1.一種雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針,其特征在于,該熒光探針的結(jié)構(gòu)式如下:
式中,n=2、3或4。
2.一種雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)首先在保護氣氛下,將芘磺?;苌锏腘-甲基吡咯烷酮溶液加入到苝酐的N-甲基吡咯烷酮溶液中,再加入無水醋酸鋅,得到混合溶液;其中芘磺?;苌锖推p酐的摩爾比為(2~4):1;
2)步驟1)得到的混合溶液在攪拌條件下并在150~200℃下加熱回流10~15h,待加熱回流得到的反應(yīng)液冷卻到室溫后,過濾得濾液;濾液經(jīng)酸洗出現(xiàn)沉淀,抽濾得到濾餅,將濾餅洗滌干燥后,得到雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,芘磺酰基衍生物的制備步驟具體包括:
a)在保護氣氛及冰浴條件下,將芘磺酰氯的三氯甲烷溶液滴加到二氨基含氧烷烴的三氯甲烷溶液中,滴加完畢后,室溫攪拌反應(yīng)2~8h;
b)反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)液洗滌并干燥,再依次酸洗、堿洗和萃取,得到有機層,旋干,制得結(jié)構(gòu)式如下的芘磺?;苌铮?/p>
式中,n=2、3或4。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,步驟a)中芘磺酰氯與二氨基含氧烷烴的摩爾比為1:(5~10),二氨基含氧烷烴為1,8-二氨基-3,6-二氧辛烷、3,6,9-三氧雜十一烷-1,11-二胺或3,6,9,12-四氧雜十六烷-1,16-二胺;步驟b)中的洗滌是用飽和食鹽水洗6~7次,干燥是用無水硫酸鈉干燥過夜,酸洗是采用1mol/L鹽酸洗滌,堿洗是采用3mol/L氫氧化鈉水溶液進行洗滌。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,步驟a)中,調(diào)節(jié)滴加速度為5~8s/滴。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,保護氣氛采用氮氣、氬氣或氖氣,保護氣氛的流速為0.5~0.8mL/s。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,步驟1)中,無水醋酸鋅的添加量為苝酐摩爾量的0.65~2倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,步驟2)中,酸洗是將濾液滴加到2mol/L的鹽酸溶液中,產(chǎn)生沉淀。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針的合成方法,其特征在于,酸洗后抽濾得到的濾餅依次用甲醇及二次水淋洗;濾餅洗滌干燥后經(jīng)過洗脫劑進行過柱分離純化,其中洗脫劑采用二氯甲烷、甲醇和三乙胺按體積比為(20~60):1:1配成的混合溶劑。
10.如權(quán)利要求1所述的雙芘修飾苝酰亞胺衍生物熒光探針在檢測蛋白質(zhì)中的應(yīng)用,其特征在于,所述的蛋白質(zhì)包括胃蛋白酶、牛血清蛋白、卵清蛋白、β-乳球蛋白、鐵蛋白、肌紅蛋白、血紅蛋白和細胞色素c。