本發(fā)明屬微生物基因工程技術(shù)領域，具體涉及植物保護領域中控制真菌致病性的基因及其編碼蛋白質(zhì)的應用。

背景技術(shù)：

灰霉病菌(Botrytis cinerea)通常又稱作灰葡萄孢，屬于子囊菌門(Ascomycota)真菌，是灰霉病的病原菌，可侵染400多種植物，包括幾乎所有的蔬菜及果樹。寄主從苗期、掛果期到貯存期均可發(fā)病，而且，植株各部位均可被灰霉病菌侵染，葉部發(fā)病的典型癥狀表現(xiàn)為“V”形病斑，花部主要表現(xiàn)為腐爛和調(diào)萎，果實主要表現(xiàn)為腐爛和脫落。病害的發(fā)生和蔓延與環(huán)境的濕度、溫度存在密切的關(guān)系，在20℃-23℃，相對濕度90％以上時發(fā)生嚴重。因此，灰霉病屬低溫高濕型病害，在多雨季節(jié)或者保護地生產(chǎn)中極易發(fā)生，世界上每年因該病導致的經(jīng)濟損失高達100-1000億美元。由于寄主范圍廣泛，生產(chǎn)上危害嚴重，再加上相關(guān)分子研究技術(shù)成熟，灰霉病菌已成為最重要的模式植物病原真菌之一，受到廣泛研究。

灰霉病菌是典型的死體營養(yǎng)型病原真菌，可生成多種致病因子參與致病，主要包括細胞壁降解酶類、角質(zhì)酶、毒素、植物激素、抵抗寄主反應的酶類、小RNA及小分子物質(zhì)等，這些因子相互協(xié)作使灰霉病菌能夠殺死寄主細胞，并分解死亡的寄主組織作為營養(yǎng)。自然條件下，灰霉菌多以分生孢子作為侵染寄主的初侵染和再侵染來源?；颐共【Ｒ跃z體、分生孢子或菌核附著在植物病殘體上，或在土壤中越冬和越夏，成為下一生長季的初侵染來源。當條件適宜時，菌核萌發(fā)產(chǎn)生菌絲體和分生孢子梗，并產(chǎn)生大量的分生孢子。成熟的分生孢子能夠借助風、雨水、灌溉水和農(nóng)事操作等進行傳播。在低溫高濕條件下，分生孢子萌發(fā)形成芽管，芽管末端稍稍膨大發(fā)育成附著胞或者進一步形成侵染墊等侵染結(jié)構(gòu)，主要從衰敗的花器、傷口以及壞死組織侵入。

當高濃度的灰霉病菌分生孢子侵染寄主時，發(fā)病迅速，此時主要通過芽管頂端形成的附著胞侵入；伴隨孢子濃度降低，通過芽管頂端侵入的比例降低，發(fā)病速度也相應延緩1-4天，此時主要通過由菌絲發(fā)育成的附著胞或侵染墊侵入?；颐共【秩爰闹骷毎?，將會直接面臨寄主組織內(nèi)敵對環(huán)境的挑戰(zhàn)，病原菌必須迅速做出調(diào)整，一方面抑制植物的防御反應，另一方面要積極適應寄主細胞內(nèi)物理、化學環(huán)境，做到這兩方面，灰霉病菌才有望成功地寄生植物。在很大程度上，灰霉病菌是通過改變自身的代謝途徑，并分泌相關(guān)效應因子(如毒素)來實現(xiàn)上述目標的，但參與相應過程的基因、蛋白及代謝產(chǎn)物及其調(diào)控的分子機制仍所知甚少。對該領域進行深入研究，鑒定灰霉病菌用以適應寄主內(nèi)環(huán)境的關(guān)鍵因子，不僅有助于揭示灰霉病菌這種死體營養(yǎng)型病原真菌致病的分子機制，還有可能從中發(fā)現(xiàn)可以作為殺真菌劑作用靶標的蛋白質(zhì)，為開發(fā)防治灰霉病及其它類似病害的高效藥劑奠定理論和技術(shù)基礎。

灰霉病菌Pck1是一類磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase,PEPCK)，參與催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸，是糖異生途徑的第二個限速酶，通過分析其編碼基因BcPCK1的致病功能，評價該基因在灰霉病菌調(diào)控孢子萌發(fā)、孢子產(chǎn)量及致病過程的作用，有利于鑒定潛在的防治靶標，用于篩選新型殺真菌藥劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的旨在提供一種調(diào)控孢子萌發(fā)、孢子產(chǎn)量及致病性的基因及其編碼的蛋白質(zhì)。

