本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年5月7日，發(fā)明名稱為“用于研究、成像以及治療疼痛的方法和組合物”的中國(guó)專利申請(qǐng)no.2010800306322的分案申請(qǐng)。對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用根據(jù)35u.s.c.§119(e)，本申請(qǐng)要求2009年5月7日提交的名稱為“methodsandcompositionsforstudying，imaging，andtreatingpain”(用于研究、成像以及治療疼痛的方法和組合物)的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)61/176,172的優(yōu)先權(quán)，通過(guò)引用的方式將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)中。本申請(qǐng)涉及dubois等人于2010年5月7日提交的序號(hào)為xx/xxx，xxx、名稱為“methodsandcompositionsforstudying，imaging，andtreatingpain”(用于研究、成像以及治療疼痛的方法和組合物)的美國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)，通過(guò)引用的方式將其全部?jī)?nèi)容并入本申請(qǐng)中。關(guān)于聯(lián)邦政府資助研究的聲明本發(fā)明是在政府支持的合同/批準(zhǔn)號(hào)為5r01ns045684-07(由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院頒發(fā))的項(xiàng)目下作出的。政府對(duì)本發(fā)明擁有特定的權(quán)利。
背景技術(shù)：
：：“赤潮”水域充斥著有毒物質(zhì)，其中最臭名昭著的是麻痹性貝類毒素(psp)(參見文獻(xiàn)seafoodandfreshwatertoxins：pharmacology，physiology，anddetection；botana，l.m.，ed.；marceldekker：newyork，2000)。形式和功能都很獨(dú)特的小分子雙胍基結(jié)構(gòu)——石房蛤毒素、新石房蛤毒素和膝溝藻毒素——代表了psp的主要成分。(參見前沿技術(shù)綜述：(a)llewellyn，l.e.nat.prod.rep.2006，23，200-222；(b)hall，s.；strichartz，g.；moczydlowski，e.；ravindran，a.；reichardt，p.b.acssymp.series1990，418，29-65。)這些強(qiáng)極性的富含雜原子的化合物是精巧設(shè)計(jì)的能夠起到阻塞離子流通過(guò)電壓門控na+通道(nav)作用的塞子，從而抑制細(xì)胞中的電傳導(dǎo)。(參見文獻(xiàn)：例如，tetrodotoxin，saxitoxin，andthemolecularbiologyofthesodiumchannel；eds.c.y.kao；s.r.levinson；ann.newyorkacad.sci.：newyork，vol479，1986；tikhonov，d.b.；zhorov，b.s.biophys.j.2005，88，184-197，及其中引用的參考文獻(xiàn)。)這些毒素所共有的復(fù)雜的分子形狀、以及這些毒素作為研究離子通道的藥理學(xué)工具的重要性，激勵(lì)了人們努力對(duì)它們進(jìn)行從頭組裝(denovoassembly)。三篇現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)已經(jīng)描述了石房蛤毒素(stx)以及一種脫氨基甲酰氧基形式的制備。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)tanino，h.；nakata，t.；kaneko，t.；kishi，y.j.am.chem.soc.1977，99，2818-2819；(b)kishi，y.heteroeycles1980，14，1477-1495；(c)jacobi，p.a.；martinelli，m.j.；polanc，s.j.am.chem.soc.1984，106，5594-5598；(d)martinelli，m.j.；brownstein，a.d.；jacobi，p.a.；polanc，s.croat.chem.acta1986，59，267-295；(e)fleming，j.j.；dubois，j.j.am.chem.soc.2006，128，3926-3927；(f)fleming，j.j.；mcreynolds，m.d.；dubois，j.j.am.chem.soc.2007，129，9964-9975。在他們的早期報(bào)道之后，kishi等描述了不對(duì)稱合成(-)-脫氨基甲酰基石房蛤毒素，參見文獻(xiàn)：hong，c.y.；kishi，y.j.am.chem.soc.1992，114，7001-7006；還可參見文獻(xiàn)如iwamoto，o.；koshino，h.；hashizume，d.；nagasawa，k.angew.chem.int.ed.2007，46，8625-8628。)痛感包括銳痛、鈍痛、疼痛以及其他形式的痛感。疼痛是一種強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間可能各不相同的感覺，并且可能由各種原因引起。例如，疼痛可能是急性的，如損傷、疾病或創(chuàng)傷所造成的疼痛；可能是慢性的，如慢性疾病或病癥、炎癥、癌癥或其他原因?qū)е碌奶弁?；可能是局灶性或彌漫性的；可能是低?qiáng)度、中等強(qiáng)度、或高強(qiáng)度的。因此，疼痛是不同的感覺，包括如急性疼痛、慢性疼痛、內(nèi)臟痛、手術(shù)疼痛、關(guān)節(jié)痛、骨痛、背痛、頭痛、神經(jīng)性疼痛、假肢痛以及其他各種形式和經(jīng)歷的疼痛。然而，在一般情況下，無(wú)論強(qiáng)度或持續(xù)時(shí)間如何，也不管出于何種原因，人們更優(yōu)選盡可能的減輕或消除痛感。往往可以通過(guò)給受試者用藥來(lái)緩解疼痛。減輕痛感的機(jī)制之一是阻斷神經(jīng)信號(hào)的傳輸，如通過(guò)阻斷神經(jīng)沖動(dòng)沿著神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，可以通過(guò)降低、阻斷或改變鈉通道的活動(dòng)來(lái)阻斷這種神經(jīng)沖動(dòng)。諸如石房蛤毒素、膝溝藻毒素、斑足蟾毒以及其他已知的“1位鈉通道阻斷劑”之類的化合物可以影響鈉通道。(參見文獻(xiàn)如llewellyn，nat.prod.rep.23：200-222(2006))。然而如其名稱中的“毒素”一詞所暗示的那樣，這類分子還有除了阻斷痛感之外的影響。因此希望鑒定出能夠有效減輕痛感而沒有危險(xiǎn)副作用的分子。慢性疼痛是主要的、普遍的健康問(wèn)題，并且是人們就醫(yī)時(shí)最常見的原因之一?！盀槭裁次視?huì)(慢性)疼痛？”“是什么導(dǎo)致我疼痛？”或者“疼痛來(lái)自哪里？”，這些問(wèn)題通常是患有慢性疼痛的個(gè)體努力要得到答案的難題中的一部分。缺乏客觀的診斷檢測(cè)、有限的有效醫(yī)療設(shè)備和安全藥物，毫無(wú)疑問(wèn)使慢性疼痛患者和他們的看護(hù)者更為煩惱。目前用于診斷患者疼痛的方法非常主觀并且依賴于患者的自我報(bào)告?；加新蕴弁吹膫€(gè)體需要忍受大量的檢測(cè)，并且往往被送去接受經(jīng)驗(yàn)止痛檢測(cè)和外科手術(shù)，而這類治療僅基于有限的客觀基礎(chǔ)。另外，由于目前采用的現(xiàn)有水平的醫(yī)學(xué)成像技術(shù)如x射線、計(jì)算機(jī)斷層掃描(ct)、超聲檢查和常規(guī)磁共振成像(mri)很大程度上依賴于解剖學(xué)異常，因此它們?cè)谠u(píng)估慢性疼痛綜合征方面仍存在不足之處。例如采用常規(guī)mri可在27％-31％無(wú)癥狀受試者中發(fā)現(xiàn)顯著的椎間盤異常。另外，個(gè)體的退行性椎間盤疾病的自然進(jìn)程與疼痛癥狀學(xué)的進(jìn)展沒有關(guān)聯(lián)性，并且刺激性椎間盤造影術(shù)和基于mr的形態(tài)測(cè)量與背痛事件只有微弱的關(guān)聯(lián)性。最近發(fā)現(xiàn)，在有癥狀和無(wú)癥狀的中年人和老年人的膝蓋中，mri檢測(cè)到半月板撕裂幾乎同樣普遍(～60％)，這再一次加強(qiáng)了mr結(jié)果和疼痛原因之間的關(guān)聯(lián)性較弱。然而，盡管有這類相反的證據(jù)，但不幸的是，對(duì)多種疾病而言，這些基于解剖學(xué)的成像結(jié)果的運(yùn)用仍然是治療規(guī)程的重要組成部分！因此，大量的患者遭受不必要的手術(shù)和不適當(dāng)?shù)闹委煛＜夹g(shù)實(shí)現(xiàn)要素：簡(jiǎn)言之，本發(fā)明的實(shí)施方案包括化合物、組合物、藥物組合物、研究疼痛的方法、對(duì)疼痛進(jìn)行成像的方法、治療疼痛的方法等。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種如下所示結(jié)構(gòu)a、b、c或d的化合物、或其可藥用的鹽、同分異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或前體藥物。在實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了涉及石房蛤毒素(stx)、膝溝藻毒素(gtx)和斑足蟾毒的化合物，以及stx變體化合物。在實(shí)施方案中，所述stx變體化合物包括這樣的軛合物，在施用于受試者時(shí)，與stx相比，該軛合物的血清半衰期延長(zhǎng)，以及在施用于受試者時(shí)，與stx相比，該軛合物的作用持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療受試者的方法，其中所述方法包括對(duì)受試者施用治療其疼痛有效量的下列結(jié)構(gòu)a、b、c或d中任意一種結(jié)構(gòu)的化合物、或其可藥用的鹽、同分異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或前體藥物。在實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種使需要接受治療的受試者減輕疼痛的方法，該方法包括對(duì)受試者施用有效量的下列結(jié)構(gòu)a、b、c或d中任意一種結(jié)構(gòu)的化合物、或其可藥用的鹽、同分異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或前體藥物，從而減輕所述受試者的疼痛。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療受試者的電壓門控鈉通道增強(qiáng)激活疼痛途徑的方法，該方法包括對(duì)受試者施用治療其疼痛有效量的下列結(jié)構(gòu)a、b、c或d中任意一種結(jié)構(gòu)的化合物、或其可藥用的鹽、同分異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或前體藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種制備石房蛤毒素類似物的方法，包括：使九元環(huán)的胍反應(yīng)生成c13-troc碳酸鹽；在路易斯酸的存在下，使(i)的產(chǎn)物中的胍環(huán)閉合；以及將(ii)的產(chǎn)物氧化并脫保護(hù)，從而生成石房蛤毒素類似物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種制備石房蛤毒素類似物的方法，包括：使1-絲氨酸甲酯反應(yīng)形成醛；將(i)的醛與胺縮合；使(ii)的產(chǎn)物反應(yīng)而有效地將環(huán)閉合并生成脲化合物；使(iii)的產(chǎn)物在這樣的過(guò)程中發(fā)生反應(yīng)，所述過(guò)程包括烯丙基脫保護(hù)和異硫脲的形成；以及將(iv)的產(chǎn)物胺化，從而生成石房蛤毒素類似物。本發(fā)明公開的化合物可作為止痛藥用于治療受試者的疼痛，包括緩解疼痛、降低疼痛的程度以及消除疼痛和/或痛感。例如它們可用于下列(并非限定)待治療疼痛的疼痛類型的治療：急性疼痛、肛裂疼痛、關(guān)節(jié)炎疼痛、背痛、眼瞼痙攣疼痛、癌癥疼痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維性肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、內(nèi)臟痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、交感神經(jīng)維持性疼痛、帶狀皰疹痛、緊張性頭痛、三叉神經(jīng)性疼痛、肌炎痛、肌肉骨骼痛；腰痛、扭傷和拉傷疼痛；與機(jī)能性腸道疾病如非潰瘍性消化不良、非心源性胸痛和過(guò)敏性腸綜合征相關(guān)的疼痛；與心肌缺血相關(guān)的疼痛；牙痛；以及痛經(jīng)引起的疼痛。本文公開的石房蛤毒素類似化合物還可以用于治療下列疾病以及減輕與這些疾病相關(guān)的疼痛和不適：眼瞼痙攣、心律失常、癲癇、局灶性肌張力障礙、多汗癥、肌肉痙攣和膀胱松弛。本文公開的石房蛤毒素類似化合物也可連接到標(biāo)記物、寡核苷酸、蛋白質(zhì)、脂類、類固醇、抗體或抗體片段。標(biāo)記物可以為(例如)選自由以下物質(zhì)組成的組：放射性同位素、熒光結(jié)構(gòu)部分、化學(xué)發(fā)光結(jié)構(gòu)部分、酶、抗體、抗體片段、磁性顆粒和量子點(diǎn)。上述連接可為共價(jià)鍵或其他連接。含有與標(biāo)記物、寡核苷酸、蛋白質(zhì)、抗體或抗體片段連接的石房蛤毒素類似化合物的軛合化合物，可通過(guò)分析被檢測(cè)到，并且可在施用了所述軛合化合物的受試者體內(nèi)被檢測(cè)到。所述含有與寡核苷酸、蛋白質(zhì)、脂類、類固醇、抗體或抗體片段連接的石房蛤毒素類似化合物的軛合化合物，可被引導(dǎo)到所需位置、器官組織、細(xì)胞、細(xì)胞室。例如，所述軛合化合物的寡核苷酸、蛋白質(zhì)、脂類、類固醇、抗體或抗體片段結(jié)構(gòu)部分可有效地將石房蛤毒素類似物引導(dǎo)到特定的電壓門控鈉通道同工型(isoform)或表達(dá)nav的細(xì)胞類型，或者可有效地將石房蛤毒素類似物定位或錨定到電壓門控鈉通道附近。本文公開的含石房蛤毒素類似物的藥物組合物包括含有本文所述的石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽的藥物組合物。本文所述的化合物和藥物組合物可用于治療受試者的方法中，所述方法包括以能夠有效地治療受試者所患疾病的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的藥物組合物或可藥用的鹽。所述疾病例如可為疼痛。待治療的疼痛疾病包括(例如)急性疼痛、肛裂疼痛、關(guān)節(jié)炎疼痛、背痛、眼瞼痙攣疼痛、癌癥疼痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維性肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、內(nèi)臟痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、交感神經(jīng)維持性疼痛、帶狀皰疹痛、緊張性頭痛、三叉神經(jīng)性疼痛、肌炎痛、肌肉骨骼痛；腰痛、扭傷和拉傷疼痛；與機(jī)能性腸道疾病如非潰瘍性消化不良、非心源性胸痛和過(guò)敏性腸綜合征相關(guān)的疼痛；與心肌缺血相關(guān)的疼痛；牙痛；以及痛經(jīng)引起的疼痛。治療受試者的方法還包括以下方法，該方法包括以能夠有效地治療電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的藥物組合物或可藥用的鹽。在實(shí)施方案中，所述電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病選自由以下疾病組成的組：急性疼痛、肛裂、關(guān)節(jié)炎、背痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、帶狀皰疹、緊張性頭痛或三叉神經(jīng)性疼痛、眼瞼痙攣、癌癥、心律失常、癲癇、局灶性肌張力障礙、多汗癥、肌肉痙攣和膀胱松弛。治療受試者的方法還包括以下方法，該方法包括以能夠有效地治療以下疾病、以及減輕與這些疾病相關(guān)的疼痛和不適的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的藥物組合物或可藥用的鹽，所述疾病選自(例如)：眼瞼痙攣、心律失常、癲癇、局灶性肌張力障礙、多汗癥、肌肉痙攣和膀胱松弛。其他方法還包括降低受試者的神經(jīng)元活性或者使得受試者的肌肉放松的方法，包括以能夠有效地降低其神經(jīng)元活性或者使其肌肉放松的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的藥物組合物或可藥用的鹽。其他方法還包括治療受試者的方法，其包括以能夠有效地減輕或消除皺紋的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。其他方法還包括對(duì)受試者進(jìn)行診斷的方法，該方法包括以能夠有效地將電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病定位于受試者體內(nèi)特定區(qū)域的量，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物、或其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。例如可在成像過(guò)程之前或期間(如在cat掃描過(guò)程之前或期間、pet掃描過(guò)程之前或期間、mri過(guò)程之前或期間、以及spect成像過(guò)程之前或期間)，對(duì)受試者施用石房蛤毒素類似化合物，其可為標(biāo)記的石房蛤毒素類似化合物。本文還公開了合成方法，包括通過(guò)圖4或圖10所示的化學(xué)合成方法制備如圖1所示的天然生成的石房蛤毒素類似物的方法。例如本文還公開了制備膝溝藻毒素的方法，如圖10所示。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖1示出了本文所述的石房蛤毒素類似物(包括石房蛤毒素、膝溝藻毒素和斑足蟾毒)的結(jié)構(gòu)。圖2a示出了石房蛤毒素在結(jié)合于鈉通道中時(shí)的位置。圖2b進(jìn)一步示出了在結(jié)合于鈉通道中時(shí)位于適當(dāng)位置的石房蛤毒素分子的示圖。圖3a示出了在細(xì)胞暴露于不同濃度的石房蛤毒素時(shí)記錄的鈉電流(圖中示出的值以納摩(nm)計(jì)量)。圖3b示出了在cho細(xì)胞中，不同濃度的石房蛤毒素對(duì)鈉電流的影響隨著石房蛤毒素的濃度而變化的曲線(頂部曲線)、以及隨著石房蛤毒素類似物n，n-二甲基stx(化合物2)的濃度而變化的曲線(底部曲線)。圖4示出了可用于制備石房蛤毒素類似物的合成流程圖。圖5示出了石房蛤毒素類似物，并提供了這些類似物對(duì)抗鈉電流(rnav1.4)的效力值。圖6示出了用于修飾石房蛤毒素類似物的連接策略(ligationstrategy)。圖7示出了通過(guò)與不同的熒光基團(tuán)(標(biāo)記物)共價(jià)連接來(lái)修飾的石房蛤毒素類似物的例子。圖8示出了不存在、以及存在不同濃度的帶標(biāo)記的石房蛤毒素類似物stx-馬來(lái)酰亞胺(圖7所示的化合物19)情況下的的鈉電流。圖9示出了合成石房蛤毒素類似物膝溝藻毒素3(gtx3)的合成方案的一個(gè)例子。圖10提供了對(duì)合成石房蛤毒素類似物gtx3的合成方案的一個(gè)例子的進(jìn)一步圖示說(shuō)明。圖11示出了石房蛤毒素類似物gtx3和膝溝藻毒素2(gtx2)的結(jié)構(gòu)及二者之間的關(guān)系。圖12提供了用于合成適合于成像研究的、連接到標(biāo)記物的石房蛤毒素類似物的合成方案的一個(gè)例子。圖13提供了與對(duì)照組大鼠相比較，通過(guò)微針貼片(microneedlepatch)對(duì)大鼠施用stx(0.44μg)進(jìn)行對(duì)比研究的結(jié)果的圖示說(shuō)明。相比于對(duì)照組，經(jīng)stx處理的皮膚對(duì)有害刺激(熱)的響應(yīng)顯著降低。圖14a示出了幾種c-13修飾的stx形式對(duì)鈉電流的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(cho細(xì)胞中的rnav1.4電流)。圖14a示出了由0、1納摩(nm)、3nm和5nmstx導(dǎo)致的鈉電流的降低。圖14b示出了以歸一化電流對(duì)用藥濃度作的圖，并且標(biāo)注了stx和石房蛤毒素類似物n，n-二甲基-石房蛤毒素(圖14b中示出的化合物10)的ic50值。圖14c列出了具有如圖所示的取代基r的幾種石房蛤毒素類似物的ic50值。圖15示出了合成熒光stx軛合物的方法，并且示出了結(jié)合到cho細(xì)胞中的鈉通道的這種分了的熒光。圖16示出了將stx-cy5軛合物(紅色所示)或stx(藍(lán)色所示)直接注射到小鼠后爪中之后進(jìn)行機(jī)械刺激所測(cè)量的相對(duì)局部麻醉的結(jié)果。圖17示出了n-琥珀酰亞胺4-[18f]氟苯甲酸酯([18f]sfv)的放射性化學(xué)合成、以及化學(xué)選擇性連接到nh2-stx，以生成針對(duì)ttx-snav同工型的體內(nèi)成像藥劑。圖18示出了左側(cè)保留神經(jīng)損傷(sni)大鼠的顯微pet-mri圖像(pet：正電子發(fā)射斷層掃描；mri：磁共振成像)。圖19示出了合成石房蛤毒素類似物如膝溝藻毒素的合成流程圖。圖20示出了合成石房蛤毒素類似物如r7-取代的stx類似物的合成流程圖。圖21示出了一系列n7-取代的石房蛤毒素類似物，并且標(biāo)注了ic50數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)是以所述化合物引起的鈉電流阻斷來(lái)計(jì)量的。圖22示出了能夠有效地在r3位置提供正丙基的合成流程圖，并進(jìn)一步示出了制備gtx3的c10-取代類似物的化學(xué)步驟。發(fā)明詳述在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述之前，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明公開的內(nèi)容不限于所描述的具體實(shí)施方案，因而，本發(fā)明的實(shí)施方案當(dāng)然是可以變化的。還應(yīng)當(dāng)理解，由于本發(fā)明公開的內(nèi)容僅由隨附的權(quán)利要求書所限定，因而本文所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體實(shí)施方案，而不是旨在限定。除非另有定義，否則本文所用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義相同。本說(shuō)明書中涉及的所有出版物和專利均以引用的方式并入本文，如同專門針對(duì)每一份出版物或?qū)＠謩e單獨(dú)地指明將其以引用的方式并入本文中一樣，并且以引用的方式并入本文中是為了公開和描述與所引用的出版物相關(guān)的方法和/或材料。在閱讀了本申請(qǐng)的公開內(nèi)容之后，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見的是，本文描述和示出的每一個(gè)實(shí)施方案都具有分離的成分和特征，在不脫離本發(fā)明的范圍和精神的情況下，其可以容易地彼此分離或與其他若干實(shí)施方案中的任意一者的特征結(jié)合。所敘述的任何方法均可以以敘述事件的先后順序或邏輯上可行的其他順序來(lái)實(shí)施。除非另外指明，否則本申請(qǐng)的實(shí)施方案將采用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的有機(jī)合成化學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、分子生物學(xué)、dna重組技術(shù)、藥理學(xué)等。這類技術(shù)在文獻(xiàn)中有充分說(shuō)明。本文列舉了實(shí)施例，以便為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供如何實(shí)施本文所披露并且要求保護(hù)的方法、以及如何使用本文所披露并且要求保護(hù)的化合物的示例性公開和描述。除非另外指明，否則份數(shù)均以重量份數(shù)計(jì)，溫度均以℃計(jì)，壓力均為大氣壓或接近大氣壓。標(biāo)準(zhǔn)溫度和壓力定義為20℃和1個(gè)大氣壓。在詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施方案之前，應(yīng)當(dāng)理解的是，除非另外指明，否則本發(fā)明不局限于特定的材料、試劑、反應(yīng)材料、制備過(guò)程等，因而這些都是可以變化的。還應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體實(shí)施方案，而不是旨在限定。此外可行的是，本文公開的步驟在邏輯上可行的情況下可以以不同的順序進(jìn)行。必須指出，在本說(shuō)明書和隨附的權(quán)利要求書中，除非上下文明確規(guī)定，否則單數(shù)形式“一種”、“一個(gè)”、“該”以及未指明數(shù)量的方式涵蓋了具有多個(gè)所指物的情況。因此，例如，提到“化合物”時(shí)，包括具有多種化合物的情況。在本說(shuō)明書及隨附的權(quán)利要求書中將會(huì)涉及許多術(shù)語(yǔ)，除非明顯有相反的意思表示，否則這些術(shù)語(yǔ)被定義為具有如下的含義。定義在描述和要求保護(hù)本申請(qǐng)公開的主題時(shí)，按照如下定義使用下列術(shù)語(yǔ)。術(shù)語(yǔ)“石房蛤毒素類似物”包括石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素和斑足蟾毒ab以及相關(guān)化合物。