本發(fā)明涉及1，2，5-噻二唑-2氧化物類似物及其應(yīng)用，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

血吸蟲病至今仍是嚴(yán)重危害人類身體健康的一種重要人獸共患寄生蟲病，是熱帶與亞熱帶地區(qū)的重要公共衛(wèi)生問題。在人體寄生的血吸蟲包括：日本血吸蟲、曼氏血吸蟲、埃及血吸蟲、間接血吸蟲和眉公血吸蟲共五種。全世界約有76個(gè)國(guó)家有血吸蟲病流行，有6億多人口受到血吸蟲感染的威脅，有2000萬人感染了血吸蟲，每年有20余萬人死于血吸蟲病。由于缺乏有效的預(yù)防血吸蟲感染的疫苗，目前血吸蟲病防治主要采取以化療結(jié)合媒介控制為主的綜合性防治措施，查病治病、消滅傳染源是當(dāng)前血吸蟲病防治工作的核心。

酒石酸銻鉀是最早用于血吸蟲病治療的藥物，1918年Christopherson用其治療埃及血吸蟲病，開創(chuàng)血吸蟲病化學(xué)藥物治療的先河，該藥對(duì)其它血吸蟲病亦有很好的療效，至20世紀(jì)60年代，已治療了近500萬日本血吸蟲病病例，在血吸蟲病防治史上發(fā)揮了重要作用。該藥需要靜脈注射給藥，會(huì)引起嚴(yán)重的心臟毒性及肝臟毒性，現(xiàn)已停止使用。隨后人們又研制了用于血吸蟲病治療的非銻劑化合物，如：硫蒽酮、海蒽酮、奧沙尼喹、尼立達(dá)唑、硝硫氰胺、奧拉普唑等等，這些藥物雖然對(duì)血吸蟲感染有一定的治療效果，但因其副作用均比較大，并沒有被推廣應(yīng)用。中國(guó)學(xué)者先后研制出用于日本血吸蟲病治療的口服藥物：沒食子酸銻鈉、呋喃丙胺、六氯對(duì)二甲苯和雙羥萘酸副品紅等藥物，均因副作用大及療效不確定，目前均已停止使用。

20世紀(jì)70年代，由德國(guó)的怡黙克與拜耳藥廠合作研發(fā)的廣譜抗蠕蟲藥吡喹酮問世，該藥對(duì)寄生于人體和動(dòng)物的多種寄生蟲，特別對(duì)血吸蟲，華支睪吸蟲、衛(wèi)氏并殖吸蟲、姜片吸蟲及絳蟲的成蟲及幼蟲都有顯著的殺滅作用，并且具有毒性低，療程短，可以口服用藥等諸多優(yōu)點(diǎn)，很適用于現(xiàn)場(chǎng)大規(guī)模普治?，F(xiàn)在該藥已在全世界的血吸蟲病及其它寄生蟲病治療中得到廣泛使用，在控制血吸蟲病流行中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用，已成為當(dāng)前治療血吸蟲病唯一的有效治療藥物。由于吡喹酮大規(guī)模的使用，藥物的選擇性壓力，使得曼氏血吸蟲和埃及血吸蟲已出現(xiàn)了耐藥株，日本血吸蟲亦發(fā)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室耐藥株。如果繼續(xù)大規(guī)模使用，很可能出現(xiàn)吡喹酮耐藥株流行的局面，在沒有新的治療血吸蟲病有效藥物問世的情況下，將給全世界未來的血吸蟲病治療帶來嚴(yán)重的困難與挑戰(zhàn)。雖然我國(guó)研制的抗瘧藥青蒿素類藥物對(duì)血吸蟲的幼蟲有一定的治療效果，但其對(duì)血吸蟲的成蟲治療效果比較差。因此，研究新的可以替代吡喹酮的血吸蟲病治療新藥已成為一個(gè)非常緊迫的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，具體是一類結(jié)構(gòu)如下所示的1，2，5-噻二唑-2氧化物類似物：

