本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物、制備方法、應(yīng)用及其檢測(cè)方法。

技術(shù)背景

尼達(dá)尼布乙磺酸鹽(NintedanibEsylate)由勃林格殷格翰(BoehringerIngelheim)研發(fā)，于2014年10月15日獲美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)上市，后于2014年11月21日獲得歐洲藥物管理局(EMA)批準(zhǔn)上市，再之后又于2015年7月3日獲日本藥品與醫(yī)療器械管理局(PMDA)批準(zhǔn)上市，由勃林格殷格翰上市銷(xiāo)售。

NintedanibEsylate是一種多重酪氨酸激酶抑制劑，通過(guò)抑制與特發(fā)性肺纖維化(IPF)的發(fā)病機(jī)制相關(guān)的生長(zhǎng)因子受體而起作用。先后獲批治療特發(fā)性肺纖維化(IPF)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。

在中國(guó)尚未上市，2016年7月6日勃林格殷格翰的尼達(dá)尼布軟膠囊被藥品審評(píng)中心(CDE)納入新一批擬優(yōu)先審評(píng)的藥品清單。

在藥物質(zhì)量控制中，活性物質(zhì)含量和有關(guān)物質(zhì)是非常關(guān)鍵的一環(huán)，其雜質(zhì)主要來(lái)源于合成過(guò)程和降解。

目前，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中均無(wú)該雜質(zhì)的公開(kāi)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的提供了一種尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物、制備方法、應(yīng)用及其檢測(cè)方法，能夠通過(guò)該雜質(zhì)的研究來(lái)提高尼達(dá)尼布質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為尼達(dá)尼布的安全用藥提供保證。本發(fā)明通過(guò)合成，制備得到較純的尼達(dá)尼布雜質(zhì)化合物，為尼達(dá)尼布成品檢測(cè)提供定性及定量分析的對(duì)照品。

本發(fā)明所述的一種尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物，其結(jié)構(gòu)如下：

尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物的制備方法如下：

所述雜質(zhì)化合物由與N‐甲基哌嗪反應(yīng)，或由與N‐甲基哌嗪反應(yīng)后在堿性條件下脫保護(hù)生成雜質(zhì)化合物，再經(jīng)過(guò)后處理、純化得到產(chǎn)品；其中R為乙?；蚵纫阴；?。

其中，(1)與N-甲基哌嗪反應(yīng)式為：

(2)與N-甲基哌嗪反應(yīng)式為：

所述化合物其中

-R為-H時(shí)，化合物為3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯；

-R為乙?；鶗r(shí)，化合物為N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯；

-R氯乙?；鶗r(shí)，化合物為N-氯乙酰基-3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯。

脫保護(hù)的堿性條件由添加哌啶或KOH來(lái)實(shí)現(xiàn)。

所述反應(yīng)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇和N,N‐二甲基甲酰胺中的一種或幾種混合；

所述反應(yīng)在60℃‐80℃溫度下進(jìn)行加熱；

所述后處理為直接析出或以二氯甲烷萃取，以再以水洗滌后在醇類(lèi)溶劑中析出。

反應(yīng)溶劑為甲醇、乙醇和異丙醇的一種或幾種混合時(shí)，產(chǎn)物直接析出。當(dāng)反應(yīng)溶劑為N,N-二甲基甲酰胺或N,N-二甲基甲酰胺與醇類(lèi)溶劑的混合時(shí)，產(chǎn)物直接析出?；蛞远燃淄檩腿。⒁运礈旌笤僭诖碱?lèi)溶劑中析出，所述醇類(lèi)溶劑指甲醇、乙醇或異丙醇。

純化方式為重結(jié)晶；

后處理所用的醇類(lèi)溶劑為甲醇、乙醇或異丙醇。

所述重結(jié)晶為以醇類(lèi)溶劑或醇類(lèi)溶劑加有機(jī)不良溶劑結(jié)晶的方法進(jìn)行純化；

所述重結(jié)晶所用醇類(lèi)溶劑為甲醇、乙醇或異丙醇；所述有機(jī)不良溶劑為二氯甲烷或乙酸乙酯。

尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物在尼達(dá)尼布或乙磺酸尼達(dá)尼布制備過(guò)程中控制所述雜質(zhì)化合物的含量不高于0.1％。

所述的尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物的檢測(cè)方法，采用高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為磷酸二氫鉀溶液和乙腈，進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm。