所述相關(guān)化合物的結(jié)構(gòu)將在下文中更詳細(xì)地討論，但是應(yīng)該理解為包括圖1所示化合物和相關(guān)化合物，所述相關(guān)化合物包括與本文描述的分子相關(guān)的變體化合物。如下所述，石房蛤毒素類似物與鈉通道結(jié)合?！笆扛蚨舅亍钡目s寫為“stx”。膝溝藻毒素的縮寫為“gtx”。術(shù)語(yǔ)“天然生成的石房蛤毒素類似物”是指在自然中發(fā)現(xiàn)的石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素和其他相關(guān)化合物。其他可與鈉通道結(jié)合的化合物包括：河豚毒素(ttx)；以及局部麻醉劑，如賽羅卡因(xylocaine)、布比卡因(bupivacaine)和利多卡因(lidocaine)。盡管大多數(shù)鈉通道對(duì)河豚毒素敏感(ttx-s)，但是也有一些鈉通道對(duì)ttx“不敏感”。如本文所用，“疼痛”一般是指身體或生理疼痛的生理和心理的感覺或感受。如本文所用，“疼痛”還包括傷害感受，其為通過(guò)受體和神經(jīng)遞質(zhì)及神經(jīng)系統(tǒng)其他方面介導(dǎo)的生物感受的疼痛。因此，如本文所用，“疼痛成像”是指進(jìn)行成像的受試者的身體或生理疼痛感受的視覺指示形式?！疤弁础笨商貏e定位于受傷部位，或者可能是全身性的；同樣，疼痛的圖像可直觀地表明疼痛感受的總體狀態(tài)，或者可以具體指示出疼痛的位置或來(lái)源。疼痛包括但不限于：急性疼痛、慢性疼痛、內(nèi)臟痛、手術(shù)疼痛、關(guān)節(jié)痛、骨痛、背痛、頭痛、神經(jīng)性疼痛、假肢痛以及其他形式的疼痛。因此，待治療的疼痛包括但不限于：急性疼痛、肛裂疼痛、關(guān)節(jié)炎疼痛、背痛、眼瞼痙攣疼痛、癌癥疼痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維性肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、內(nèi)臟痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、交感神經(jīng)維持性疼痛、帶狀皰疹痛、緊張性頭痛、三叉神經(jīng)性疼痛、肌炎痛、肌肉骨骼痛；腰痛、扭傷和拉傷疼痛；與機(jī)能性腸道疾病如非潰瘍性消化不良、非心源性胸痛和過(guò)敏性腸綜合征相關(guān)的疼痛；與心肌缺血相關(guān)的疼痛；牙痛；以及痛經(jīng)引起的疼痛。本文所公開的石房蛤毒素類似化合物也可用于治療眼瞼痙攣、癌癥、心律失常、癲癇、局灶性肌張力障礙、多汗癥、肌肉痙攣和膀胱松弛，以及減輕與這些疾病相關(guān)的疼痛和不適。神經(jīng)性疼痛綜合征習(xí)慣上是根據(jù)促成該綜合征的疾病或情況來(lái)分類的。神經(jīng)性疼痛綜合征包括：糖尿病神經(jīng)病變；坐骨神經(jīng)痛；非特異性腰痛；多發(fā)性硬化疼痛；纖維肌痛；與艾滋病相關(guān)的神經(jīng)病變；帶狀皰疹后神經(jīng)痛；三叉神經(jīng)痛；以及由身體創(chuàng)傷、截肢、癌癥、毒素或慢性炎癥狀況造成的疼痛。這些狀況難以治療，并且盡管已知有幾種藥物具有有限的療效，但是很少能完全控制疼痛。神經(jīng)性疼痛的癥狀具有令人難以置信的異質(zhì)性，并且往往被描述為自發(fā)性劇烈刺痛，或持續(xù)性灼痛。另外，還有與常規(guī)非疼痛感覺相關(guān)的疼痛，例如，“如坐針氈”(感覺異常和感覺遲鈍)、對(duì)觸摸的敏感性增強(qiáng)(感覺過(guò)敏)、無(wú)傷害性刺激后產(chǎn)生的疼痛感(動(dòng)、靜或熱異常性疼痛)、對(duì)傷害性刺激的敏感性增強(qiáng)(熱、冷、機(jī)械性痛覺過(guò)敏)、去除刺激后的持續(xù)疼痛感(痛覺過(guò)敏)、或者選擇性的感覺途徑缺失或不足(痛覺減退)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“療法”、“醫(yī)治”和“治療”定義為采用本申請(qǐng)公開的化合物或組合物減輕或改善疼痛和/或其癥狀的產(chǎn)生、感覺、感知和/或影響。如本文所用，“療法”涵蓋了治療主體(如哺乳動(dòng)物，通常為人或獸醫(yī)關(guān)注的非人類動(dòng)物)疼痛的任何療法，并且包括：(a)減少受試者發(fā)生疼痛的可能性，(b)阻礙疼痛的啟動(dòng)，以及(c)減輕疼痛，即，使疼痛退行和/或緩解一種或多種疼痛癥狀。因此，術(shù)語(yǔ)“療法”、“醫(yī)治”和“治療”以及諸如此類的表述包括：緩解疼痛、減輕疼痛、限制疼痛、減少疼痛、鎮(zhèn)痛、改善疼痛、阻斷疼痛、抑制疼痛，以及其他作用于疼痛感覺、疼痛感知、疼痛信號(hào)在神經(jīng)系統(tǒng)中的傳播、或者其他作用于疼痛的行為方式。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“預(yù)防性醫(yī)治”或“預(yù)防性治療”是指完全或部分地抑制疼痛或其癥狀，以及/或者在部分或完全緩解疼痛和/或減輕由疼痛引起的不利影響方面可起到治療作用。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“主體”、“受試者”或“患者”包括人和哺乳動(dòng)物(如小鼠、大鼠、豬、貓、狗和馬)?？墒┯帽旧暾?qǐng)公開的化合物的典型主體為哺乳動(dòng)物，特別是靈長(zhǎng)類動(dòng)物，尤其是人類。就獸醫(yī)應(yīng)用而言，有多種多樣的受試者都是合適的，例如為：牲畜，如牛、綿羊、山羊、奶牛、豬等；家禽，如小雞、鴨、鵝、火雞等；以及家養(yǎng)動(dòng)物，特別是寵物，如狗和貓。就診斷或研究應(yīng)用而言，有多種多樣的哺乳動(dòng)物都是合適的受試者，包括嚙齒動(dòng)物(如小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠)、兔、靈長(zhǎng)類動(dòng)物和豬(如近交系豬)等。術(shù)語(yǔ)“活主體”指的是上述提到的主體或其他有生命的有機(jī)體。術(shù)語(yǔ)“活主體”是指整個(gè)主體或有機(jī)體，而不是僅從活主體切取的一部分(如肝臟或其他器官)。術(shù)語(yǔ)“分離的化合物”是指已大體上從其天然生成時(shí)所伴生的其他化合物中分離出來(lái)，或相對(duì)于伴生的其他化合物而富集的化合物。分離的化合物純度通常為至少約80重量％、至少約90重量％、至少約98重量％或至少約99重量％。本申請(qǐng)公開旨在包括非對(duì)映異構(gòu)體、以及它們的外消旋形式和拆分得到的對(duì)映異構(gòu)的純形式、及其可藥用的鹽。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單位劑型”是指適合作為人和/或動(dòng)物受試者的單位劑量的物理分離的單元，每個(gè)單元包含預(yù)定量的化合物以及與之聯(lián)用的可藥用的稀釋劑、載體或賦形劑，所述預(yù)定量是經(jīng)過(guò)計(jì)算足以產(chǎn)生預(yù)期效應(yīng)的量。單位劑型的規(guī)格取決于采用的具體化合物、給藥途徑和頻率、所要達(dá)到的效果，以及各化合物在主體中的藥效學(xué)。“可藥用的賦形劑”、“可藥用的稀釋劑”、“可藥用的載體”或“可藥用的佐劑”是指這樣的賦形劑、稀釋劑、載體和/或佐劑，其可用于制備總體上安全、無(wú)毒并且沒有生物學(xué)或其他方面不期望情況的藥物組合物，并且包括可為獸用和/或人類藥用的賦形劑、稀釋劑、載體和佐劑。本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中所用的“可藥用的賦形劑、稀釋劑、載體和/或佐劑”包括一種或多種這樣的賦形劑、稀釋劑、載體和佐劑的情況。如本文所用，“藥物組合物”旨在包括適合施用于受試者(如哺乳動(dòng)物，特別是人)的組合物?！八幬锝M合物”一般是無(wú)菌的，并且優(yōu)選不含那些能引起受試者產(chǎn)生不良反應(yīng)的污染物(例如，藥物組合物中的化合物為醫(yī)藥級(jí))。可將藥物組合物設(shè)計(jì)成能夠通過(guò)多種不同的給藥途徑施用于需要該藥物組合物的受試者或患者，給藥途徑包括經(jīng)口、靜脈內(nèi)、含服、直腸、腸胃外、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、氣管內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、吸入等。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”和“有效的量”可替換使用，是指所施用的、足以使預(yù)期應(yīng)用生效的化合物(也可稱為藥劑、藥物化合物或藥物，并且被包含于組合物或藥物組合物中)的量，所述預(yù)期應(yīng)用包括但不限于治療疼痛或者治療疾病或病癥。例如，有效量的化合物能在一定程度上緩解所治療的疼痛、病癥或疾病的一種或多種癥狀，以及/或者能在一定程度上抑制正接受治療的主體已有的或者有可能要產(chǎn)生的疼痛、病癥或疾病的一種或多種癥狀。治療有效量根據(jù)預(yù)期應(yīng)用(體外或體內(nèi))、或受試者(如受試者的體重和年齡)、以及所治療的疼痛、病癥或疾病(如疼痛、病癥或疾病的輕重程度)、給藥途徑等會(huì)有所不同，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定治療有效量。該術(shù)語(yǔ)也適用于能誘發(fā)靶細(xì)胞的特定應(yīng)答的劑量。根據(jù)所選的具體化合物、采用的給藥方式、是否與其他化合物聯(lián)合給藥、給藥時(shí)間、給藥組織和攜帶化合物的物理給藥系統(tǒng)，具體劑量會(huì)有所不同。在本文中，術(shù)語(yǔ)“血清半衰期”和“血漿半衰期”如本領(lǐng)域所理解的那樣使用，并且指的是給藥后該物質(zhì)在受試者的血清中的量或濃度降到初始值的一半所用的時(shí)間。血清半衰期和血漿半衰期可用于確定或推斷化合物(如藥物化合物、示蹤劑或其他可施用于受試者的化合物)的作用持續(xù)時(shí)間；較長(zhǎng)的血清半衰期和較長(zhǎng)的血漿半衰期表明所述化合物具有較長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“作用持續(xù)時(shí)間”是指給藥后，該化合物對(duì)用藥的受試者產(chǎn)生顯著效果的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)度。例如，在化合物具有麻醉作用的情況下，作用持續(xù)時(shí)間包括施用該化合物后受試者經(jīng)歷麻醉作用的時(shí)間。比參照化合物具有更長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間的化合物是這樣的化合物，該化合物的作用(如麻醉)比參考化合物的作用(如麻醉)持續(xù)的時(shí)間更長(zhǎng)。如本文所用，“鈉通道”為一大類大分子中的任意一種，其天然存在于生物膜(如神經(jīng)細(xì)胞膜)中。當(dāng)存在于自然就有的膜中時(shí)，鈉通道對(duì)這些膜兩側(cè)的電壓差敏感，并且可以允許鈉離子通過(guò)細(xì)胞膜。與某些毒素相結(jié)合，能夠阻斷鈉離子通過(guò)(否則，如果沒有該毒素，則鈉離子就會(huì)通過(guò))。自然產(chǎn)生的鈉通道有多種形式(如在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中已鑒別出了編碼十種獨(dú)特的na+通道同工型(nav1.1-1.9，nax，其中x指鈉通道亞型)的基因(參見文獻(xiàn)hille，b.ionchannelsofexcitablemembranes，第三版，sinauer：sunderland，ma，2001.第73-78頁(yè))。本文所用的術(shù)語(yǔ)“鈉通道”包括鈉通道變體，無(wú)論是基因變體、剪接變體、糖基化變體、翻譯后加工變體、還是其他變體(包括人工變體)。膜上的鈉通道能傳遞帶電離子(特別是鈉離子)，并且能產(chǎn)生可通過(guò)各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)測(cè)量的“鈉電流”。鈉電流的幅度和時(shí)間進(jìn)程會(huì)受到外部因素(包括施用藥物和毒素)的影響。stx化合物(包括本文公開的石房蛤毒素類似物)可減小鈉電流的幅度。這種減小可稱為“阻斷”或“阻塞”或其他表示幅度降低的術(shù)語(yǔ)，并且可部分或完全阻斷離子從鈉通道流過(guò)。鈉通道是神經(jīng)和肌肉系統(tǒng)正常行使功能的關(guān)鍵。鈉電流的阻斷(如通過(guò)石房蛤毒素類似物與鈉通道結(jié)合來(lái)阻斷)能阻斷神經(jīng)傳導(dǎo)，如阻斷沿痛覺纖維以及其他神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)、阻止肌肉收縮，因此可以影響受試者的感覺、運(yùn)動(dòng)以及其他生理屬性。痛覺纖維的阻塞能導(dǎo)致痛覺喪失和感覺缺失；肌肉運(yùn)動(dòng)的阻斷能導(dǎo)致受影響的肌肉的弱化或麻痹，并能導(dǎo)致受影響的肌肉的松弛。該松弛作用可有效減少或消除皮膚皺紋，其中受影響的肌肉包括皮膚附近的肌肉或連接到皮膚的肌肉。鈉電流的阻斷(如通過(guò)石房蛤毒素類似物與鈉通道結(jié)合來(lái)阻斷)能影響心血管系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)、膀胱、心臟、感覺器官和其他器官和器官系統(tǒng)。對(duì)受試者施用能夠有效降低或消除其鈉通道活性(無(wú)論是在特定位置處，還是在某一組織、器官、器官系統(tǒng)中，或者是全身)的石房蛤毒素類似物，有益于治療或改善疾病、失調(diào)和病癥以及減輕與這些失調(diào)相關(guān)的疼痛和不適，其中包括疼痛、肌肉痙攣、癲癇、眼瞼痙攣、局灶性肌張力障礙、多汗癥和膀胱松弛、心臟失調(diào)和病癥(包括心律失常)、消化道失調(diào)和病癥、感覺失調(diào)和病癥、癌癥、皮膚病癥、其他本文公開的失調(diào)和病癥。如本文所用，“受體”是指結(jié)合配體的分子或分子的一部分；例如當(dāng)stx結(jié)合到鈉通道時(shí)，鈉通道作為stx受體。不同的分子以不同的特異性與受體結(jié)合；某些配體以高的特異性與受體結(jié)合。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“配體”是指結(jié)合到受體的分子；在實(shí)施方案中，配體可能會(huì)比其結(jié)合的受體更易移動(dòng)。在實(shí)施方案中，配體可以是比其結(jié)合的受體更小、或質(zhì)量更低的分子。例如在生理?xiàng)l件下stx分子通常比鈉通道更小、質(zhì)量更低并且更易移動(dòng)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“受體特異性”是指特定配體與受體結(jié)合的特異性。受體特異性的測(cè)量結(jié)果提供了針對(duì)受體和配體之間相互作用的藥物動(dòng)力學(xué)特性的理解和細(xì)節(jié)?！翱伤幱玫柠}”是指保持標(biāo)準(zhǔn)品(freebase)的生物學(xué)效力以及任選的其他特性的那些鹽(有機(jī)鹽或無(wú)機(jī)鹽)。因此，“可藥用的鹽”包括任何可藥用以及具有預(yù)期藥理特性的鹽?！翱伤幱玫柠}”可以為衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或者無(wú)機(jī)或有機(jī)堿的任意鹽。術(shù)語(yǔ)“可藥用的陰離子”是指該酸加成鹽的陰離子。術(shù)語(yǔ)“可藥用的陽(yáng)離子”是指由堿加成而形成的陽(yáng)離子。該鹽和/或陰離子或陽(yáng)離子被選擇為在生物學(xué)或其他方面沒有不利之處?？伤幱玫柠}可通過(guò)與無(wú)機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)而獲得，所述的酸例如為鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、蘋果酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸等。這樣的鹽包括衍生自無(wú)毒也不會(huì)以任何方式產(chǎn)生不良影響的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或者無(wú)機(jī)或有機(jī)堿(包括氨基酸)的鹽。合適的無(wú)機(jī)鹽包括與堿金屬(如鈉、鉀、鎂、鈣和鋁)形成的那些鹽。合適的有機(jī)鹽包括與有機(jī)堿(如胺類的堿，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、n-甲葡糖胺等)形成的那些鹽。所述的鹽還包括與無(wú)機(jī)酸(如鹽酸和氫溴酸)和有機(jī)酸(如乙酸、檸檬酸、馬來(lái)酸，以及烷烴磺酸和芳烴磺酸，如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成鹽。“可藥用的酯”是指可藥用的且具有期望的藥理學(xué)特性的任意酯?？伤幱玫孽グㄓ苫衔镏写嬖诘聂然?、磺酰氧基和膦酰氧基基團(tuán)形成的酯，如c1-6烷基酯。當(dāng)存在兩個(gè)酸性基團(tuán)時(shí)，可藥用的鹽或酯可為單酸單鹽或單酸單酯、或者為二鹽或二酯；類似地，當(dāng)存在超過(guò)兩個(gè)酸性基團(tuán)時(shí)，酸性基團(tuán)的一部分或全部可成鹽或酯化。在所公開的具體化合物形成鹽的情況中，這些鹽也在本申請(qǐng)公開的范圍內(nèi)。除非另有說(shuō)明，否則提到本文任意結(jié)構(gòu)式的化合物應(yīng)被理解為包括提到其鹽。本文所用的術(shù)語(yǔ)“鹽”是指用無(wú)機(jī)和/或有機(jī)酸和堿形成的酸式鹽和/或堿式鹽。另外，當(dāng)化合物同時(shí)包含堿性結(jié)構(gòu)部分和酸性結(jié)構(gòu)部分時(shí)，可形成兩性離子(“內(nèi)鹽”)，這也包括在本文所用的術(shù)語(yǔ)“鹽”的范圍內(nèi)。優(yōu)選可藥用的鹽(如無(wú)毒、生理上可接受的鹽)，但是其他的鹽也是有用的，例如在制備過(guò)程可能采用的分離或純化步驟中使用?；衔锏柠}例如可通過(guò)以下方式形成：在諸如能夠使鹽析出的介質(zhì)中或者在水性介質(zhì)中，使該化合物與一定量的酸或堿(例如等量)反應(yīng)，然后凍干。包含堿性結(jié)構(gòu)部分的藥劑可與各種有機(jī)或無(wú)機(jī)酸形成鹽。示例性的酸加成鹽包括乙酸鹽(如與乙酸或三鹵乙酸(如三氟乙酸)形成的鹽)、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦鹽(camphorate)、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽(與鹽酸形成的鹽)、氫溴酸鹽(與溴化氫形成的鹽)、氫碘酸鹽、2-羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽(與蘋果酸形成的鹽)、馬來(lái)酸鹽(與馬來(lái)酸形成的鹽)、乙磺酸鹽(與乙磺酸形成的鹽)、甲磺酸鹽(與甲磺酸形成的鹽)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過(guò)硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽(與磷酸形成的鹽)、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽(例如與硫酸形成的鹽)、磺酸鹽(如本文提到的那些，包括與對(duì)甲苯磺酸形成的鹽)、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽如對(duì)甲苯磺酸鹽、十一酸鹽等。在具有本申請(qǐng)公開的特征的實(shí)施方案中，石房蛤毒素類似物可包括或者可形成鹽，包括：氯化物、乙酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、葡糖酸鹽、檸檬酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽和甲苯磺酸鹽。含有酸性結(jié)構(gòu)部分的化合物可與各種有機(jī)或無(wú)機(jī)堿形成鹽。示例性的堿式鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(如鈉、鋰和鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣和鎂鹽)、與有機(jī)堿形成的鹽(所述有機(jī)堿例如為有機(jī)胺，如芐星青霉素、二環(huán)己基胺、海巴青霉素(由n，n-雙(脫氫松香)乙二胺形成)、n-甲基-d-葡糖胺、n-甲基-d-葡糖酰胺、叔丁胺)、以及與氨基酸(如精氨酸、賴氨酸等)形成的鹽。含氮堿性基團(tuán)可被下述化合物季銨化，所述化合物例如為低級(jí)烷基鹵化物(如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、及其溴化物和碘化物)、二烷基硫酸鹽(如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽)、長(zhǎng)鏈鹵代烴(如癸基、月桂基、肉豆寇基和硬脂基氯化物、及其溴化物和碘化物)、芳烷基鹵化物(如苯甲基溴和苯乙基溴)等。在此還考慮到本申請(qǐng)公開的化合物的溶劑化物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的化合物可具有一個(gè)或多個(gè)手性中心，因而可被制成單獨(dú)的立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體混合物，這取決于初始材料是采用單獨(dú)的立體異構(gòu)體還是采用立體異構(gòu)體混合物。除非另有說(shuō)明，否則化合物或化合物組的描述或命名旨在同時(shí)包括單獨(dú)的異構(gòu)體或立體異構(gòu)體混合物(外消旋或其他)。確定立體化學(xué)屬性和分離立體異構(gòu)體的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知[參見文獻(xiàn)marchj.：advancedorganicchemistry(第4版，johnwileyandsons，紐約，n.y.，1992)中第4章的討論]。在所公開的活性化合物及其鹽可以以其互變異構(gòu)體形式存在的情況下，所有這類互變異構(gòu)體形式也考慮為本申請(qǐng)公開內(nèi)容的一部分?；衔锏乃辛Ⅲw異構(gòu)體(例如，由于各種取代基上的不對(duì)稱碳原子而可能存在的那些立體異構(gòu)體；包括對(duì)映異構(gòu)形式(即使沒有不對(duì)稱碳原子也可存在)和非對(duì)映異構(gòu)形式)均被考慮在本申請(qǐng)公開的范圍內(nèi)。本申請(qǐng)公開的化合物的單獨(dú)立體異構(gòu)體可以(例如)實(shí)質(zhì)上不含其他異構(gòu)體，或者可混合(例如)成為外消旋物、或與所有其他的或其他所選的立體異構(gòu)體混合。本申請(qǐng)公開的化合物的立體中心可具有如iupac1974recommendations所定義的s或r構(gòu)型。術(shù)語(yǔ)“前體藥物”是指化合物的非活性前體，其在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為生物活性形式。前體藥物通常是有益的，這是由于在某些情況下前體藥物比母體化合物更容易給藥。前體藥物例如可以是口服時(shí)為生物可利用的，而母體化合物則并非如此。在藥物組合物中，前體藥物還可能比母體藥物具有更好的溶解性。前體藥物可通過(guò)各種機(jī)制轉(zhuǎn)化為母體藥物，所述機(jī)制包括酶促過(guò)程和代謝水解。參見以下文獻(xiàn)：harper，n.j.(1962).druglatentiationinjucker，ed.progressindrugresearch，4：221-294；morozowich等，(1977).applicationofphysicalorganicprinciplestoprodrugdesignine.b.rocheed.designofbiopharmaceuticalpropertiesthroughprodrugsandanalogs，apha；acad.pharm.sci.；e.b.roche，ed.(1977).bioreversiblecarriersindrugindrugdesign，theoryandapplication，apha；h.bundgaard，ed.(1985)designofprodrugs，elsevier；wang等，(1999)prodrugapproachestotheimproveddeliveryofpeptidedrug，curr.pharm.design.5(4)：265-287；pauletti等，(1997).improvementinpeptidebioavailability：peptidomimeticsandprodrugstrategies，adv.drug.deliveryrev.27：235-256；mizen等，(1998).theuseofestersasprodrugsfororaldeliveryofβ-lactamantibiotics，pharm.biotech.11，：345-365；gaignault等，(1996).designingprodrugsandbioprecursorsi.carrierprodrugs，pract.med.chem.671-696；m.asgharnejad(2000).improvingoraldrugtransportviaprodrugs，ing.l.amidon，p.i.leeande.m.topp，eds.，transportprocessesinpharmaceuticalsystems，marcelldekker，p.185-218；balant等，(1990)prodrugsfortheimprovementofdrugabsorptionviadifferentroutesofadministration，eur.j.drugmetab.pharmacokinet.，15(2)：143-53；balimaneandsinko(1999).involvementofmultipletransportersintheoralabsorptionofnucleosideanalogue，adv.drugdeliveryrev.