其中，R₁包括羥甲基、鹵代甲基、氰基；

R₂包括H，甲氧基，亞甲基氧取代芳基，亞甲基氧取代C1-C5直鏈烷烴，亞甲基氧取代末端溴的C1-C5直鏈烷烴，溴取代的C1-C4稀氧基，溴取代的C1-C3炔氧基。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述鹵代甲基包括氟代甲基，氯代甲基，溴代甲基，碘代甲基。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述化合物中R₁選自以下任一種：羥甲基、鹵代甲基、氰基；R₂選自以下任一種：H；甲氧基；亞甲基氧取代芳基；亞甲基氧取代C1-C5直鏈烷烴，亞甲基氧取代末端溴的C1-C5直鏈烷烴，溴取代的C1-C4稀氧基，溴取代的C1-C3炔氧基；

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述化合物包括3-氰基-4-苯基-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-(氟甲基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑2-氧化物(3-(氯甲基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-(溴甲基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-(碘甲基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-(溴甲基)-4-(4-甲氧基苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-甲氧基苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-羥基苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物4-(4-(3-溴丙氧基)苯基)-3-氨基-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-炔丙基氧基)苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-丁烷氧基)苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-芐氧基)苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物3-氰基-4-(4-(4-溴-2-丁烯氧基)苯基)-1,2,5-噻二唑2-氧化物

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述化合物具體如表1所示：

表1 1，2，5-噻二唑-2-氧化物類似物舉例

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種上述化合物的制備方法，包括方案(a),(b)，(c),(d)；

(a)所述化合物中R₁為氰基，R₂為H時(shí)，通過下列反應(yīng)方案實(shí)施：

a.將化合物1溶于二氯甲烷中，在-25～0℃與按質(zhì)量比1:1的三甲基氯硅烷和亞硝酸異戊酯作用得到化合物2；

b.將化合物2溶于甲醇中，于pH≥10，回流條件下與鹽酸羥胺作用得到化合物3；

c.將化合物3溶于乙腈中，-25～0℃與氯化硫作用得到化合物4；

d.將化合物4溶于四氯化碳中，與NBS和AIBN作用得到化合物5；

e.將化合物5溶于乙醇中，與醋酸鈉作用得到化合物6；

f.將化合物6溶于異丙醇中，與氯化銅在回流條件下得到化合物7；

g.將化合物7溶于二氯甲烷中，與戴斯-馬丁氧化劑作用得到化合物8；

h.將化合物8溶于乙醇中，與鹽酸羥胺和吡啶作用得到化合物9；

i.將化合物9溶于N,N-二甲基甲酰胺中，與氯化亞砜作用得到化合物10。

(b)所述化合物R₂為H，R₁為鹵代甲基時(shí)，通過下列反應(yīng)方案實(shí)施：

將化合物7通過與R₁相應(yīng)的鹵化試劑反應(yīng)得到化合物11；所述鹵代甲基包括亞甲基氟亞甲基氯亞甲基碘所述鹵化試劑包括二乙胺基三氟化硫，氯化亞砜，碘。

(c)所述化合物R₁為氰基，R₂為羰基時(shí)，通過下列反應(yīng)方案實(shí)施

a.將化合物12溶于二氯甲烷中，在-25～0℃下與三甲基氯硅烷和亞硝酸異戊酯作用得到化合物13；

b.將化合物13溶于甲醇中，于pH≥10，在回流條件下與鹽酸羥胺作用得到化合物14；

c.將化合物14溶于乙腈中，在-25～0℃下與氯化硫作用得到化合物15；

d.將化合物15溶于四氯化碳中，與NBS和AIBN作用得到化合物16；

e.將化合物16溶于乙醇中，與醋酸鈉作用得到化合物17；

f.將化合物17溶于異丙醇中，與氯化銅在加熱條件下得到化合物18；

g.將化合物18溶于二氯甲烷中，與戴斯-馬丁氧化劑作用得到化合物19；

h.將化合物19溶于乙醇中，與鹽酸羥胺和吡啶作用得到化合物20；

i.將化合物20溶于N,N-二甲基甲酰胺中，與氯化亞砜作用得到化合物21；

j.將化合物21溶于甲基磺酸中，與DL-蛋氨酸作用得到化合物22；

(d)所述化合物R₁為氰基，R₂為甲氧基，或亞甲基氧取代芳基，或亞甲基氧取代C1-C5直鏈烷烴，或亞甲基氧取代末端溴的C1-C5直鏈烷烴，或溴取代的C1-C4稀氧基，或溴取代的C1-C3炔氧基時(shí)，通過下列反應(yīng)方案實(shí)施：

