本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種含多肽靶向因子的多糖衍生物及其制備方法。

背景技術(shù)：

多糖是一類由不同糖單元通過糖苷鍵連接而成的天然高分子，它廣泛地存在于自然界中，安全無(wú)毒，具有非常好的生物相容性和生物降解性，所以，多糖在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域備受關(guān)注，顯示出較好的應(yīng)用前景和研究?jī)r(jià)值。目前研究較為廣泛的多糖包括淀粉葡聚糖、纖維素、殼聚糖、海藻酸鈉、透明質(zhì)酸等。多糖鏈上含有羥基、氨基、羧基等活性官能團(tuán)，通過化學(xué)反應(yīng)可合成出不同結(jié)構(gòu)及功能的多糖衍生物，這樣更加能夠提升多糖在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。例如在藥物和基因傳輸領(lǐng)域多糖衍生物可用作載體以提高治療效果，在組織工程領(lǐng)域多糖衍生物可作為支架材料促進(jìn)組織或器官的形成。（Yifen W., et al, Macromolecular Rapid Communications, 2014, 35, 1819?1832）。

近年來(lái)，多糖的陽(yáng)離子化改性引起了人們廣泛的研究興趣。這是因?yàn)樯矬w中細(xì)胞表面帶有負(fù)電荷，陽(yáng)離子化后的多糖呈正電荷，可以通過靜電相互作用進(jìn)入細(xì)胞。根據(jù)這一特性，陽(yáng)離子多糖可作為載體將藥物或基因運(yùn)入細(xì)胞體內(nèi)，從而起到治療疾病的作用（如專利：一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及其在增強(qiáng)血卟啉類光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用，公開號(hào)：CN105949344A）。為了增強(qiáng)藥物或基因載體對(duì)病灶部位的靶向運(yùn)輸性能，通常在多糖衍生物載體上偶聯(lián)靶向因子基團(tuán)，通過靶向因子基團(tuán)與病灶組織細(xì)胞中受體存在特異性的識(shí)別作用，而增強(qiáng)多糖衍生物對(duì)病灶部位的靶向運(yùn)輸性能。例如，在癌細(xì)胞中葉酸受體普遍過度表達(dá)，所以，含葉酸靶向因子的葡聚糖衍生物可以通過葉酸基團(tuán)與癌細(xì)胞上的葉酸受體的特異性結(jié)合而體現(xiàn)出對(duì)癌細(xì)胞靶向作用（Nakamura J., et al, Anticancer Research, 2010, 30, 903?910）。此外，由于一些病灶組織細(xì)胞中存在過度表達(dá)的蛋白受體，因此，可尋找一些多肽作為這些蛋白受體的靶向因子，將其偶聯(lián)到多糖鏈上，合成含有多肽靶向因子的陽(yáng)離子多糖衍生物，以獲得更好的病灶部位靶向運(yùn)輸性能。

然而，由于多肽和多糖均為具有生物活性的物質(zhì)，且多肽和多糖的性質(zhì)差異，合成含有多肽靶向因子的多糖衍生物后，往往會(huì)破壞多肽和多糖的活性，無(wú)法實(shí)現(xiàn)預(yù)期目標(biāo)，因此，探尋一種特殊合適的方法合成含有多肽靶向因子的多糖衍生物，使得多肽和多糖的活性不被破壞，具有重要的意義。而目前現(xiàn)有技術(shù)中未見有相關(guān)研究報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有含有多肽靶向因子的多糖衍生物合成技術(shù)的缺陷和不足，提供一種含有多肽靶向因子的多糖衍生物的制備方法，所制備得到的含多肽靶向因子的多糖衍生物可以作為藥物或基因傳輸載體，以增強(qiáng)多糖衍生物對(duì)病灶部位的靶向運(yùn)輸性能。

本發(fā)明的目的是提供一種含多肽靶向因子的多糖衍生物。

本發(fā)明的另一目的是提供上述含多肽靶向因子的多糖衍生物的制備方法。

本發(fā)明的上述目的是用過以下技術(shù)方案給予實(shí)現(xiàn)的：

一種含多肽靶向因子的多糖衍生物的制備方法，是以多肽靶向因子和含有3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的多糖衍生物為原料，在室溫下通過巰基-烯點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)制備得到含多肽靶向因子的多糖衍生物。

優(yōu)選地，所述多肽靶向因子為精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽（RGD）、細(xì)胞膜穿透肽（TAT、PTD-4）或生長(zhǎng)抑素（SST-14）。