本發(fā)明所提供的調(diào)控孢子萌發(fā)、孢子產(chǎn)量及致病性基因來源于灰霉病菌，名稱為BcPCK1，其DNA序列如SEQ ID No:1所示。該DNA序列為BcPCK1基因開放閱讀框，由2644個核苷酸組成，其中包含4個外顯子，分別位于SEQ ID No:1的5’端第1位至277位核苷酸之間，第327位至844位核苷酸之間，第895位至1446位核苷酸之間，第1891位至2226位核苷酸之間，組成的編碼區(qū)長度合計為1683個核苷酸。

本發(fā)明提供了BcPCK1基因所編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示，該序列由560個氨基酸組成。

來自灰霉病菌的調(diào)控孢子萌發(fā)、孢子產(chǎn)量及致病性基因BcPCK1可應用于植物抗灰霉病基因工程領域。

來自灰霉病菌的調(diào)控孢子萌發(fā)、孢子產(chǎn)量及致病性基因BcPCK1所編碼的蛋白質(zhì)可作為靶標應用于抗灰霉病菌藥劑的設計與篩選。

本發(fā)明證明了BcPCK1基因的缺失或突變，導致灰霉病菌致病力顯著降低，說明BcPCK1基因是灰霉病菌引起農(nóng)作物灰霉病所必需的基因。因此，篩選能夠阻止該基因表達與其蛋白質(zhì)的表達、修飾及定位的化合物，可以有效控制灰霉病的發(fā)生，從而有助于開發(fā)新型殺菌劑，即本發(fā)明所提供的BcPCK1基因的一個重要用途是：該基因的表達與其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，可以作為重要候選靶標位點，用于抗灰霉病菌藥劑的設計與篩選。

本發(fā)明所使用的灰霉病菌菌株B05.10，購買自美國真菌遺傳材料保藏中心(Fungal Genetics Stock Center，F(xiàn)GSC)，其他人員如需要該菌株，可從該保藏中心購買獲得，相關(guān)信息如下：保藏中心地址：Fungal Genetics Stock Center，Department of Plant Pathology，Kansas State University，4024 Throckmorton Plant Sciences Center，Manhattan,KS 66506 USA；網(wǎng)址：http://www.fgsc.net/scripts/StrainSearchReturnPage.asp？OrgID＝23812；菌株編號：FGSC 10317。

附圖說明

圖1為BcPck1蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域分析示意圖

其中：PEPCK為磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的保守結(jié)構(gòu)域；

圖2為灰霉病菌BcPCK1基因的敲除策略(通過同源重組進行基因替換)示意圖

其中：WT為野生型菌株B05.10，PXEH-KO為敲除載體

圖3為BcPCK1基因在野生型、缺失突變體及遺傳互補菌株中的半定量RT-PCR電泳圖

其中：使用BcPCK1基因cDNA設計的一對引物PCKU、PCKD，及另一對做內(nèi)參的引物Actin-U、Actin-D同時進行半定量PCR；WT為野生型菌株B05.10，ΔBcpck1為BcPCK1基因缺失突變體，Bcpck1-C為在BcPCK1基因缺失突變體基礎上轉(zhuǎn)入完整BcPCK1基因的互補菌株；

圖4為野生型菌株B05.10、BcPCK1基因的缺失突變體與遺傳互補菌株孢子萌發(fā)率統(tǒng)計圖

其中：分別取濃度為1×10⁵/mL分生孢子與PDB溶液1:1混合，滴5ul混合液于載玻片上，在20℃恒溫分別培養(yǎng)2h、4h、6h，分別于顯微鏡觀察，利用血球計數(shù)板統(tǒng)計萌發(fā)率；***表示在p<0.001水平上差異極顯著。

圖5為BcPCK1基因的缺失突變體與野生型菌株及互補菌株的產(chǎn)孢照片

圖6為BcPCK1基因的缺失突變體與野生型菌株及互補菌株的產(chǎn)孢量統(tǒng)計圖

其中：***表示在p<0.001水平上差異極顯著。

圖7為BcPCK1基因的缺失突變體與野生型菌株及互補菌株的致病力比較照片

其中：所選擇寄主為番茄葉片，采用離體葉片接種孢子的方法。接種3天后進行評價；

圖8為BcPCK1基因的突變體與對照菌株侵染寄主所產(chǎn)生病斑大小的定量分析示意圖

其中：接種方法同上，接種3天后對葉片病斑面積進行測量計算，換算成相對大??；***表示在p<0.001水平上差異極顯著。

具體實施方式

為了更好地描述本發(fā)明，下面通過具體的實施例予以進一步的說明，下述實施例中的方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。