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述溶劑選自N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、二氯甲烷、水、四氯化碳、乙醇中的一種或多種。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述化合物在制備抗血吸蟲藥物中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，所述應(yīng)用是指在抗日本血吸蟲方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種抗血吸蟲的藥物組合物，所述藥物組合物含有所述的化合物。

有益效果：本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成了一類新型1，2，5-噻二唑-2氧化物類似物，具有麻痹蟲體和殺蟲作用。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，易于制備，可用于制備治療血吸蟲病的藥物，其作用效果與商業(yè)化藥物相當(dāng)，并能夠克服現(xiàn)有抗血吸蟲病藥物長(zhǎng)期用藥產(chǎn)生的抗藥性導(dǎo)致的療效差或者治療無效的現(xiàn)象。

附圖說明

圖1為本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)通式。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式中，NMR用Bruker生產(chǎn)的BrukerAVⅢ400M儀器測(cè)定，NMR定標(biāo)：δH/C 7.26/77.0ppm(CDCl₃)；質(zhì)譜用Waters 2695LC/MS液質(zhì)聯(lián)用儀；試劑主要由上?；瘜W(xué)試劑公司提供，產(chǎn)品純化主要用柱層析法，硅膠(200-300目)，柱色譜法所用的硅膠型號(hào)為粗空(ZLX－Ⅱ)，由青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)。

如未作特別說明，本發(fā)明所采用的方法和儀器等為本領(lǐng)域公知的技術(shù)。

實(shí)施例1

按如下方案制備化合物：

試劑和條件：a)三甲基氯硅烷，亞硝酸異戊酯，二氯甲烷(DCM),-20℃升至室溫(rt),保持2h；b)鹽酸羥胺，甲醇-水(V:V＝3:1)，回流(reflux),3h；c)氯化硫，吡啶，乙腈，-25℃～-5℃,1h；d)溴代丁二酰亞胺(NBS)，偶氮二異丁腈(AIBN)，CCl₄，reflux,18h；e)醋酸鈉，四丁基溴化銨，乙醇，reflux,3h；f)氯化銅，異丙醇，reflux,18h；g)戴斯馬丁氧化劑，DCM,rt,18h；h)鹽酸羥胺，乙醇，reflux,3h；i)氯化亞砜,DMF,rt,18h；

反應(yīng)步驟具體為：將1.0當(dāng)量(eq)化合物1溶于四倍體積的二氯甲烷中，降溫至-25℃，然后依次加入TMSCl(1.1eq)和亞硝酸異戊酯(1.1eq)，然后0℃攪拌0.5h，室溫?cái)嚢?h。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后旋蒸除去大部分DCM，殘留夜放置冰箱過夜，固體析出，過濾得化合物2；將鹽酸羥胺(2.0eq)溶于水中，加入氫氧化鈉(1.0eq)，然后加入化合物2(1.0eq)的甲醇溶液。加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后冷卻至0℃，過濾，固體干燥后即化合物3；將化合物3(1.0eq)溶于乙腈中，降至-25℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入吡啶(2.5eq)，然后慢慢滴加氯化硫(2.0eq)，反應(yīng)液-5℃攪拌1h。采用薄層色譜法(TLC)跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物4；將化合物4(1.0eq)溶于四氯化碳中，加入NBS(2.0eq)，AIBN(0.2eq)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)液加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物5；將化合物5(1.0eq)溶于乙醇中，加入醋酸鈉(1.5eq)和四丁基溴化銨(催化量)，然后加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)加水，乙酸乙酯萃取，干燥旋干得目標(biāo)產(chǎn)物化合物6；將化合物6(1.0eq)溶于異丙醇，加入氯化銅(0.3eq)加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)萃取，旋干，柱純化得產(chǎn)物化合物7；之后，將化合物7(1.0eq)溶于DCM，加入戴斯-馬丁氧化劑(1.2eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過抽濾、中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到淡黃色化合物8；然后將化合物8(1eq)溶于乙醇，依次加入鹽酸羥胺(1.2eq)、吡啶(1.2eq)，加料完畢后升溫至95℃回流反應(yīng)3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過旋蒸去除乙醇、酸洗、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到黃色化合物9；之后，將化合物9(1.0eq)溶于DMF，緩慢滴加SOCl₂(4.0eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑、柱層析分離等得到淡黃色化合物10。(采用本法可制備F-1)

