、取代呋喃基和取代噻吩基的取代基，分別獨(dú)立地選自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基。進(jìn)一步的，所述的化合物為：本發(fā)明還提供了一種制備上述化合物的方法，當(dāng)X選自時(shí)，它包括以下步驟：①、化合物A與化合物B反應(yīng)，得到化合物C；其中，化合物A與化合物B的摩爾比為1：0.5～2；Y選自R4選自芳基、雜芳基、取代的芳基、取代的雜芳基；所述取代芳基和取代雜芳基的取代基，分別獨(dú)立地選自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基、鹵素、羥基、巰基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨酰基；Z選自鹵素或羥基；②、化合物C與化合物D反應(yīng)，得到化合物Ⅰa；其中，化合物C與化合物D的摩爾比為1：0.5～2；R1、R2、R3分別獨(dú)立地選自H、羥基、鹵素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基或苯基。本發(fā)明還提供了另外一種制備上述化合物的方法，當(dāng)X選自時(shí)，它包括以下步驟：a、按照上述方法，制備得到X為的化合物Ⅰa，即：b、X為的化合物Ⅰa與間氯過氧苯甲酸反應(yīng)，得到化合物Ⅰb；其中，X為的化合物Ⅰa與間氯過氧苯甲酸的摩爾比為1：0.5～5；Y選自R1、R2、R3分別獨(dú)立地選自H、羥基、鹵素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基或苯基；R4選自芳基、雜芳基、取代的芳基或取代的雜芳基；所述取代芳基和取代雜芳基的取代基，分別獨(dú)立地選自C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4鹵代烷基、鹵素、羥基、巰基、醚基、酯基、氨基、硝基、酰胺基或氨酰基。本發(fā)明還提供了上述式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物在制備沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)蛋白的抑制劑中的用途。本發(fā)明還提供了上述式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物在制備治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物中的用途。進(jìn)一步的，所述的腫瘤為肝癌、肝母細(xì)胞瘤、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病。本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物組合物，它是以上述式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、晶型、溶劑合物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料制備得到的制劑。本發(fā)明式Ⅰ所示的新化合物，不僅對(duì)SIRT2具有良好的抑制活性，而且對(duì)腫瘤具有很好的抑制作用，具有很好的藥用價(jià)值，為臨床用藥提供了一種新的潛在選擇；同時(shí)，本發(fā)明新化合物的制備方法簡(jiǎn)便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，可適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明中提供的化合物和衍生物可以根據(jù)IUPAC(國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì))或CAS(化學(xué)文摘服務(wù)社，Columbus，OH)命名系統(tǒng)命名。關(guān)于本發(fā)明的使用術(shù)語的定義：除非另有說明，本文中基團(tuán)或者術(shù)語提供的初始定義適用于整篇說明書的該基團(tuán)或者術(shù)語；對(duì)于本文沒有具體定義的術(shù)語，應(yīng)該根據(jù)公開內(nèi)容和上下文，給出本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠給予它們的含義?！叭〈笔侵阜肿又械臍湓颖黄渌煌脑踊蚍肿铀鎿Q。碳?xì)浠鶊F(tuán)中碳原子含量的最小值和最大值通過前綴表示，例如，前綴Ca～Cb烷基表明任何包含“a”至“b”個(gè)碳原子的烷基。因此，例如，C1～C4烷基是指包含1～4個(gè)碳原子的烷基，換句話說，C1～C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指某載體、運(yùn)載物、稀釋劑、輔料，和/或所形成的鹽通常在化學(xué)上或物理上與構(gòu)成某藥物劑型的其它成分相兼容，并在生理上與受體相兼容。術(shù)語“鹽”和“可藥用的鹽”是指上述化合物或其立體異構(gòu)體，與無機(jī)和/或有機(jī)酸和堿形成的酸式和/或堿式鹽，也包括兩性離子鹽(內(nèi)鹽)，還包括季銨鹽，例如烷基銨鹽。這些鹽可以是在化合物的最后分離和純化中直接得到。也可以是通過將上述化合物，或其立體異構(gòu)體，與一定數(shù)量的酸或堿適當(dāng)(例如等當(dāng)量)進(jìn)行混合而得到。這些鹽可能在溶液中形成沉淀而以過濾方法收集，或在溶劑蒸發(fā)后回收而得到，或在水介質(zhì)中反應(yīng)后冷凍干燥制得。本發(fā)明中所述鹽可以是化合物的鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽或三氟乙酸鹽。本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤(rùn)濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤(rùn)滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需要的推進(jìn)劑一起混合。本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質(zhì)。