實施例1 BcPCK1基因的相關(guān)性分析

灰霉病菌BcPCK1基因的開放閱讀框由2644個核苷酸組成，包含4個外顯子，編碼區(qū)cDNA全長為1683個核苷酸，編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物由560個氨基酸組成，結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)，BcPck1蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域非常保守(見圖1)。

實施例2 BcPCK1基因的敲除

1)敲除載體的構(gòu)建

采用引物PCK-UP-F(5'-AGATCTCGGAGCATGTGAATGCCAAGT-3')與PCK-UP-R(5'-GAGCTCAGCCGCCGTCGTTCGTAAAT-3')，以灰霉病菌菌株B05.10的基因組DNA為模板擴增BcPCK1基因上游555bp片段，采用PCK-DN-F(5'-GTCGACAAGAAATACCAGTCGGAAGCTA-3')與PCK-DN-R(5'-CTGCAGGAAAGCCAAACCTACAAAGTTC-3')擴增灰霉病菌BcPCK1基因下游710bp片段，反應體系為：10mmol/L dNTP Mixture，0.5μL；10×PCRbuffer，2.5μL；上下游引物各1μL(10μmol/mL)；模板DNA，1μL；Ex-Taq，0.2μL(5U)；ddH₂O，18.8μL；擴增程序為：94℃預變性3分鐘，然后(1)94℃，變性50秒；(2)58℃，退火50秒；(3)72℃，延伸60秒；(4)循環(huán)30次；(5)72℃延伸10分鐘。將上述兩段DNA擴增產(chǎn)物分別克隆到T載體，然后分別用Bgl II、Sac I酶切含上游片段質(zhì)粒及pXEH載體，將酶切好的上游同源片段克隆至用相同酶酶切的pXEH載體上；驗證正確后，再用Sal I、Pst I酶切含下游片段的質(zhì)粒及連有上游同源片段的pXEH載體，再將酶切好的下游同源片段克隆至用相同酶酶切的連有上游同源片段的pXEH載體上，構(gòu)建成敲除載體PXEH-KO(見圖2)，并進行測序驗證。

2)灰霉病菌的轉(zhuǎn)化

a.農(nóng)桿菌的培養(yǎng)

挑取含有雙元載體PXEH-KO的根癌農(nóng)桿菌菌株Agl-1單菌落，接種至含50μg/ml卡那霉素、10μg/ml利福平的MM液體培養(yǎng)基(磷酸氫二鉀0.205％，磷酸二氫鉀0.145％，氯化鈉0.015％，七水硫酸鎂0.05％，六水氯化鈣0.01％，七水硫酸亞鐵0.00025％，硫酸銨0.05％，葡萄糖0.2％)中，250rpm、28℃振蕩培養(yǎng)48h；4000rpm，離心5分鐘，棄上清，IM液體培養(yǎng)基(磷酸氫二鉀0.205％，磷酸二氫鉀0.145％，氯化鈉0.015％，七水硫酸鎂0.05％，六水氯化鈣0.01％，七水硫酸亞鐵0.00025％，硫酸銨0.05％，葡萄糖0.2％，200μMAS，MES 0.854％，甘油0.5％)重懸，4000rpm離心5分鐘，棄上清；IM培養(yǎng)基重懸，28℃，250rpm振蕩培養(yǎng)6h，進行預誘導。

b.灰霉病菌的產(chǎn)孢培養(yǎng)

選用B05.10菌株，取少量孢子涂布于PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯20％煮爛過濾，葡萄糖2％，瓊脂1.5％)，置28℃培養(yǎng)8h令孢子快速萌發(fā)，然后轉(zhuǎn)移至20℃培養(yǎng)3-5天，待菌體表面被灰色孢子覆蓋之后，用IM液體培養(yǎng)基刮取、收集孢子，顯微鏡觀察，利用血球計數(shù)器調(diào)節(jié)孢子濃度為1×10⁶/mL。

c.根癌農(nóng)桿菌與灰霉病菌分生孢子共培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化子篩選

將在IM液體培養(yǎng)基中預先誘導6h的農(nóng)桿菌菌液和灰霉病菌孢子液等體積混合，加入AS，使終濃度達到500μM，混勻，然后按250～350μL/皿，均勻涂抹至鋪有玻璃紙的IM培養(yǎng)基上，22℃黑暗培養(yǎng)48h；共培養(yǎng)完畢后，將玻璃紙轉(zhuǎn)移至含有100μg/mL潮霉素的PDA培養(yǎng)基上，相同條件下繼續(xù)培養(yǎng)。4～7天后挑取擴展的菌落到含有同樣抗生素的篩選培養(yǎng)基上。