實(shí)施例2

按如下方案制備化合物：

將化合物7溶于相應(yīng)溶劑中，與鹵化試劑反應(yīng)，TLC來跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后采用乙酸乙酯萃取、減壓濃縮反應(yīng)液除盡溶劑、柱層析(石油醚與乙酸乙酯作淋洗劑)分離等得到化合物11；其中對(duì)應(yīng)鹵化劑為二乙胺基三氟化硫(DASY)，二氯亞砜，碘；其中R₁為亞甲基氟亞甲基氯亞甲基碘

采用本方案可制備出化合物F-2，F(xiàn)-3，F(xiàn)-4，F(xiàn)-5。

實(shí)施例3

按如下方案制備化合物：

試劑和條件：a)三甲基氯硅烷，亞硝酸異戊酯，DCM,-20℃-rt,2h；b)鹽酸羥胺，甲醇-水，reflux,3h；c)氯化硫，吡啶，乙腈，-25℃--5℃,1h；d)NBS,AIBN,CCl₄，reflux,18h；e)醋酸鈉，四丁基溴化銨，乙醇，reflux，3h；f)氯化銅，異丙醇，reflux,18h；g)戴斯-馬丁氧化劑，DCM,rt,18h；h)鹽酸羥胺，乙醇，reflux,3h；i)氯化亞砜，DMF,rt,18h；j)DL-蛋氨酸，甲磺酸，60℃.

具體步驟為：將化合物12(1.0eq)溶于二氯甲烷中，降溫至-20℃，然后依次加入TMSCl(1.1eq)和亞硝酸異戊酯(1.1eq)，然后0℃攪拌0.5h，室溫?cái)嚢?h。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后旋蒸除去大部分DCM，殘留夜放置冰箱過夜，固體析出，過濾得化合物13；將鹽酸羥胺(2.0eq)溶于水中，加入氫氧化鈉(1.0eq)，然后加入化合物13(1.0eq)的甲醇溶液。加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后冷卻至0℃，過濾，固體干燥后即化合物14；將化合物14(1.0eq)溶于乙腈中，降至-25℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入吡啶(2.5eq)，然后慢慢滴加氯化硫(2.0eq)，反應(yīng)液-5℃攪拌1小時(shí)。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物15；將化合物15(1.0eq)溶于四氯化碳中，加入NBS(2.0eq)，AIBN(0.2eq)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)液加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物16；將化合物16(1.0eq)溶于乙醇中，加入醋酸鈉(1.5eq)和四丁基溴化銨(催化量)，然后加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)加水，乙酸乙酯萃取，干燥旋干得目標(biāo)產(chǎn)物化合物17；將化合物17(1.0eq)溶于異丙醇，加入氯化銅(0.3eq)加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)萃取，旋干，柱純化得產(chǎn)物化合物18；之后，將化合物18(1eq)溶于DCM，加入戴斯-馬丁氧化劑(1.2eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過抽濾、中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到淡黃色化合物19；然后將化合物19(1eq)溶于乙醇，依次加入鹽酸羥胺(1.2eq)、吡啶(1.2eq)，加料完畢后升溫至95℃回流反應(yīng)3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過旋蒸去除乙醇、酸洗、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到黃色化合物20之后，將化合物20(1eq)溶于DMF，緩慢滴加SOCl₂(4eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑、柱層析分離等得到淡黃色化合物21；將化合物21(1eq)溶于甲基磺酸中，加入的DL-蛋氨酸(1.5eq)，60℃攪拌3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后采取中和、萃取、飽和食鹽水以及無水硫酸鈉干燥，濃縮得到化合物22。采用本法可制備F-6，F(xiàn)-7，F(xiàn)-8。

實(shí)施例4

按如下方案制備化合物：

將化合物22(1.0eq)溶于DMF中，依次加入碳酸銫(1.2eq)，溴代烷烴(1.0eq)。TLC來跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后采用乙酸乙酯萃取、減壓濃縮反應(yīng)液除盡溶劑、柱層析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)分離等得到化合物23；其中R₂為3-溴-丙烷氧基4-溴-2-丁烯-1-氧基3-丙炔基芐氧基丁烷氧基