，39(1-3)：183-209；browne(1997).fosphenytoin(cerebyx)，clin.neuropharmacol.20(1)：1-12；bundgaard(1979).bioreversiblederivatizationofdrugs--principleandapplicabilitytoimprovethetherapeuticeffectsofdrugs，arch.pharm.chemi.86(1)：1-39；h.bundgaard，ed.(1985)designofprodrugs，newyork：elsevier；fleisher等，(1996).improvedoraldrugdelivery：solubilitylimitationsovercomebytheuseofprodrugs，adv.drugdeliveryrev.19(2)：115-130；fleisher等，(1985).designofprodrugsforimprovedgastrointestinalabsorptionbyintestinalenzymetargeting，methodsenzymol.112：360-81；farquhard等，(1983).biologicallyreversiblephosphate-protectivegroups，j.pharm.sci.，72(3)：324-325；han，h.k.等，(2000).targetedprodrugdesigntooptimizedrugdelivery，aapspharmsci.，2(1)：e6；sadzukay.(2000).effectiveprodrugliposomeandconversiontoactivemetabolite，curr.drugmetab.，1(1)：31-48；d.m.lambert(2000)rationaleandapplicationsoflipidsasprodrugcarriers，eur.j.pharm.sci.，11suppl2：s15-27；wang，w.等，(1999)prodrugapproachestotheimproveddeliveryofpeptidedrugs.curr.pharm.des.，5(4)：265-87。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“取代”優(yōu)選是指：用指定的一種取代基或多種取代基取代，可允許多種程度的取代，除非另有說(shuō)明。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“任選”是指隨后描述的情況可發(fā)生也可以不發(fā)生，并且既包括發(fā)生的情況，也包括不發(fā)生的情況。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“衍生物”及其語(yǔ)法上變形的表述方式優(yōu)選是指本申請(qǐng)公開的化合物的任何化學(xué)衍生物，例如酯或酰胺，并且優(yōu)選為具有藥學(xué)功能的化合物，其在施用于哺乳動(dòng)物時(shí)能(直接或間接)提供本申請(qǐng)公開的化合物或其活性代謝物。這樣的衍生物是本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要經(jīng)過(guò)過(guò)多實(shí)驗(yàn)就能清楚知道的，并且可參考文獻(xiàn)：burger′smedicinalchemistryanddrugdiscovery，5thedition，vol1：principlesandpractice(以引用的方式將該文獻(xiàn)所教導(dǎo)的生理學(xué)功能性衍生物的內(nèi)容并入到本文中)。這樣的衍生物包括所謂的前體藥物化合物，例如經(jīng)烷基、?；?、糖或肽(如寡肽)衍生化、并且容易降解或代謝為本申請(qǐng)公開的活性化合物的那些根據(jù)本申請(qǐng)公開的化合物。這樣的衍生物包括本申請(qǐng)公開的化合物的生物降解性聚合物衍生物。合適的聚合物和制備生物降解性聚合物衍生物的方法是本領(lǐng)域已知的，例如參見文獻(xiàn)：int.j.pharm.115，61-67(1995)。在本文中，術(shù)語(yǔ)“脂類”如本領(lǐng)域所理解的那樣使用，并且指的是一大類化學(xué)化合物，其包括但不限于(例如)甾醇、單酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂、鞘脂、聚酮化合物、脂肪和蠟。在本文中，術(shù)語(yǔ)“類固醇”如本領(lǐng)域所理解的那樣使用，并且指的是一大類化學(xué)品，其中一個(gè)示例性實(shí)例為膽固醇，其包括一個(gè)包含四個(gè)稠合環(huán)(三個(gè)環(huán)己烷環(huán)和一個(gè)環(huán)戊烷環(huán))的甾烷母核，還包括具有不同程度氧化的環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，以及包括在環(huán)結(jié)構(gòu)上具有所有可能的取代基的化合物。術(shù)語(yǔ)“給藥”是指將本申請(qǐng)公開的化合物引入主體中。一種優(yōu)選的給藥途徑為口服給藥。另一優(yōu)選的途徑為靜脈內(nèi)給藥。但是可采用任意給藥途徑，例如局部、皮下、腹膜、動(dòng)脈內(nèi)、吸入、陰道、直腸、鼻腔、引入腦脊液中、或滴注到體腔(bodycompartment)內(nèi)。術(shù)語(yǔ)“脂族基團(tuán)”是指飽和或不飽和的直鏈或支鏈烴基團(tuán)，包括例如烷基、烯基和炔基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“烷”或“烷基”是指這樣的直鏈或支鏈烴基團(tuán)，其具有1至24個(gè)碳原子、或具有1至12個(gè)碳原子、或具有2至5個(gè)碳原子、或具有6至18個(gè)碳原子、或優(yōu)選具有2至12個(gè)碳原子，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、正辛基、十二烷基、十八烷基、戊基、2-乙基己基等。除非另外說(shuō)明，否則烷基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：芳基(任選取代的)、雜環(huán)(任選取代的)、碳環(huán)(任選取代的)、鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、烷氧基(如c1至c7)(任選取代的)、?；?如c1至c7)、芳氧基(如c1至c7)(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、烷?；?任選取代的)、芳?；?任選取代的)、羧基、受保護(hù)的羧基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、(單取代)氨基、(雙取代)氨基、受保護(hù)的氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；取Ｐg(shù)語(yǔ)“烯基”是指這樣的直鏈或支鏈烴基團(tuán)，其具有2至12個(gè)碳原子、或具有2至4個(gè)碳原子、或具有2至5個(gè)碳原子、或具有6至18個(gè)碳原子、或優(yōu)選具有2至12個(gè)碳原子，并且具有至少一個(gè)c＝c雙鍵(順式或反式)，例如乙烯基。除非另外說(shuō)明，否則烯基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：芳基(包括取代芳基)、雜環(huán)(包括取代雜環(huán))、碳環(huán)(包括取代碳環(huán))、鹵素、羥基、烷氧基(任選取代的)、芳氧基(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、烷?；?任選取代的)、芳?；?任選取代的)、氰基、硝基、氨基、取代氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；?。術(shù)語(yǔ)“炔基”是指這樣的直鏈或支鏈烴基團(tuán)，其具有2至12個(gè)碳原子、或具有2至4個(gè)碳原子、或具有2至5個(gè)碳原子、或具有6至18個(gè)碳原子、或優(yōu)選具有2至12個(gè)碳原子，并且具有至少一個(gè)c≡c三鍵，例如乙炔基。除非另外說(shuō)明，否則炔基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：芳基(包括取代芳基)、雜環(huán)(包括取代雜環(huán))、碳環(huán)(包括取代碳環(huán))、鹵素、羥基、烷氧基(任選取代的)、芳氧基(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、烷?；?任選取代的)、芳?；?任選取代的)、氰基、硝基、氨基、取代氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；?。術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指連接到氧的烷基基團(tuán)，即r-o-。該式中r代表烷基基團(tuán)。其一個(gè)例子為甲氧基基團(tuán)ch3o-?！坝袡C(jī)基團(tuán)”可為官能化的、或者包含與該有機(jī)基團(tuán)相連的附加官能團(tuán)(如羧基、氨基、羥基等)，其可為受保護(hù)的、或未受保護(hù)的。例如，術(shù)語(yǔ)“烷基基團(tuán)”不僅包括純的開鏈飽和烴烷基取代基，如甲基、乙基、丙基、叔丁基等等，還包括具有本領(lǐng)域所知的其他取代基(如羥基、烷氧基、烷基磺酰基、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、氨基甲酸酯、羧基等)的烷基取代基。因此，“烷基基團(tuán)”包括醚、酯、鹵代烷基、硝基烷基、羧烷基、羥烷基、磺烷基等。“氰基”是指-cn官能團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“鹵”和“鹵素”是指氟、氯、溴或碘基?？梢跃哂幸粋€(gè)或多個(gè)(相同或不同)鹵素原子。術(shù)語(yǔ)“鹵代烷基”是指由一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的上述定義的烷基。該鹵素原子可相同或不同。術(shù)語(yǔ)“二鹵代烷基”是指由兩個(gè)可以相同或不同的鹵基取代的上述定義的烷基。術(shù)語(yǔ)“三鹵代烷基”是指由三個(gè)可以相同或不同的鹵基取代的上述定義的烷基。術(shù)語(yǔ)“全鹵代烷基”是指烷基基團(tuán)中的每個(gè)氫原子都被鹵素原子取代的上述定義的鹵代烷基。術(shù)語(yǔ)“全氟烷基”是指烷基基團(tuán)中的每個(gè)氫原子都被氟基取代的上述定義的鹵代烷基。術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指全飽和或部分不飽和的單、雙或三環(huán)飽和環(huán)。該基團(tuán)的例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、金剛烷基、環(huán)辛基、順式或反式萘烷、二環(huán)[2.2.1]庚-2-烯、環(huán)己-1-烯基、環(huán)戊-1-烯基、1，4-環(huán)辛二烯基等。除非另外說(shuō)明，否則環(huán)烷基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：芳基(包括取代芳基)、雜環(huán)(包括取代雜環(huán))、碳環(huán)(包括取代碳環(huán))、鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、烷氧基(如c1至c7)(任選取代的)、酰基(如c1至c7)、芳氧基(如c1至c7)(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、烷?；?任選取代的)、芳酰基(任選取代的)、羧基、受保護(hù)的羧基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、(單取代)氨基、(雙取代)氨基、受保護(hù)的氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；取Ｐg(shù)語(yǔ)“(環(huán)烷基)烷基”是指由上述定義的烷基基團(tuán)取代的上述定義的環(huán)烷基基團(tuán)。該基團(tuán)的例子包括(環(huán)己基)甲基、3-(環(huán)丙基)-正丙基、5-(環(huán)戊基)己基、6-(金剛烷基)己基等。除非另外說(shuō)明，否則(環(huán)烷基)烷基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：烷基(包括取代烷基)、芳基(包括取代芳基)、雜環(huán)(包括取代雜環(huán))、碳環(huán)(包括取代碳環(huán))、鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、烷氧基(如c1至c7)(任選取代的)、?；?如c1至c7)、芳氧基(如c1至c7)(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、烷酰基(任選取代的)、芳?；?任選取代的)、羧基、受保護(hù)的羧基、氰基、硝基、氨基、取代氨基、(單取代)氨基、(雙取代)氨基、受保護(hù)的氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；?。術(shù)語(yǔ)“取代苯基”是指由一個(gè)或多個(gè)(在某些情況下為一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè))選自以下的結(jié)構(gòu)部分所取代的苯基基團(tuán)：鹵素、羥基、受保護(hù)的羥基、氰基、硝基、三氟甲基、c1至c7烷基、c1至c7烷氧基、c1至c7?；?、c1至c7酰氧基、羧基、氧羧基、受保護(hù)的羧基、羧甲基、受保護(hù)的羧甲基、羥甲基、受保護(hù)的羥甲基、氨基、受保護(hù)的氨基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、甲酰胺、受保護(hù)的甲酰胺、n-(c1至c6烷基)甲酰胺、受保護(hù)的n-(c1至c6烷基)甲酰胺、n，n-二(c1至c6烷基)甲酰胺、三氟甲基、n-((c1至c6烷基)磺?；?氨基、n-(苯磺酰基)氨基或苯基(取代或未取代的，從而形成例如聯(lián)苯基或萘基基團(tuán))。術(shù)語(yǔ)“取代苯基”的例子包括：?jiǎn)?鹵代)或二(鹵代)苯基基團(tuán)，如2，3或4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2，3或4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2，3或4-氟苯基等；單(羥基)或二(羥基)苯基基團(tuán)，如2，3或4-羥苯基、2，4-二羥苯基、其受保護(hù)的羥基衍生物等；硝基苯基基團(tuán)，如2，3或4-硝基苯基；腈基苯基基團(tuán)，如2，3或4-腈基苯基；單(烷基)或二(烷基)苯基基團(tuán)，如2，3或4-甲苯基、2，4-二甲基苯基、2，3或4-(異丙基)苯基、2，3或4-乙基苯基、2，3或4-(正丙基)苯基等；單(烷氧基)或二(烷氧基)苯基基團(tuán)，如2，6-二甲氧基苯基、2，3或4-(異丙氧基)苯基、2，3或4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；2，3或4-三氟甲基苯基；單羧基或二羧基苯基或(受保護(hù)的羧基)苯基基團(tuán)，如2，3或4-羧基苯基或2，4-二(受保護(hù)的羧基)苯基；單(羥甲基)或二(羥甲基)苯基或(受保護(hù)的羥甲基)苯基，如2，3或4-(受保護(hù)的羥甲基)苯基或3，4-二(羥甲基)苯基；單(氨甲基)或二(氨甲基)苯基或(受保護(hù)的氨甲基)苯基，如2，3或4-(氨甲基)苯基或2，4-(受保護(hù)的氨甲基)苯基；或單(n-(甲磺?；被?)或二(n-(甲磺?；被?)苯基，如2，3或4-(n-(甲磺?；被?)苯基。此外，術(shù)語(yǔ)“取代苯基”還表示其中取代基不同的雙取代苯基基團(tuán)，例如3-甲基-4-羥苯基、3-氯-4-羥苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羥苯基、3-羥基-4-硝基苯基、2-羥基-4-氯苯基等。術(shù)語(yǔ)“(取代苯基)烷基”是指連接到上述定義的烷基基團(tuán)中的一種上的上述取代苯基基團(tuán)中的一種。該(取代苯基)烷基連接到另一結(jié)構(gòu)部分上。(取代苯基)烷基的例子包括諸如下列所述的基團(tuán)：如2-苯基-1-氯乙基、2-(4′-甲氧基苯基)乙基、4-(2′，6′-二羥基苯基)正己基、2-(5′-氰基-3′-甲氧基苯基)正戊基、3-(2′，6′-二甲基苯基)正丙基、4-氯-3-氨基芐基、6-(4′-甲氧基苯基)-3-羧基(正己基)、5-(4′-氨甲基苯基)-3-(氨甲基)正戊基、5-苯基-3-氧代-正戊-1-基、(4-羥基萘-2-基)甲基等。術(shù)語(yǔ)“芳”或“芳基”是指含有芳香同素環(huán)(即烴)形式的單、雙或三環(huán)的基團(tuán)，優(yōu)選為6至12元，如苯基、萘基和聯(lián)苯基。除非另外說(shuō)明，否則芳基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：烷基(任選取代的烷基)、烯基(任選取代的)、芳基(任選取代的)、雜環(huán)(任選取代的)、鹵素、羥基、烷氧基(任選取代的)、芳氧基(任選取代的)、烷酰基(任選取代的)、芳酰基(任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、氰基、硝基、氨基、取代氨基、酰氨基、氨基甲酸酯、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；??？扇芜x地，相鄰取代基及其連接的原子形成3至7元環(huán)。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指具有1至4個(gè)雜原子的任選取代的五元環(huán)或六元環(huán)，雜原子例如為氧、硫和/或氮原子(單獨(dú)的，或者與另外的氮、硫或氧環(huán)原子連接)。另外，上述任選取代的五元或六元環(huán)可任選地與芳香五元或六元環(huán)體系稠合。例如，該環(huán)可任選地與諸如苯、吡啶或三唑體系之類的芳香五元或六元環(huán)體系稠合。下述的環(huán)體系為術(shù)語(yǔ)“雜芳基”所指的雜環(huán)(取代或未取代的)官能團(tuán)的例子：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、噁嗪基、三嗪基、四唑并噻二嗪、1，5-[b]噠嗪基和嘌呤基、以及苯并衍生物(如苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基和吲哚基)。除非另外說(shuō)明，否則雜芳基基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：一至三個(gè)鹵素、三鹵甲基、氨基、受保護(hù)的氨基、氨基鹽、單取代氨基、雙取代氨基、羧基、受保護(hù)的羧基、羧酸鹽、羥基、受保護(hù)的羥基、羥基基團(tuán)的鹽、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、烷基(任選取代的)、環(huán)烷基(任選取代的)、(環(huán)烷基)烷基(任選取代的)、苯基(任選取代的)、苯基烷基(任選取代的苯基烷基)。雜芳基基團(tuán)的取代基的定義如上所述，或者在三鹵甲基的情況下可為三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基或三碘甲基。在與雜芳基環(huán)的上述取代基關(guān)聯(lián)使用時(shí)，“低級(jí)烷氧基”是指c1至c4烷氧基基團(tuán)，類似地，“低級(jí)烷硫基”是指c1至c4烷硫基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”、“雜環(huán)型基團(tuán)”、“雜環(huán)基團(tuán)”或“雜環(huán)狀基團(tuán)”涉及完全飽和、部分不飽和或完全不飽和的基團(tuán)，其包括在至少一個(gè)含碳原子環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子的芳香環(huán)基團(tuán)(“雜芳基”)或非芳香環(huán)狀基團(tuán)(例如3至13元單環(huán)、7至17元雙環(huán)、或10至20元三環(huán)體系，優(yōu)選總共含有3至10個(gè)環(huán)原子)。包含雜原子的雜環(huán)基團(tuán)的每個(gè)環(huán)可包含1、2、3或4個(gè)選自氮原子、氧原子和/或硫原子的雜原子，其中氮和硫雜原子可任選地被氧化，并且氮雜原子可任選地被季銨化。雜環(huán)基團(tuán)可在環(huán)或環(huán)體系的任意雜原子或碳原子上被連接。在雜環(huán)的氮原子上被連接的雜環(huán)基團(tuán)稱為n-連接的雜環(huán)，在雜環(huán)的碳原子上被連接的雜環(huán)基團(tuán)稱為c-連接的雜環(huán)。多環(huán)雜環(huán)的環(huán)可通過(guò)一個(gè)或多個(gè)螺接而稠合、橋連和/或連接。示例性的單環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括：吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、環(huán)氧丙烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑啉基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、噁二唑基、呱啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮雜卓基(2-oxoazepinyl)、氮雜卓基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、三嗪基、四氫吡喃基、四唑基、三唑基、嗎啉基、噻嗎啉基、噻嗎啉基亞砜、噻嗎啉基砜、1，3-二氧戊環(huán)和四氫-1，1-二氧代噻吩基等。示例性的雙環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括：吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、奎寧環(huán)基、喹啉基、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并氧茂基(benzofuranly)、二氫苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并二氧雜環(huán)戊二烯基(benzodioxolyl)、二氫苯并二氧雜環(huán)戊二烯基(dihydrobenzodioxolyl)、苯并二噁英基(benzodioxinyl)、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基或呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氫異吲哚基、二氫喹唑啉基(如3，4-二氫-4-氧代-喹唑啉基)、四氫喹啉基、氮雜環(huán)烷基(如6-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷)、氮雜螺烷基(如1，4二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷)、咪唑并吡啶基(如咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)、三唑并吡啶基(如1，2，4-三唑并[4，3-a]吡啶-3-基)和六氫咪唑并吡啶基(如1，5，6，7，8，8a-六氫咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)等。示例性的三環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括：咔唑基、苯并吲哚基(benzidolyl)、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、夾氧蒽基等。除非另外說(shuō)明，否則雜環(huán)基團(tuán)任選地被一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：烷基(包括取代烷基)、烯基、氧代、芳基(包括取代芳基)、雜環(huán)(包括取代雜環(huán))、碳環(huán)(任選取代的)、鹵素、羥基、烷氧基(任選取代的)、芳氧基(任選取代的)、烷?；?任選取代的)、芳?；?任選取代的)、烷基酯(任選取代的)、芳基酯(任選取代的)、氰基、硝基、酰氨基、氨基、取代氨基、內(nèi)酰胺、脲、尿烷、磺?；?，其中任選地，一對(duì)或多對(duì)取代基與連接的原子一起形成3至7元環(huán)。術(shù)語(yǔ)“烷酰基”是指連接到羰基基團(tuán)的烷基基團(tuán)(可以如上述的那樣，為任選取代的)(即，-c(o)-烷基)。類似地，術(shù)語(yǔ)“芳?；笔侵高B接到羰基基團(tuán)的芳基基團(tuán)(可以如上述的那樣，為任選取代的)(即，-c(o)-芳基)。術(shù)語(yǔ)“(單取代)氨基”是指具有一個(gè)選自由以下基團(tuán)組成的組中的取代基的氨基基團(tuán)：苯基、取代苯基、烷基(包括取代烷基)、c1至c4酰基、c2至c7烯基(包括c2至c7取代烯基)、c2至c7炔基、c7至c16烷基芳基(包括c7至c16取代烷基芳基)以及雜芳基基團(tuán)。該(單取代)氨基還可具有氨基保護(hù)基團(tuán)，如術(shù)語(yǔ)“受保護(hù)的(單取代)氨基”所涵蓋的那樣。術(shù)語(yǔ)“(雙取代)氨基”是指具有兩個(gè)選自由以下基團(tuán)組成的組中的取代基的氨基基團(tuán)：苯基、取代苯基、烷基、取代烷基、c1至c7?；2至c7烯基、c2至c7炔基、c7至c16烷基芳基、c7至c16取代烷基芳基以及雜芳基。所述兩個(gè)取代基可相同或不同。術(shù)語(yǔ)“雜芳基(烷基)”是指在任意位置被上述定義的雜芳基取代的上述定義的烷基基團(tuán)?！半娮拥扰朋w”為具有不同分子式的不同原子、分子或離子，但是其具有相似或相同的外殼電子排列，并且也具有類似的特性(如藥理學(xué)特性(如藥物動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特性))?！