優(yōu)選地，所述多糖為葡聚糖、普魯蘭、糖原或殼聚糖。

優(yōu)選地，所述多肽靶向因子基團(tuán)的取代度為0.1～0.5。

優(yōu)選地，所述3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為0.5～1.5。

具體地，上述含多肽靶向因子的多糖衍生物的制備方法，包括如下步驟：

S1.按照3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：除水有機(jī)溶劑=0.1～1.0g：5～20mL的比例，向3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物中加入除水有機(jī)溶劑，在惰性氣體保護(hù)下室溫?cái)嚢枞芙?，得?-二甲胺基丙胺基多糖衍生物溶液；

S2.按照3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：弱堿催化劑=0.1～1.0g：0.1～1mL的比例，向步驟S1所得溶液中緩慢滴加弱堿催化劑，在惰性氣體保護(hù)下，室溫活化反應(yīng)；

S3.向步驟S2的溶液中緩慢滴加含碳碳雙鍵基團(tuán)試劑，在惰性氣體保護(hù)下，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)；所述含碳碳雙鍵基團(tuán)試劑與弱堿催化劑等體積；

S4.步驟S3的反應(yīng)液經(jīng)過透析、冷凍干燥，得到含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物；

S5.按照含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：純水=0.1～1.0g：5～20mL的比例，向多糖衍生物中加入純水，室溫?cái)嚢枞芙?，得到含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物溶液；

S6.按照含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：含巰基的多肽試劑質(zhì)量比為0.1～1：0.1～1的比例，向步驟S5的溶液中緩慢滴加含巰基的多肽試劑溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)；

S7.步驟S6的反應(yīng)液經(jīng)過透析、冷凍干燥，得到含多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的多糖衍生物。

更優(yōu)選地，上述含多肽靶向因子的多糖衍生物的制備方法，具體包括如下步驟：

S1.按照3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：除水有機(jī)溶劑=0.1～1.0g：5～20mL（優(yōu)選0.1～1.0g：5～15mL）的比例，向3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物中加入除水有機(jī)溶劑，在惰性氣體保護(hù)下100～500r/min（優(yōu)選200～500r/min）室溫?cái)嚢?～24小時(shí)溶解，得到3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物溶液；

S2.按照3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：弱堿催化劑=0.1～1.0g：0.1～1mL的比例，向步驟S1所得溶液中緩慢滴加弱堿催化劑，在惰性氣體保護(hù)下，100～500r/min（200～500r/min）室溫活化反應(yīng)10～60分鐘；

S3.向步驟S2的溶液中緩慢滴加與弱堿催化劑等體積的含碳碳雙鍵基團(tuán)試劑，在惰性氣體保護(hù)下，100～500r/min（優(yōu)選200～500r/min）室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1～24小時(shí)；

S4.步驟S3的反應(yīng)液用水透析1～5天，冷凍干燥，得到含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物。

S5.按照含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：純水=0.1～1.0g：5～20mL（優(yōu)選0.1～0.5g：5～15mL）的比例，向多糖衍生物中加入純水，100～500r/min（優(yōu)選200～500r/min）室溫?cái)嚢?～24小時(shí)溶解，得到含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物溶液；

S6.按照含碳碳雙鍵基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物：含巰基的多肽試劑質(zhì)量比為0.1～0.5：0.1～1的比例，向步驟S5的溶液中緩慢滴加含巰基的多肽試劑溶液，100～500r/min（優(yōu)選200～500r/min）室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1～24小時(shí)；所述含巰基的多肽試劑溶液的組分為含巰基的多肽試劑：純水=0.1～0.5g：1～10mL；

S7.步驟S6的反應(yīng)液用水透析1～5天，冷凍干燥，得到含多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的多糖衍生物。

優(yōu)選地，步驟S1所述3-二甲胺基丙胺基多糖衍生物為含3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物、含3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的普魯蘭衍生物、含3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的糖原衍生物、含3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的殼聚糖衍生物，其制備方法可參照專利（一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及其在增強(qiáng)血卟啉類光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用，公開號(hào)：CN105949344A）。

優(yōu)選地，步驟S1所述除水有機(jī)試劑為除水二甲基甲酰胺、除水乙酸乙酯、除水二氯甲烷或除水二甲基亞砜。

優(yōu)選地，步驟S1、S2或S3所述惰性氣體為氮?dú)狻鍤饣蚝狻?/p>

更優(yōu)選地，步驟S1、S2或S3同時(shí)選擇氮?dú)?、氬氣或氦氣?/p>

優(yōu)選地，步驟S2所述弱堿催化劑為吡啶、哌啶、三乙胺或乙酸鈉。

優(yōu)選地，步驟S3所述含碳碳雙鍵基團(tuán)試劑為丙烯酸、丙烯酸酐、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酸酐或甲基丙烯酰氯。

