本發(fā)明涉及一種馬錢(qián)子堿提取方法。
背景技術(shù)：
風(fēng)濕馬錢(qián)片具有顯著的祛風(fēng)、除濕、鎮(zhèn)痛作用，標(biāo)本兼治，能迅速緩解和改善風(fēng)濕、類風(fēng)濕和坐骨神經(jīng)痛癥狀。處方中馬錢(qián)子粉為主要成分，馬錢(qián)子中生物堿的種類較多，各類生物堿的理化性質(zhì)差異較小，分離困難。馬錢(qián)子的主要成分是馬錢(qián)子堿和士的寧。馬錢(qián)子堿具有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫的功效。
中藥樣品基體復(fù)雜，前處理手段必不可少。固相萃取是一項(xiàng)結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過(guò)程的分離技術(shù)，具有分離效率高、處理樣品容量大、有機(jī)溶劑耗用量小等優(yōu)點(diǎn)，成為近年來(lái)應(yīng)用較多的中藥前處理方法，中藥制劑中的馬錢(qián)子堿具有一定的藥理作用，但測(cè)定過(guò)程中其他成分干擾嚴(yán)重，不能準(zhǔn)確對(duì)其進(jìn)行定性定量分析。傳統(tǒng)方法采用液液萃取法分離馬錢(qián)子堿，步驟
繁瑣且條件不宜控制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出一種簡(jiǎn)單、精確、快速地分離風(fēng)濕馬錢(qián)片中的馬錢(qián)子堿的方法。
本發(fā)明一種馬錢(qián)子堿提取方法，包括以下步驟：
（1）取風(fēng)濕馬錢(qián)片，用50％的乙醇除去包衣，研磨成粉末；
（2）稱粉末3g，用濾紙包好放入150 mL的索氏提取器中；
（3）取70mL的石油醚置于圓底燒瓶中，加熱回流3小時(shí)，取出粉末真空烘干，然后放冷后置于索式提取器中，
（4）取60mL氯仿置圓底燒瓶中，加熱回流3h，重復(fù)2次；
（5）合并氯仿提取液，旋蒸，用純甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到容量瓶中，定容到刻度；
（6）用微孔濾膜過(guò)濾，取濾液，即得粗提品；
（7）取粗提品，轉(zhuǎn)移到預(yù)洗過(guò)的PXC柱上待凈化，分別使用5mL體積分?jǐn)?shù)為10％的甲醇淋洗，真空抽干，用5mL含5％氨水的70％的甲醇洗脫，烘干餾出液，得到馬錢(qián)子堿。
優(yōu)選地，所述步驟（3）中的烘干溫度為30℃，時(shí)長(zhǎng)為25分鐘。
優(yōu)選地，所述PXC柱為60mg，3mL。
本方所述一種馬錢(qián)子堿提取方法，步驟簡(jiǎn)單可精確、快速地分離風(fēng)濕馬錢(qián)片中的馬錢(qián)子堿，純化處理后采用高效液相色譜法測(cè)定馬錢(qián)子堿的含量高達(dá)75%。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明一種馬錢(qián)子堿提取方法，包括以下步驟：
（1）取風(fēng)濕馬錢(qián)片，用50％的乙醇除去包衣，研磨成粉末；
（2）稱粉末3g，用濾紙包好放入150 mL的索氏提取器中；
（3）取70mL的石油醚置于圓底燒瓶中，加熱回流3小時(shí)，取出粉末真空烘干，然后放冷后置于索式提取器中，
（4）取60mL氯仿置圓底燒瓶中，加熱回流3h，重復(fù)2次；
（5）合并氯仿提取液，旋蒸，用純甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到容量瓶中，定容到刻度；
（6）用微孔濾膜過(guò)濾，取濾液，即得粗提品；
（7）取粗提品，轉(zhuǎn)移到預(yù)洗過(guò)的PXC柱上待凈化，分別使用5mL體積分?jǐn)?shù)為10％的甲醇淋洗，真空抽干，用5mL含5％氨水的70％的甲醇洗脫，烘干餾出液，得到馬錢(qián)子堿。
優(yōu)選地，所述步驟（3）中的烘干溫度為30℃，時(shí)長(zhǎng)為25分鐘。
優(yōu)選地，所述PXC柱為60mg，3mL。
分別精密量取1 mL制備好的風(fēng)濕馬錢(qián)片供試品溶液，轉(zhuǎn)移到預(yù)洗過(guò)的小柱、炭黑小柱、自制MIP分子印跡填充小柱、PXC小柱上待凈化，分別使用5mL的水淋洗，真空抽干，用5 mL含5％氨水的70％的甲醇洗脫，烘干流出液，用2 mL甲醇溶液定容，進(jìn)樣測(cè)定。對(duì)比回收率，小柱為50.3%、炭黑小柱10.9%、自制MIP分子印跡填充小柱90.3%、PXC小柱97.3%。
精密量取1mL樣品，轉(zhuǎn)移到已活化好的PXC小柱上，然后分別用5％～100％的甲醇水溶液淋洗，分析檢測(cè)流出液中的馬錢(qián)子堿，甲醇水溶液體積分?jǐn)?shù)為30％時(shí)，淋洗液會(huì)將馬錢(qián)子堿洗出，而體積分?jǐn)?shù)低于10％時(shí)，馬錢(qián)子堿完全沒(méi)有流出。將淋洗液設(shè)定為10％的甲醇水溶液，可以最大限度地去除弱于馬錢(qián)子堿的干擾物。
取樣品按照確定好的固相萃取條件凈化后檢測(cè)，固相萃取凈化前在馬錢(qián)子堿主峰前有一個(gè)雜質(zhì)峰嚴(yán)重干擾馬錢(qián)子堿的準(zhǔn)確測(cè)定，固相萃取后的樣品有效消除了雜質(zhì)干擾，且馬錢(qián)子堿的回收率為94％。