敖Y(jié)構(gòu)部分”(moiety)是指分子的特定區(qū)段或官能團(tuán)。化學(xué)結(jié)構(gòu)部分通常是嵌入分子中或與分子附接的可識(shí)別的化學(xué)單元。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“r”及其相關(guān)術(shù)語(yǔ)r1、r2、r3等是指取代基，如本文所定義的那樣?！傲蛩岣笔侵竤o3-?！跋趸笔侵?no2基。“氧雜”是指-o-基。“氧代”是指＝o基?！盎酋；笔侵赶铝谢鶊F(tuán)：-s(o2)-h、-s(o2)-(烷基)、-s(o2)-(環(huán)烷基)、-s(o2)-(氨基)、-s(o2)-(芳基)、-s(o2)-(雜芳基)和-s(o2)-(雜環(huán)烷基)?！皝喕酋０坊?sulfonamidyl)或“亞磺酰氨基”是指-s(＝o)2-nrr基，其中每個(gè)r獨(dú)立地選自由以下基團(tuán)組成的組：氫、烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基(通過(guò)環(huán)上的碳連接)以及雜脂環(huán)基(通過(guò)環(huán)上的碳連接)。-s(＝o)2-nrr基的-nrr中的r基團(tuán)可以與其連接的氮一起形成4、5、6或7元環(huán)(-s(o2)-(雜環(huán)烷基)。在一些實(shí)施方案中為c1-c10亞磺酰氨基，其中亞磺酰氨基中的每個(gè)r共包含1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)或4個(gè)碳。亞磺酰氨基任選地被一個(gè)或多個(gè)如本文中針對(duì)烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基分別所述的取代基取代?！绊俊笔侵?s(o2)-(烷基)、-s(o2)-(芳基)、-s(o2)-(雜芳基)或-s(o2)-(雜環(huán)烷基)(這時(shí)，砜基團(tuán)附接在雜環(huán)烷基的碳原子上)。亞磺酰氨基任選地被一個(gè)或多個(gè)如本文中針對(duì)烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基分別所述的取代基取代。如本文所用，“標(biāo)記物”及其語(yǔ)法上變形的表述方式是指可檢測(cè)到的化合物或組合物，其直接或間接地與另一化合物軛合，如與石房蛤毒素類似物軛合，從而產(chǎn)生“標(biāo)記的”化合物。標(biāo)記物包括可檢測(cè)到的結(jié)構(gòu)部分?？蓹z測(cè)到的結(jié)構(gòu)部分能直接或間接產(chǎn)生可檢測(cè)到的信號(hào)。標(biāo)記物可以是自身可被檢測(cè)到的(如放射性同位素標(biāo)記物或熒光標(biāo)記物)，或者，在酶標(biāo)記物的情況下，可以催化底物化合物或組合物發(fā)生可檢測(cè)的化學(xué)改變。化合物可與提供可檢測(cè)信號(hào)的標(biāo)記物直接或間接軛合，所述標(biāo)記物例如為放射性同位素、熒光劑、酶、抗體、粒子如磁性顆粒、化學(xué)發(fā)光體、量子點(diǎn)、或特異性結(jié)合分子等。優(yōu)選的標(biāo)記物包括但不限于熒光標(biāo)記物、標(biāo)記酶和放射性同位素。合適的標(biāo)記物包括：例如，熒光或化學(xué)發(fā)光化合物，如熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、四甲基羅丹明、伊紅、藻紅、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀綠(malacitegreen)、均二苯乙烯、熒光黃(luciferyellow)、cascadetexasiaedans、edans、bodipyfl、lc紅640、cy5、cy5.5、lc紅705和oregongreentm。在richardp.haugland所著的molecularprobeshandbook(1996)中描述了合適的光學(xué)染料，在此通過(guò)引用方式明確地將其內(nèi)容并入本文。合適的標(biāo)記物還包括：熒光蛋白或肽(如綠色熒光蛋白(gfp)和gfp變體以及相關(guān)的肽)；(gfp，參見文獻(xiàn)：chalfie等，science263(5148)：802-805(1994年2月11日)；以及egfp，clontech公司-基因庫(kù)登錄號(hào)(genbankaccessionnumber)u55762)、藍(lán)色熒光蛋白(bfp；quantumbiotechnologies公司，地址為：1801demaisonneuveblvd.west，8thfloor，montreal(quebec)canadah3h1j9；參見文獻(xiàn)：stauber，r.h.biotechniques24(3)：462-471(1998)；3.heim，r.andtsien，r.y.curr.biol.6：178-182(1996))、增強(qiáng)型黃色熒光蛋白(eyfp；clontechlaboratories公司，地址為1020eastmeadowcircle，paloalto，calif.94303)、熒光素酶(參見文獻(xiàn)：ichiki等，j.immunol.150(12)：5408-5417(1993)以及renillawo92/15673；wo95/07463；wo98/14605；wo98/26277；wo99/49019；美國(guó)專利5,292,658；美國(guó)專利5,418,155；美國(guó)專利5,683,888；美國(guó)專利5,741,668；美國(guó)專利5,777,079；美國(guó)專利5,804,387；美國(guó)專利5,874,304；美國(guó)專利5,876,995；以及美國(guó)專利5,925,558)。合適的標(biāo)記物還包括：放射性標(biāo)記物(如125i、25s、32p、18f、14c、3h等)；生物標(biāo)記物，包括特異性結(jié)合分子(如生物素、鏈霉親和素、地高辛以及抗地高辛等)，酶如堿性磷酸酯酶、β-半乳糖苷酶(參見文獻(xiàn)：nolan等，procnatlacadsciusa85(8)：2603-2607(1988年4月))、或辣根過(guò)氧化物酶；及其他標(biāo)記物。所有上述文獻(xiàn)均通過(guò)引用方式明確地并入本文中?？刹捎帽绢I(lǐng)域任何已知的方法，將可檢測(cè)的結(jié)構(gòu)部分并到或并入石房蛤毒素類似物中、或?qū)⒃撌扛蚨舅仡愃莆锱c可檢測(cè)的結(jié)構(gòu)部分軛合，包括以下文獻(xiàn)所述的那些方法：hunter等，nature，144：945(1962)；david等，biochemistry，13：1014(1974)；pain等，j.immunol.meth.，40：219(1981)；以及nygren，j.histochem.andcytochem.，30：407(1982)。在本文中使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”具有最廣泛的含義，其包括：例如，多克隆抗體、單克隆抗體、具有多表位特異性的抗體組合物、單鏈以及抗體片段。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是指從一群本質(zhì)上同源的抗體中獲得的抗體，即，除了可能自然產(chǎn)生的極少量存在的變異，該群的單個(gè)抗體是相同的。“特異性結(jié)合到”或者對(duì)特定多肽或特定多肽的表位“具有特異性”的抗體這樣的抗體，其結(jié)合到該特定多肽或特定多肽的表位，而沒有實(shí)質(zhì)性地結(jié)合到任何其他的多肽或多肽的表位。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗體片段”及其語(yǔ)法上變形的表述方式是指包含完整抗體的一部分的分子，優(yōu)選為該完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括fab、fab′、f(ab′).sub.2和fv片段；微型雙功能抗體(diabodies)；線性抗體(參見文獻(xiàn)：zapata等，proteineng.8(10)：1057-1062[1995])；單鏈抗體分子；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。木瓜蛋白酶消化抗體，產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段(稱為“fab”片段，每個(gè)具有一個(gè)單獨(dú)的抗原結(jié)合位點(diǎn))，以及“fc”殘基片段(反映結(jié)晶難易能力的標(biāo)識(shí))。胃蛋白酶處理產(chǎn)生具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的f(ab′)2片段，并且該片段仍然能使抗原交聯(lián)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“fv”是指包含完全抗原的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。該區(qū)域由一個(gè)重鏈可變區(qū)和一個(gè)輕鏈可變區(qū)緊密地非共價(jià)締合而成的二聚體構(gòu)成。正是在這種構(gòu)造中，每個(gè)可變區(qū)的三個(gè)cdr互相作用而限定vh-vl二聚體表面的抗原結(jié)合位點(diǎn)?？傮w來(lái)說(shuō)，六個(gè)cdr賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變區(qū)(或fv的一半，只含對(duì)抗原具有特異性的三個(gè)cdr)也能夠識(shí)別并結(jié)合抗原，但是比完整結(jié)合位點(diǎn)的親和力低。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“fab片段”是指含有輕鏈恒定區(qū)和重鏈第一恒定區(qū)(ch1)的抗體片段。fab片段與fab′片段的不同之處在于：fab′片段在重鏈ch1區(qū)的羧基末端添加了幾個(gè)殘基(包括來(lái)自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸)。本文將恒定區(qū)的半胱氨酸殘基帶有巰基自由基的fab′記為fab′-sh。最初，f(ab′)2抗體片段被制備成一對(duì)二者之間具有鉸鏈半胱氨酸的fab′片段。抗體片段的其他化學(xué)偶聯(lián)方式也是本領(lǐng)域已知的。來(lái)自任意脊椎動(dòng)物的抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”可根據(jù)它們恒定區(qū)的氨基酸序列而歸為以下兩種完全不同的類型中的一種，所述兩種類型稱為κ和λ?！皢捂渇v”或“sfv”抗體片段包含抗體的vh和vl區(qū)，這些區(qū)域存在于單個(gè)多肽鏈中。該fv多肽還優(yōu)選地包含位于vh和vl區(qū)之間的多肽接頭，該多肽接頭能使sfv形成結(jié)合抗原所需的結(jié)構(gòu)。關(guān)于sfv的綜述可參見文獻(xiàn)：rosenburg和moore，pluckthuninthepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，springer-verlag，newyork，pp.269-315(1994)。根據(jù)重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，可將免疫球蛋白分為不同種類。主要有五種免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，并且其中某些還可分為亞型(同工型)，如igg1、igg2、igg3、igg4、iga和iga2。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“微型雙功能抗體”是指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，該片段在同一多肽鏈中包含連接到輕鏈可變區(qū)(vl)的重鏈可變區(qū)(vh)。通過(guò)在同一條鏈上的所述兩個(gè)區(qū)域之間采用很短而使其不能配對(duì)的接頭，從而強(qiáng)制使所述區(qū)域與另一條鏈的互補(bǔ)區(qū)域配對(duì)，并產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。微型雙功能抗體在下列文獻(xiàn)中有更詳細(xì)的描述，所述文獻(xiàn)例如為：ep404,097；wo93/11161；以及hollinger等，proc.natl.acad.sci.usa，90：6444-6448(1993)。本文所述的石房蛤毒素類似化合物可連接于另一分子上，該另一分子可作為標(biāo)記物和/或可將石房蛤毒素類似物引導(dǎo)到特定位置、器官、組織、細(xì)胞或細(xì)胞室。例如，抗體或抗體片段可連接到石房蛤毒素類似物上，從而有效地將石房蛤毒素類似物引導(dǎo)到特異性電壓門控鈉通道同工型或表達(dá)nav的細(xì)胞類型。如本文所用，短語(yǔ)“將石房蛤毒素類似物引導(dǎo)到…”中的“引導(dǎo)”用于表明石房蛤毒素類似物可結(jié)合于、或可定位于預(yù)期位置、器官、組織、細(xì)胞或細(xì)胞室的附近。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“成像”是指采用成像裝置和方法產(chǎn)生受試者或受試者的一部分的圖像，如x射線成像、計(jì)算機(jī)輔助斷層掃描(cat)成像、正電子發(fā)射斷層掃描(pet)成像、磁共振成像(mri)、單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層(spect)成像等。例如，pet成像包括建立目標(biāo)受試者的正電子發(fā)射放射性核素的斷層圖像。將放射性核素標(biāo)記的藥品，即放射性藥物，施用于要進(jìn)行成像的受試者。將該受試者置于pet成像系統(tǒng)中，該成像系統(tǒng)包括探測(cè)環(huán)和探測(cè)用電子設(shè)備。由于放射性核素的衰變，發(fā)射出被稱為“正電子”的帶正電荷的光子。對(duì)于常用的放射性藥物，如fdg(即18f-氟代脫氧葡萄糖)，這些正電子只能穿過(guò)受試者的組織運(yùn)動(dòng)幾毫米，之后與電子碰撞而導(dǎo)致互相湮滅。該正電子/電子湮滅會(huì)導(dǎo)致發(fā)射出一對(duì)反向的能量約為511kev的伽瑪射線。探測(cè)環(huán)的閃爍體組件所要探測(cè)的就是這些伽瑪射線。當(dāng)受到伽馬射線的撞擊時(shí)，該組件中的閃爍材料發(fā)出光，其被光電探測(cè)器組件(如光電二極管或光電倍增管)探測(cè)到。隨伽瑪射線的入射而處理光電探測(cè)器的信號(hào)。當(dāng)兩個(gè)伽瑪射線在幾乎相同的時(shí)刻撞擊相反位置的閃爍體時(shí)，記錄下一次符合事件。數(shù)據(jù)分類單元處理該符合事件以確定真正的符合事件，并挑選出表示死時(shí)間和單伽瑪射線探測(cè)的那些數(shù)據(jù)。將符合事件二進(jìn)制化并整合形成pet數(shù)據(jù)幀，其可重建為示出放射性核素標(biāo)記的藥品在受試者體內(nèi)的分布情況的圖像。mri是這樣一種醫(yī)學(xué)成像方式，其可以不采用x射線或其他電離輻射而構(gòu)建人體內(nèi)部圖像。mri采用強(qiáng)磁鐵建立一個(gè)強(qiáng)的、均一的靜態(tài)磁場(chǎng)(即“主磁場(chǎng)”)。當(dāng)人體或人體的一部分置于主磁場(chǎng)中時(shí)，與組織水中的氫原子核相關(guān)的核自旋極化。這意味著，與這些自旋相關(guān)的磁矩優(yōu)選地沿主磁場(chǎng)的方向排列，導(dǎo)致小的凈組織沿該軸(按照慣例為“z軸”)磁化。mri系統(tǒng)還包括所謂的梯度線圈部件，當(dāng)施加電流時(shí)其產(chǎn)生較小幅度的空間變化磁場(chǎng)。通常情況下，將梯度線圈設(shè)計(jì)成產(chǎn)生沿z軸排列的磁場(chǎng)分量，并且其幅度隨著沿x、y或z軸中一者的位置而線性變化。梯度線圈的作用是沿單一軸向使磁場(chǎng)強(qiáng)度小幅度斜線上升并隨之使核自旋共振頻率小幅度斜線上升。三個(gè)具有正交軸的梯度線圈通過(guò)在機(jī)體的各個(gè)位置產(chǎn)生信號(hào)共振頻率而用于“空間編碼”mr信號(hào)。射頻(rf)線圈用于產(chǎn)生在氫原子核的共振頻率或其附近的射頻能量脈沖。該線圈用于以可控的方式為核自旋系統(tǒng)增加能量。由于核自旋后松弛回到靜息能量狀態(tài)，因此它們以射頻信號(hào)的形式放出能量。mri系統(tǒng)探測(cè)到該信號(hào)，并采用計(jì)算機(jī)和已知算法將其與多個(gè)另外的該類信號(hào)相組合，以用于重建mr圖像。討論本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了用于研究、成像以及治療疼痛的方法和組合物。本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了可用于研究疼痛、治療疼痛和對(duì)疼痛成像的石房蛤毒素類似化合物(如石房蛤毒素型化合物、新石房蛤毒素型化合物和膝溝藻毒素型化合物)的制備方法。特別是，本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了在體內(nèi)具有鈉離子通道拮抗劑功能效力的石房蛤毒素類似化合物。本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了制備石房蛤毒素類似化合物的新型和新穎性的方法。本方法的實(shí)施方案允許對(duì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行選擇性修飾，從而使設(shè)計(jì)的化合物可具有改善的受體特異性和/或藥動(dòng)學(xué)特性。另外，本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了制備石房蛤毒素類似化合物的熒光和/或放射性標(biāo)記形式的方法，從而使得石房蛤毒素類似物(包括膝溝藻毒素型化合物)可用于對(duì)疼痛成像并確定疼痛的位置和/或來(lái)源。另外，可將石房蛤毒素類似化合物的實(shí)施方案設(shè)計(jì)成對(duì)特異性鈉通道同工型顯示出抑制效果。結(jié)構(gòu)a所述化合物的實(shí)施方案包括結(jié)構(gòu)a、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；喕酋０被?、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。r2可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、雜芳基(烷基)、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基、砜、-ora、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-so2ra、-no2或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷酰基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；喕酋０被蝽?。r3可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷酰基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。r4可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。r5可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、硫酸根、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。r6可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；⒘蛩岣?、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。r7可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-so2ra、-no2或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、烷氧基、氰基、雜芳基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2或-nhc(o)ra，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。r2可為氫。r3可為氫或正丙基。r4可為氫或正丙基。r5可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、硫酸根、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。r6可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、硫酸根、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。r7可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、烷氧基、烷?；?、-(ch2)2c(＝o)ra、-(ch2)2c(＝o)n(ra)2，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、-oc(＝o)nhra、-oc(＝o)n(ra)2，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、甲基、異丙基、十四烷基或以下基團(tuán)中的任意一種：r2為氫。r3可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫或丙基。r4可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫或丙基。r5可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、硫酸根、-oc(＝o)ra，其中ra為正丙基或苯基。r6可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、硫酸根、-oc(＝o)ra，其中ra為正丙基或苯基。r7可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫或-(ch2)2c(＝o)n(ra)。r2至r7中的每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、羥基或烷氧基。結(jié)構(gòu)b所述化合物的實(shí)施方案包括結(jié)構(gòu)b、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。結(jié)構(gòu)b為膝溝藻毒素3的一般結(jié)構(gòu)。參見圖1。r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；喕酋０被?、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、烷氧基、氰基、雜芳基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-cn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2或-nhc(o)ra，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、-oc(＝o)nhra、-oc(＝o)n(ra)，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、甲基或十四烷基。結(jié)構(gòu)c所述化合物的實(shí)施方案包括結(jié)構(gòu)c(圖1)、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。結(jié)構(gòu)c為膝溝藻毒素2的一般結(jié)構(gòu)。參見圖1。r1可為以下基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷酰基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、烷氧基、氰基、雜芳基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-cn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2或-nhc(o)ra，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、-oc(＝o)nhra、-oc(＝o)n(ra)，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、甲基或十四烷基。結(jié)構(gòu)d所述化合物的實(shí)施方案包括結(jié)構(gòu)d(圖1)、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。結(jié)構(gòu)d為石房蛤毒素的一般結(jié)構(gòu)。參見圖1。r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷酰基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基、砜、-ora、＝o、-c(＝o)ra、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-co2ra、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2、-nhc(o)ra或-c(ra)3，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺酰基、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、烷氧基、氰基、雜芳基、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、-ora、＝o、-oc(＝o)ra、-oc(＝o)ora、-oc(＝o)n(ra)2、-cn、-scn、-sra、-sora、-so2ra、-no2、-n(ra)2或-nhc(o)ra，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基、全鹵代烷基、全氟烷基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、取代苯基、(取代苯基)烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)型基團(tuán)、雜環(huán)狀基團(tuán)、烷?