優(yōu)選地，步驟S6所述多肽試劑為精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽（RGD）、細(xì)胞膜穿透肽（TAT或PTD-4）或生長(zhǎng)抑素（SST-14）。

另外，上述方法制備得到的含多肽靶向因子的多糖衍生物也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

上述含多肽靶向因子的多糖衍生物在作為藥物或基因傳輸載體上的應(yīng)用，以及在制備藥物或基因傳輸載體上的應(yīng)用，也都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

優(yōu)選地，所述藥物或基因傳輸載體可往病灶部位靶向運(yùn)輸。

本發(fā)明中的多肽和多糖均是具有生物學(xué)活性的物質(zhì)，需要在比較溫和的條件下反應(yīng)才不會(huì)使的活性喪失。因此本發(fā)明選用巰基-烯點(diǎn)擊化學(xué)法合成含多肽靶向因子的多糖衍生物，該合成法不使用金屬催化劑，反應(yīng)條件溫和（如室溫），能最大程度地保持多肽和多糖的生物活性，所制備得到的含多肽靶向因子的多糖衍生物可用作藥物或基因的傳輸載體，以提高針對(duì)病灶部位靶向性治療疾病的效果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

（1）本發(fā)明的工藝簡(jiǎn)單，操作方便，所需設(shè)備及原材料廉價(jià)。

（2）本發(fā)明涉及的化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單，在室溫即可反應(yīng)，避免使用強(qiáng)酸強(qiáng)堿試劑，溫和的反應(yīng)條件可保證產(chǎn)物中多糖及多肽的生物活性不受影響。

（3）本發(fā)明制備得到的含多肽靶向因子的多糖衍生物可用作藥物或基因載體，有利于攜帶藥物或基因靶向到達(dá)病灶組織，以減少對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明制備含多肽靶向因子的多糖衍生物的工藝流程圖。

圖2為本發(fā)明含多肽靶向因子的多糖衍生物的合成路線圖。

圖3為本發(fā)明3-二甲胺基丙胺基糖原（DMAPA-Gly）及產(chǎn)物含RGD多肽靶向因子基團(tuán)的糖原衍生物（RGD-DMAPA-Gly）的紅外光譜圖（FTIR）。

圖4為本發(fā)明3-二甲胺基丙胺基糖原（DMAPA-Gly）及產(chǎn)物含RGD多肽靶向因子基團(tuán)的糖原衍生物（RGD-DMAPA-Gly）的核磁譜圖（¹H NMR）。

圖5為含F(xiàn)ITC熒光標(biāo)記基團(tuán)、TAT多肽基團(tuán)以及含F(xiàn)ITC-TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物（FITC-TAT-DMAPA-DEX）靶向進(jìn)入骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的共聚焦照片（標(biāo)尺20μm）：（a）為FITC-TAT-DMAPA-DEX衍生物在骨髓間質(zhì)干細(xì)胞中的分布，（b）Wie通過Hoechst 33258熒光試劑將細(xì)胞核染成藍(lán)色的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，（c）為通過Lyso Tracker Red DND-99熒光試劑將細(xì)胞膜、溶酶體等細(xì)胞器染成紅色的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，（d）為（a）、（b）和（c）的合并照片。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。除非特別說明，實(shí)施例中所涉及的試劑、方法均為本領(lǐng)域常用的試劑和方法。

實(shí)施例1

1. 制備方法

本發(fā)明制備含多肽靶向因子的多糖衍生物的工藝流程圖和合成路線圖分別如圖1和圖2所示。

具體制備方法如下：

（1）稱取0.1g 3-二甲胺基丙胺基糖原衍生物（DMAPA-Gly）加入至干燥的燒瓶中，加入10mL除水二甲基甲酰胺，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下200r/min室溫?cái)嚢?2小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加0.5 mL吡啶至步驟（1）所得溶液中，200r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加0.5 mL丙烯酸，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，200r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液1天，冷凍干燥，得到含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基糖原衍生物（MAA-DMAPA-Gly）。

（4）稱取0.5g含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基糖原衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入5mL純水，200r/min室溫?cái)嚢?4小時(shí)溶解。