取尼達(dá)尼布，流動(dòng)相A‐流動(dòng)相B的質(zhì)量比為45:55，超聲使溶解并稀釋成0.4mg/ml的供試品溶液。

取雜質(zhì)化合物，流動(dòng)相A‐流動(dòng)相B的質(zhì)量比為45:55，超聲使溶解并稀釋成20μg/ml的對(duì)照品溶液。

本發(fā)明所得到的雜質(zhì)化合物，其純度大于95％，滿(mǎn)足作為雜質(zhì)對(duì)照品的要求，用作雜質(zhì)定性及定量研究。重結(jié)晶純化后其純度不低于99％。

通過(guò)控制尼達(dá)尼布反應(yīng)條件與純化，對(duì)尼達(dá)尼布進(jìn)一步精制，使該雜質(zhì)含量降低至檢測(cè)限以下，即未檢出該雜質(zhì)，精制方法包括采用醇、醇/水、丙酮/水、DMSO/醇重結(jié)晶的方式，其中醇類(lèi)為甲醇、乙醇、異丙醇或叔丁醇。

本發(fā)明一種尼達(dá)尼布中雜質(zhì)化合物的檢測(cè)方法，具體方法為：

取尼達(dá)尼布，流動(dòng)相A‐流動(dòng)相B的質(zhì)量比為45:55，超聲使溶解并稀釋成0.4mg/ml的供試品溶液。

取雜質(zhì)化合物，流動(dòng)相A‐流動(dòng)相B的質(zhì)量比為45:55，超聲使溶解并稀釋成20μg/ml的對(duì)照品溶液。

按照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0512)試驗(yàn)，色譜條件為：

(1)色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠。

(2)流動(dòng)相：流動(dòng)相A為20mmol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)，流動(dòng)相B為乙腈，進(jìn)行梯度洗脫；0-35min，流動(dòng)相A 45％，流動(dòng)相B 55％；35-50min，流動(dòng)相A 30％，流動(dòng)相B 70％；50min-60，流動(dòng)相A 25％，流動(dòng)相B 75％；

(3)流速：1ml/min。

(4)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。

(5)柱溫：30℃。

(6)進(jìn)樣量：20μl。

本發(fā)明所涉及尼達(dá)尼布及該雜質(zhì)的含量與純度以高效液相色譜法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算得到。

本發(fā)明在對(duì)尼達(dá)尼布質(zhì)量研究中，發(fā)現(xiàn)了尼達(dá)尼布的合成過(guò)程中一個(gè)潛在的相關(guān)雜質(zhì)，其來(lái)源于前合成步驟中N-甲基哌嗪的殘留，在后續(xù)步驟中反應(yīng)，產(chǎn)生本發(fā)明所述雜質(zhì)化合物。通過(guò)控制相應(yīng)雜質(zhì)限度來(lái)獲得高純度的尼達(dá)尼布，滿(mǎn)足藥用需要。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明尼達(dá)尼布的潛在雜質(zhì)化合物、制備方法、應(yīng)用及其檢測(cè)方法，通過(guò)該雜質(zhì)的研究來(lái)提高尼達(dá)尼布質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為尼達(dá)尼布的安全用藥提供保證。本發(fā)明通過(guò)合成，制備得到較純的尼達(dá)尼布雜質(zhì)化合物，為尼達(dá)尼布成品檢測(cè)提供定性及定量分析的對(duì)照品。

附圖說(shuō)明

圖1雜質(zhì)化合物的MS測(cè)試結(jié)果。

圖2雜質(zhì)化合物的H-NMR測(cè)試結(jié)果。

圖3雜質(zhì)化合物的C-NMR測(cè)試結(jié)果。

圖4雜質(zhì)化合物的HPLC測(cè)試結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

將3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯(8.8g，28mol)和N-甲基哌嗪(5.6g，57mmol)加入甲醇80mL中，于60℃攪拌反應(yīng)，2-5小時(shí)反應(yīng)畢，反應(yīng)液冷卻，析出固體，將固體過(guò)濾，甲醇淋洗，得到淺紅色固體的雜質(zhì)化合物8.9g。

HPLC檢測(cè)，產(chǎn)品純度96.2％。

HPLC方法為：取雜質(zhì)化合物5mg，加入25mL容量瓶中，流動(dòng)相A-流動(dòng)相B(45:55)適量超聲使溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。

色譜條件為：

(1)色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠。

(2)流動(dòng)相：流動(dòng)相A為為20mmol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)，流動(dòng)相B為乙腈，進(jìn)行梯度洗脫；0-35min，流動(dòng)相A45％，流動(dòng)相B55％；35-50min，流動(dòng)相A30％，流動(dòng)相B70％；50-60min，流動(dòng)相A25％，流動(dòng)相B75％。