本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔助性成分，它具有一定生理活性，但該成分的加入不會(huì)改變上述藥物組合物在疾病治療過程中的主導(dǎo)地位，而僅僅發(fā)揮輔助功效，這些輔助功效僅僅是對(duì)該成分已知活性的利用，是醫(yī)藥領(lǐng)域慣用的輔助治療方式。若將上述輔助性成分與本發(fā)明藥物組合物配合使用，仍然屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。附圖說明圖1為本發(fā)明化合物1的1HNMR圖。圖2為本發(fā)明化合物1的13CNMR圖。圖3為本發(fā)明化合物15的1HNMR圖。圖4為本發(fā)明化合物15的13CNMR圖。圖5為本發(fā)明化合物17的1HNMR圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明具體實(shí)施方式中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。實(shí)施例1、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯氨基)苯基)乙酰胺(化合物1)的合成將化合物1a(1mmol,184mg)溶于二氯甲烷(DCM,3ml)中,加入三乙胺(3mmol,416μl)，后將反應(yīng)置于0℃攪拌溶解，在0℃下將溴乙酰溴(1.1mmol,96μl)的DCM(1ml)溶液緩慢加入到反應(yīng)后，將反應(yīng)移至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4-5h,經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，減壓除去多余的溶劑，柱層析得到中間體1b。然后，將4,6-二甲基-2-巰基嘧啶(1.2mmol,168.2mg)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺，3ml)中，室溫條件下加入叔丁醇鉀(2mmol,224.4mg)，接著在室溫下攪拌反應(yīng)30min后，將化合物1b(1mmol,305mg)溶于DMF(1ml)中緩慢加入到反應(yīng)中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4-5h后，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，往反應(yīng)中加入冰水(40ml)，并用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，有機(jī)層經(jīng)無水MgSO4干燥，濃縮后經(jīng)柱層析得到化合物1(142mg,產(chǎn)率41％)?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.08(s,1H),8.05(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,2H),7.20(t,J＝8.0Hz,2H),7.05-6.98(m,5H),6.77(t,J＝7.2Hz,1H),4.02(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.3,144.5,139.4,132.3,129.6,121.0,119.5,118.3,116.5,116.3,35.9,23.8ppm。實(shí)施例2、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物2)的合成將化合2a(1mmol,185mg)和溴乙酸(1.2mmol,166.8mg)溶于DCM(16ml)中，并置于0℃攪拌溶解后，在0℃下依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI,1.2mmol,230.4mg),1-羥基苯并三唑(HOBT,1.2mmol,162mg),N,N-二異丙基乙胺(DIEA,2mmol,331μl)，加畢，將反應(yīng)移至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后減壓除去多余的溶劑，柱層析得中間體2b。以中間體2b為原料，按照實(shí)施例1化合物1類似的合成方法，得到目標(biāo)化合物2，產(chǎn)率52％。化合物2的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.27(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.37(t,J＝8.0Hz,2H),7.11(t,J＝7.6Hz,1H),7.01-6.96(m,5H),4.04(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,157.8,152.3,135.4,130.4,123.5,121.3,119.9,118.4,116.5,35.8,23.8ppm。實(shí)施例3、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)亞磺?；?-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物3)的合成將化合物2(70.0mg,0.185mmol)用DCM(4mL)溶解，0℃攪拌下加入間氯過氧苯甲酸(33.5mg,0.194mmol)，室溫反應(yīng)45min，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，減壓除去多余的溶劑，柱層析得白色固體目標(biāo)化合物3(44mg，產(chǎn)率62％)。化合物3的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.32(s,1H),7.47(d,J＝8.8Hz,2H),7.33(t,J＝7.6Hz,2H),7.10(t,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.93(m,5H),4.16(d,J＝14.