實(shí)施例5

按如下方案制備化合物：

試劑和條件：a)三甲基氯硅烷，亞硝酸異戊酯，二氯甲烷(DCM),-20℃～室溫(rt),2h；

b)鹽酸羥胺，甲醇-水，reflux,3h；c)氯化硫，吡啶，乙腈，-25℃--5℃,1h；d)NBS,AIBN,CCl₄,reflux,18h；e)醋酸鈉，四丁基溴化銨，乙醇，reflux,3h；f)氯化銅，異丙醇,，reflux,18h；g)戴斯馬丁氧化劑，DCM,rt,18h；h)鹽酸羥胺，乙醇，reflux,3h；i)氯化亞砜，DMF,rt,18h；

將化合物1(40g,0.3mol,1.0eq)溶于二氯甲烷(200mL)中，降溫至-20℃,然后依次加入TMSCl(35.6g,0.33mol,1.1eq)和亞硝酸異戊酯(38.6g,0.33mol,1.1eq)，然后0℃攪拌0.5h，室溫?cái)嚢?h。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后旋蒸除去大部分DCM，殘留夜放置冰箱過夜，固體析出，過濾得化合物2(25g,產(chǎn)率:52％)；將鹽酸羥胺(4.2g,60mmol,2.0eq)溶于水(30mL)中，加入氫氧化鈉(1.2g,30mmol,1.0eq)，然后加入化合物2(5g,30mmol,1.0eq)的甲醇(80mL)溶液。加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后冷卻至0℃，過濾，固體干燥后即化合物3(2.5g,產(chǎn)率:46％)；將化合物3(3.6g,20mmol,1.0eq)溶于乙腈(100mL)中，降至-25℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入吡啶(4mL,50mmol,2.5eq)，然后慢慢滴加氯化硫(3.2mL,40mmol,2.0eq)，反應(yīng)液-5℃攪拌1小時(shí)。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物4(1g,產(chǎn)率:26％)；將化合物4(500mg,2.6mmol,1.0eq)溶于四氯化碳中(10mL)，加入NBS(460mg,5.2mmol,2.0eq)，AIBN(400mg,2.6mmol,0.2eq)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)液加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物5(500mg，產(chǎn)率:71％)；將化合物5(500mg,1.84mmol,1.0eq)溶于乙醇(10mL)中，加入醋酸鈉(375mg,2.76mmol,1.5eq)和四丁基溴化銨(50mg)，然后加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)加水，乙酸乙酯萃取，干燥旋干得目標(biāo)產(chǎn)物化合物6(350mg,產(chǎn)率:76％)；將化合物6(250mg,1.0mmol,1.0eq)溶于異丙醇(5mL)，加入氯化銅(40mg,0.3mmol,0.3eq)加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)萃取，旋干，柱純化得產(chǎn)物化合物7(100mg,產(chǎn)率:48％)；之后，將化合物7(2.1g,10mmol,1eq)溶于DCM(50mL)，加入戴斯-馬丁氧化劑(5g,12mmol,1.2eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過抽濾、中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到淡黃色化合物8(2.1g,產(chǎn)率:100％)；然后將化合物8(2.1g,10

mmol,1eq)溶于乙醇(25mL)，依次加入鹽酸羥胺(0.9g,13mmol,1.2eq)、吡啶(1.0mL,13mmol,1.2eq)，加料完畢后升溫至95℃回流反應(yīng)3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過旋蒸去除乙醇、酸洗、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到黃色化合物9(1g，產(chǎn)率:44％)；之后，將化合物9(2.2g,10mmol,1eq)溶于DMF(25mL)，緩慢滴加SOCl₂(5mL)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑、柱層析分離等得到化合物10，命名為F-1(0.8g,產(chǎn)率40％)。

表2

實(shí)施例6

按如下方案制備化合物：

將化合物7(100mg,0.485mmol,1.0eq)溶于5mL DCM中，加入一滴甲醇，降至0℃，慢慢加入DAST(625mg,3.88mmol,8.0eq)。加完后此溫度下攪拌1h。點(diǎn)板顯示反應(yīng)完畢。加水淬滅，DCM萃取。柱純化得化合物F-2(70mg,產(chǎn)率：69％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:5.41(s,1H),5.53(s,1H),7.52-7.57(m,3H),7.79-7.84(m,2H).