；?、(單取代)氨基、受保護(hù)的(單取代)氨基、(雙取代)氨基、雜芳基(烷基)、硝基、氧雜、氧代、磺?；?、亞磺酰氨基或砜。在一個(gè)實(shí)施方案中，r1可為諸如下列所述的基團(tuán)：羥基、-oc(＝o)nhra、-oc(＝o)n(ra)，其中每個(gè)ra可獨(dú)立地為諸如下列所述的基團(tuán)：氫、甲基、異丙基、十四烷基或以下基團(tuán)中的任意一種：在結(jié)構(gòu)a、結(jié)構(gòu)b、結(jié)構(gòu)c和結(jié)構(gòu)d中任意一者的實(shí)施方案中，基團(tuán)(例如r1到r7基團(tuán)，如每個(gè)結(jié)構(gòu)所適用的那樣)不被選擇成得到具有石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素或斑足蟾毒ab結(jié)構(gòu)的化合物。換言之，組合物、藥物組合物、治療方法等可包括結(jié)構(gòu)a、結(jié)構(gòu)b、結(jié)構(gòu)c或結(jié)構(gòu)d中的一個(gè)或多個(gè)，前提條件是：r基團(tuán)不被選擇成得到石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素或斑足蟾毒ab中的任意一者。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)結(jié)構(gòu)a、結(jié)構(gòu)b、結(jié)構(gòu)c和結(jié)構(gòu)d中的每一個(gè)的r基團(tuán)進(jìn)行選擇，以排除對(duì)應(yīng)于石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素或斑足蟾毒ab的結(jié)構(gòu)。關(guān)于這些結(jié)構(gòu)，參見圖1所示，不選擇這些結(jié)構(gòu)來(lái)得到本文公開的新化合物。對(duì)受試者進(jìn)行治療的方法也可采用在對(duì)結(jié)構(gòu)a-d的討論以及本文相關(guān)討論中所述的化合物的各實(shí)施方案的前體藥物。示例性的前體藥物可通過(guò)肝臟中的酶活化(如，被以下基團(tuán)取代的環(huán)-1，3-丙烷基酯，所述基團(tuán)為通過(guò)cyp3a等促進(jìn)氧化剪切反應(yīng)的基團(tuán))。這些修飾可使本申請(qǐng)公開的組合物在抵達(dá)肝臟之前失活或活性降低(參見文獻(xiàn)：currentopinionininvestigationaldrugs2006vol7no2，109-117；j.med.chem.2008，51，2328-2345；和nucleosides，nucleotides，andnucleicacids，24(5-7)：375-381，(2005)，通過(guò)引用的方式將相應(yīng)討論的內(nèi)容引入到本文中)。合成方法一般而言，本發(fā)明提供化合物的實(shí)施方案(包括在對(duì)圖1中結(jié)構(gòu)a-d的討論以及本申請(qǐng)相關(guān)討論中所述的每個(gè)化合物實(shí)施方案)可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的有機(jī)合成技術(shù)和/或根據(jù)本發(fā)明提供的合成流程圖進(jìn)行。具體而言，本文提供的實(shí)施例提供了制備本發(fā)明公開的化合物的詳情和指導(dǎo)。根據(jù)需要，從市售可得的化學(xué)制劑和/或化學(xué)文獻(xiàn)中描述的化合物開始進(jìn)行題述化合物的合成?！笆惺劭傻玫幕瘜W(xué)制劑”可通過(guò)以下標(biāo)準(zhǔn)市售渠道獲得，包括：acrosorganics(位于美國(guó)賓夕法尼亞州匹茲堡市)、aldrichchemical(位于美國(guó)威斯康星州密爾沃基市，包括sigmachemicalandfluka)、apin化學(xué)有限公司(位于英國(guó)miltonpark)、avocadoresearch(位于英國(guó)藍(lán)開夏郡)、bdh公司(位于加拿大多倫多市)、bionet(位于英國(guó)康沃爾郡)、chemservice有限公司(位于美國(guó)賓夕法尼亞州西切斯特市)、crescent化學(xué)公司(位于美國(guó)紐約州hauppauge市)、eastman有機(jī)化學(xué)試劑、eastmankodak公司(位于美國(guó)紐約州羅切斯特市)、fisher科技公司(位于美國(guó)賓夕法尼亞州匹茲堡市)、fisons化學(xué)公司(位于英國(guó)萊斯特郡)、frontierscientific(位于美國(guó)猶他州logan市)、icn生物藥品有限公司(位于美國(guó)加利佛尼亞州科斯塔梅薩市)、keyorganics(位于英國(guó)康沃爾郡)、lancastersynthesis(位于美國(guó)新罕布什爾州windham市)、maybridge化學(xué)有限公司(位于英國(guó)康沃爾郡)、parish化學(xué)公司(位于美國(guó)猶他州奧勒姆市)、pfaltz&bauer有限公司(位于美國(guó)康涅狄格州沃特伯里市)、polyorganix(位于美國(guó)田納西州休斯頓市)、pierce化學(xué)公司(位于美國(guó)伊利諾斯州羅克福德市)、riedeldehaenag(位于德國(guó)漢諾威市)、spectrumqualityproduct公司(位于美國(guó)新澤西州新賓士威克市)、tciamerica(位于美國(guó)俄勒岡州波特蘭市)、transworld化學(xué)公司(位于美國(guó)馬里蘭州羅克維爾市)以及wakochemicalsusa公司(位于美國(guó)維吉尼亞州里奇蒙市)。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法可通過(guò)各種參考書籍和數(shù)據(jù)庫(kù)而確定。詳細(xì)描述了可用于制備本發(fā)明化合物的反應(yīng)物的合成、或提供了描述制備的參考論文的那些合適的參考書籍和論文包括：例如，“syntheticorganicchemistry”，johnwiley&sons，inc.，newyork；s.r.sandler等，“organicfunctionalgrouppreparations”，第二版，academicpress，newyork，1983；h.o.house，“modernsyntheticreactions”，第二版，w.a.benjamin，inc.menlopark，calif.1972；t.l.gilchrist，“heterocyclicchemistry”，第二版，johnwiley&sons，newyork，1992；j.march，“advancedorganicchemistry：reactions，mechanismsandstructure”，第四版，wiley-interscience，newyork，1992。詳細(xì)描述了可用于制備本發(fā)明化合物的反應(yīng)物的合成、或提供了描述制備的參考論文的其他合適的參考書籍和論文包括：例如，fuhrhop，j.和penzling.“organicsynthesis：concepts，methods，startingmaterials”，second，revisedandenlargededition(1994)johnwiley&sonsisbn：3-527-29074-5；hoffman，r.v.“organicchemistry，anintermediatetext”(1996)oxforduniversitypress，isbn0-19-509618-5；larock，r.c.“comprehensiveorganictransformations：aguidetofunctionalgrouppreparations”，第二版(1999)wiley-vch，isbn：0-471-19031-4；march，j.“advancedorganicchemistry：reactions，mechanisms，andstructure”第四版(1992)johnwiley&sons，isbn：0-471-60180-2；otera，j.(editor)“moderncarbonylchemistry第二版(2000)wiley-vch，isbn：3-527-29871；patai，s.“patai′s1992guidetothechemistryoffunctionalgroups”(1992)interscienceisbn：0-471-93022-9；solomons，t.w.g.“organicchemistry”第七版(2000)johnwiley&sons，isbn：0-471-19095-0；stowell，j.c.，“intermediateorganicchemistry”第二版(1993)wiley-interscience，isbn：0-471-57456-2；“industrialorganicchemicals：startingmaterialsandintermediates：anullmann′sencyclopedia”(1999)johnwiley&sons，isbn：3-527-29645-x，in8volumes；“organicreactions”(1942-2000)johnwiley&sons，超過(guò)55個(gè)卷；以及“chemistryoffunctionalgroups”johnwiley&sons，73個(gè)卷。除非特別指明為相反意義，否則本申請(qǐng)中所述的反應(yīng)是在大氣壓、通常在-78℃至200℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行的。另外，除非特別指明，否則反應(yīng)時(shí)間和條件傾向于近似，如反應(yīng)在大約為大氣壓的條件以及約-78℃至約110℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行約1至約24小時(shí)；剩余的過(guò)夜反應(yīng)平均持續(xù)期約為16小時(shí)。除非特別指明為相反意義，否則本申請(qǐng)所述反應(yīng)中所用的溶劑為惰性有機(jī)溶劑。除非特別指明為相反意義，否則對(duì)于每克所限制的藥劑而言，1cc(或ml)溶劑構(gòu)成體積當(dāng)量。如果需要，可以通過(guò)任何合適的分離或純化過(guò)程(例如過(guò)濾、萃取、結(jié)晶、柱色譜法、薄層色譜法或厚層色譜法，或這些方法的組合)，來(lái)實(shí)施本申請(qǐng)所述的化學(xué)物質(zhì)和中間體的分離和純化。對(duì)適當(dāng)?shù)姆珠_或分離過(guò)程的具體說(shuō)明可參見實(shí)施例。然而也可使用其他等價(jià)的分開或分離方法。應(yīng)當(dāng)理解，化學(xué)合成可能是不對(duì)稱的。在需要的情況下，如果本申請(qǐng)公開的化合物中存在(r)和(s)異構(gòu)體，則可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行拆分，例如通過(guò)以下方法：形成可以分開(如通過(guò)結(jié)晶而分開)的非對(duì)應(yīng)異構(gòu)的鹽或絡(luò)合物；形成可以分開(如通過(guò)結(jié)晶、氣液或液相色譜而分開)的非對(duì)映異構(gòu)的衍生物；使一種對(duì)映體與對(duì)映體特異性試劑發(fā)生選擇性反應(yīng)(例如酶促氧化或還原)，之后分離出修飾或未修飾的對(duì)映體；或在手性環(huán)境中進(jìn)行氣-液或液相色譜過(guò)程，所述手性環(huán)境例如為在手性支持物(如結(jié)合有手性配體的二氧化硅)上，或存在手性溶劑。可供選擇的方式是，可采用光學(xué)活性的試劑、底物、催化劑或溶劑通過(guò)非對(duì)稱合成來(lái)合成特定的對(duì)映體，或者通過(guò)不對(duì)稱轉(zhuǎn)換將一種對(duì)映體轉(zhuǎn)化為另一種對(duì)映體。本申請(qǐng)所述化合物的實(shí)施方案可任選地與可藥用的酸接觸而形成相應(yīng)的酸加成鹽。許多任選取代的起始化合物和其他反應(yīng)物均為市售可得的，例如可得自aldrich化學(xué)公司(位于美國(guó)威斯康星州密爾沃基市)；或本領(lǐng)域技術(shù)人員可采用普遍采用的合成方法容易地制備得到?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的合成方法和本申請(qǐng)公開方法的適當(dāng)結(jié)合來(lái)合成本申請(qǐng)公開的化合物。下面的討論是為了說(shuō)明制備本申請(qǐng)公開的化合物可用的多種方法中的若干，而并非旨在限定在制備本申請(qǐng)公開的化合物中可采用的反應(yīng)或反應(yīng)順序的范圍。這些實(shí)施例描述了結(jié)構(gòu)a-d的合成，以及合成放射性標(biāo)記的石房蛤毒素和膝溝藻毒素衍生物、以及熒光石房蛤毒素和膝溝藻毒素衍生物。使用方法本申請(qǐng)也公開了石房蛤毒素類似物的用途，包括：石房蛤毒素類似物在制備用于對(duì)需要接受治療的受試者進(jìn)行治療的藥物中的用途，所述藥物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物，包括其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。所述石房蛤毒素類似物在所述藥物中的量?jī)?yōu)選為有效量。石房蛤毒素類似物在制備用于降低受試者的神經(jīng)元活性或者使得受試者的肌肉放松的藥物中的用途，所述藥物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。所述石房蛤毒素類似物在所述藥物中的量?jī)?yōu)選為能有效降低受試者的神經(jīng)元活性或者使得受試者的肌肉放松的量。石房蛤毒素類似物在制備用于降低受試者的神經(jīng)元活性或者使得受試者的肌肉放松的藥物中的用途，所述藥物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物、其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽，其中所述受試者患有電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病。在實(shí)施方案中，電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病選自由下列疾病組成的組：急性疼痛、肛裂、關(guān)節(jié)炎、背痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、帶狀皰疹、緊張性頭痛或三叉神經(jīng)性疼痛、眼瞼痙攣、癌癥、心律失常、癲癇、局灶性肌張力障礙、多汗癥、肌肉痙攣、以及膀胱松弛。石房蛤毒素類似物在制備用于對(duì)需要接受疼痛治療的受試者進(jìn)行治療的藥物中的用途，所述藥物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物，包括其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。所述石房蛤毒素類似物在所述藥物中的量?jī)?yōu)選為有效量。石房蛤毒素類似物在制備用于對(duì)需要接受疼痛治療的受試者進(jìn)行治療的藥物中的用途，其中所述疼痛選自：急性疼痛、肛裂疼痛、關(guān)節(jié)炎疼痛、背痛、眼瞼痙攣疼痛、癌癥疼痛、慢性疼痛、牙科疼痛、纖維性肌痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、頸部疼痛、內(nèi)臟痛、神經(jīng)性疼痛、產(chǎn)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、交感神經(jīng)維持性疼痛、帶狀皰疹痛、緊張性頭痛、三叉神經(jīng)性疼痛、肌炎痛、肌肉骨骼痛；腰痛、扭傷和拉傷疼痛；與機(jī)能性腸道疾病如非潰瘍性消化不良、非心源性胸痛和過(guò)敏性腸綜合征相關(guān)的疼痛；與心肌缺血相關(guān)的疼痛；牙痛；以及痛經(jīng)引起的疼痛。石房蛤毒素類似物在制備用于診斷受試者所患疾病的組合物中的用途，該用途包括制備一種組合物，所述組合物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物，包括其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。在實(shí)施方案中，所述石房蛤毒素類似化合物的用量為能夠有效地將電壓門控鈉通道增強(qiáng)型疾病定位于受試者體內(nèi)特定區(qū)域的量。石房蛤毒素類似物在制備用于對(duì)受試者進(jìn)行成像的組合物中的用途，該用途包括制備一種組合物，所述組合物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物，包括其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。在實(shí)施方案中，所述石房蛤毒素類似化合物的用量為能夠有效地在成像過(guò)程中檢測(cè)出所述化合物在所述受試者體內(nèi)的位置的量。石房蛤毒素類似物在制備用于治療皺紋的藥物中的用途，所述藥物包含本申請(qǐng)所述的石房蛤毒素類似物，包括其同分異構(gòu)體、其互變異構(gòu)體、或這些物質(zhì)中任意一者的前體藥物、或這些物質(zhì)中任意一者的可藥用的鹽。在實(shí)施方案中，所述石房蛤毒素類似化合物的量為能夠有效地減輕或消除皺紋的量。藥物的配制和給藥途徑本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案提供了藥物組合物，該藥物組合物包括在對(duì)結(jié)構(gòu)a-d的討論以及本申請(qǐng)相關(guān)討論中所述的化合物實(shí)施方案中的一種或多種，并且含有或不含可藥用的賦形劑、稀釋劑、載體和/或佐劑。在一些實(shí)施方案中，包含該化合物的藥物組合物被配制成基本上不含賦形劑。在其他實(shí)施方案中，可將該化合物或組合物與一種或多種可藥用的輔助物質(zhì)一起配制成藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，可將該化合物與其他藥劑聯(lián)用從而制備本中請(qǐng)公開的組合物，并且該組合物可包括一種或多種可藥用的賦形劑、稀釋劑、載體和/或佐劑。多種多樣的可藥用的賦形劑是本領(lǐng)域已知的。許多出版物中已經(jīng)詳細(xì)地描述了可藥用的賦形劑，包括：例如，a.gennaro(2000)“remington：thescienceandpracticeofpharmacy”，第20版，lippincott，williams，&wilkins；pharmaceuticaldosageformsanddrugdeliverysystems(1999)h.c.ansel等著，第7版，lippincott，williams，&wilkins；以及handbookofpharmaceuticalexcipients(2000)a.h.kibbe等著，第3版，amer.pharmaceuticalassoc?？伤幱玫馁x形劑(如媒介物、佐劑、載體或稀釋劑)為公眾容易獲得的。另外，可藥用的輔助物質(zhì)(如ph調(diào)節(jié)和緩沖劑、張度調(diào)節(jié)劑(tonicityadjustingagent)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑等)也均為公眾容易獲得的。在本申請(qǐng)公開的一個(gè)實(shí)施方案中，將該化合物或組合物通過(guò)能達(dá)到期望效果(如治療疼痛、減輕疼痛等)的任何方法而施用于主體。因此，可將化合物或組合物并入用于治療給藥的多種多樣的劑型中。例如可將該化合物或組合物與合適的可藥用的載體或稀釋劑摻和而配制成藥物組合物，也可配制為固體、半固體、液體或氣體形式的制劑，如片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣溶膠。在實(shí)施方案中，可將化合物或組合物配制為適于局部給藥，如液體、凝膠、軟膏、乳膏、油膏、藥膏、油、糊劑、粉劑或其他適合局部給藥的劑型。可將該化合物和組合物配制成適于直接應(yīng)用于皮膚、或組織、或患者的體外或體內(nèi)表面或一部分，或者可將其配制成適于被整合到敷料、繃帶、膏藥、膠布、釘(staple)、導(dǎo)管、針、補(bǔ)給式輸送系統(tǒng)(depotdeliverysystem)中，或者配制成適于被整合到可用于將具有本申請(qǐng)公開特征的化合物或組合物給藥的其他裝置或設(shè)備中。本申請(qǐng)公開的化合物的局部或透皮給藥的劑型包括：軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、粉劑、溶液、噴霧劑、吸入劑或膏藥。在無(wú)菌條件下將活性成分與可藥用的載體以及可能需要的任意所需的防腐劑或緩沖劑混合。眼用制劑、滴耳液和滴眼液也考慮在本申請(qǐng)公開的范圍內(nèi)。另外，本申請(qǐng)公開還考慮到采用透皮膏藥，其具有額外的有益效果，即提供了化合物在體內(nèi)的可控輸送。該劑型是通過(guò)將化合物溶解或分散在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中來(lái)制備的。吸收促進(jìn)劑也可用于提高穿過(guò)皮膚的化合物的量?？赏ㄟ^(guò)速率控制膜或?qū)⒒衔锓稚⒃诰酆衔锘|(zhì)或凝膠中來(lái)控制速率。在藥物劑型中，該化合物或組合物可以以其可藥用的鹽的形式給藥，或者可單獨(dú)采用題述活性藥劑、或?qū)⑵渑c其他藥學(xué)活性化合物適當(dāng)?shù)芈?lián)用以及組合使用。下述方法和賦形劑僅為示例之用，而決非用于限定本申請(qǐng)。對(duì)于口服制劑而言，該化合物或組合物可單獨(dú)使用或與合適的添加劑聯(lián)用，以制備片劑、粉劑、顆粒劑或膠囊劑，例如，可與常規(guī)添加劑聯(lián)用，常規(guī)添加劑例如為乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；可與粘合劑聯(lián)用，粘合劑例如為結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；可與崩解劑聯(lián)用，崩解劑例如為玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或羧甲基纖維素鈉；可與潤(rùn)滑劑聯(lián)用，潤(rùn)滑劑例如為滑石或硬脂酸鎂；如果需要的話，可與稀釋劑、緩沖劑、潤(rùn)濕劑、防腐劑和調(diào)味劑聯(lián)用?？赏ㄟ^(guò)在水性或非水性溶劑中將該化合物或組合物溶解、懸浮或乳化，而將化合物或組合物配制成注射制劑，所述溶劑例如為植物油或其他類似的油、合成脂肪酸甘油酯、高級(jí)脂肪酸或丙二醇的酯；如果需要，可與常規(guī)添加劑聯(lián)用，常規(guī)添加劑例如為增溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。可以將化合物或組合物用于經(jīng)吸入給藥的氣溶膠劑型中?？梢詫⒒衔锘蚪M合物配入可加壓的推進(jìn)劑中，推進(jìn)劑例如為二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)獾取Ａ硗?，可以通過(guò)將化合物或組合物與各種基質(zhì)(如乳化基質(zhì)或可溶于水的基質(zhì))混合而制成栓劑?；衔锘蚪M合物可通過(guò)栓劑經(jīng)直腸給藥。栓劑可包括賦形劑，如可可脂、卡波蠟(carbowax)和聚乙二醇，其在體溫下融化，但在室溫下凝固。可提供用于口服或直腸給藥的單位劑型，如糖漿、酏劑和混懸劑，其中每個(gè)劑量單位(例如一茶匙、一湯匙、一片、或一個(gè)栓劑)包含預(yù)先確定量的組合物，該組合物含有本申請(qǐng)公開的一種或多種化合物。類似地，用于注射或靜脈內(nèi)給藥的單位劑型可包含處于組合物中的化合物，該組合物為在無(wú)菌水、生理鹽水或其他可藥用的載體中的溶液。根據(jù)本申請(qǐng)公開可將化合物或組合物配制成可注射的組合物。通常情況下，將可注射組合物制備為液體溶液或懸浮液；也可制備成固體形式，其中該固體形式適合于在注射前被溶解或懸浮于液體載體中。根據(jù)本申請(qǐng)公開也可將該制劑乳化或?qū)⒒钚猿煞?化合物)封裝在脂質(zhì)體載體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，將化合物或組合物配制為適于通過(guò)連續(xù)輸送系統(tǒng)進(jìn)行輸送。在本文中，術(shù)語(yǔ)“連續(xù)輸送系統(tǒng)”與“受控輸送系統(tǒng)”可互換使用，并且包括連續(xù)(如受控)輸送裝置(如泵)與導(dǎo)管、注射裝置等的組合，多種多樣的這類輸送系統(tǒng)是本領(lǐng)域已知的。機(jī)械或機(jī)電灌注泵也可以適合應(yīng)用于本申請(qǐng)公開。這類設(shè)備的例子包括：例如，美國(guó)專利no.4,692,147、4,360,019、4,487,603、4,360,019、4,725,852、5,820,589、5,643,207、6,198,966等中描述的那些。一般情況下，化合物的輸送可采用多種可再填充的泵系統(tǒng)中的任何一種來(lái)完成。泵提供一致的時(shí)間控釋。在一些實(shí)施方案中，該化合物為裝在藥物不可透過(guò)的貯存器中的液體劑型，并且以持續(xù)的方式輸送給個(gè)體。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物輸送系統(tǒng)為至少部分可植入式裝置?？刹捎帽绢I(lǐng)域已知的方法和裝置將該可植入式裝置植入任意合適的植入位點(diǎn)。植入位點(diǎn)是在受試者體內(nèi)引入和放置給藥裝置的位點(diǎn)。