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.4Hz,1H),2.55(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ171.5,168.9,162.9,157.7,152.7,134.9,130.4,123.5,121.9,121.4,119.9,118.4,60.5,23.9ppm。實(shí)施例4、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)磺?；?-N-(4-苯氧基苯基)乙酰胺(化合物4)的合成將化合物2(70.0mg,0.185mmol)用DCM(4mL)溶解，0℃攪拌下加入間氯過氧苯甲酸(95.6mg,0.554mmol)，室溫反應(yīng)3h，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后減壓除去多余的溶劑，柱層析得白色固體目標(biāo)化合物4(44mg，產(chǎn)率71％)?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.33(s,1H),7.55(d,J＝8.8Hz,2H),7.46(t,J＝7.6Hz,2H),7.13(t,J＝8.8Hz,2H),7.00-6.95(m,5H),4.16(d,J＝14.4Hz,1H),3.93(d,J＝14.4Hz,1H),2.55(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.3,164.5,159.8,157.6,152.9,134.6,130.5,123.7,123.6,121.4,119.9,118.5,57.9,23.8ppm。實(shí)施例5、N-(4-芐基苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物5)的合成將LiAlH4(10mmol,379.5mg)加入到反應(yīng)瓶中后，置于0℃下約15min后將AlCl3(10mmol,1333mg)的乙醚(15ml)溶液滴加到反應(yīng)中，混合液在0℃攪拌5min。接著將對(duì)氨基二苯甲酮(5a,1mmol,197.2mg)的乙醚(15ml)溶液滴加到反應(yīng)中，并將反應(yīng)移至室溫反應(yīng)3h,經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，反應(yīng)液先用6MHCl稀釋，后用飽和NaHCO3中和，水層經(jīng)乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有機(jī)層，無水Na2SO4干燥，濃縮，柱層析得中間體5b。以中間體5b為原料，按照實(shí)施例2化合物2類似的合成方法，得到目標(biāo)化合物5，三步總產(chǎn)率36％?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.17(s,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,2H),7.22-7.15(m,5H),6.97(s,1H),4.02(s,2H),3.89(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,141.9,137.5,136.7,129.4,129.1,128.8,125.4,119.8,116.5,40.0,35.9,23.8ppm。實(shí)施例6、N-(4-苯甲酰基苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物6)的合成以化合物5a為原料，按照實(shí)施例2化合物2類似的合成方法，得到目標(biāo)化合物6，兩步總產(chǎn)率45％?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.65(s,1H),7.79-7.74(m,4H),7.72(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(t,J＝4.4Hz,1H),7.56(t,J＝8.0Hz,2H),6.98(s,1H),4.10(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ195.00,169.7,167.7,167.5,143.6,138.0,132.7,131.9,131.7,129.8,128.9,118.8,116.6,36.1,23.8ppm。實(shí)施例7、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(羥基(苯基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物7)的合成將LiAlH4(5mmol,189.8mg)加入到反應(yīng)瓶中，置于0℃下攪拌15min后將AlCl3(5mmol,666.7mg)的乙醚(8ml)溶液滴加到反應(yīng)后，將混合液在0℃攪拌5min。接著將對(duì)氨基二苯甲酮(5a,1mmol,197.2mg)的乙醚(8ml)溶液滴加到反應(yīng)中，然后將反應(yīng)移至室溫反應(yīng)3h,經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，反應(yīng)液先用6MHCl稀釋，再用飽和NaHCO3中和，水層經(jīng)乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有機(jī)層，無水Na2SO4干燥，濃縮，柱層析得到化合物中間體7a。以中間體7a為原料，按照實(shí)施例2化合物2類似的合成方法，得到化合物7，三步總產(chǎn)率32％?；衔?的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.20(s,1H),7.57(s,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.30(t,J＝8.0Hz,2H),7.25-7.19(m,2H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),5.89(d,J＝4.0Hz,1H),5.65(d,J＝4.0Hz,1H),4.01(s,2H),2.32(s,6H)ppm。