本發(fā)明屬于生物技術(shù)及飼料加工領(lǐng)域，具體涉及一種魚蛋白小肽螯合鋅的制備方法。技術(shù)背景鋅是動(dòng)物必須的微量元素之一，以骨骼、肝臟、毛皮等組織器官含量最高。鋅與體內(nèi)的300多種酶和功能蛋白組成有關(guān)。鋅的種類有無機(jī)鋅、有機(jī)鋅、螯合鋅，第一代補(bǔ)鋅劑，硫酸鋅等無機(jī)試劑，對胃腸有刺激作用，生物學(xué)效價(jià)較低。第二代補(bǔ)鋅劑，葡萄糖酸鋅、乳酸鋅等，其性能優(yōu)于第一代鋅補(bǔ)劑，而第三次補(bǔ)鋅劑是氨基酸螯合鋅和多肽螯合鋅，研究表明，所有螯合鋅能以肽/氨基酸的形式被吸收，其結(jié)構(gòu)中的金屬離子能直接通過腸絨毛，以胞飲形式被吸收。螯合物還能直接通過細(xì)胞膜，以載體的形式促進(jìn)微量元素的吸收和利用，其生物利用率高于無機(jī)鋅和有機(jī)鋅，并能有效促進(jìn)動(dòng)物生長。添加到飼料中適口性好，還具有抗應(yīng)激和抗病能力，還能減少環(huán)境污染。小肽的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)和氨基酸相比，具有耗能低、轉(zhuǎn)運(yùn)速度快和不易被飽和的特點(diǎn)，可提高氨基酸的利用率，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和礦物質(zhì)元素的吸收等。因此，鋅與小肽螯合物是一種補(bǔ)鋅的功能性營養(yǎng)強(qiáng)化劑。我國海水養(yǎng)殖產(chǎn)量居世界前列，產(chǎn)生大量的魚皮，魚骨，魚內(nèi)臟等下腳料，含有較高的蛋白質(zhì)，直接丟棄不僅污染環(huán)境，而且造成資源嚴(yán)重浪費(fèi)；通過資源合理化高值利用，利用酶解技術(shù)將得到的魚蛋白小肽與鋅在一定條件下進(jìn)行螯合，制備出的魚蛋白小肽螯合鋅可以不僅可以補(bǔ)充動(dòng)物需要的氨基酸和鋅，還可以大大提高魚下腳料的附加值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有工藝制備螯合鋅，螯合過程不易控制，螯合時(shí)間長，螯合率低的問題。本發(fā)明提供了一種魚蛋白小肽螯合鋅的制備方法，采用超聲處理，制備工藝步驟簡單，能有效控制螯合過程，螯合時(shí)間短，操作簡便，螯合率高。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)手段：一種魚蛋白小肽螯合鋅的制備方法，包括如下步驟：（1）將魚蛋白小肽溶于水中后，將pH調(diào)節(jié)至5.0~5.5，得小肽溶液；在pH5.0~5.5時(shí)，魚蛋白小肽螯合鋅螯合率較高；（2）在小肽溶液中加入鋅鹽，充分溶解，升溫至30~40°C，超聲反應(yīng)15-20min得反應(yīng)液，其中鋅鹽中的Zn2+與魚蛋白小肽的質(zhì)量比為1:2~1:3;（3）將反應(yīng)液過濾后濃縮至原體積的30%~50%，噴霧干燥后得魚蛋白小肽螯合鋅；（4）小肽鋅螯合率的計(jì)算：準(zhǔn)確移取螯合鋅濃縮液10ml于100ml容量瓶中，定容，搖勻。用EDTA絡(luò)合滴定法測定微量元素的總量。另移取螯合鋅濃縮液10ml于100ml燒杯中，加熱濃縮至干。加入50ml無水乙醇，充分?jǐn)嚢韬箅x心分離，將沉淀用水溶解后定容，搖勻。采用EDTA滴定法測定螯合態(tài)微量元素的含量。EDTA滴定法：準(zhǔn)確移取25ml試液于250ml錐形瓶中，加入50ml水，滴加2~3滴二甲酚橙作指示劑，用0.02mol/lEDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液顏色由紫紅變?yōu)榱咙S色即為滴定終點(diǎn)。