（5）稱取0.5g 精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）多肽加入至干燥燒瓶中，加入1 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加RGD溶液1 mL，200r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)8小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液1天，冷凍干燥，得到含RGD多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的糖原衍生物（RGD-DMAPA-Gly）。

2. 結(jié)果

（1）圖3為3-二甲胺基丙胺基糖原原料（DMAPA-Gly）以及衍生物的FTIR譜圖，從圖3b可看出偶聯(lián)了丙烯酸的3-二甲胺基丙胺基糖原衍生物（MAA-DMAPA-Gly）在1630cm^-1出現(xiàn)了新吸收峰，歸屬為碳碳雙鍵的伸縮振動(dòng)峰，表明丙烯酸與3-二甲胺基丙胺基糖原發(fā)生偶聯(lián)，同時(shí)1709 cm^-1處氨基甲酸酯的羰基（C=O）特征峰還存在，表明衍生物的3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的性質(zhì)并未受影響。

（2）圖4為3-二甲胺基丙胺基糖原原料（DMAPA-Gly）以及衍生物的¹H NMR譜圖，與3-二甲胺基丙胺基糖原的¹H NMR譜圖（圖4a）相比，MAA-DMAPA-Gly衍生物的¹H NMR譜圖（圖4b）中出現(xiàn)了2個(gè)丙烯酸基團(tuán)的特征共振峰：（e）峰（5.6 ppm）、（e’）峰（6.1 ppm），進(jìn)一步證實(shí)了丙烯酸與3-二甲胺基丙胺基糖原發(fā)生偶聯(lián)，合成出MAA-DMAPA-Gly衍生物。

（3）通過¹H NMR譜的質(zhì)子積分法，即分別對(duì)3-二甲胺基丙胺基糖原衍生物中異頭H1（5.3-4.8 ppm）共振峰和3-二甲胺基丙胺基團(tuán)中亞甲基質(zhì)子[（a）峰]進(jìn)行積分，根據(jù)公式可計(jì)算出DMAPA-Gly衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度DS₁（即每個(gè)糖單元中偶聯(lián)的配體基團(tuán)數(shù)目）。通過元素分析法，得出RGD-DMAPA-Gly中N/S的重量比，根據(jù)公式可計(jì)算出RGD-DMAPA-Gly衍生物中RGD多肽基團(tuán)的取代度DS₂。

式中，N(DMAPA)是DMAPA-Glyp衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的數(shù)目，N(Glc)是DMAPA-Glyp衍生物中葡萄糖單元的數(shù)目，I(>CH2)是3-二甲胺基丙胺基團(tuán)中亞甲基質(zhì)子[(a)峰]的積分面積，I(H1)是DMAPA-Glyp衍生物中異頭H1共振峰的積分面積。

式中N/S為RGD-DMAPA-Gly中氮元素與硫元素的重量比，M_N和M_S分別為氮和硫兩種元素的原子質(zhì)量，DS₁和DS₂分別為3-二甲胺基丙胺基團(tuán)和多肽靶向因子取代度。

本實(shí)施例所得RGD-DMAPA-Gly衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為1.7，RGD多肽的取代度為0.1。

實(shí)施例2

1. 制備方法

（1）稱取0.4g 3-二甲胺基丙胺基殼聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入5mL除水二氯甲烷，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下300r/min室溫?cái)嚢?4小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加0.1 mL三乙胺至步驟（1）所得溶液中，300r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加0.1 mL丙烯酸酐，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，300r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液2天，冷凍干燥，得到含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基殼聚糖衍生物。

（4）稱取0.1g含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基殼聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入10mL純水，300r/min室溫?cái)嚢?小時(shí)溶解。

（5）稱取0.2g細(xì)胞膜穿透肽（TAT）加入至干燥燒瓶中，加入2 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加TAT溶液2 mL，300r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液2天，冷凍干燥，得到含TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的殼聚糖衍生物。

2. 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)證明，本實(shí)施例成功合成了含TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的殼聚糖衍生物，本實(shí)施例所得TAT-DMAPA-CHI衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為1.0，TAT多肽的取代度為0.2。

實(shí)施例3

1. 制備方法

（1）稱取1g 3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入10mL除水二甲基甲酰胺，在氬氣保護(hù)下500r/min室溫?cái)嚢?小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加1.0 mL吡啶至步驟（1）所得溶液中，500r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加1.0 mL甲基丙烯酸，在氬氣保護(hù)下，500r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液3天，冷凍干燥，得到含甲基丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物。