實(shí)施例8、N-(4-(芐胺基)苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物8)的合成利用8a按照實(shí)施例2中間體2b的合成方法合成中間體8b，接著利用8b按照實(shí)施例2目標(biāo)化合物2的合成方法合成中間體8c。然后將苯甲醛(0.374mmol,39.6mg)和化合物8c(0.34mmol,98.1mg)溶于DCM(6ml)中，再將2，6-二甲基-1，4-二氫吡啶-3，5-二羧酸乙酯(漢斯酯，0.477mmol,120.1mg)加入，最后滴入三氟乙酸(0.17mmol,12.7μl)并置于45℃回流反應(yīng)過夜。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，減壓除去多余的溶劑，柱層析得目標(biāo)化合物8，三步反應(yīng)總產(chǎn)率為27％?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.85(s,1H),7.37-7.31(m,4H),7.30-7.25(m,4H),6.98(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,2H),4.26(s,2H),3.97(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,150.2,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,116.5,112.7,46.1,35.7,23.8ppm。實(shí)施例9、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((3-甲氧基芐基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物9)的合成利用中間體8c與3-甲氧基苯甲醛，按照實(shí)施例8化合物8類似的合成方法獲得目標(biāo)化合物9，產(chǎn)率75％?；衔?的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.85(s,1H),7.38-7.32(m,3H),7.28-7.24(m,4H),6.98(s,1H),6.57(d,J＝8.4Hz,2H),4.26(s,2H),3.97(s,2H),3.83(s,3H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ170.0,167.6,166.2,159.9,150.3,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,117.0,116.5,112.7,54.2,46.1,35.7,23.8ppm。實(shí)施例10、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((吡啶-4-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物10)的合成利用中間體8c與4-吡啶甲醛，按照實(shí)施例8化合物8類似的合成方法獲得目標(biāo)化合物10，產(chǎn)率78％?；衔?0的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.83(s,1H),8.48(d,J＝5.6Hz,2H),7.33(d,J＝6.0Hz,2H),7.24(d,J＝8.8Hz,2H),6.97(s,1H),6.50(d,J＝8.8Hz,2H),6.29(t,J＝6.0Hz,1H),4.29(d,J＝6.4Hz,2H),3.96(s,2H),2.32(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,150.2,149.9,145.1,129.0,122.8,121.4,116.5,112.7,46.1,35.7,23.8ppm。實(shí)施例11、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((噻吩-2-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物11)的合成利用重要中間體8c與2-噻吩甲醛，按照實(shí)施例8化合物8類似的合成方法獲得目標(biāo)化合物11，產(chǎn)率71％?；衔?1的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.80(s,1H),7.32(d,J＝3.2Hz,1H),7.24(d,J＝5.6Hz,2H),7.01(s,1H),6.93(t,J＝3.2Hz,2H),6.57(d,J＝5.6Hz,2H),6.07(brs,1H,),4.39(s,2H),3.95(s,2H),2.32(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ170.8,169.9,167.4,165.9,145.1,144.8,129.2,127.2,125.2,124.8,121.3,116.5,113.0,55.4,35.8,23.8ppm。實(shí)施例12、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((呋喃-2-基-甲基)氨基)苯基)乙酰胺(化合物12)的合成利用中間體8c與糠醛，按照實(shí)施例8化合物8類似的合成方法獲得目標(biāo)化合物12，產(chǎn)率70％?；衔?2的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ9.89(s,1H),7.58(s,1H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),6.97(s,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H),6.38(s,1H),6.29(s,1H),4.24(s,2H),3.99(s,2H),2.35(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.9,167.4,166.0,153.4,144.2,142.5,129.8,121.2,116.5,113.5,110.8,107.7,41.0,35.8,24.1ppm。