3)缺失突變體的驗證

選用兩對引物通過PCR擴增對轉(zhuǎn)化子進行篩選。擴增結(jié)果符合如下結(jié)果的，確定為BcPCK1基因缺失突變體：上游同源臂之外基因組上的引物c(5'-ATGACTTCAATGTCCCGCTAA-3')與潮霉素抗性基因的引物d(5'-ACAGACGTCGCGGTGAGTTCA-3')配對可以擴增到預期大小的重組片段；而編碼區(qū)引物a(5'-CCGAGGGTATGACTTCAGGTA-3')與b(5'-TTGTGGTGCTCAATCTTCTCA-3')無擴增條帶(野生型菌株可擴增到0.81kb片段)。結(jié)果，從轉(zhuǎn)化子中篩選到BcPCK1基因缺失突變體ΔBcpck1用于后續(xù)功能分析。

實施例3 BcPCK1基因缺失突變體的遺傳互補

采用引物C-F(5'-AAAGATCAAAGGATCGAATTCCAATGTCCCGCTAAATGTCA-3')與C-R(5'-CCGGGTACCGAGCTCGAATTCCCGATTGCTAGACTGGTGG-3')，擴增灰霉病菌BcPCK1基因全長4672bp(包含啟動子、開放閱讀框與終止子)，克隆至pXEB載體(含有草銨膦抗性基因)的EcoR I位點，構(gòu)建成遺傳互補載體PXEH-KO-C。載體經(jīng)測序驗證，確認沒有氨基酸突變。采用如前所述的農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化方法，使用400μg/mL草銨膦進行篩選，將該互補片段轉(zhuǎn)入BcPCK1基因缺失突變體基因組中，獲得遺傳互補菌株Bcpck1-C。選用灰霉病菌菌株B05.10的BcPCK1基因cDNA基因組設計的引物PCKU(5'-CGAAGGTAAGGACGGAGACG-3')與PCKD(5'-CAGAGCCGAATTGGATAGCG-3')、及野生型菌株B05.10另一對做內(nèi)參的引物Actin-U(5'-CATGGCTGGTCGTGATTTGA-3')、Actin-D(5'-GAGGATTGACTGGCGGTTTG-3')同時進行半定量PCR，電泳結(jié)果符合預期(見圖3)：BcPCK1基因缺失突變體ΔBcpck1-1、ΔBcpck1-2中沒有擴增出條帶，野生型和互補菌株接近內(nèi)參擴增的亮度，說明：在BcPCK1基因缺失突變體中BcPCK1基因的確被敲除，互補菌株額外擁有一個后續(xù)轉(zhuǎn)入的BcPCK1基因，因為BcPCK1基因缺失突變體中沒有BcPCK1基因的轉(zhuǎn)錄，而互補菌株和野生型菌株有BcPCK1基因的正常轉(zhuǎn)錄。

實施例4 BcPCK1基因在灰霉病菌的分生孢子萌發(fā)過程中的作用

分別取濃度為1×10⁵/mL分生孢子與PDB溶液1:1混合，滴5ul混合液于載玻片上，在20℃恒溫分別培養(yǎng)2h、4h、6h，分別于顯微鏡觀察統(tǒng)計萌發(fā)率；觀察發(fā)現(xiàn)，2h時BcPCK1基因缺失突變體分生孢子萌發(fā)率不到30％，而野生型菌株和互補菌株接近80％；4h時BcPCK1基因缺失突變體分生孢子萌發(fā)率不到60％，而野生型菌株和互補菌株早已達100％；直到6h BcPCK1基因缺失突變體分生孢子萌發(fā)率才達到100％。以上研究表明，BcPCK1基因具有調(diào)控分生孢子萌發(fā)的作用(見圖4)。

實施例5 BcPCK1基因在灰霉病菌產(chǎn)孢方面的作用

分別取10μL待測菌株P(guān)DB孢子懸浮液(1×10⁶ml^-1)接種在PDA培養(yǎng)基的中心，20℃黑暗培養(yǎng)一周(見圖5)，收集孢子，顯微鏡觀察，利用血球計數(shù)器統(tǒng)計。分析發(fā)現(xiàn)，BcPCK1基因缺失突變體產(chǎn)孢量只有野生型菌株的10％左右，而互補菌株與野生型菌株接近，表明BcPCK1基因具有調(diào)控分生孢子產(chǎn)量的作用(見圖6)。