植入位點(diǎn)包括但不必局限于：皮膚下(subdermal)、皮下(subcutaneous)、肌肉內(nèi)或受試者體內(nèi)其他合適的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中采用皮下植入位點(diǎn)，是由于這樣便于植入和移除給藥裝置。適合于本申請(qǐng)公開中采用的藥物釋放裝置可基于多種操作模式中的任何一種。例如，藥物釋放裝置可基于擴(kuò)散系統(tǒng)、對(duì)流系統(tǒng)或可蝕性系統(tǒng)(如侵蝕型系統(tǒng)(erosion-basedsystem))。例如，藥物釋放裝置可以為電化學(xué)泵、滲透泵、電滲泵、蒸汽壓泵、或滲透脹破性基質(zhì)(osmoticburstingmatrix)(例如，在這種情況下，藥物被引入聚合物中，伴隨著經(jīng)藥物浸漬的聚合物材料(例如可生物降解的、經(jīng)藥物浸漬的聚合物材料)的降解，該聚合物使得藥物制劑得以釋放)。在其他實(shí)施方案中，藥物釋放裝置基于電擴(kuò)散系統(tǒng)、電解泵、泡騰型泵、壓電泵、水解系統(tǒng)等?；跈C(jī)械或機(jī)電輸送泵的藥物釋放裝置也可以適合用于本申請(qǐng)公開中。這類裝置的例子包括在以下專利文獻(xiàn)中所述的那些：例如，美國(guó)專利no.4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,360,019；4,725,852等。一般情況下，題述治療方法可采用多種可再填充的非互換式泵系統(tǒng)中的任何一種來(lái)完成。通常優(yōu)選泵和其他對(duì)流系統(tǒng)，這是由于它們通常會(huì)產(chǎn)生更一致的時(shí)間控釋。在一些實(shí)施方案中采用滲透泵，這是由于其兼具更一致的控釋以及相對(duì)較小的尺寸這兩方面的優(yōu)勢(shì)(參見專利文獻(xiàn)：例如，pct公開申請(qǐng)no.wo97/27840，美國(guó)專利no.5,985,305和5,728,396)。適合用于本申請(qǐng)公開中的示例性的滲透驅(qū)動(dòng)型裝置包括但不必局限于下列專利中所述的那些：美國(guó)專利no.3,760,984、3,845,770、3,916,899、3,923,426、3,987,790、3,995,631、3,916,899、4,016,880、4,036,228、4,111,202、4,111,203、4,203,440、4,203,442、4,210,139、4,327,725、4,627,850、4,865,845、5,057,318、5,059,423、5,112,614、5,137,727、5,234,692、5,234,693、5,728,396等。在一些實(shí)施方案中，藥物輸送裝置是可植入式裝置。可采用本領(lǐng)域已知的方法和裝置將藥物輸送裝置植入任意合適的植入位點(diǎn)。如本文所述，植入位點(diǎn)是在受試者體內(nèi)引入和放置給藥裝置的位點(diǎn)。植入位點(diǎn)包括但不必局限于皮膚下、皮下、肌肉內(nèi)或受試者體內(nèi)其他合適的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，采用可植入式藥物輸送系統(tǒng)輸送化合物或組合物，例如采用可編程式系統(tǒng)給藥。示例性的可編程可植入式系統(tǒng)包括可植入式灌注泵。示例性的可植入式灌注泵或者可與其結(jié)合的裝置在下列專利中有描述：如美國(guó)專利no.4,350,155、5,443,450、5,814,019、5,976,109、6,017,328、6,171,276、6,241,704、6,464,687、6,475,180和6,512,954。其他可適合于本申請(qǐng)公開的示例性設(shè)備為synchromed灌注泵(medtronic公司)?；衔锘蚪M合物的合適的賦形劑例如為水、生理鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等、以及其組合。另外，如果需要的話，該賦形劑可含有少量的輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑或ph緩沖劑。制備該劑型的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，或者在考慮本申請(qǐng)公開的內(nèi)容之后是顯而易見的。參見文獻(xiàn)：例如，remington′spharmaceuticalsciences，mack出版公司(位于美國(guó)賓夕法尼亞州伊斯頓市)，第17版，1985年。在任何情況下，待施用的組合物或制劑均含有足以在接受治療的受試者體內(nèi)獲得預(yù)期效果的量的化合物或組合物。本申請(qǐng)公開的組合物包括含有緩釋或控釋基質(zhì)的組合物。另外，本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案可與其他采用緩釋制劑的療法聯(lián)用。如本文所用，緩釋基質(zhì)為采用可通過(guò)酶促或酸促水解或通過(guò)溶解而降解的材料(通常為聚合物)制成的基質(zhì)。一旦進(jìn)入體內(nèi)，該基質(zhì)就經(jīng)酶或體液作用?？扇〉氖?，緩釋基質(zhì)選自生物相容性材料，如脂質(zhì)體、聚丙交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(羥基乙酸聚合物)、聚乙丙交酯(乳酸和羥基乙酸的共聚物)、聚酐、聚原酸酯、多肽、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、硫酸軟骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸(如苯丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸)、多聚核苷酸、聚乙烯丙烯(polyvinylpropylene)、聚乙烯吡咯烷酮和有機(jī)硅。示例性的可生物降解基質(zhì)包括聚丙交酯基質(zhì)、聚乙交酯基質(zhì)和聚乙丙交酯(乳酸和羥基乙酸的共聚物)基質(zhì)。類似地，本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案的緩釋制劑可以有助于較長(zhǎng)時(shí)間地維持病毒抑制濃度。在另一實(shí)施方案中，可在控釋系統(tǒng)中輸送本申請(qǐng)公開的藥物組合物(以及聯(lián)用組合物)。例如，可采用靜脈灌注、可植入式滲透泵、透皮膏藥、脂質(zhì)體或其他給藥模式施用該化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可采用泵(參見文獻(xiàn)：sefton(1987)，crccrit.ref.biomed.eng.14：201；buchwald等，(1980)，surgery88：507；saudek等，(1989).n.engl.j.med.321：574)。在另一實(shí)施方案中可采用聚合物材料。在又一實(shí)施方案中，控釋系統(tǒng)被放置于治療目標(biāo)(如肝臟)附近，從而只需要施用全身劑量的一部分。在另一實(shí)施方案中，控釋系統(tǒng)被放置于治療目標(biāo)附近，從而只需要施用全身劑量的一部分。其他控釋系統(tǒng)在如下綜述中有所描述：langer(1990)science249：1527-1533。在另一實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的組合物(以及分開或一起聯(lián)用的組合物)包括通過(guò)將本申請(qǐng)所述的化合物浸漬到吸收性材料(例如為縫合線、繃帶和紗布)中而形成的組合物，或者通過(guò)涂敷到固相材料表面(如手術(shù)釘、拉鏈和導(dǎo)管)來(lái)輸送組合物。根據(jù)本申請(qǐng)公開，這種類型的其他輸送系統(tǒng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是非常顯而易見的。可將本申請(qǐng)公開的具體化合物配制成包含針對(duì)其使用目的為有效量的化合物的藥物組合物。例如，可將本申請(qǐng)公開的化合物配制成約1μg至10mg的單位劑型用于治療疼痛。在一些實(shí)施方案中，可將本申請(qǐng)公開的化合物或組合物配制成約1μg至20μg、或約20μg至1mg、或約1mg至10mg、或約10mg至100mg以及約50mg至500mg的單位劑量。具體而言，包含化合物的實(shí)例可被配制成0.1μg、0.2μg、0.5μg、1μg、20μg、50μg、100μg、200μg、500μg、1mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg以及500mg的單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，單位劑型為片劑；在另一個(gè)實(shí)施方案中，單位劑型為膠囊。可將片劑配制為速釋劑型或緩釋劑型。在另一實(shí)施方案中，單位劑型為液體?；衔锖退幬锝M合物的用途題述化合物及其藥物組合物在研究、成像、治療疼痛或疼痛相關(guān)病癥方面特別有用。本申請(qǐng)公開的方法還提供了靶定、診斷和/或研究與疼痛相關(guān)的各種疾病的能力。這包括非典型的疼痛綜合征，例如但不限于：纖維肌痛、慢性疲勞綜合征、反射性交感神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)不良以及外周神經(jīng)損傷綜合征。能夠?qū)⑻弁闯上竦哪芰μ峁┝酸槍?duì)這些病癥的客觀指標(biāo)，以及提供了確定疼痛和/或壓力的程度和/或強(qiáng)度的可能性。就疼痛而言，如果在對(duì)受試者進(jìn)行檢查時(shí)其疼痛的來(lái)源或起源不明顯的話，這種能夠?qū)⑻弁闯上竦哪芰€可以允許將疼痛的來(lái)源或起源定位。治療方法通常包括以一劑或多劑的方式，對(duì)需要接受疼痛治療的受試者施用治療有效量的結(jié)構(gòu)a-d以及相關(guān)討論的實(shí)施方案中的任意一個(gè)。對(duì)于已患有疼痛的受試者，通常本申請(qǐng)公開的方法在經(jīng)過(guò)幾天、幾周或幾個(gè)月的一段時(shí)間后能有效地治療(如減輕或改變疼痛)。本申請(qǐng)公開的實(shí)施方案還提供了預(yù)防性治療疼痛的方法，包括對(duì)需要的受試者施用有效量的結(jié)構(gòu)a-d以及相關(guān)討論的實(shí)施方案中的任意一個(gè)。此外，對(duì)于不能耐受其他止痛藥物的患者或者在其他止痛藥物對(duì)治療疼痛無(wú)濟(jì)于事的情況下，施用本申請(qǐng)公開的化合物或組合物可能也會(huì)是有益的?？梢砸砸粍┗蚨鄤┑姆绞綄?duì)受試者施用本發(fā)明的化合物和包含所述化合物的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以以如下所述的量來(lái)施用所述化合物或組合物：每劑約1μg至10mg，例如，每劑約1μg至5μg、約5μg至10μg、約10μg至50μg、約50μgmg至100μg、約100μg至200μg、約200μg至400μg、約400μg至800μg、約800μg至1mg、約1mg至2mg、約2mg至3mg、約3mg至4mg、約4mg至5mg、約5mg至6mg、約6mg至7mg、約7mg至8mg、約8mg至9mg、或約9mg至10mg。在一個(gè)實(shí)施方案中，每劑中所述化合物或組合物的量基于單位體重而定。例如，基于單位體重而定，每劑中化合物或組合物的量可以為例如約10ng/kg、約15ng/kg、約20ng/kg、約50ng/kg、約100ng/kg、約200ng/kg、約500ng/kg、約1μg/kg、約2μg/kg、約5μg/kg、約10μg/kg、約20μg/kg、約50μg/kg、約100μg/kg、約200μg/kg、約500μg/kg、約1mg/kg、約2mg/kg和約5mg/kg。例如在一個(gè)實(shí)施方案中，可以以如下所述的量來(lái)施用所述化合物或組合物：約15ng/kg至150μg/kg，例如約15ng/kg至30ng/kg、約30ng/kg至60ng/kg、約60mg/kg至120ng/kg、約120ng/kg至240ng/kg、約240ng/kg至480ng/kg、約480ng/kg至700ng/kg、約700mg/kg至1μg/kg、約1μg/kg至2μg/kg、約2μg/kg至4μg/kg、約4μg/kg至8μg/kg、約8μg/kg至15μg/kg、約15μg/kg至20μg/kg、約20μg/kg至30μg/kg、約30μg/kg至40μg/kg、約40μg/kg全60μg/kg、約60μg/kg至90μg/kg、或約90μg/kg至120mg/kg、或大于約120μg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，劑量水平可隨著具體施用的化合物或組合物、癥狀的嚴(yán)重程度和受試者對(duì)副作用的易感性的不同而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)各種手段可容易地確定給定化合物的優(yōu)選劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用多劑所述化合物或組合物。施用所述化合物或組合物的頻率可根據(jù)諸如癥狀嚴(yán)重程度等多種因素中的任何因素而變化。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物或組合物的給藥方式為：每月1次、每月2次、每月3次、每隔1周(qow)、每周1次(qw)、每周2次(biw)、每周3次(tiw)、每周4次、每周5次、每周6次、每隔1天(qod)、一天1次(qd)、一天2次(bid)或一天三次(tid)。如上所述，在一個(gè)實(shí)施方案中，持續(xù)施用所述化合物或組合物。施用化合物或組合物的持續(xù)期，如施用化合物或組合物的時(shí)間段，可根據(jù)諸如病人的反應(yīng)等多種因素中的任何因素而變化。例如，施用化合物或組合物的持續(xù)時(shí)間可為：約1天至1周、約2周至4周、約1個(gè)月至2個(gè)月、約2個(gè)月至4個(gè)月、約4個(gè)月至6個(gè)月、約6個(gè)月至8個(gè)月、約8個(gè)月至1年、約1年至2年或約2年至4年、或更長(zhǎng)。實(shí)施本申請(qǐng)公開的方法通常包括施用有效劑量的化合物、組合物或包含該化合物的藥物組合物。根據(jù)所選的具體化合物、要遵循的給藥方案、是否與其他化合物聯(lián)用、給藥時(shí)間、給藥組織以及載藥的物理輸送系統(tǒng)，具體劑量會(huì)有所不同?？刹捎萌魏慰色@得的方法和適合輸送藥物的途徑，包括體內(nèi)和體外方法、以及全身和局部給藥途徑，將具體化合物、組合物及其藥物組合物應(yīng)用于受試者。給藥途徑包括經(jīng)鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、氣管內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、局部施用、靜脈內(nèi)、直腸、鼻、口腔和其他腸內(nèi)和腸胃外給藥途徑。給藥途徑可根據(jù)需要聯(lián)用，或根據(jù)藥劑和/或需要的效果而加以調(diào)整。可以以一劑或多劑的方式施用具體化合物或組合物。可采用常規(guī)可得的方法和適合輸送常規(guī)藥物的途徑(包括全身或局部途徑)，將本申請(qǐng)公開的具體物質(zhì)施用于主體?？傮w上，本申請(qǐng)公開考慮到的給藥途徑包括但不限于腸內(nèi)、腸胃外或吸入途徑。吸入給藥方式以外的其他腸胃外給藥途徑包括但不限于，局部、透皮、皮下、肌肉內(nèi)、眼眶內(nèi)、囊內(nèi)、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)以及靜脈內(nèi)途徑，即通過(guò)消化道以外的任何給藥途徑?？蛇M(jìn)行腸道外給藥以實(shí)現(xiàn)該化合物或組合物的全身或局部輸送。當(dāng)需要全身性輸送時(shí)，藥物制劑的給藥通常包括侵入性給藥或全身吸收式局部給藥或粘膜給藥。也可通過(guò)腸內(nèi)給藥將該化合物或組合物輸送到受試者體內(nèi)。腸內(nèi)給藥途徑包括但不限于：口腔和直腸(如使用栓劑)輸送。通過(guò)皮膚或粘膜將該化合物或組合物給藥的方法包括但不限于：局部應(yīng)用合適的藥物制劑、透皮傳送、注射和表皮給藥。合適的透皮傳送方法為吸收促進(jìn)劑法或離子電滲療法。在實(shí)施方案中，僅使皮膚、粘膜或其他機(jī)體組織與化合物接觸就能有效地施用該化合物。另外，載體、增強(qiáng)劑以及其他化合物可用于加快或增強(qiáng)該化合物的給藥。離子電滲傳送可采用市售可得的“膏藥”來(lái)實(shí)現(xiàn)，其通過(guò)穿透完好皮膚的電脈沖而在數(shù)天或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)持續(xù)輸送其產(chǎn)品。在一些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)公開的組合物通過(guò)經(jīng)口、靜脈內(nèi)、透皮、舌下、肌肉內(nèi)或直腸途徑給藥。實(shí)施例列舉以下實(shí)施例，以便為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供如何實(shí)施和應(yīng)用本發(fā)明的完整公開和描述，而不是要限定發(fā)明人所認(rèn)為的其披露內(nèi)容的范圍，也并非要表示以下實(shí)驗(yàn)為所有或唯一實(shí)施過(guò)的實(shí)驗(yàn)。申請(qǐng)人已盡力保證所用數(shù)字的精確性(如量、溫度等)，但一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差在所難免。除非另有說(shuō)明，否則份數(shù)是以重量計(jì)的份數(shù)，分子量為重均分子量，溫度以攝氏度計(jì)(℃)，并且壓力為大氣壓或接近大氣壓?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)縮寫，如bp，堿基對(duì)；kb，千堿基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分鐘；h或hr，小時(shí)；aa，氨基酸；kb，千堿基；bp，堿基對(duì)；nt，核苷酸；i.m.，肌內(nèi)(地)；i.p.，腹膜內(nèi)(地)；s.c.，皮下(地)；等等。實(shí)施例1：電壓門控鈉離子通道(nav)在生物電的產(chǎn)生中起到不可缺少的作用并且對(duì)于所有的生命過(guò)程也是必需的。(參見文獻(xiàn)：例如，hille，b.ionchannelsofexcitablemembranes，第三版，sinauer：sunderland，ma，2001)。已經(jīng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中鑒別出了編碼10種獨(dú)特的鈉通道同工型(nav1.1-1.9，nax)的基因(參見文獻(xiàn)：(a)catterall，w.a.；yu，f.h.genomebiology2003，4，207。(b)catterall，w.a.；goldin，a.l.；waxman，s.g.pharm.rev.2005，57，397)。這些蛋白質(zhì)亞型之間的生物物理特性的差異、它們的膜濃度和空間分布限定了神經(jīng)元的信號(hào)特征。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)novakovic，s.d.；eglen，r.m.；hunter，j.c.trendsinneurosci.2001，24，473。(b)lai，h.c.；jan，l.y.；nat.rev.neurosci.2006，7，548；(c)rush，a.m.；cummins，t.r.；waxman，s.g.j.physiol.2007，579，1。)通常認(rèn)為異常的nav功能和/或表達(dá)與多種疾病狀態(tài)相關(guān)，包括心律失常、癲癇、神經(jīng)性疼痛和先天性痛覺喪失癥。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)keating，mt.；sanguinetti，m.c.cell2001，104，569。(b)lossin，c.；wang，d.w.；rhodes，t.h.；vanoye，c.g.；george，a.l.jr.neuron，2002，34，877。(c)rogers，m.；tang，l.；madge，d.j.；stevens，e.b.semin.cell.dev.biol.2006，17，571。(d)cox，j.j.；reimann，f.；nicholas，a.k.；thornton，g.；roberts，e.；springell，k.；karbani，g.；jafri，h.；mannan，j.；raashid，y.；al-gazali，l.；hamamy，h.；valente，e.m.；gorman，s.；williams，r.；mchale，d.p.；wood，j.n.；gribble，f.m.；woods，c.g.nature2006，444，894。)因此，人們尋求用于探索蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、用于調(diào)節(jié)特異性nav同工型的活性以及用于跟蹤與nav調(diào)控和表達(dá)相關(guān)的動(dòng)態(tài)事件的化學(xué)工具，以進(jìn)一步理解與通道功能相關(guān)的病理生理學(xué)。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)anger，t.；madge，d.j.；mulla，m.；ridall，d.j.med.chem.2001，44，115。(b)priest，b.t.；kaczorowski，g.j.pnas2007，104，8205。)在此，我們描述了我們對(duì)這類藥劑的開發(fā)，其中貝毒(+)-石房蛤毒素1(stx)(特定nav亞型的單數(shù)位納摩抑制劑)為其提供了分子藍(lán)圖(圖2)。迄今為止，我們的研究已經(jīng)顯示出了與stx在通道口中的結(jié)合態(tài)的現(xiàn)有可得的模型之間的差異。另外，我們建立了獲得該毒素的氨基甲酸酯修飾形式的手段，并且證實(shí)了該結(jié)構(gòu)改變不會(huì)大大降低底物-受體的結(jié)合親和力。完全功能性電壓門控na+通道是由1個(gè)大的異聚α亞單位(～260kda)和1或2個(gè)輔助β亞單位(33-36kda)組成的。(參見文獻(xiàn)：(a)catterall，w.a.；yu，f.h.genomebiology2003，4，207。(b)catterall，w.a.；goldin，a.l.；waxman，s.g.pharm.rev.2005，57，397。)在缺乏蛋白質(zhì)晶體學(xué)數(shù)據(jù)的情況下，小分子藥理探針與蛋白質(zhì)突變和電生理學(xué)為該大分子家族提供了大量現(xiàn)有的結(jié)構(gòu)理解。(參見文獻(xiàn)：例如，choudhary，g.；shang，l.；li，x.f.；dudley，s.c.biophys.j.2002，83，912。)這些數(shù)據(jù)連同相關(guān)k+離子通道的x射線結(jié)構(gòu)(kcsa和mthk)使構(gòu)建navα亞單位的同源模型成為可能。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)lipkind，g.m.；fozzard，h.a.biochemistry2000，39，8161。(b)tikhonov，d.b.；zhorov，b.s.biophys.j.2005，88，184。)通道外口(即所謂的i位點(diǎn))包括離子選擇性過(guò)濾器，并且被認(rèn)為是stx和相關(guān)胍基毒物的受體位點(diǎn)(圖2)。(參見文獻(xiàn)：llewellyn，l.e.nat.prod.rep.2006，23，200。)五個(gè)羧酸殘基在該孔道區(qū)排列成行(d400、e755、e403、e758、d1532，nav1.4編號(hào))，根據(jù)定點(diǎn)突變研究，它們的存在是實(shí)現(xiàn)高親和力stx結(jié)合的關(guān)鍵。(參見文獻(xiàn)：(a)terlau，h.；heinemann，s.h.；stühmer，w.；pusch，m.；conti，f.；imoto，k.；numa，s.febslett，1991，293，93。(b)heinemann，s.h.；terlau，h.；stühmer，w.；imoto，k.；numa，s.nature1992，356，441。(c)schlief，t.；r.；imoto，k.；heinemann，s.h.eur.biophys.j.1996，25，75。(d)chiamvimonvat，n.；pérez-garcia，m.t.；tomaselli，g.f.；marban，e.j.physiol.1996，491，51。(e)chiamvimonvat，n.；pérez-garcia，m.t.；ranjan，r.；marban，e.；tomaselli，g.f.neuron1996，16，1037。(f)hui，l.；mcintyre，d.；french，r.j.j.gen.physiol.2003，122，63。)lipkind和fozzard、dudley和zhorov建立的計(jì)算模型都假定：stx的7，8，9-胍指向組成選擇性過(guò)濾器的四氨基酸環(huán)(又稱為deka環(huán))。(參見文獻(xiàn)：(a)lipkind，g.m.；fozzard，h.a.biochemistry2000，39，8161。(b)tikhonov，d.b.；zhorov，b.s.biophys.j.2005，88，184。(c)llewellyn，l.e.nat.prod.rep.2006，23，200。)c13-氨基甲酸酯單元、c12-水合酮、以及1，2，3-胍基結(jié)構(gòu)部分與前庭環(huán)(outervestibuleloop)的羧酸殘基之間的特異性接觸也是研究熱點(diǎn)。作為研究的出發(fā)點(diǎn)，我們選擇首先檢查作為氫鍵供體的伯氨基甲酸酯對(duì)總的毒素結(jié)合親和力的貢獻(xiàn)。相比于stx，自然發(fā)生脫氨基甲酰基的stx(dc-stx)的效力減小20-40％。(參見文獻(xiàn)：(a)koehn，f.e.；schnoes，h.k.；kao，c.y.biochim.biophys.acra：biomembranes1983，734，129。(b)strichartz，g.r.；hall，s.；magnani，b.；hong，c.y.；kishi，y.；debin，j.a.toxicon1995，33，723。)之前的通過(guò)dc-stx的半合成修飾來(lái)改變?cè)搶m能團(tuán)的成果局限于單一的琥珀酸酯衍生物。(參見文獻(xiàn)：(a)schlager，j.j.；williams，k.c.；hornyak，m.j.；courtney，b.c.；smith，j.r.medicaldefensebiosciencereview，proceedings，baltimore，may12-16，1996。(b)robillot，c.；kineavy，d.；burnell，j.；llewellyn，l.e.toxicon2009，53，460。)由于可以從頭合成stx，使得我們能夠隨意改變?cè)揷13側(cè)的元素。由此，制備并評(píng)估了n，n-二甲基-stx2阻斷na+電流的能力。在全細(xì)胞電壓鉗形式中針對(duì)異源表達(dá)的大鼠骨骼肌通道nav1.4的α亞單位(cho細(xì)胞)進(jìn)行電生理學(xué)測(cè)量。(參見文獻(xiàn)：例如，moran，o.；picollo，a.；conti，f.biophys.j.2003，84，2999。)圖3顯示了在10ms的、相對(duì)于保持電位-100mv其振幅為100mv的去極化脈沖后的電流記錄。將濃度增加的2灌注到外部溶液中，導(dǎo)致峰電流下降。將這些數(shù)據(jù)擬合成朗謬爾(langmuir)等溫線，得到2的ic50為2.1±0.1nm，該值幾乎等于我們合成的(+)-stx的ic50記錄值。該結(jié)果似乎表明，在天然產(chǎn)物中的伯氨基甲酸酯的作用不是作為氫鍵供體。(關(guān)于