（4）稱取0.2g含甲基丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入15mL純水，500r/min室溫?cái)嚢?2小時(shí)溶解。

（5）稱取1.0g 細(xì)胞膜穿透肽（PTD-4）加入至干燥燒瓶中，加入2 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加PTD-4溶液2 mL，500r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液3天，冷凍干燥，得到含PTD-4多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的普魯蘭衍生物。

2. 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)證明，本實(shí)施例成功合成了含PTD-4多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的普魯蘭衍生物，本實(shí)施例所得PTD-4-DMAPA-Pul衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為1.5，PTD-4多肽的取代度為0.1。

實(shí)施例4

1. 制備方法

（1）稱取1g 3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入15mL除水二氯甲烷，在氦氣保護(hù)下200r/min室溫?cái)嚢?0小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加0.5mL乙酸鈉至步驟（1）所得溶液中，200r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加0.5 mL甲基丙烯酰氯，在氦氣保護(hù)下，200r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含甲基丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物。

（4）稱取0.5g含甲基丙烯酰胺基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入5mL純水，200r/min室溫?cái)嚢?0小時(shí)溶解。

（5）稱取0.1g生長(zhǎng)抑素（SST-14）加入至干燥燒瓶中，加入10 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加SST-14溶液10 mL，200r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含SST-14多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物。

2. 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)證明，本實(shí)施例成功合成了含SST-14多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物，本實(shí)施例所得SST-14-DMAPA-DEX衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為1.2，SST-14多肽的取代度為0.1。

實(shí)施例5

1. 制備方法

（1）稱取0.2g 3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入5mL除水乙酸乙酯，在氦氣保護(hù)下400r/min室溫?cái)嚢?2小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加1.0 mL三乙胺至步驟（1）所得溶液中，400r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加1.0 mL丙烯酸，在氦氣保護(hù)下，400r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物。

（4）稱取0.2g含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基普魯蘭衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入10mL純水，400r/min室溫?cái)嚢?小時(shí)溶解。

（5）稱取0.8 g PTD-4加入至干燥燒瓶中，加入5 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加PTD-4溶液5 mL，400r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含PTD-4多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的普魯蘭衍生物。

2. 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)證明，本實(shí)施例成功合成了含PTD-4多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的普魯蘭衍生物，本實(shí)施例所得PTD-4-DMAPA-Pul衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為1.0，PTD-4多肽的取代度為0.5。

實(shí)施例6

1. 制備方法

（1）稱取0.2g 3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入5mL除水乙酸乙酯，在氦氣保護(hù)下400r/min室溫?cái)嚢?2小時(shí)溶解。

（2）用注射器緩慢滴加1.0 mL三乙胺至步驟（1）所得溶液中，400r/min室溫?cái)嚢?0分鐘，隨后用注射器緩慢滴加1.0 mL丙烯酸，在氦氣保護(hù)下，400r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。

（3）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物。

（4）稱取0.2g含丙烯酸基團(tuán)的3-二甲胺基丙胺基葡聚糖衍生物加入至干燥的燒瓶中，加入10mL純水，400r/min室溫?cái)嚢?小時(shí)溶解。

（5）稱取1.0 g FITC-TAT加入至干燥燒瓶中，加入5 mL純水溶解，向步驟（4）的溶液中緩慢滴加FITC-TAT溶液5 mL，400r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時(shí)；

（6）去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含F(xiàn)ITC-TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物。

2. 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)證明，本實(shí)施例成功合成了含F(xiàn)ITC-TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物，本實(shí)施例所得TAT-DMAPA-DEX衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度為2.0，TAT多肽的取代度為0.1。

實(shí)施例7 含多肽靶向因子多糖衍生物的應(yīng)用

經(jīng)過試驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明的方法所制備的含多肽靶向因子多糖衍生物均能最大程度地保持多肽和多糖的生物活性，可用作對(duì)病灶部位具有靶向運(yùn)輸性能的藥物或基因載體。

以下以實(shí)施例6制備的含F(xiàn)ITC-TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物（FITC-TAT-DMAPA-DEX）為例，呈現(xiàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

圖5為含F(xiàn)ITC-TAT多肽靶向因子基團(tuán)以及3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的葡聚糖衍生物（FITC-TAT-DMAPA-DEX）進(jìn)入骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的共聚焦照片?？捎^察到該衍生物已進(jìn)入骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，主要分布在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核膜中，表明該衍生物對(duì)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞具有較好靶向性，這與TAT肽能穿透骨髓間質(zhì)干細(xì)胞膜的性能有關(guān)。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。