本發(fā)明涉及一種破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：靈芝多糖是靈芝“扶正固本”的有效成分。靈芝多糖存在于靈芝菌絲體、子實(shí)體、孢子粉及靈芝工程菌株的發(fā)酵液中，由肽多糖、葡聚糖、雜多糖等組成的混合物。葡聚糖中大部分為β2葡聚糖，少數(shù)為α2葡聚糖，而β2葡聚糖是其發(fā)揮活性的主要成分。研究表明，靈芝多糖具有廣泛的生理活性，具有提高機(jī)體免疫力、抑制腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧能力、消除自由基、抗衰老等作用。目前，提取靈芝多糖的方法大多采用水提醇沉法、酸堿提取法、酶法提取、超臨界流體輔助提取、以及超聲波微波提取法等。用這些方法提取的靈芝多糖，其結(jié)構(gòu)、生物活性均會(huì)受到溶劑、提取溫度、酸堿度等條件的影響而下降，這些方法也存在提取率不高，雜質(zhì)較多等缺憾，同時(shí)靈芝多糖的提取部位也對(duì)其物理性質(zhì)、化學(xué)性質(zhì)及生物學(xué)功能產(chǎn)生較大的影響。目前，面市上的靈芝多糖保健食品中，其多糖成分主要來(lái)源于靈芝菌絲體，或靈芝子實(shí)體，少部分來(lái)源于靈芝高產(chǎn)菌株的發(fā)酵產(chǎn)物，并以靈芝提取物的形式組成產(chǎn)品組方，以靈芝孢子粉多糖為原料的產(chǎn)品正是鳳毛麟角。從靈芝孢子粉中提取多糖的制備工藝大多停留在實(shí)驗(yàn)室階段，或處于中試過(guò)程中，尚未見(jiàn)到一款用成熟的靈芝孢子粉多糖提取工藝制備的產(chǎn)品問(wèn)世。傳統(tǒng)的靈芝多糖提取、分離方法普遍存在提取效率不高、純度低、溶劑用量大等缺點(diǎn)。新型提取分離技術(shù)如超聲波提取、酶法提取、大孔樹(shù)脂分離等雖然在一定程度上能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)方法的不足，但由于上述方法的最優(yōu)操作條件較為苛刻，若要將其運(yùn)用到實(shí)際生產(chǎn)中，還需要進(jìn)行大量的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明目的：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝。技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開(kāi)了一種破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.2～-0.1MPa；靜置時(shí)間為10～14h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為40～50℃；5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-16℃～-20℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為20～24h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為35～45℃，升華時(shí)間為16～20h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.2～-0.1MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)70～90目篩網(wǎng)，裝袋，封口。進(jìn)一步地，所述步驟1)中的破壁靈芝孢子粉的制備工藝包括以下步驟：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化3-5h；然后在40～70℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，即得所述破壁靈芝孢子粉。進(jìn)一步地，所述步驟1)中的破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：(5-10)。進(jìn)一步地，所述步驟1)的混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為30～40rpm。進(jìn)一步地，所述步驟1)的混合溫度為50～60℃。進(jìn)一步地，所述步驟1)的混合時(shí)間為5～10min。進(jìn)一步地，所述步驟2)的超聲頻率為10～30kHZ。本發(fā)明中破壁方法采用冷凍脆化破壁，僅需在-18℃條件下，放置脆化3-5h，再進(jìn)行超聲波破壁，即可達(dá)到99％以上的破壁率，條件要求低，工藝簡(jiǎn)單，無(wú)需添加任何輔料，并且能有效保留原料中的有效成分，破壁率高?，F(xiàn)有技術(shù)中有采用液氮中超低溫冷凍處理5-120分鐘，然后室溫靜置，并且反復(fù)多次的破壁方法，該方法成本高，操作復(fù)雜，條件要求高，并且破壁效果不佳；還有技術(shù)將原料置于干冰和無(wú)水乙醇的混合物中，采用超聲波進(jìn)行機(jī)械粉碎破壁，雖然該技術(shù)也采用超聲波破壁，但是其破壁仍然需要在低溫環(huán)境下，并且還需加入干冰和無(wú)水乙醇，除了增加成本外，無(wú)水乙醇會(huì)破壞其中有效成分，甚至造成殘留。本發(fā)明是以破壁靈芝孢子粉提取靈芝孢子油后的剩余物料為原料，采用超聲空化、極限真空低溫水提取工藝制取靈芝孢子粉多糖，再經(jīng)低溫濃縮膏狀物、冷凍干燥，粉碎過(guò)篩等步驟制備具有增強(qiáng)免疫力功能的保健食品原料靈芝孢子粉多糖干品，是對(duì)靈芝孢子粉的綜合利用。本發(fā)明制備的破壁靈芝孢子粉多糖，與傳統(tǒng)的靈芝子實(shí)體多糖有著明顯的區(qū)別：靈芝孢子粉多糖無(wú)苦味、具有破壁靈芝孢子粉特有的氣香味、蔗糖醇味。靈芝多糖(靈芝子實(shí)體多糖)具有強(qiáng)烈苦味，傳統(tǒng)工藝用乙醇提取，配輔料環(huán)狀糊精、羧甲纖維素鈉把子實(shí)體多糖苦味以降到最低程度。本發(fā)明的提取工藝與傳統(tǒng)的堿提取、醇沉等提取方法相比，水提取過(guò)程均在低溫、無(wú)溶劑接觸條件下進(jìn)行，有效地保留了靈芝孢子粉多糖的生物活性，使其免受溶劑、溫度等理化因素的影響。用這一方法提取的靈芝孢子粉多糖膏體水分低、雜質(zhì)少，再經(jīng)過(guò)后續(xù)的低溫冷凍干燥進(jìn)一步純化破壁靈芝孢子粉多糖。本方法提取的靈芝孢子粉多糖具有蔗糖香甜、純度高、無(wú)溶劑殘留等特點(diǎn)。有益效果：與傳統(tǒng)的堿提醇沉等提取方法相比，本發(fā)明的工藝過(guò)程均在低溫、無(wú)化學(xué)溶劑接觸條件下進(jìn)行，有效地保留了破壁靈芝孢子粉多糖的生物活性，使其免受溶劑、溫度等理化因素的影響。用這一工藝提取的靈芝孢子粉多糖口感醇香，無(wú)靈芝菌絲體多糖、子實(shí)體多糖的苦味而具有蔗糖甜醇感，在后續(xù)的成品配方中不需要添加遮味劑，可直接入組方；這種多糖物料具有良好的流動(dòng)性、可壓性及較大的堆積密度，適合加工成片劑、膠囊劑。