背景技術(shù)：
：，參見文獻(xiàn)：tikhonov，d.b.；zhorov，b.s.biophys.j.2005，88，184。)這一發(fā)現(xiàn)也提供了進(jìn)一步探索c13氨基甲酰殘基附近的蛋白質(zhì)孔道的立體環(huán)境的動(dòng)機(jī)。已經(jīng)設(shè)計(jì)出了對(duì)我們之前公開的(+)-stx路線之一進(jìn)行的策略性調(diào)整，以制備可供替代的c13氨基甲酸酯形式(圖4)。(參見文獻(xiàn)：fleming，j.j.；mcreynolds，m.d.；dubois，j.j.am.chem.soc.2007，129，9964。)三環(huán)噁唑烷酮4代表我們新的合成計(jì)劃的基礎(chǔ)，我們假設(shè)親核性胺會(huì)選擇性打開該張力雜環(huán)。這種結(jié)構(gòu)可從9元環(huán)胍3(目前我們實(shí)驗(yàn)室通常以＞5g的規(guī)模合成該材料)經(jīng)過(guò)僅僅3個(gè)步驟而形成。要獲得4，已證實(shí)依序形成c13-troc碳酸鹽以及使環(huán)閉合是必要的；使用其他羰基化試劑(如光氣、羰二咪唑)則導(dǎo)致幾乎僅產(chǎn)生c4-c13烯。在伯胺的存在下，噁唑烷酮實(shí)際上順利地發(fā)生開環(huán)，得到相應(yīng)的仲氨基甲酸酯。隨后經(jīng)過(guò)兩次轉(zhuǎn)化，其中包括路易斯酸介導(dǎo)的胍環(huán)閉合和脫保護(hù)以及c12氧化，從而完成定制的石房蛤毒素的組裝。已經(jīng)評(píng)價(jià)了石房蛤毒素c13-衍生物8-12對(duì)rnav1.4的效力(如圖5所述)。如8那樣引入線性n-己基結(jié)構(gòu)部分，導(dǎo)致相比于天然產(chǎn)物的ic50僅略有減小。該結(jié)果與支鏈n-異丙基結(jié)構(gòu)9的測(cè)量結(jié)果(其表現(xiàn)出結(jié)合親和力顯著降低)形成對(duì)照。不受限于特定的理論，似乎氨基甲酸酯結(jié)構(gòu)部分保持在相當(dāng)狹窄的、有可能延伸到細(xì)胞外空間的峽谷中。(參見文獻(xiàn)：sato，c.；ueno，y.；asai，k.；takahashi，k.；sato，masahiko，s.；engel，a.；fujiyoshi，y.nature2001，409，1047。)其他數(shù)據(jù)，即來(lái)自電壓鉗記錄的10和12的結(jié)果，支持了這一結(jié)論。然而，有趣的是，在石房蛤毒素母核的遠(yuǎn)端引入羧酸殘基(即11)降低了藥物效力。二苯甲酮標(biāo)記的毒素12旨在為c13單兀附近的近鄰氨基酸接觸提供直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。據(jù)我們所知，該化合物是任何該類光子親和性stx軛合物中的第一個(gè)。(已經(jīng)制備了基于河豚毒素的光子親和性探針，參見文獻(xiàn)：(a)guillory，r.j.；rayner，m.d.；d’arrigo，j.s.science1977，196，883。(b)uehara，s.；uyemura，k.neurochem.res.1985，10，1119。(c)yoshida，e.；nakayama，h.；hatanaka，y.；kanaoka，y.chem.pharm.bull.(tokyo)1990，38，982。(d)nakayama，h.；hatanaka，y.；yoshida，e.；oka，k.；takanohashi，m.；amano，y.；kanaoka，y.biochem.biophys.res.commun.1992，184，900。)為了最終展示從頭合成得到stx新形式的能力，我們開發(fā)了化合物如10用于“合成后”修飾(圖6)。盡管存在兩個(gè)胍基基團(tuán)，但是10與n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)苯甲酸酯發(fā)生選擇性偶聯(lián)而產(chǎn)生所需的酰胺13。這最后一步的偶聯(lián)反應(yīng)使得結(jié)構(gòu)復(fù)雜的有效載荷(即熒光基團(tuán)、生物標(biāo)記物)連接到stx母核上，另外的與所述化學(xué)結(jié)構(gòu)不相容的側(cè)鏈元素用于胍脫保護(hù)或c12氧化(參見圖4)。目前為止，我們已經(jīng)通過(guò)在10上進(jìn)行的偶聯(lián)反應(yīng)，將結(jié)構(gòu)不同的熒光基團(tuán)(圖7中14、15、16)，生物素標(biāo)記(17)、用于光親和標(biāo)記的雙吖丙啶類(18)、半胱氨酸反應(yīng)性官能團(tuán)(19)和親脂性類固醇(如膽固醇(20))連接到stx。由于含馬來(lái)酰亞胺的化合物19似乎不可逆地抑制電壓門控鈉通道(參見圖8)，因此化合物19是特別受關(guān)注的種類。通過(guò)不對(duì)稱全合成來(lái)獲得(+)-stx使得能夠開發(fā)該獨(dú)特的天然產(chǎn)物的非天然類似物。已經(jīng)采用全細(xì)胞、電壓鉗技術(shù)評(píng)價(jià)了新的石房蛤毒素類似物阻斷nav功能的效力。這些發(fā)現(xiàn)已經(jīng)表明了有可能用多種多樣的不同結(jié)構(gòu)基團(tuán)中的任何一個(gè)來(lái)重新設(shè)計(jì)stx的c13-氨基甲酰基單元。此類研究連同分子生物學(xué)工具使研究人員能夠更詳細(xì)地繪制通道孔的三維結(jié)構(gòu)。我們認(rèn)為，這些研究是實(shí)現(xiàn)利用經(jīng)過(guò)設(shè)計(jì)的化學(xué)工具來(lái)質(zhì)詢與nav功能相關(guān)的動(dòng)態(tài)過(guò)程的更大計(jì)劃中的一個(gè)必要步驟。材料和方法除非另有說(shuō)明，否則所有試劑均為市售可得的。反應(yīng)在干燥氮?dú)猸h(huán)境下于烘干的玻璃器皿中進(jìn)行。通過(guò)注射器或不銹鋼導(dǎo)管轉(zhuǎn)移空氣敏感和濕氣敏感的液體和溶液。在減壓條件下(約15托)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮有機(jī)溶液。在即將使用之前，使二氯甲烷、四氫呋喃(thf)和乙腈(mecn)以及n，n-二甲基甲酰胺穿過(guò)兩根活性氧化鋁柱子。用氫化鈣蒸餾吡啶。根據(jù)dondone的方法制備n-boc-l-絲氨酸甲酯。(參見文獻(xiàn)：dondoni，a.；perrone，d.synthesisof1，1-dimethylmethyl(s)-4-formyl-2，2-dimethyl-3-oxazolidine-carboxylatebyoxidationofthealcohol.org.syn.2004，10，64-70。)根據(jù)quan和baldwin的方法兩步制備n-(對(duì)甲氧芐基)羥胺。(參見文獻(xiàn)：(a)quan，c.；kurth，m.solid-phasesynthesisof5-isoxazol-4-y1-[1，2，4]oxaciazoles.j.org.chem.2004，69，1470-1474。(b)baldwin，j.e.；cah，j.k.；kruse，l.i.totalsynthesisofantitumoragentat-125，(as，5s)-a-amino-3-chloro-4，5-dihydro-5-isoxazolieaceticacid.tetrahedron1985，41，5241-5260。)根據(jù)fleming的方法制備β-石房蛤毒素酚(β-saxitoxinol)和石房蛤毒素。(參見文獻(xiàn)：fleming，j.j.；dubois，j.asynthesisof(+)-saxitoxin.j.am.chem.soc.2006，128，3926-3927。)根據(jù)phanstiel的方法制備叔丁基-6-氨基己基氨基甲酸酯。(參見文獻(xiàn)：gardner，r.a.；ghobrial，g.；nasser，s.a.；phanstiel，o.，ivsynthesisandbiologicalevaluationofnewacinetoferrinhomologuesforuseasirontransportprobesinmycobacteria.j.med.chem.2004，47，4933。)根據(jù)dijkgraaf的方法制備叔丁基-2-氨基乙基氨基甲酸酯。(dijkgraaf，i.；rijnders，a.y.；soede，a.；dechesne，a.c.；vanesse，g.w.；brouwer，a.j.；corstens，f.h.；boerman，o.c.；rijkers，d.t.；liskamp，r.m.synthesisofdota-conjugatedmultivalentcyclic-rgdpeptidedendrimersvia1，3-dipolarcycloadditionandtheirbiologicalevaluation：implicationsfortumortargetingandtumorimagingpurposes.org.biomolec.chem.2007，5，935-944。)根據(jù)bauer所述，將三(三氟乙酸)硼制備成在三氟乙酸中的0.5m溶液，并儲(chǔ)存在-5℃下的施倫克(schlenk)瓶中。(參見文獻(xiàn)：例如，pless，j.；bauer，w.borontris(trifluoroacetate)forremovalofprotectinggroupsinpeptidechemistry.angew.chem.，iht.ed.1973，12，147-148。)在silicycle超純硅膠(40-63μm)上采用強(qiáng)制流動(dòng)色譜法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行色譜法純化。在型號(hào)為320的varianprostar上進(jìn)行半制備型高效液相色譜(hplc)。在emscience硅膠60f254板(250μm)上進(jìn)行薄層色譜法。通過(guò)熒光淬滅以及通過(guò)用鉬酸銨鈰(cam)水溶液染色來(lái)實(shí)現(xiàn)展開的色譜圖的可視化。在varianmercury分光計(jì)上在400和100mhz下分別檢測(cè)1h和13c，或是在varianinova分光計(jì)上在500和125mhz下分別檢測(cè)1h和13c，獲得核磁共振(nmr)譜圖，并將殘留溶劑信號(hào)作為內(nèi)參。1hnmr數(shù)據(jù)記錄如下：化學(xué)位移(δ，ppm)、多重性(s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；quint，五重峰；m，多重峰；br，寬峰)、積分、耦合常數(shù)(hz)。13cnmr的數(shù)據(jù)以化學(xué)位移(δ，ppm)來(lái)報(bào)告。在thermo-nicolet300ft-ir分光計(jì)上記錄采用nacl鹽片的薄膜的紅外光譜(ir)，并且以吸收頻率報(bào)告。通過(guò)將樣品裝入位于在nad線下工作的jascodip-1000數(shù)字旋光儀上的50mm的池中，獲得旋光數(shù)據(jù)。高分辨率質(zhì)譜來(lái)自斯坦福大學(xué)的vincentcoates基金會(huì)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室。bma.3：向5.0ml吡啶中的bma.1(155mg，0.27mmol)乙醇溶液中加入二甲基氨基甲酰氯(555μl，6.0mmol，22當(dāng)量)。為燒瓶配備回流冷凝器，并加熱混合物至90℃。在該溫度下攪拌12h后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜法(96∶4ch2cl2/meoh→93∶7ch2cl2/meoh梯度洗脫)來(lái)純化油狀殘留物，獲得所需產(chǎn)物bma.2，為白色固體(65mg，37％)。tlcrf＝0.55(92∶8ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，400mhz，65℃)δ7.78-7.70(m，4h)，7.05-6.96(m，4h)，6.28-6.20(m，2h)，5.85(brd，1h，j＝8.2hz)，4.82-4.74(m，2h)，4.67-4.63(m，1h)，4.20(dd，1h，j＝11.4，3.2hz)，4.11(dd，1h，j＝11.4，5.5hz)，3.92-3.87(m，1h)，3.88(s，3h)，3.86(s，3h)，3.49-3.36(m，2h)，2.89(s，3h)，2.84(s，3h)，2.69-2.61(m，1h)，2.20-2.10(m，1h)ppm。將分離出的物質(zhì)bma.2(17mg，0.027mmol)溶于680μl的11∶2mecn/h2o中，然后向其中加入oscl3溶液(36mm，在h2o中，74μl，3.0μmol，0.1當(dāng)量)。然后向獲得的棕色溶液中加入570μl的etoac，一份na2co3(28mg，0.027mmol，10.0當(dāng)量)，以及一份過(guò)硫酸氫鉀制劑(oxone)(125mg，0.20mmol，7.6當(dāng)量)。觀察到有氣體溫和地釋放出來(lái)，劇烈攪拌所獲得的淺黃色懸浮液達(dá)60h。滴加1ml的na2s2o3飽和溶液使該反應(yīng)淬滅，攪拌5min，并轉(zhuǎn)移到含10ml的etoac的分液漏斗中。收集有機(jī)層并用10ml的etoac萃取水層。合并有機(jī)層并用5ml的nacl飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，并減壓濃縮。通過(guò)硅膠色譜法(94∶6ch2cl2/meoh)來(lái)純化白色殘余物，獲得為白色固體(4mg，24％)bma.3，并回收bma.2(10mg，57％)。獲得的產(chǎn)物為同分異構(gòu)的5/6雙環(huán)的9∶1混合物(hplc確定)。可通過(guò)反相hplc(novapakc18，采用30∶70mecn/0.1％cf3co2h水溶液作為洗脫液，流速為4ml/min)進(jìn)一步純化樣品。在上述條件下洗脫bma.3，保留時(shí)間為10.1min。tlcrf＝0.37(92∶8ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz)δ7.75(s，1h)，7.74-7.69(m，4h)，6.99-6.94(m，4h)，6.57(brs，2h)，6.38(brd，1h，j＝8.9hz)，4.26(brd，1h，j＝10.9hz)，4.02-3.99(m，1h)，3.91(d，1h，j＝3.8hz)，3.84(s，6h)，3.72(dd，1h，j＝11.1，6.8hz)，3.68(ddd，1h，j＝10.8，6.7，2.4hz)，3.57-3.47(m，2h)，2.85(brs，3h)，2.73(brs，3h)，2.20-2.15(m，1h)，1.81(dd，1h，j＝13.4，6.6hz)ppm；ir(薄膜)v3333，1686，1578，1536，1499，1259，1202，1133，1081，853cm-1；hrms(es+)：c26h35n7o10s2計(jì)算值為669.1887，實(shí)際值為692.1783(mna+)。bma.4：將0.5m的b(o2ccf3)3的cf3co2h溶液(400μl，30當(dāng)量)滴加到裝有bma.3(4.5mg，6.7μmol)的燒瓶中(事先放于冰水浴中)。劇烈攪拌該淺棕色混合物，同時(shí)用5h的時(shí)間使內(nèi)容物緩慢升溫至20℃。在該溫度攪拌14h后，將溶液冷卻至-78℃，并滴加1ml的meoh使該反應(yīng)淬滅。將該溶液減壓濃縮為固狀殘余物，然后再溶于1ml的meoh中。再一次濃縮該溶液。將該過(guò)程重復(fù)一次。然后將分離出的物質(zhì)溶于0.5ml的h2o中，并使之通過(guò)20x100mm離子交換樹脂柱(dowex1x8-200-oh型)，采用h2o作為洗脫液。收集按ph(～7.5-8.0)確定的含產(chǎn)物的級(jí)分，并用20μl的1.0mhcl水溶液酸化至ph為2。凍干溶液，獲得bma.4，為白色粉末(2.0mg，75％)。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.76(d，1h，j＝1.4hz)，4.31(d，1h，j＝4.0hz)，4.26(dd，1h，j＝11.5，9.0hz)，4.04(dd，1h，j＝11.5，5.5，hz)，3.83(ddd，1h，j＝9.0，5.4，1.5hz)，3.74(ddd，1h，j＝10.2，10.2，2.1hz)，3.66(ddd，1h，j＝9.8，9.8，8.4hz)，2.91(s，3h)，2.86(s，3h)，2.39(dddd，1h，j＝14.7，10.2，10.2，4.4hz)，2.21(ddd，1h，j＝15.0，8.2，1.5hz)；hrms(es+)：c12h21n7o3計(jì)算值為311.1706，實(shí)際值為312.1782(mh+)。bma.5：將β-dmc-stxbma.4(2.0mg，5.2μmol)與粉狀分子篩混入500μl的dmso中并攪拌30min。向該混合物中加入二環(huán)己基碳二亞胺(13mg，63μmol，12.1當(dāng)量)和三氟乙酸吡啶鹽(8.2mg，42μmol，8.1當(dāng)量)。立即形成稠的沉淀物，劇烈攪拌獲得的渾濁懸浮液達(dá)17h。凍干反應(yīng)混合物，得到固體產(chǎn)物，將其重懸于1ml的h2o中并過(guò)濾。另外用1ml的h2o以保證該物質(zhì)的定量轉(zhuǎn)移。凍干合并的濾液，并用反相hplc純化分離出的固體產(chǎn)物(altimac18，10μm，10x250mm柱，10∶90mecn/10mmc3f7co2h水溶液→25∶75mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫30min，214nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，二甲基氨基甲?；扛蚨舅亍?c3f7co2h的保留時(shí)間為20.8min，分離得到白色吸濕性固體(1.2mg，60％)。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.73(d，1h，j＝1.0hz)，4.29(dd，1h，j＝11.6，9.5hz)，4.03(dd，1h，j＝11.6，5.3hz)，3.84(ddd，1h，j＝9.3，5.2，0.9hz)，3.78(ddd，1h，j＝9.7，9.7，1.7hz)，3.55(ddd，1h，j＝9.7，9.7，8.2hz)，2.91(s，3h)，2.86(s，3h)，2.40(ddd，1h，j＝13.6，7.8，1.7hz)，2.32(ddd，1h，j＝13.7，9.7，9.7hz)ppm；hrms(es+)：c12h19n7o3計(jì)算值為309.1549，實(shí)際值為310.1633(mh+)。bma.6：將氯甲酸三氯乙酯(49ml，0.35mmol)滴加到冰冷的bma.1(200mg，0.35mmol)的3.5ml吡啶溶液中。立即形成膠粘性的固體，其緩慢溶解。攪拌該混合物10min，加入第二份氯甲酸三氯乙酯(49ml，0.35mmol，1.0當(dāng)量)。在0℃下另外攪拌該混合物20min。加入10ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。將混合物轉(zhuǎn)移至裝有10ml的ch2cl2的分液漏斗中。收集有機(jī)相，并用3x10ml的ch2cl2萃取水層。合并的有機(jī)級(jí)分用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮為白色固體。用硅膠色譜法(94∶6ch2cl2/meoh)純化該物質(zhì)，獲得bma.6，為白色固體(244mg，93％)。tlcrf＝0.34(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz，70℃)δ7.76-7.70(m，4h)，7.02-6.94(m，4h)，6.78(brs，1h)，6.16(s，2h)，5.62(d，1h，j＝7.0hz)，4.87(d，1h，j＝12.0hz)，4.82(d，1h，j＝12.0hz)，4.82-4.76(m，1h)，4.64(brs，1h)，4.61(dd，1h，j＝7.5，7.5hz)，4.31(dd，1h，j＝18.0，11.0hz)，4.28(ddd，1h，j＝11.5，11.5，3.5hz)，4.00-3.92(m，1h)，3.85(s，3h)，3.84(s，3h)，3.48-3.34(m，2h)，2.74-2.64(m，1h)，2.19-2.12(m，1h)ppm；ir(薄膜)v3333，1764，1597，1531，1499，1255，1131，1081cm-1；hrms(es+)：c26h31n6o9s2計(jì)算值為740.0481，實(shí)際值為763.0546(mna+)。bma.7：將二異丙基乙胺(535ml，3.1mmol，10.0當(dāng)量)加入到bma.6(228mg，0.31mmol)的6.0mlmecn懸浮液中，并在60℃下攪拌該混合物12h，在此期間固體物質(zhì)溶解。將該反應(yīng)冷卻至室溫，并將溶液減壓濃縮，產(chǎn)生米色固體。在5mlet2o的存在下將未經(jīng)純化的物質(zhì)磨碎；過(guò)濾收集該米色固體，并用5ml冰冷的et2o洗滌，獲得2.54(156mg，86％)。tlcrf＝0.34(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz)δ7.80(dd，2h，j＝7.0，2.0hz)，7.70(dd，2h，j＝7.0，2.0hz)，7.04(dd，2h，j＝7.0，2.0hz)，6.95(dd，2h，j＝7.0，2.0hz)，6.25(brs，2h)，5.66(brs，1h)，4.73(ddd，1h，j＝14.5，11.0，5.0hz)，4.66(brs，1h)，4.61(dd，1h，j＝11.0，7.5hz)，4.38(dd，1h，j＝8.0，8.0hz)，4.22(ddd，1h，j＝10.0，10.0，1.5hz)，4.14(dd，1h，j＝9.0，2.5hz)，3.85(s，3h)，3.82(s，3h)，3.61(ddd，1h，j＝14.5，7.5，3.0hz)，3.40(m，1h)，2.55-2.46(m，1h)，2.23-2.17(m，1h)ppm；ir(薄膜)v3326，3307，1776，1596，1533，1499，1398，1259，1138，1084cm-1；hrms(es+)：c24h28n6o8s2計(jì)算值為592.1410，實(shí)際值為615.1308(mna+)。bma.8：向冰冷的bma.7(20mg，0.034mmol)的1ml乙酸酐溶液中加入固體kmno4(11mg，0.067mmol，2.0當(dāng)量)。在0℃下攪拌該亮紫色溶液4h。然后加入2ml的na2s2o3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅，并用5ml的etoac和5ml的h2o稀釋。將混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中并收集有機(jī)層。用3x5mletoac萃取水層。將合并的有機(jī)層用10ml的nacl飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到油狀殘余物。用硅膠色譜法(95∶5ch2cl2/meoh)純化該物質(zhì)，獲得乙酸鹽bma.8，為白色固體(12mg，53％)。tlcrf＝0.40(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，400mhz)δ8.23(brs，1h)，7.84-7.80(m，2h)，7.75-7.71(m，2h)，7.06-7.03(m，2h)，6.98-6.94(m，2h)，6.48(brs，2h)，6.04(d，1h，j＝6.0hz)，5.18(d，1h，j＝4.0hz)，4.65(ddd，1h，j＝8.8，7.2，2.4hz)，4.48(s，1h)，4.46(d，1h，j＝1.2hz)，4.35(ddd，1h，j＝6.4，4.0，2.8hz)，3.85(s，3h)，3.83-3.78(m，1h)，3.82(s，3h)，3.56-3.50(m，1h)，2.66(dd，2h，j＝6.8，5.2hz)，2.07(s，3h)ppm；ir(薄膜)v3447，3356，1783，1720，1621，1597，1525，1500，1399，1260，1138，1082，836cm-1；hrms(es+)：c25h28n6o12s2計(jì)算值為668.1207，實(shí)際值為689.1312(mna+)。bma.9：向冰冷的bma.7(20mg，34.0μmol)的976μl50∶10∶1丙酮/h2o/acoh溶液中加入kmno4(11mg，67.0μmol，2.0當(dāng)量)。在0℃下攪拌2.5h后，加入2ml的na2s2o3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。