以對(duì)應(yīng)的方法合成表3所示化合物：

表3

實(shí)施例7

按如下方案制備化合物：

試劑和條件：a)三甲基氯硅烷，亞硝酸異戊酯，DCM，-20℃-rt,2h；b)鹽酸羥胺，甲醇-水，reflux,3h；c)氯化硫，吡啶，乙腈，-25℃--5℃,1h；d)NBS,AIBN,CCl₄,reflux,18h；e)醋酸鈉，四丁基溴化銨，乙醇，reflux,3h；f)氯化銅，異丙醇，reflux,18h；g)戴斯馬丁氧化劑，DCM,rt,18h；h)鹽酸羥胺，乙醇，reflux,3h；i)氯化亞砜，DMF,rt,18h；j)DL-蛋氨酸，甲磺酸，60℃.

將化合物12(49g,0.3mol,1.0eq)溶于二氯甲烷(200mL)中，降溫至-20℃，然后依次加入TMSCl(35.6g,0.33mol,1.1eq)和亞硝酸異戊酯(38.6g,0.33mol,1.1eq)，然后0℃攪拌0.5h，室溫?cái)嚢?h。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后旋蒸除去大部分DCM，殘留夜放置冰箱過夜，固體析出，過濾得化合物13(25g,產(chǎn)率:43％)；將鹽酸羥胺(4.2g,60mmol,2.0eq)溶于水(30mL)中，加入氫氧化鈉(1.2g,30mmol,1.0eq)，然后加入化合物13(5.8g,30mmol,1.0eq)的甲醇(80mL)溶液。加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后冷卻至0℃，過濾，固體干燥后即化合物14(2.5g,產(chǎn)率:40％)；將化合物14(4.2g,20mmol,1.0eq)溶于乙腈(100mL)中，降至-25℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加入吡啶(4mL,50mmol,2.5eq)，然后慢慢滴加氯化硫(3.2mL,40mmol,2.0eq)，反應(yīng)液-5℃攪拌1小時(shí)。TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物15(1.5g,產(chǎn)率:34％)；將化合物15(577mg,2.6mmol,1.0eq)溶于四氯化碳中(10mL)，加入NBS(460mg,5.2mmol,2.0eq)，AIBN(400mg,2.6mmol,0.2eq)，氮?dú)獗Ｗo(hù)，反應(yīng)液加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過濾，旋蒸，柱純化得到化合物16(500mg,產(chǎn)率:62％)；

將化合物16((554mg,1.84mmol,1.0eq)溶于乙醇(10mL)中，加入醋酸鈉(375mg,2.76mmol,1.5eq)和四丁基溴化銨(50mg)，然后加熱回流3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)加水，乙酸乙酯萃取，干燥旋干得目標(biāo)產(chǎn)物化合物17(450mg,產(chǎn)率:87％)；將化合物17(280mg,1.0mmol,1.0eq)溶于異丙醇(5mL)，加入氯化銅(40mg,0.3mmol,0.3eq)加熱回流過夜，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)萃取，旋干，柱純化得產(chǎn)物化合物18(140mg,產(chǎn)率:59％)；之后，將化合物18(2.4g,10mmol,1eq)溶于DCM(50mL)，加入戴斯-馬丁氧化劑(5g,12mmol,1.2eq)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過抽濾、中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到淡黃色化合物19(2.4g,產(chǎn)率:100％)；然后將化合物19(2.4g,10mmol,1eq)溶于乙醇(25mL)，依次加入鹽酸羥胺(0.9g,13mmol,1.2eq)、吡啶(1.0mL,13mmol,1.2eq)，加料完畢后升溫至95℃回流反應(yīng)3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過旋蒸去除乙醇、酸洗、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑得到黃色化合物20(1.5g,產(chǎn)率:60％)；之后，將化合物20(2.5g,10mmol,1eq)溶于DMF(25mL)，緩慢滴加SOCl₂(5mL)，在常溫下攪拌過夜反應(yīng)，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后經(jīng)過中和、萃取、旋蒸濃縮去除溶劑、柱層析分離等得到化合物21(1.2g,產(chǎn)率:52％)；將化合物21(233mg,1mmol,1eq)溶于甲基磺酸(2mL)中，加入的、DL-蛋氨酸(223mg,1.5mmol,1.5eq)，60℃攪拌3h，TLC跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后采取中和、萃取、飽和食鹽水以及無水硫酸鈉干燥，濃縮得到化合物22(100mg,產(chǎn)率:46％)。