具體實(shí)施方式本發(fā)明中的破壁靈芝孢子粉多糖得率按照以下公式算得：多糖得率(％)＝破壁靈芝孢子粉多糖重量(g)/破壁靈芝孢子粉重量(g)*100％本發(fā)明中的破壁靈芝孢子粉多糖含量的檢測(cè)：多糖含量測(cè)定：用苯酚-硫酸法測(cè)定。實(shí)施例1破壁靈芝孢子粉的制備：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，真空度為0.9MPa，真空干燥時(shí)間為6h，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化4h；然后在55℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，超聲波的超聲頻率為20千赫茲，混合時(shí)間為8min，混合轉(zhuǎn)速為35rpm，即得所述破壁靈芝孢子粉。破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉70kg，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為30rpm，混合溫度為50℃，混合時(shí)間為10min；破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：5；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；超聲頻率為30kHZ；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.2MPa；靜置時(shí)間為14h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為40℃；5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-16℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為24h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為45℃，升華時(shí)間為16h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.2MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)70目篩網(wǎng)，裝袋，封口即得破壁靈芝孢子粉多糖6.8kg。實(shí)施例2破壁靈芝孢子粉的制備：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，真空度為0.9MPa，真空干燥時(shí)間為6h，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化4h；然后在55℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，超聲波的超聲頻率為20千赫茲，混合時(shí)間為8min，混合轉(zhuǎn)速為35rpm，即得所述破壁靈芝孢子粉。破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉70kg，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為40rpm，混合溫度為60℃，混合時(shí)間為5min；破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：10；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；超聲頻率為30kHZ；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.1MPa；靜置時(shí)間為14h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為50℃5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-20℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為20h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為35℃，升華時(shí)間為20h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.1MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)90目篩網(wǎng)，裝袋，封口即得破壁靈芝孢子粉多糖6.027kg。實(shí)施例3破壁靈芝孢子粉的制備：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，真空度為0.9MPa，真空干燥時(shí)間為6h，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化4h；然后在55℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，超聲波的超聲頻率為20千赫茲，混合時(shí)間為8min，混合轉(zhuǎn)速為35rpm，即得所述破壁靈芝孢子粉。破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉70kg，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為35rpm，混合溫度為55℃，混合時(shí)間為7min；破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：8；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；超聲頻率為20kHZ；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.1MPa；靜置時(shí)間為12h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為45℃5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-18℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為22h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為40℃，升華時(shí)間為18h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.2MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)80目篩網(wǎng)，裝袋，封口即得破壁靈芝孢子粉多糖5.516kg。