本發(fā)明涉及植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，進(jìn)一步涉及植物細(xì)胞的營養(yǎng)條件設(shè)計(jì)，具體涉及一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是以離體植物細(xì)胞或原生質(zhì)體為對象，以細(xì)胞量擴(kuò)增和目標(biāo)代謝產(chǎn)物累積為目的的培養(yǎng)工藝。對于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細(xì)胞培養(yǎng)而言，其主要工藝環(huán)節(jié)不僅在于細(xì)胞量的擴(kuò)增，同時(shí)，目標(biāo)代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)合成對培養(yǎng)效益更為重要。在植物細(xì)胞的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)條件和營養(yǎng)條件是影響產(chǎn)量的最重要因素，其中培養(yǎng)條件是指溫度、溶氧、光照、pH等環(huán)境條件的控制，而營養(yǎng)條件主要指植物細(xì)胞的培養(yǎng)基。由于在封閉培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)基是植物細(xì)胞的唯一營養(yǎng)來源，因此培養(yǎng)基的成分對植物細(xì)胞的生長水平、代謝產(chǎn)物類別具有極其重要的影響，尤其對于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細(xì)胞培養(yǎng)而言，培養(yǎng)基往往是影響培養(yǎng)效率的關(guān)鍵因素。

紅景天屬景天科多年生草本植物，是重要藏藥藥用植物之一.主要產(chǎn)于我國西藏、云南、四川等高海拔地區(qū)。體內(nèi)含特有的紅景天甙、酪醇等多種化合物，紅景天甙具有抗疲勞、抗衰老、抗微波輻射、抗病毒及抗腫瘤等顯著功效。近幾年研究還發(fā)現(xiàn)，紅景天甙在軍事醫(yī)學(xué)、航天醫(yī)學(xué)及運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)上亦具有十分重要的價(jià)值。但由于我國的野生紅景天資源十分有限，紅景天又多生長在海拔較高地區(qū)，常常難以得到較多的繁殖材料，加之長期的掠奪性采挖及在引種時(shí)根莖腐爛現(xiàn)象十分嚴(yán)重，使得紅景天已成為瀕危物種。因此，紅景天的就地保存和遷地保存都變得較為困難。離體培養(yǎng)技術(shù)在植物種質(zhì)收集擴(kuò)增和中短期保存起到了很大作用，但受制于培養(yǎng)技術(shù)相對滯后，尤其是紅景天細(xì)胞營養(yǎng)供給體系設(shè)計(jì)不夠合理，使得紅景天離體細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)條件下生長較為緩慢、紅景天甙產(chǎn)量較低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有技術(shù)中紅景天細(xì)胞培養(yǎng)效果不佳的技術(shù)問題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)的紅景天細(xì)胞培養(yǎng)過程中紅景天甙產(chǎn)量較低。

為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸5～10mg/L，維生素C 0.5～1mmol/L，苯丙氨酸10～50mg/L，肉桂酸10～50mg/L，水楊酸0.1～1mg/L，蛋白胨200～500mg/L，水楊酸0.1mg/L。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的過崗龍壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的含羞草壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的焊菜壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的河白草壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，過崗龍壓榨汁1g/L，含羞草壓榨汁1g/L，焊菜壓榨汁1g/L，河白草壓榨汁1g/L。

在以上技術(shù)方案中，所述MS培養(yǎng)基可以依據(jù)本領(lǐng)域的一般技術(shù)常識進(jìn)行配制，當(dāng)然也可以采用以下具體配方的MS培養(yǎng)基：NH₄NO₃ 1650mg/L，KNO₃ 1900mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 27.8mg/L，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，煙酸0.5mg/L，維生素B6 0.5mg/L，維生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。

在以上技術(shù)方案中，過崗龍、含羞草、焊菜、河白草分別指其新鮮全草。本發(fā)明中所述的壓榨汁，是指利用物理方法獲取的各原料的新鮮汁液，包括但不限于壓榨、粉碎離心等常規(guī)方法。

本發(fā)明提供了一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該技術(shù)方案針對紅景天細(xì)胞代謝特性改進(jìn)了其營養(yǎng)條件，在MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加了6-BA、NAA、BA、IBA等植物激素，以其作為合成培養(yǎng)基中誘導(dǎo)子及前體物質(zhì)，促進(jìn)了紅景天細(xì)胞的甙類物質(zhì)分泌量，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步添加了一定量的天然藥物使得紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)效果得到了進(jìn)一步提升。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)利用本發(fā)明合成培養(yǎng)基對紅景天細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后紅景天甙分泌量顯著提升，同時(shí)能夠在一定程度增進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)密度。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)改進(jìn)實(shí)現(xiàn)了良好的技術(shù)效果，同時(shí)成本較低、易于實(shí)現(xiàn)，因此具有良好的退推廣前景。

具體實(shí)施方式

以下將對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實(shí)施例1

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸5mg/L，維生素C 0.5mmol/L，苯丙氨酸10mg/L，肉桂酸10mg/L，水楊酸0.1mg/L，蛋白胨200mg/L，水楊酸0.1mg/L。

實(shí)施例2

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸10mg/L，維生素C 1mmol/L，苯丙氨酸50mg/L，肉桂酸50mg/L，水楊酸1mg/L，蛋白胨500mg/L，水楊酸0.1mg/L。

實(shí)施例3

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，過崗龍壓榨汁1g/L。

實(shí)施例4

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，含羞草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例5

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，焊菜壓榨汁1g/L。

實(shí)施例6

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，河白草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例7

一種用于紅景天細(xì)胞的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時(shí)還含有植物激素6-BA 1mg/L，植物激素NAA 2mg/L，植物激素BA 3mg/L，植物激素IBA 1mg/L，酪氨酸7mg/L，維生素C 0.8mmol/L，苯丙氨酸30mg/L，肉桂酸30mg/L，水楊酸0.6mg/L，蛋白胨350mg/L，水楊酸0.1mg/L，過崗龍壓榨汁1g/L，含羞草壓榨汁1g/L，焊菜壓榨汁1g/L，河白草壓榨汁1g/L。

實(shí)施例8

本實(shí)施例用于評價(jià)以上實(shí)施例1～7所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時(shí)對紅景天細(xì)胞中紅景天甙產(chǎn)量的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

表1不同培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時(shí)對紅景天細(xì)胞中紅景天甙產(chǎn)量的影響

由此可見，利用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基培養(yǎng)紅景天細(xì)胞時(shí)，對其紅景天甙產(chǎn)量具有確切的促進(jìn)作用。

以上對本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。