實(shí)施例13、N-(4-(芐氧基)苯基)-2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)乙酰胺(化合物13)的合成將對(duì)氟硝基苯(13a,0.5mmol,70.5mg)、苯甲醇(0.75mmol,72mg)溶于二氧六環(huán)(5ml)中，加入KOH(1.5mmol,84mg)，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后減壓除去溶劑二氧六環(huán)，加適量水和乙酸乙酯，經(jīng)萃取、干燥、濃縮后柱層析得中間體13b。接著將13b(0.45mmol,103.5mg)溶于乙醇(3ml)和水(1.5ml)的混合溶劑中，加入NH4Cl(0.225mmol,12mg)和Fe(2.25mmol,126mg)，于80℃反應(yīng)30min，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后過濾除去不溶物質(zhì)，加入NaHCO3調(diào)節(jié)PH至堿性，再減壓除去乙醇，水層經(jīng)乙酸乙酯萃取，濃縮，柱層析得到中間體13c。利用13c按照實(shí)施例2化合物2類似的合成方法，合成目標(biāo)化合物13，四步總產(chǎn)率為41％。化合物13的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.10(s,1H),7.49(d,J＝6.8Hz,2H),7.46-7.44(m,2H),7.41-7.38(m,2H),7.35-7.31(m,1H),7.00-6.95(m,3H),5.07(s,2H),4.01(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.5,154.8,137.6,132.9,128.9,128.2,128.1,121.1,116.5,115.3,69.8,35.8,23.8ppm。實(shí)施例14、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯氧甲基)苯基)乙酰胺(化合物14)的合成將苯酚(14a，1mmol,94mg)加到反應(yīng)瓶中，用2mlDMF溶解，接著加入碳酸鉀(5mmol，690mg)后將對(duì)硝基芐溴(1mmol,216mg)溶解在2mlDMF中并滴加到反應(yīng)瓶中。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，經(jīng)過萃取減壓蒸餾得到化合物14b。然后將化合物14b(1mmol,229mg)溶解在乙醇和水(10ml,乙醇：水＝2：1)的混合溶劑后，加入鐵粉(5mmol,280mg)和氯化銨(1mmol,53.5mg)于80℃攪拌回流反應(yīng)0.5小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至堿性，抽濾后減壓蒸餾除去乙醇，再加少量水，用乙酸乙酯萃取后經(jīng)過柱層析得到化合物14c。利用14c按照實(shí)施例2目標(biāo)化合物2的合成方法，合成化合物14，四步總產(chǎn)率為24％?；衔?4的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.30(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.2Hz,2H),7.01-6.98(m,2H),6.94(t,J＝7.2Hz,1H),5.04(s,2H),4.05(s,2H),2.34(s,6H)ppm.實(shí)施例15、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-((苯氨基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物15)的合成將對(duì)硝基苯甲醛(15a,2mmol,302.2mg)和苯胺(2.2mmol,201μl)溶于DCM(16ml)中，接著將2，6-二甲基-1，4-二氫吡啶-3，5-二羧酸乙酯(漢斯酯，2.8mmol,708.4mg)加入，最后滴入三氟乙酸(1mmol,74.6μl)并置于45℃回流反應(yīng)過夜。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后減壓除去多余的溶劑，柱層析得到還原胺化產(chǎn)物15b。將還原胺化產(chǎn)物15b(1.89mmol,427mg)溶于乙醇(10ml)和水(5ml)的混合溶劑后加入鐵粉(9.44mmol,528.4mg)和NH4Cl(0.945mmol,50.6mg)至反應(yīng)中并置于80℃回流反應(yīng)30min，經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后過濾除去不溶物質(zhì)，加入NaHCO3調(diào)節(jié)PH至堿性，減壓除去乙醇，水層經(jīng)乙酸乙酯萃取，濃縮，柱層析后得化合物15c.利用15c按照實(shí)施例2目標(biāo)化合物2的合成方法，合成化合物15，四步總產(chǎn)率37％?；衔?5的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.19(s,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(t,J＝8.4Hz,2H),6.97(s,1H),6.56(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(t,J＝7.2Hz,1H),6.14(t,J＝6.0Hz,1H),4.20(d,J＝6.0Hz,2H),4.03(s,2H),2.34(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.8,149.1,138.0,135.6,129.2,128.0,119.6,116.5,116.2,112.7,46.6,35.9,23.8ppm。實(shí)施例16、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(((3-(三氟甲基)苯基)氨基)甲基)苯基)乙酰胺(化合物16)的合成利用3-三氟甲基苯胺替換苯胺，按照實(shí)施例15化合物15的合成方法，合成目標(biāo)化合物16，四步總產(chǎn)率38％。