實(shí)施例4破壁靈芝孢子粉的制備：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，真空度為0.7MPa，真空干燥時(shí)間為4h，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化3h；然后在40℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，超聲波的超聲頻率為18千赫茲，混合時(shí)間為4min，混合轉(zhuǎn)速為50rpm，即得所述破壁靈芝孢子粉。破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉70kg，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為35rpm，混合溫度為55℃，混合時(shí)間為8min；破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：7；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；超聲頻率為25kHZ；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.2MPa；靜置時(shí)間為11h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為46℃5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-19℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為23h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為42℃，升華時(shí)間為18h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.1MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)85目篩網(wǎng)，裝袋，封口即得破壁靈芝孢子粉多糖5.761kg。實(shí)施例5破壁靈芝孢子粉的制備：(1)原材料準(zhǔn)備：取靈芝孢子粉原材料，水洗、去雜；(2)真空干燥：設(shè)置真空度和真空干燥時(shí)間，真空度為1.0MPa，真空干燥時(shí)間為8h，使真空干燥后水分≤6％；(3)冷凍脆化破壁：將真空干燥后的原材料在-18℃條件下，放置脆化5h；然后在70℃條件下，進(jìn)行超聲波混合破壁，超聲波的超聲頻率為22千赫茲，混合時(shí)間為12min，混合轉(zhuǎn)速為20rpm，即得所述破壁靈芝孢子粉。破壁靈芝孢子粉多糖的提取工藝，包括以下步驟：1)預(yù)處理：取破壁靈芝孢子粉70kg，加入純化水在混勻機(jī)中混合得到混合物；混勻機(jī)轉(zhuǎn)速為40rpm，混合溫度為50℃，混合時(shí)間為10min；破壁靈芝孢子粉：純化水的質(zhì)量比為1：8；2)超聲空化：將步驟1)預(yù)處理后得到的混合物加入超聲波反應(yīng)斧中進(jìn)行超聲空化得到提取液；超聲頻率為15kHZ；3)初純：將步驟2)得到的提取液抽真空后靜置得到上清液，所述真空度為-0.1MPa；靜置時(shí)間為13h；4)浸膏濃縮：將步驟3)得到的上清液進(jìn)行低溫濃縮得到浸膏；濃縮溫度為43℃5)冷凍干燥：將浸膏真空冷凍干燥得到凍干粉，分為三個(gè)階段：預(yù)冷處理、冷凍處理、升溫處理；所述預(yù)冷的溫度為-16℃，過(guò)夜；所述冷凍處理過(guò)程中冷阱溫度為-22℃，冷凍時(shí)間為24h，升溫處理過(guò)程中的升華溫度為45℃，升華時(shí)間為20h；整個(gè)真空干燥過(guò)程中的真空度為-0.2MPa；6)粉碎并收集：將凍干粉經(jīng)粉碎機(jī)粉碎整齊，顆粒通過(guò)70～90目篩網(wǎng)，裝袋，封口即得破壁靈芝孢子粉多糖5.278kg。實(shí)驗(yàn)例11.樣品處理：取破壁靈芝孢子粉多糖樣品分別用研缽粉碎，混合均勻。精密稱(chēng)取樣品粉末0.5g，精確到0.001g，用冷水溶解并全部轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中。定容并混合均勻后，置于4℃冰箱靜置2－4小時(shí)。準(zhǔn)確移取容量瓶中上層清液5.0mL，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，并用水定容。此溶液為樣品測(cè)定液，過(guò)濾后使用。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制：精密吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于25mL具塞比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)水至1.0mL。加入5％苯酚水溶液1.0mL，再快速加5.0mL濃硫酸(與液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便與反應(yīng)液充分混合)，靜置10min，使用渦旋振蕩器使反應(yīng)液充分混合，然后將試管置于30℃水浴中反應(yīng)20min，冷卻至室溫后，用分光光度計(jì)在490nm處測(cè)定吸光度值。取水1.0mL，加5％苯酚溶液1.0mL，濃硫酸5.0mL，同上做空白對(duì)照。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.樣品測(cè)定：精密吸取樣品測(cè)定液1.0mL于25mL具塞比色管中，按步驟B.4.2操作，測(cè)吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。4.計(jì)算樣品中多糖含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以克每百克(g/100g)表示，按式(1)計(jì)算：式中：m1—樣品測(cè)得的光度計(jì)數(shù)值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線所求得的對(duì)應(yīng)葡萄糖量，單位為微克(μg)；m2—樣品質(zhì)量，單位為克(g)V1—樣品定容體積，單位為毫升(mL)V2—比色測(cè)定時(shí)，所移取的樣品測(cè)定液的體積，單位為毫升(mL)通過(guò)上述方法對(duì)實(shí)施例1～5制備得到的破壁靈芝孢子粉多糖分別進(jìn)行測(cè)定，得到如下結(jié)果：實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5多糖含量60.6％56.9％58.8％57.6％59.8％多糖得率9.71％8.61％7.88％8.23％7.54％當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3