(3)流速：1ml/min。

(4)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。

(5)柱溫：30℃。

實(shí)施例2

將N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯(10g，28mmol)和N-甲基哌嗪(5.6g，57mmol)加入甲醇50mL和N,N-二甲基甲酰胺5mL中，于68℃回流反應(yīng)，2-4小時(shí)反應(yīng)后，添加哌啶(4.8g，57mmol)，繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液冷卻，降溫析出固體，過(guò)濾，殘留物加甲醇30mL打漿，過(guò)濾得淺紅色固體的雜質(zhì)化合物5.7g。HPLC檢測(cè)，雜質(zhì)化合物純度97.4％。

實(shí)施例3

將N-氯乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯(10g，28mmol)和N-甲基哌嗪(5.6g，57mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺30mL中，于80℃反應(yīng)，2小時(shí)反應(yīng)后，添加哌啶(4.8g，57mmol)，繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液冷卻，加入水100mL,二氯甲烷100mL萃取，飽和氯化鈉溶液50mL×3洗滌。無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)相，過(guò)濾，濾液減壓蒸餾除去二氯甲烷，殘留物加異丙醇50mL析晶，過(guò)濾，得淺紅色固體的雜質(zhì)化合物7.4g。HPLC檢測(cè)，雜質(zhì)化合物純度98.5％。

實(shí)施例4-6

分別將實(shí)施例1、2或3得到的雜質(zhì)化合物5.0g，加入乙醇80mL中，加熱回流至全溶，攪拌下緩慢降溫析出固體，溫度降至室溫后過(guò)濾，得到純化的雜質(zhì)化合物3.1g。HPLC檢測(cè)，所純化的雜質(zhì)化合物純度均為99.8％。

實(shí)施例1-3中的的原料采用下列方法制備得到。

N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯的制備步驟：

將2-氧化吲哚-6-甲酸甲酯6.9g加入到甲苯15mL中攪拌，加入乙酸酐15mL、原苯甲酸三甲酯11g，120-125℃加熱，回流反應(yīng)5h。反應(yīng)畢，加甲苯7mL，降溫；析晶，降溫至25℃，過(guò)濾。得N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯6.2g。

3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯的之別步驟如下：

將N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯6.2g懸浮于25mL甲醇中，攪拌，加熱回流；于2min內(nèi)將KOH的甲醇溶液(0.6g，5ml)添加至反應(yīng)液中。反應(yīng)10min。降溫，過(guò)濾，得3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯4.3g。

尼達(dá)尼布的制備步驟如下：

將N-(4-氨基苯基)-N,4-二甲基-1-哌嗪乙酰胺17.6g和將N-乙?；?3-[甲氧基(苯基)亞甲基]-2-氧代二氫吲哚-6-甲酸甲基酯19g添加至DMF 15mL和甲醇75mL中，回流反應(yīng)1.5h以上。反應(yīng)液中加入N-甲基哌嗪9.4g，反應(yīng)1h，降溫，至5℃過(guò)濾。得產(chǎn)品尼達(dá)尼布25.1g。將尼達(dá)尼布加甲醇250mL重結(jié)晶，得到純化后的尼達(dá)尼布HPLC純度99.58％。

檢測(cè)尼達(dá)尼布中雜質(zhì)化合物的含量，HPLC方法為：

取尼達(dá)尼布10mg，加入25mL容量瓶中，流動(dòng)相A-流動(dòng)相B(45:55)適量超聲使溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。

取該雜質(zhì)化合物，流動(dòng)相A-流動(dòng)相B(45:55)適量超聲使溶解并稀釋成20μg/ml的對(duì)照品溶液。

色譜條件為：

(1)色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠。

(2)流動(dòng)相：流動(dòng)相A為為20mmol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH值至3.0)，流動(dòng)相B為乙腈，進(jìn)行梯度洗脫；0-35min，流動(dòng)相A45％，流動(dòng)相B55％；35-50min，流動(dòng)相A30％，流動(dòng)相B70％；50-60min，流動(dòng)相A25％，流動(dòng)相B75％。

(3)流速：1ml/min。

(4)檢測(cè)波長(zhǎng)：245nm。

(5)柱溫：30℃。

(6)進(jìn)樣量：20μl。

尼達(dá)尼布中雜質(zhì)化合物未檢出。