實施例6 BcPCK1基因在灰霉病菌致病性方面的作用

采用離體葉片接種法，評價BcPCK1基因缺失突變體的致病力變化情況。從溫室培養(yǎng)的番茄植株上采集成熟葉片，水平放置容器中，取15μL待測菌株P(guān)DB孢子懸浮液(1×10⁵ml^-1)點接在葉面上，20℃保濕黑暗培養(yǎng)，3天后評價待測菌株的致病力。實驗結(jié)果顯示，BcPCK1基因缺失突變體基本喪失了致病能力，只能在接種點附近發(fā)現(xiàn)微小病斑。與此形成鮮明對照的是，野生型可成功侵染番茄葉片，并迅速蔓延至近半個葉面；遺傳互補菌株Bcpck1-C的致病力回復正常，基本達到野生型水平(見圖7)。對葉片病斑面積進行測量計算，發(fā)現(xiàn)BcPCK1基因缺失突變體侵染引起的病斑面積只有野生型引起的25％左右(見圖8)。該研究結(jié)果表明，BcPCK1是一個關(guān)鍵的致病基因，是灰霉病菌侵染寄主所必需的，如果該基因或其編碼的蛋白質(zhì)喪失活性，灰霉病菌將基本失去侵染寄主引發(fā)病害的能力。