化合物16的1HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.21(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(s,1H),6.84-6.79(m,3H),6.69(t,J＝6.0Hz,1H),4.26(d,J＝5.6Hz,2H),4.03(s,2H),2.33(s,6H)ppm；13CNMR(100MHz,DMSO):δ169.8,167.4,166.9,149.6,138.2,134.7,130.2,128.1,125.4,123.6,119.7,116.5,116.0,112.0,108.6,46.3,35.9,23.8ppm。實(shí)施例17、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯硫基)苯基)乙酰胺(化合物17)的合成向反應(yīng)瓶中加入對(duì)碘苯胺(17a,2mmol,438mg)、CuSO4.5H2O(0.1mmol,25mg)、KOH(10mmol,561mg)和DMSO(二甲基亞砜，4ml)/H2O(0.4ml),然后加入1,2-乙二硫醇(2mmol,180μl)并于100-110℃反應(yīng)8h，接著將反應(yīng)液冷卻至室溫后將碘苯(2.6mmol,530.4mg)溶于DMF(2ml)中后加入到反應(yīng)中，于120℃繼續(xù)反應(yīng)18h。經(jīng)TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后反應(yīng)冷卻至室溫，加入水和乙酸乙酯，水層經(jīng)乙酸乙酯(10ml×3)萃取，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，濃縮，柱層析得中間體17b。利用17b按照實(shí)施例2化合物2的合成方法，合成目標(biāo)化合物17，三步總產(chǎn)率48％?；衔?7的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.40(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(t,J＝7.6Hz,2H),7.26-7.20(m,3H),6.98(s,1H),4.06(s,2H),2.33(s,6H)ppm。實(shí)施例18、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯亞磺?；?苯基)乙酰胺(化合物18)的合成利用化合物17b按照實(shí)施例3目標(biāo)化合物3的合成方法，經(jīng)m-CPBA氧化生成化合物18a。然后，利用化合物18a按照實(shí)施例2化合物2的合成方法，合成目標(biāo)化合物18，三步總產(chǎn)率為41％。化合物18的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.46(s,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(t,J＝7.6Hz,2H),7.27-7.22(m,3H),6.97(s,1H),4.09(s,2H),2.34(s,6H)ppm。實(shí)施例19、2-((4,6-二甲基嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯磺?；?苯基)乙酰胺(化合物19)的合成將化合物17b按照實(shí)施例4目標(biāo)化合物4的合成方法，經(jīng)m-CPBA氧化生成化合物19a。利用化合物19a按照實(shí)施例2化合物2的合成方法，合成目標(biāo)化合物19，三步總產(chǎn)率為41％?；衔?9的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ10.46(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.57(t,J＝7.6Hz,2H),7.27-7.20(m,3H),6.97(s,1H),4.08(s,2H),2.33(s,6H)ppm。實(shí)施例20、2-((4-甲基-6-羥基-1,6-二氫嘧啶-2-基)硫代)-N-(4-(苯胺基)苯基)乙酰胺(化合物20)的合成利用中間體1b和甲基硫脲嘧啶作為原料，按照實(shí)施例1化合物1的合成方法，合成目標(biāo)化化合物20，產(chǎn)率65％?；衔?0的1HNMR數(shù)據(jù)如下：1HNMR(400MHz,DMSO):δ12.56(brs,1H),10.16(s,1H),8.20(s,1H),7.46(s,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,2H),7.15(t,J＝8.0Hz,1H),7.09(d,J＝7.6Hz,2H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(t,J＝7.6Hz,1H),6.75(dd,J＝1.6Hz,J＝7.6Hz,2H),6.01(brs,1H),4.06(s,2H),2.15(s,3H)ppm,。實(shí)施例21、本發(fā)明化合物對(duì)體外SIRT2蛋白的抑制活性測(cè)試方法如下：(1)實(shí)驗(yàn)材料：購(gòu)買于美國(guó)BPSBioscience公司的SIRT2酶(產(chǎn)品編號(hào)：50013)；美國(guó)PerkinElmer公司的384孔板(產(chǎn)品編號(hào)：6007279)；Sigma公司的陽性對(duì)照產(chǎn)品Suramin(產(chǎn)品編號(hào)：S2671)。(2)實(shí)驗(yàn)方法：首先，制備三羥甲氨基甲烷緩沖液；然后，將所有受試化合物及陽性對(duì)照化合物Suramin溶解于100％的DMSO中配制成不同濃度的測(cè)試溶液并轉(zhuǎn)移至測(cè)試孔板中；隨后將SIRT2酶溶于緩沖溶液中配制酶溶液；同時(shí)利用煙酰胺腺嘌呤核苷酸(NAD+)和乙?；牡孜镫娜芙庥诰彌_溶液中配制成底物緩沖溶液；接著在測(cè)試孔板中分別加入10μL酶溶液或空白對(duì)照緩沖溶液后，將測(cè)試孔板置于室溫孵化15分鐘；再向每孔中加入10μL底物緩沖液反應(yīng)4小時(shí)；反應(yīng)完畢后向每孔中加入胰蛋白酶溶液反應(yīng)1.5小時(shí)；最后使用SynergyMX酶標(biāo)儀在激發(fā)光為360nM和460nM發(fā)射光波長(zhǎng)處測(cè)試以上反應(yīng)液的發(fā)光強(qiáng)度，從而確定化合物對(duì)SIRT2的抑制活性。