表4

實(shí)施例8

按如下方案制備化合物：

將化合物22(50mg,0.23mmol,1.0eq)溶于2mL DMF中，依次加入碳酸銫(91mg,0.28mmol,1.2eq)，溴代正丁烷(31.5mg,0.23mmol,1.0eq)。加熱至40℃攪拌，TLC來跟蹤測(cè)定反應(yīng)的完成程度，反應(yīng)完畢后往反應(yīng)液中加50mL乙酸乙酯，用水反萃DMF，收集有機(jī)相濃縮得到粗品，柱層析分離(PE:EA＝10：1至4：1)得到化合物F-11。(30mg,產(chǎn)率：48％)¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:1.0(t,J＝8.0Hz,3H),1.49-1.57(m,2H),1.78-1.83(m,2H),4.05(t,J＝6.0Hz,2H),7.05(d,J＝8.0Hz,2H),7.85(d,J＝8.0Hz,2H).

采用相同的方法合成以下化合物：

表5

實(shí)施例9

使用100％的二甲基亞砜(購(gòu)自上海生工生物有限公司)溶解實(shí)驗(yàn)所需樣品藥物濃度，配成10mM的儲(chǔ)存液，使用RPMI 1640培養(yǎng)基(購(gòu)于GIBCO公司)稀釋成4個(gè)濃度(即10，25，50，100μM)，并以商業(yè)化產(chǎn)品吡喹酮(Praziquantel，PZQ，購(gòu)于Sigma公司)，和與本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)相似的作為實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥物，在相同條件下檢測(cè)每種化合物對(duì)體外培養(yǎng)的血吸蟲的殺傷作用。

日本血吸蟲尾蚴(江蘇株)自人工感染的釘螺逸出，血吸蟲感染性釘螺由江蘇省血吸蟲病防治研究所釘螺室提供。ICR小鼠，體重20～22g，購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心。每只小鼠經(jīng)腹部感染日本血吸蟲尾蚴50條后，35d后剖殺小鼠，經(jīng)門靜脈灌注收集成蟲。

血吸蟲成蟲用普通的RPMI 1640培養(yǎng)基沖洗干凈后，立即轉(zhuǎn)移到裝有培養(yǎng)基的24孔板中，培養(yǎng)基成份為RPMI 1640,含20mM HEPES(PH 7.5)，青霉素100IU/mL，鏈霉素100μg/L，10％胎牛血清(Gibco),體積為2ml。每孔加入兩對(duì)雌雄合抱的成蟲，或者兩條雌蟲和兩條雄蟲。在含5％CO₂的37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)30～60min后，加入濃度分別為10，25，50，100μM化合物，以RPMI 1640(購(gòu)于GIBCO公司)，1％二甲基亞砜DMSO(購(gòu)自上海生工生物有限公司)陰性對(duì)照，分別于24、48、72h觀察蟲體活力及死亡情況。其中，RPMI1640為不加任何藥物和溶劑的陰性對(duì)照；1％DMSO為10mM的藥物儲(chǔ)存液用RPMI 1640稀釋為四個(gè)濃度時(shí)最高的DMSO濃度，即在RPMI 1640中DMSO的濃度為1％的溶劑對(duì)照；PZQ為吡喹酮，其在RPMI 1640中處于不同濃度時(shí)對(duì)成蟲的殺傷作用，作為陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)2～3次。

蟲體活力減輕程度，輕度即為蟲體活力與對(duì)照相比稍減輕，蟲體攣縮，蟲體內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰可見；重度即為蟲體基本無活動(dòng)，僅有吸盤蠕動(dòng)，蟲體膨大，內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊；蟲體死亡定義為觀察2min內(nèi)蟲體無活動(dòng)，伴有形態(tài)學(xué)改變：蟲體膨大，表皮有散在的空泡，內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊等。

表6不同化合物對(duì)日本血吸蟲體外殺傷作用

體外殺蟲試驗(yàn)結(jié)果(表6)表明本發(fā)明化合物對(duì)日本血吸蟲具有良好的殺傷作用，在藥物濃度為25μM時(shí)，本發(fā)明中化合物F1給藥48小時(shí)后血吸蟲殺滅率達(dá)87.5％，濃度為100μM時(shí)殺滅率達(dá)100％，比已報(bào)道的化合物1,2,5-噁二唑的體外殺蟲活性具有良好的優(yōu)勢(shì)，并且明顯高于已成藥化合物PZQ。

雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。