SEQ ID No:1的序列

(i)序列特征：(A)長度：2644bp；(B)類型：核苷酸；(C)鏈性：單鏈

(ii)分子類型：DNA

(iii)序列描述：SEQ ID No:1

1 ATGTCGACCT CAAATATGAA TAAGAAGGCT TTCGATCCCA TCCAAAGAAC TGCATCTCCA

61 TATCCTGACA AGAGCAGTGT TGGTCCTTCG CACATTATTG CACAACACCA ACCTACAAAC

121 AACTATCATT CTTCATCACT CTCCACTCTC AAAATGGTTT CTACAAATCC AAGCGTCAAT

181 CGCACATGTC AGTATACCTT TCTTCATGCT CCTACTGCTT CAGCACTGCT TCAGACCTGC

241 CGCATTCGAC CTGGCATCTG ATGTTCGGGT CAGATTGGAT GTCGACGCAC CTGCGACTTT

301 AGCAGTCCGC CCACAGTCTT TCAGCTCGCA GCTCAATGAT GACGCTTCGC GATAGCTTTT

361 ATGCAACTTC ACTTTGCTAA CATTATCTTT TACAGCACTT CACCCAAGCG GTGTACAACC

421 ACAAGTTGAG CACACCGAGC TTGAGGAGGA ACTTCACGAG AACGCACATA TCGATTATGA

481 TCGTGTAGCT ATTGTGTGTA TCTCGCCCCC TCTTTGGATC TGCCAGCTGC TAACTCCTAT

541 TCTTTTCTAG GTTCCTAATC CAAGTGTCGC TGCCCTTTAC GAAGATGCAC TTGTTTACGA

601 AACTGGTTCT GCCATCACAT CTACCGGTGC TCTCACTGCA TACTCTGGAG CTAAGACAGG

661 TCGCTCGCCC TTAGACAAGA GAATTGTCAA AGAACCATCA TCTGAAAATG AGATTTGGTG

721 GGGACCAGTC AACAAGCCAA TGACACCTGA TGTAAGAACC TCTCTCTCTC TCTGTTTACA

781 TTCATTTCTT GCGTCTTTTA CTTTTTCCTT GGAAATGCAT TCAATACGTT TTCAGTCGAG

841 GAAATTTACA TTGGCTCTAC AACACTACGG ATTTTGAAAA CGGCAATCTC ATCTCAGCAT

901 TTTTGAGAGC ACATCTTCAC ATCTACAACT CATCACTTTC CTTTCTTCTT TACGCCAAAC

961 AATCATTCTA AGAGATTTCC CCGCACATTT CTACGTCATA AGCTCTTGGG CATCCTCGGC

1021 TTTATCTTTT TCCTTCCTTC CCCAAGCGAA AACGCGGGGT GCAGATAAAC CGATATTATC

1081 CCGATCTTGC TGCTATTAGT GATCAGCTAT CATATTCCCC CTTTACATGT CGCGTGCGAA

1141 CTTTATCTAT GAGTTTTTGA ATGTTGGAAA TTTAGTAGAC TAACATCAAT GATAGGTATG

1201 GAGAATCAAC CGTGAACGTG CAATTGATTA CTTAAACACG AGAAATCGTA TTTACGTCGT

1261 CGATGGTTTC GCAGGATGGG ACGAGAAATA CAGAATCAAG GTTCGAGTCG TATGCGCTCG

1321 TGCCTACCAC GCTCTTTTCA TGCGCAATAT GCTCATTAGA CCTGAACGCA AAGATCTCGA

1381 ACATTTCCAC CCAGATTATA CTATTTACAA CGCAGGATCT TTCCCTGCTA ACAGATACAC

1441 CGAGGGTATG ACTTCAGGTA CTTCAGTTGC TATCAACTTC GCAGCGAAGG AGATGGTTAT

1501 CTTGGGTACT GAGTACGCCG GAGAGATGAA GAAGGGTGTT TTTACAGTTC TCTTCTACGA

1561 GATGCCTGTC AAGCATAACG TTCTCACTCT TCACTCGTCA GCCAACGAAG GTAAGGACGG

1621 AGACGTCACT GTCTTCTTTG GTCTTTCGGG TACCGGTAAA ACAACACTTT CAGCAGACCC

1681 CAACCGTGCC TTGATTGGTG ACGACGAGCA CTGCTGGAGT GACCGTGGTG TTTTCAACAT

1741 TGAGGGTGGT GTAAGTGTTT CAGAATCTGC ATTACGTTGT ATCAAGCTAA CAATCTGCAG

1801 TGCTACGCTA AGTGCATCGG TCTTTCAGCA GAGAAGGAGC CTGATATCTT TGGCGCTATC

1861 CAATTCGGCT CTGTTCTTGA GAACGTTGTT TTTGACCCAG ACACTCGTCT TGTTGATTAT

1921 GATGACTCAA CCTTGACTGA GAACACCCGT TGCGCATACC CAATTGAGTA CATTTCCAAC

1981 GCTAAGATTC CTTGTCTATC GACAAACCAC CCAAGCAACA TCATTCTTCT TACATGTGAT

2041 GCTCGTGGTG TCCTTCCACC CATTTCCAAG CTTGACTCCG CCCAAACCAT GTTCCATTTC

2101 ATCTCCGGTT ACACCTCAAA GATGGCCGGT ACCGAAGATG GTGTCACAGA GCCACAGGCT