螯合率/%=×100=（CV1/CV0）×100=（CV1/CV0）×100C-EDTA溶液的濃度，mol/l；V1-滴定螯合鋅所消耗的EDTA溶液體積，ml；V0-滴定鋅的總量所消耗的EDTA溶液體積，ml；進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了上述制備方法的優(yōu)選條件，如優(yōu)選步驟（1）小肽溶液中魚蛋白小肽的質(zhì)量百分含量為20%~30%。所述的優(yōu)選步驟（2）鋅鹽為氯化鋅或硫酸鋅。所述的優(yōu)選步驟（2）超聲條件為超聲時(shí)間5-10秒，間隙時(shí)間2-5秒，超聲功率100~400W，利用超聲處理有利于螯合液中魚蛋白小肽與Zn2+的充分接觸，均勻混合，大大提高螯合速率與螯合物的得率。本發(fā)明的第一目的在于保護(hù)上述制備方法得到的魚蛋白小肽螯合鋅，可借助小肽的吸收特點(diǎn)和機(jī)制以螯合物整體的形式通過小腸被主動(dòng)吸收，可促進(jìn)鋅的吸收，并增強(qiáng)體內(nèi)酶的活性，增強(qiáng)抗病免疫力等。本發(fā)明的第二目的在于保護(hù)上述魚蛋白小肽螯合鋅作為飼料添加劑的應(yīng)用，由于采用小肽螯合技術(shù)，對胃腸無刺激，能夠有利于動(dòng)物吸收，可作為動(dòng)物功能營養(yǎng)補(bǔ)鋅劑應(yīng)用于動(dòng)物飼料中。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：制備工藝步驟簡單，能有效控制螯合過程，螯合時(shí)間短，操作簡便，螯合率高。具體實(shí)施方式實(shí)施例1（1）將魚蛋白小肽溶解后，調(diào)節(jié)pH至5.0~5.5，得小肽溶液，小肽溶液的質(zhì)量百分含量為20%。（2）在小肽溶液中加入氯化鋅，氯化鋅與小肽溶液的質(zhì)量比為1:2，充分溶解，升溫至35°C，超聲反應(yīng)15min，超聲條件超聲時(shí)間為5秒，間隙時(shí)間2秒，超聲功率70%。（3）將反應(yīng)液過濾后濃縮至原體積的40%，噴霧干燥后得魚蛋白小肽螯合鋅。經(jīng)檢測，本實(shí)施例中魚蛋白小肽螯合鋅的螯合率為98.2%，鋅含量為15.7%。按照楊會(huì)成《一種魚皮膠原蛋白多肽螯合鋅的制備工藝》中的制備方法測得的魚皮膠原蛋白多肽與鋅的螯合率為85.4%。采用本專利方法比文獻(xiàn)報(bào)道的螯合鋅得率高。實(shí)施例2小肽螯合鋅補(bǔ)鋅效果研究做小鼠缺鋅模型，硫酸鋅組、葡萄糖酸鋅、小肽螯合鋅每天給藥量為7.00mgZn/kg.bw，連續(xù)灌胃14天。與缺鋅組相比，小肽鋅組具有顯著差異，在補(bǔ)鋅劑量相同條件下，小鼠血清鋅含量，小肽鋅組>葡萄糖酸鋅組>硫酸鋅組。表1小肽螯合鋅補(bǔ)鋅效果研究組別缺鋅組小肽鋅組葡萄糖酸鋅組硫酸鋅組鋅含量（μg/g）28.92±1.3737.09±0.52**34.30±1.2232.51±1.53注：與缺鋅組相比，*p<0.05，**p<0.01。實(shí)施例3小肽螯合鋅抗氧化效果研究做小鼠缺鋅模型，硫酸鋅組、葡萄糖酸鋅、小肽螯合鋅每天給藥量為7.00mgZn/kg.bw，連續(xù)灌胃14天。測定小鼠肝組織中總抗氧化能力。與缺鋅組相比，小肽鋅組具有顯著差異，在補(bǔ)鋅劑量相同條件下，小鼠肝臟總抗氧化能力的大小順序?yàn)?，小肽鋅組>葡萄糖酸鋅組>硫酸鋅組。說明在補(bǔ)鋅劑量相同的條件下，小肽鋅優(yōu)于葡萄糖酸鋅和硫酸鋅。表2小肽螯合鋅抗氧化效果研究總抗氧化能力缺鋅組小肽鋅組葡萄糖酸鋅組硫酸鋅組U/mg0.438±0.0450.951±0.042**0.496±0.0520.485±0.054注：與缺鋅組相比，*p<0.05，**p<0.01。當(dāng)前第1頁1 2 3