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：通過以上實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)試了本發(fā)明化合物針對(duì)SIRT2的抑制活性；具體的化合物在5μM、50μM濃度下的抑制活性及部分化合物對(duì)SIRT2的半數(shù)抑制有效濃度(IC50)見表1，其中“-”表示未測(cè).。表1、本發(fā)明化合物對(duì)SIRT2的抑制活性(Inh％)上述結(jié)果表明，本發(fā)明化合物對(duì)SIRT2具有良好的抑制活性，可以用于制備沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)蛋白的抑制劑。實(shí)施例21、本發(fā)明化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株的增殖的抑制效果測(cè)試方法如下：(1)實(shí)驗(yàn)材料：主要試劑：RPMI-1640、胎牛血清、胰酶等購(gòu)自GibcoBRL公司(InvitrogenCorporation，USA)，IMDM培養(yǎng)基購(gòu)自ATCC(AmericanTypeCultureCollection)。四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)為Sigma公司(USA)產(chǎn)品。人肝癌細(xì)胞系(HUH7),人肝癌細(xì)胞系(SMMC7721)，肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(HepG2)，人乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7)，人肺癌細(xì)胞系(NCI-H460),人肺癌細(xì)胞系(A549)，人胰腺癌細(xì)胞系(MIAPACA)，人早幼粒白血病細(xì)胞系(HL60),人慢性髓系白血病細(xì)胞系(K562),人前列腺癌細(xì)胞(DU-145)等均購(gòu)于美國(guó)ATCC(Americantypeculturecollection)，由本實(shí)驗(yàn)室保存。(2)實(shí)驗(yàn)方法：用完全細(xì)胞培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1～2×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔200μl細(xì)胞懸液，培養(yǎng)過夜。次日，吸棄上清(懸浮細(xì)胞離心后吸取上清)，然后分別用梯度濃度的受試化合物處理細(xì)胞。同時(shí)設(shè)不含藥物的陰性對(duì)照組和等體積的溶劑對(duì)照組，DMSO濃度為0.1％，每個(gè)劑量組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，在37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)。72小時(shí)后，每孔加入濃度為5mg/mL的MTT試劑20μl，再培養(yǎng)2-4h后，棄上清，每孔再加入DMSO150μL，振蕩混勻15min，用酶標(biāo)儀(λ＝570nm)測(cè)定吸光度(A)值(A值與活細(xì)胞數(shù)成正比)，取其平均值。相對(duì)細(xì)胞增殖抑制率＝(陰性對(duì)照組A570-實(shí)驗(yàn)組A570)/陰性對(duì)照組A570×100％。。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)資料采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以下各化合物對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用均用IC50或抑制率表示。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用以上方法，測(cè)試了本發(fā)明化合物17對(duì)人肝癌細(xì)胞系(HUH7),人肝癌細(xì)胞系(SMMC7721)，肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(HepG2),人乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7)，人肺癌細(xì)胞系(NCI-H460),人肺癌細(xì)胞系(A549),人胰腺癌細(xì)胞系(MIAPACA)，人早幼粒白血病細(xì)胞系(HL60),人慢性髓系白血病細(xì)胞系(K562),人前列腺癌細(xì)胞(DU-145)等進(jìn)行了增殖抑制活性測(cè)試，具體的為化合物17在50μM、100μM濃度下的抑制活性。表2、本發(fā)明化合物17對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制活性化合物17Inh％@50uMInh％@100uMHUH78088SMMC77215067HepG23036MCF-74866NCI-H4604150A5493246MIAPACA3136HL603290K5621828DU-1452846上述結(jié)果表明，本發(fā)明化合物對(duì)肝癌、肝母細(xì)胞瘤、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌和白血病的細(xì)胞增殖，具有很好的抑制作用，可以用于制備治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物。綜上所述，本發(fā)明式Ⅰ所示的新化合物，不僅對(duì)SIRT2具有良好的抑制活性，而且對(duì)腫瘤具有很好的抑制作用，具有很好的藥用價(jià)值，為臨床用藥提供了一種新的潛在選擇；同時(shí)，本發(fā)明新化合物的制備方法簡(jiǎn)便，反應(yīng)條件溫和，便于操作和控制，能耗小，產(chǎn)率高，成本低，可適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。當(dāng)前第1頁1 2 3