2161 ACCTTCTCAT CTTGCTTCGC GCAACCTTTC TTGGCTTTAC ACCCAATGCG TTATGCTAAG

2221 ATGTTGGCTG AGAAGATTGA GCACCACAAG GCTAATGCTT GGTTGTTGAA CACTGGATGG

2281 GTTGGAGCTG GTGCTACCAC TGGTGGCAAG CGTTGCCCGT AAGTACAATT GGAATCTTCC

2341 GGAAAAACGC ATGCTAACAT GAACTAGATT GAAATACACT CGTGCTATTC TTGACGCAAT

2401 TCACTCTGGA GAGCTTGCAA AGGTTGAGTA TGAAAACTAC GAGACCTTCA ACCTCCAAGT

2461 ACCAAAGACT TGCACCAATG TTCCATCGGA ATTGTTGAAC CCAAGAAATG CATGGAGTCA

2521 AGGAGAGGAT AGCTTCAAAG CCGAGGTTAA CAAACTTGGT GGTCTCTTCG TTGAGAACTT

2581 TAAGAAATAC CAGTCGGAAG CTACTGAGGA TGTCATTGCA GCAGGGCCAG CTGTTAAGGT

2641 TTAA

SEQ ID No:2的序列

(i)序列特征：(A)長度：560個氨基酸；(B)類型：氨基酸；(C)鏈性：單鏈

(ii)分子類型：多肽

(iii)序列描述：SEQ ID No:2

1 MVSTNPSVNR TSLHPSGVQP QVEHTELEEE LHENAHIDYD RVAIVPNPSV AALYEDALVY

61 ETGSAITSTG ALTAYSGAKT GRSPLDKRIV KEPSSENEIW WGPVNKPMTP DVWRINRERA

121 IDYLNTRNRI YVVDGFAGWD EKYRIKVRVV CARAYHALFM RNMLIRPERK DLEHFHPDYT

181 IYNAGSFPAN RYTEGMTSGT SVAINFAAKE MVILGTEYAG EMKKGVFTVL FYEMPVKHNV

241 LTLHSSANEG KDGDVTVFFG LSGTGKTTLS ADPNRALIGD DEHCWSDRGV FNIEGGCYAK

301 CIGLSAEKEP DIFGAIQFGS VLENVVFDPD TRLVDYDDST LTENTRCAYP IEYISNAKIP

361 CLSTNHPSNI ILLTCDARGV LPPISKLDSA QTMFHFISGY TSKMAGTEDG VTEPQATFSS

421 CFAQPFLALH PMRYAKMLAE KIEHHKANAW LLNTGWVGAG ATTGGKRCPL KYTRAILDAI

481 HSGELAKVEY ENYETFNLQV PKTCTNVPSE LLNPRNAWSQ GEDSFKAEVN KLGGLFVENF

541 KKYQSEATED VIAAGPAVKV

序 列 表

SEQ ID No:1的序列

　　?。╥）序列特征：（A）長度：2644 bp；（B）類型：核苷酸；（C）鏈性：單鏈

　　?。╥i）分子類型：DNA

　　?。╥ii）序列描述：SEQ ID No:1

1 ATGTCGACCT CAAATATGAA TAAGAAGGCT TTCGATCCCA TCCAAAGAAC TGCATCTCCA

61 TATCCTGACA AGAGCAGTGT TGGTCCTTCG CACATTATTG CACAACACCA ACCTACAAAC

121 AACTATCATT CTTCATCACT CTCCACTCTC AAAATGGTTT CTACAAATCC AAGCGTCAAT

181 CGCACATGTC AGTATACCTT TCTTCATGCT CCTACTGCTT CAGCACTGCT TCAGACCTGC

241 CGCATTCGAC CTGGCATCTG ATGTTCGGGT CAGATTGGAT GTCGACGCAC CTGCGACTTT

301 AGCAGTCCGC CCACAGTCTT TCAGCTCGCA GCTCAATGAT GACGCTTCGC GATAGCTTTT

361 ATGCAACTTC ACTTTGCTAA CATTATCTTT TACAGCACTT CACCCAAGCG GTGTACAACC

421 ACAAGTTGAG CACACCGAGC TTGAGGAGGA ACTTCACGAG AACGCACATA TCGATTATGA

481 TCGTGTAGCT ATTGTGTGTA TCTCGCCCCC TCTTTGGATC TGCCAGCTGC TAACTCCTAT

541 TCTTTTCTAG GTTCCTAATC CAAGTGTCGC TGCCCTTTAC GAAGATGCAC TTGTTTACGA

601 AACTGGTTCT GCCATCACAT CTACCGGTGC TCTCACTGCA TACTCTGGAG CTAAGACAGG

661 TCGCTCGCCC TTAGACAAGA GAATTGTCAA AGAACCATCA TCTGAAAATG AGATTTGGTG

721 GGGACCAGTC AACAAGCCAA TGACACCTGA TGTAAGAACC TCTCTCTCTC TCTGTTTACA

781 TTCATTTCTT GCGTCTTTTA CTTTTTCCTT GGAAATGCAT TCAATACGTT TTCAGTCGAG

841 GAAATTTACA TTGGCTCTAC AACACTACGG ATTTTGAAAA CGGCAATCTC ATCTCAGCAT

901 TTTTGAGAGC ACATCTTCAC ATCTACAACT CATCACTTTC CTTTCTTCTT TACGCCAAAC

961 AATCATTCTA AGAGATTTCC CCGCACATTT CTACGTCATA AGCTCTTGGG CATCCTCGGC

1021 TTTATCTTTT TCCTTCCTTC CCCAAGCGAA AACGCGGGGT GCAGATAAAC CGATATTATC

1081 CCGATCTTGC TGCTATTAGT GATCAGCTAT CATATTCCCC CTTTACATGT CGCGTGCGAA

1141 CTTTATCTAT GAGTTTTTGA ATGTTGGAAA TTTAGTAGAC TAACATCAAT GATAGGTATG

1201 GAGAATCAAC CGTGAACGTG CAATTGATTA CTTAAACACG AGAAATCGTA TTTACGTCGT

1261 CGATGGTTTC GCAGGATGGG ACGAGAAATA CAGAATCAAG GTTCGAGTCG TATGCGCTCG

1321 TGCCTACCAC GCTCTTTTCA TGCGCAATAT GCTCATTAGA CCTGAACGCA AAGATCTCGA

1381 ACATTTCCAC CCAGATTATA CTATTTACAA CGCAGGATCT TTCCCTGCTA ACAGATACAC

1441 CGAGGGTATG ACTTCAGGTA CTTCAGTTGC TATCAACTTC GCAGCGAAGG AGATGGTTAT

1501 CTTGGGTACT GAGTACGCCG GAGAGATGAA GAAGGGTGTT TTTACAGTTC TCTTCTACGA

1561 GATGCCTGTC AAGCATAACG TTCTCACTCT TCACTCGTCA GCCAACGAAG GTAAGGACGG

1621 AGACGTCACT GTCTTCTTTG GTCTTTCGGG TACCGGTAAA ACAACACTTT CAGCAGACCC

1681 CAACCGTGCC TTGATTGGTG ACGACGAGCA CTGCTGGAGT GACCGTGGTG TTTTCAACAT

1741 TGAGGGTGGT GTAAGTGTTT CAGAATCTGC ATTACGTTGT ATCAAGCTAA CAATCTGCAG

1801 TGCTACGCTA AGTGCATCGG TCTTTCAGCA GAGAAGGAGC CTGATATCTT TGGCGCTATC

1861 CAATTCGGCT CTGTTCTTGA GAACGTTGTT TTTGACCCAG ACACTCGTCT TGTTGATTAT

1921 GATGACTCAA CCTTGACTGA GAACACCCGT TGCGCATACC CAATTGAGTA CATTTCCAAC

1981 GCTAAGATTC CTTGTCTATC GACAAACCAC CCAAGCAACA TCATTCTTCT TACATGTGAT

2041 GCTCGTGGTG TCCTTCCACC CATTTCCAAG CTTGACTCCG CCCAAACCAT GTTCCATTTC

2101 ATCTCCGGTT ACACCTCAAA GATGGCCGGT ACCGAAGATG GTGTCACAGA GCCACAGGCT

2161 ACCTTCTCAT CTTGCTTCGC GCAACCTTTC TTGGCTTTAC ACCCAATGCG TTATGCTAAG

2221 ATGTTGGCTG AGAAGATTGA GCACCACAAG GCTAATGCTT GGTTGTTGAA CACTGGATGG

2281 GTTGGAGCTG GTGCTACCAC TGGTGGCAAG CGTTGCCCGT AAGTACAATT GGAATCTTCC

2341 GGAAAAACGC ATGCTAACAT GAACTAGATT GAAATACACT CGTGCTATTC TTGACGCAAT

2401 TCACTCTGGA GAGCTTGCAA AGGTTGAGTA TGAAAACTAC GAGACCTTCA ACCTCCAAGT

2461 ACCAAAGACT TGCACCAATG TTCCATCGGA ATTGTTGAAC CCAAGAAATG CATGGAGTCA

2521 AGGAGAGGAT AGCTTCAAAG CCGAGGTTAA CAAACTTGGT GGTCTCTTCG TTGAGAACTT

2581 TAAGAAATAC CAGTCGGAAG CTACTGAGGA TGTCATTGCA GCAGGGCCAG CTGTTAAGGT

2641 TTAA

SEQ ID No:2的序列

　　　（i）序列特征：（A）長度：560個氨基酸；(B)類型：氨基酸；（C）鏈性：單鏈

　　?。╥i）分子類型：多肽

　　　（iii）序列描述：SEQ ID No:2

1 MVSTNPSVNR TSLHPSGVQP QVEHTELEEE LHENAHIDYD RVAIVPNPSV AALYEDALVY

61 ETGSAITSTG ALTAYSGAKT GRSPLDKRIV KEPSSENEIW WGPVNKPMTP DVWRINRERA

121 IDYLNTRNRI YVVDGFAGWD EKYRIKVRVV CARAYHALFM RNMLIRPERK DLEHFHPDYT

181 IYNAGSFPAN RYTEGMTSGT SVAINFAAKE MVILGTEYAG EMKKGVFTVL FYEMPVKHNV

241 LTLHSSANEG KDGDVTVFFG LSGTGKTTLS ADPNRALIGD DEHCWSDRGV FNIEGGCYAK

301 CIGLSAEKEP DIFGAIQFGS VLENVVFDPD TRLVDYDDST LTENTRCAYP IEYISNAKIP

361 CLSTNHPSNI ILLTCDARGV LPPISKLDSA QTMFHFISGY TSKMAGTEDG VTEPQATFSS

421 CFAQPFLALH PMRYAKMLAE KIEHHKANAW LLNTGWVGAG ATTGGKRCPL KYTRAILDAI

481 HSGELAKVEY ENYETFNLQV PKTCTNVPSE LLNPRNAWSQ GEDSFKAEVN KLGGLFVENF

541 KKYQSEATED VIAAGPAVKV