用5ml的etoac和5ml的h2o稀釋該混合物，并轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。收集有機(jī)層并用3x5ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)層用3x10ml的nahco3飽和水溶液和1x10ml的nacl飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法純化分離出的物質(zhì)，獲得酮醇bma.9，為白色固體(11mg，54％)。tlcrf＝0.36(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz)δ8.18(brs，1h)，7.81-7.78(m，2h)，7.76-7.73(m，2h)，6.43(brs，2h)，6.03(d，1h，j＝6.0hz)，4.57(dd，1h，j＝6.0，6.0hz)，4.50(ddd，1h，j＝6.0，6.0，2.0hz)，4.47-4.42(m，1h)，4.32-4.29(m，1h)，4.24(ddd，1h，j＝6.5，5.0，1.5hz)，3.90(ddd，1h，j＝14.5，9.0，3.0hz)，3.85(s，3h)，3.82(s，3h)，3.57(ddd，1h，j＝15.0，6.5，4.5hz)，2.89(ddd，1h，j＝14.0，6.0，3.0hz)，2.59(ddd，1h，j＝14.0，9.5，4.0hz)ppm；ir(薄膜)v3363，1784，1691，1614，1539，1403，1262，1135，1075，833，763cm-1。bma.10：將一份過(guò)硫酸氫鉀制劑(436mg，0.71mmol，7.0當(dāng)量)加入到oscl3(36mm的h2o溶液，282ml，0.010mmol，0.10當(dāng)量)和na2co3(107mg，1.0mmol，10當(dāng)量)的4.3ml的3∶3∶1etoac/mecn/h2o混合物中。觀察到有氣體溫和地釋放出來(lái)，將所得的米色懸浮液混合物攪拌2min，然后加入噁唑烷酮bma.9(60mg，0.10mmol)。劇烈攪拌該內(nèi)容物48h。加入5ml的飽和na2s2o3使該反應(yīng)淬滅，然后將混合物轉(zhuǎn)移到含10ml的h2o和20ml的etoac的分液漏斗中。收集有機(jī)層，并用3x15ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用10ml的nacl飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(92∶8ch2cl2/meoh)純化固體殘余物，獲得bma.10，為白色固體(28mg，44％)。tlcrf＝0.21(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz)δ7.80-7.76(m，4h)，7.01-6.95(m，4h)，6.51(brs，2h)，6.07(brs，1h)，4.83(brs，1h)，4.46-4.40(m，2h)，4.32(brs，1h)，4.12(d，1h，j＝6.0hz)，3.92(d，1h，j＝3.5hz)，3.83(s，3h)，3.81(s，3h)，3.81-3.75(m，1h)，3.44(ddd，1h，j＝12.0，12.0，2.0hz)，2.25(1h，信號(hào)被dho掩蓋)，1.84(dd，1h，j＝12.5，7.5hz)ppm；ir(薄膜)v3326，3307，1776，1596，1533，1499，1398，1259，1138，1084cm-1；hrms(es+)：c24h28n6o10s2計(jì)算值為624.1308，實(shí)際值為625.1359(mh+)。bma.11：向冰冷的bma.9(30mg，51.0μmol)的2.5ml的2∶2∶1etoac/mecn/h2o溶液中加入rucl3(0.53mg，2.5μmol，o.05當(dāng)量)，然后加入固體naio4(13.1mg，61.2mmol，1.2當(dāng)量)。在0℃下攪拌進(jìn)行反應(yīng)達(dá)45min，然后加入2ml的na2s2o3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。用5ml的etoac和5ml的h2o稀釋該反應(yīng)，并轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。收集有機(jī)層并用3x5ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)級(jí)分用10ml的nacl飽和水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮。用硅膠色譜法對(duì)分離出的物質(zhì)進(jìn)行純化，獲得二醇bma.11，為白色固體(23mg，72％)。tlcrf＝0.30(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，400mhz)δ7.90(brs，1h)，7.82-7.79(m，2h)，7.76-7.73(m，2h)，7.06-7.02(m，2h)，7.00-6.96(m，2h)，6.36(brs，2h)，5.67(brd，1h，j＝3.6hz)，4.57-4.52(m，1h)，4.31(dd，1h，j＝11.2，5.6hz)，4.30-4.27(m，1h)，3.88-3.79(m，1h)，3.84(s，3h)，3.82(s，3h)，3.73-3.64(m，2h)，3.45-3.37(m，1h)，3.32-3.17(m，2h)，1.91-1.81(m，1h)，1.70-1.61(m，1h)ppm；ir(薄膜)v3325，1767，1618，1596，1534，1499，1400，1260，1134，1083cm-1。采用一般的三步法將噁唑烷酮bma.10轉(zhuǎn)化為stx衍生物bma.14-bma.18。將bma.10轉(zhuǎn)化為bma.14的實(shí)驗(yàn)詳情是具有代表性的。bma.12：將叔丁基-6-氨基己基氨基甲酸酯(28mg，0.13mmol，5.0當(dāng)量)加入bma.10(16mg，26.0μmol)的1.3mlthf溶液中。攪拌該混合物4h，減壓濃縮，用硅膠色譜法(94∶6ch2cl2/meoh)純化分離出的物質(zhì)，獲得bma.12，為無(wú)色的油(22mg，99％)。tlcrf＝0.30(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cd3cn，500mhz，60℃)δ7.75(dd，4h，j＝9.0，1.5hz)，6.98(dd，4h，j＝9.0，2.5hz)，6.37(brs，2h)，5.81(brs，1h)，5.53(brs，1h)，5.11(brs，1h)，4.81(brs，1h)，4.29(brd，1h，j＝11.5hz)，4.13(s，1h)，4.03(brt，1h，j＝8.0hz)，3.94(t，1h，j＝3.5hz)，3.85(s，6h)，3.75(dd，1h，j＝12.0，4.5hz)，3.67-3.63(m，1h)，3.58-3.50(m，2h)，3.07(brs，2h)，2.99(ddd，2h，j＝6.5，6.5，6.5hz)，2.23-2.16(m，1h)，1.85-1.81(m，1h)，1.51-1.40(m，4h)，1.42(s，9h)，1.34-1.25(m，4h)ppm；ir(薄膜)v3330，2932，1701，1578，1535，1499，1256，1132，1082cm-1；hrms(es+)：c35h52n8o12s2計(jì)算值為840.3146，實(shí)際值為863.3033(mna+)。bma.13：將裝有bma.12(23mg，0.027mmol)的10ml圓底燒瓶放于冰浴中，緩慢向其中加入b(o2ccf3)3(0.5m的cf3co2h溶液，1.64ml，0.82mmol，30當(dāng)量)。攪拌所得的淡棕色溶液，經(jīng)5h緩慢升溫至室溫。在該溫度下繼續(xù)加熱14h后，將該溶液冷卻至0℃，并滴加1.0ml的meoh使該反應(yīng)淬滅。減壓濃縮該混合物，獲得油狀殘余物。將未經(jīng)純化的產(chǎn)物再溶于～2ml的meoh中，并濃縮該溶液。將上述過(guò)程重復(fù)一次。然后將分離出的物質(zhì)溶于1ml的h2o，并使之通過(guò)2x10cmdowex1x8-200(-oh型)柱。收集按ph確定(＞7.5)的含有產(chǎn)物的級(jí)分，并用100ml的1.0mhcl水溶液酸化。凍干溶液，獲得bma.13，為白色粉末(12mg，92％)。1hnmr(d2o，400mhz)δ4.77(d，1h，j＝1.2hz)，4.33(d，1h，j＝3.6hz)，4.26(dd，1h，j＝11.6，9.2hz)，4.01(dd，1h，j＝11.6，5.6hz)，3.81(dd，1h，j＝9.2，5.6hz)，3.77(ddd，1h，j＝10.0，10.0，2.0hz)，3.67(ddd，1h，j＝18.8，8.8，1.6hz)，3.15-3.05(m，2h)，2.97(dd，2h，j＝7.6，7.6hz)，2.46-2.36，(m，1h)，2.23(ddd，1h，j＝14.8，8.4，1.6hz)，1.68-1.61(m，2h)，1.52-1.45(m，2h)，1.41-1.31(m，4h)ppm；hrms(es+)：c16h30n8o3計(jì)算值為382.2441，實(shí)際值為383.2514(mh+)。bma.14：向bma.13(9mg，0.018mmol)的1.4mldmso溶液中加入粉狀分子篩。攪拌該懸浮液20min，然后加入二環(huán)己基碳二亞胺(45mg，0.22mmol，12當(dāng)量)和三氟乙酸吡啶鹽(27mg，0.14mmol，7.5當(dāng)量)。立即生成白色沉淀；劇烈攪拌該漿料達(dá)17h。凍干反應(yīng)混合物，獲得固體產(chǎn)物，將其重懸于1ml的h2o中，并用硅藻土薄墊過(guò)濾。另外用2x1ml的h2o以保證該物質(zhì)的定量轉(zhuǎn)移。將合并的濾液凍干，并用反相hplc純化分離出的固體產(chǎn)物(altimac18，10μm，10x250mm柱，20∶80mecn/10mmc3f7co2h水溶液→27∶73mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫14min，214nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，bma.14的保留時(shí)間為7.1min，凍干分離，產(chǎn)物為白色粉末(12mg，63％)。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.68(s，1h)，4.23(dd，1h，j＝11.5，9.5hz)，3.97(dd，1hj＝11.5，5.5hz)，3.78-3.74(m，2h)，3.52(ddd，1h，j＝18.5，8.5，1.5hz)，3.09-3.01(m，2h)，2.93(dd，2h，j＝6.4，6.4hz)，2.38(ddd，1h，j＝14.0，8.0，2.0hz)，2.33-2.26(m，1h)，1.63-1.57(m，2h)，1.48-1.42(m，2h)，1.35-1.28(m，4h)ppm；hrms(es+)：c16h30n8o4計(jì)算值為398.2390，實(shí)際值為399.2472(mh+)。bma.15：1hnmr(d2o，400mhz)δ4.70(s，1h)，4.27(dd，1h，j＝11.6，8.8hz)，3.99(dd，1h，j＝11.6，5.2hz)，3.80-3.76(m，2h)，3.54(dd，1h，j＝7.6，7.6hz)，3.11-3.04(m，2h)，2.39-2.30(m，2h)，1.45(dd，2h，j＝6.8，6.8hz)，1.26-1.21(m，8h)，0.83(t，3h，j＝6.8hz)ppm；hrms(es+)：c17h31n7o4計(jì)算值為397.2438，實(shí)際值為398.2505(mh+)。bma.16：1hnmr(d2o，500mhz)δ4.70(s，1h)，4.26(dd，1h，j＝11.5，9.0hz)，3.99-3.95(m，1h)，3.80-3.75(m，2h)，3.66-3.60(m，1h)，3.54(ddd，1h，j＝18.0，10.0，1.5hz)，2.40(ddd，1h，j＝14.0，8.0，1.5hz)，2.34-2.28(m，1h)，1.09(d，6h，j＝7.0hz)ppm；hrms(es+)：c13h23n7o4計(jì)算值為341.1812，實(shí)際值為342.1890(mh+)。bma.17：1hnmr(d2o，500mhz)δ4.69(d，1h，j＝1.5hz)，4.27(dd，1h，j＝12.0，9.5hz)，3.97(dd，1h，j＝11.5，5.0hz)，3.78-3.71(m，2h)，3.52(dd，1h，j＝9.0，9.0hz)，3.08(dd，2h，j＝6.5，6.5hz)，2.15(t，2h，j＝7.0hz)，1.55-1.49(m，2h)，1.49-1.43(m，2h)，1.31-1.23(m，2h)ppm(注：由于與d2o交換，所以沒有c11甲叉的1h信號(hào))；hrms(es+)：c16h27n7o6計(jì)算值為413.2023，實(shí)際值為414.2122(mh+)。bma.18：1hnmr(d2o，400mhz)δ7.87(d，2h，j＝9.2hz)，7.85(d，2h，j＝9.2hz)，7.81(dd，2h，j＝8.0，1.2hz)，7.73(tt，1h，j＝7.6，1.6hz)，7.57(t，2h，j＝8.0hz)，4.64(d，1h，j＝1.2hz)，4.17(dd，1h，j＝11.6，9.6hz)，3.96(dd，1h，j＝11.6，4.8hz)，3.74-3.69(m，2h)，3.53(dd，2h，j＝5.2，5.2hz)，3.41-3.34(m，3h)，2.34-2.26(m，2h)ppm；hrms(es+)：c26h30n8o6計(jì)算值為550.2288，實(shí)際值為551.2388(mh+)。bma.20：向bma.13(2.5mg，2.4mmol)在240μl的ph9.5緩沖液(0.1mnahco3/na2co3)和dmf為1∶3的混合物中的溶液里加入4-氟苯甲酸n-羥基琥珀酰亞胺酯(1.6mg，7.2mmol，3.0當(dāng)量)。在室溫下攪拌該溶液5h，然后用30ml的1.0mhcl水溶液酸化。凍干該混合物，獲得固體物質(zhì)，用反相hplc純化(altimac18，10μm，10x250mm柱，10∶90mecn/10mmc3f7co2h水溶液→40∶60mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫30min，254nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，bma.20的保留時(shí)間為16.2min，凍干分離，產(chǎn)物為白色粉末(2.2mg，96％)。1hnmr(d2o，500mhz)δ7.75-7.72(m，2h)，7.21-7.18(m，2h)，4.68(s，1h)，4.21(dd，1h，j＝12.0，9.5hz)，3.84(dd，1h，j＝12.0，5.5hz)，3.78-3.74(m，2h)，3.54-3.49(m，1h)，3.34(dd，2h，j＝7.0，7.0hz)，3.10-3.03(m，2h)，2.40-2.26(m，2h)，1.61-1.55(m，2h)，1.48-1.43(m，2h)，1.38-1.28(m，4h)ppm；hrms(es+)計(jì)算值為c23h33fn8o5520.2558，實(shí)際值為521.2639(mh+)。tlcrf＝0.08(9∶1ch2cl2/meoh)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ7.91(d，2h，j＝8.0hz)，7.81-7.75(m，4h)，7.43(d，2h，j＝8.4hz)，6.78(brs，1h)，4.63(brs，1h)，3.96(s，2h)，3.45(q，2h，j＝6.8hz)，3.11(q，2h，j＝6.4hz)，1.66-1.57(m，4h)，1.51-1.32(m，4h)ppm；ir(薄膜)v3361，3305，2931，2859，1686，1648，1523，1280，1174，932cm-1。bma.23：向攪拌的bma.22(4.0mg，4.1μmol)在200μl的mecn和ph9.5緩沖液(nahco3/na2co3)為1∶1的混合物中的溶液里加入生物素nhs酯(2.1mg，6.2μmol，1.5當(dāng)量)。攪拌該混合物6h，然后加入21μl的1.0mhcl水溶液使該反應(yīng)淬滅，減壓移除溶劑。用反相hplc純化分離出的物質(zhì)(altimac18，10μm，10x250mm柱，20∶80mecn/h2o(含0.1％cf3co2h水溶液)→80∶20mecn/h2o(含0.1％cf3co2h水溶液)梯度洗脫30min，254nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，bma.23的保留時(shí)間為8.9min，凍干分離，產(chǎn)物為白色粉末(0.71mg，20％)。1hnmr(d2o，400mhz)δ7.84(s，4h)，7.79(d，2h，j＝8.0hz)，7.46(d，2h，j＝7.6hz)，4.72(s，1h)，4.47(dd，1h，j＝7.6，5.2hz)，4.40(d，2h，j＝6.0hz)，4.31-4.27(m，2h)，4.05(dd，1h，j＝12.0，5.2hz)，3.83-3.74(m，2h)，3.56-3.49(m，1h)，3.39(t，2h，j＝6.8hz)，3.21-3.13(m，3h)，2.85(dd，1h，j＝12.8，4.8hz)，2.63(d，1h，j＝13.2hz)，2.42-2.26(m，2h)，2.14(t，2h，j＝7.2hz)，1.65-1.57(m，4h)，1.55-1.44(m，4h)，1.39-1.26(m，6h)ppm。1hnmr(d2o，400mhz)δ4.68(s，1h)，4.28(dd，1h，j＝11.6，9.6hz)，3.96(dd，1h，j＝12.0，5.2hz)，3.78(ddd，1h，j＝10.0，10.0，2.0hz)，3.77-3.74(m，1h)，3.54(ddd，1h，j＝18.4，10.4，2.8hz)，3.15(s，2h)，2.39ddd，1h，j＝14.4，8.4，2.0hz)，2.30(ddd，1h，j＝14.4，10.0，10.0hz)，1.00(s，3h)ppm；hrms(es+)：c13h21n9o4計(jì)算值為367.1717，實(shí)際值為368.1789(mh+)。bma.25：向攪拌的bma.13(2.6mg，2.5μmol)在125μlph9.5緩沖液(0.1mnahco3/na2co3水溶液)中的溶液里加入oregongreennhs酯(4.0mg，7.8μmol，3當(dāng)量)的125μlmecn溶液。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h，然后用37.5μl的1.0mhcl水溶液酸化。減壓濃縮該溶液，并用反相hplc純化固體物質(zhì)(altimac18，10μm，10x250mm柱，10∶90mecn/10mmc3f7co2h水溶液→40∶60mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫30min，254nihuv檢測(cè))。流速為6ml/min。bma.25的保留時(shí)間為28.5min，凍干分離，產(chǎn)物為橙色固體(0.37mg，19％)：1hnmr(d2o，400mhz)δ8.47(d，1h，j＝1.6hz)，8.10(dd，1h，j＝8.0，1.6hz)，7.44(d，1h，j＝8.0hz)，7.00(s，1h)，6.99(s，1h)，6.91(s，1h)，6.88(s，1h)，4.66(s，1h)，4.19(dd，1h，j＝11.6，9.2hz)，3.95(dd，1h，j＝11.6，5.2hz)，3.78-3.71(m，2h)，3.50(dd，1h，j＝18.4，10.0hz)，3.43(t，2h，j＝6.8hz)，3.11-3.03(m，2h)，2.36(ddd，1h，j＝14.0，8.4，1.6hz)，2.28(ddd，1h，j＝14.0，9.6，9.6hz)，1.68-1.61(m，2h)，1.51-1.44(m，2h)，1.41-1.34(m，4h)ppm；hrms(es+)：c37h38f2n8o10計(jì)算值為792.2679，實(shí)際值為793.2753(mh+)。bma.26：向攪拌的bma.13(7.0mg，6.7μmol)在340μlmecn/ph9.5緩沖液(0.1mnahco3/na2co3水溶液)為1∶1的混合物中的溶液里加入cy5-nhs酯(6.2mg，10μmol，1.5當(dāng)量)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h，然后用68μl的1.0mhcl水溶液酸化。減壓濃縮該溶液，并用反相hplc純化固體物質(zhì)(altimac18，10μm，10x250mm柱，20∶80mecn/含0.1％cf3co2h的h2o→50∶50mecn/含0.1％cf3co2h的h2o梯度洗脫30min，254nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min。bma.26的保留時(shí)間為26.0min，凍干分離，產(chǎn)物為深藍(lán)色固體(1.03mg，18％)：1hnmr(d2o，400mhz)δ8.01-7.94(m，2h)，7.50-7.47(m，2h)，7.41-7.37(m，2h)，7.24(t，4h，j＝7.6hz)，6.51(t，1h，j＝12.8hz)，6.23(d，1h，j＝2.4.hz)，6.20(d，1h，j＝2.4hz)，4.64(d，1h，j＝1.2hz)，4.10(dd，1h，j＝11.6，9.2hz)，4.97(t，2h，j＝6.4hz)，3.81(dd，1h，j＝11.6，5.6hz)，3.75(ddd，1h，j＝10.0，10.0，2.4hz)，3.69(dd，1h，j＝9.2，6.0hz)，3.54(s，3h)，3.48(dd，1h，j＝18.0，10.0hz)，3.00-2.93(m，4h)，2.37(ddd，1h，j＝14.0，8.4，2.4hz)，2.29(ddd，1h，j＝13.6，10.4，10.4hz)，2.15(t，2h，j＝6.4hz)，1.85-1.78(m，2h)，1.62(s，6h)，1.62(s，6h)，1.61-1.54(m，2h)，1.37-1.24(m，6h)，1.20-1.16(m，2h)ppm；hrms(es+)：c48h67n10o5+計(jì)算值為863.5290，實(shí)際值為430.7580(mh+/2)。bma.27：向攪拌的bma.13在mecn/ph9.5緩沖液(0.1mnahco3/na2co3水溶液)為1∶1的混合物中的溶液里加入dcdhf-nhs酯。室溫?cái)嚢柘逻M(jìn)行該反應(yīng)達(dá)3h，然后用40μl的1.0mhcl水溶液酸化。減壓濃縮該溶液后，用反相hplc純化固體物質(zhì)(altimac18，10μm，10x250mm柱，20∶80mecn/含0.1％cf3co2h的h2o→80∶20mecn/含0.1％cf3co2h的h2o梯度洗脫30min，254nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min。bma.27的保留時(shí)間為14.6min，凍干分離，產(chǎn)物為深紫色固體(1.3mg，44％)：1hnmr(d2o，500mhz)δ7.73(d，1h，j＝16.5hz)，7.55(d，2h，j＝8.0hz)，6.82(d，2h，j＝8.5hz)，6.57(d，1h，j＝15.5hz)，4.68(s，1h)，4.20(dd，1h，j＝11.0，11.0hz)，3.96(dd，1h，j＝10.5，4.5hz)，3.78-3.73(m，2h)，3.53-3.48(m，3h)，3.08(s，3h)，3.01-2.99(m，4h)，2.38(dd，1h，j＝14.0，5.6hz)，2.33-2.25(m，3h)，1.97-1.92(m，2h)，1.41-1.36(m，2h)，1.33-1.28(m，2h)，1.22-1.17(m，4h)ppm。whp.3：向whp.1(1.5mg，0.0015mmol)在700μlmecn和ph8.5緩沖液(0.1mnah2po4/na2hpo4)為2∶1的混合物中的溶液里加入3-馬來(lái)酰亞胺丙酸n-羥基琥珀酰亞胺酯(2.1mg，0.0077mmol，5.0當(dāng)量)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h，然后用50μl的1.0mhcl水溶液酸化。凍干該混合物，獲得固體物質(zhì)，然后用反相hplc純化(altimac18，10μm，10x250mm柱，20∶80mecn/10mmc3f7co2h水溶液→27∶73mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫14min，214nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，whp.3的保留時(shí)間為7.1min，凍干分離，產(chǎn)物為白色粉末(0.38mg，28％)。1hnmr(d2o，500mhz)δ6.81(s，2h)，4.60(s，1h)，4.31(dd，1h，j＝11.3，9.5hz)，3.96(dd，1h，j＝12.0，5.0hz)，3.81-3.76(m，2h)，3.75(t，2h，j＝6.0hz)，3.58-3.54(m，1h)，3.31-3.20(m，2h)，3.14(t，2h，j＝10.5hz)，2.47(t，2h，j＝6.5hz)，2.41-2.29(m，2h)ppm；lrms(es+)c19h27n9o7計(jì)算值為493.47，實(shí)際值為494.59(mh+)。實(shí)施例2：本實(shí)施例提供了石房蛤毒素類似物及相關(guān)分子的合成路徑，以膝溝藻毒素3(gtx3)的合成為例，其為具有類似于其他石房蛤毒素類似物(如石房蛤毒素、新石房蛤毒素和其他膝溝藻毒素)結(jié)構(gòu)的小分子雙胍基結(jié)構(gòu)的麻痹性貝類毒素。超過(guò)20種的已知的硫酸化毒素——膝溝藻毒素3(gtx3)中的任意一者的第一合成路徑在如下文獻(xiàn)中有所描述(圖9)。(參見文獻(xiàn)：(a)shimizu，y.；buckley，l.j.；alam，m.；oshima，y.；fallon，w.e.；kasai，h.；miura，i.；gullo，v.p.；nakanishi，k.j.am.chem.soc.1976，98，5414-5416。(b)boyer，g.l.；schantz，e.j.；schnoes，h.k.j.chem.soc.，chem.comm.1978，889-890.。(c)onodera，h.；satake，m.；oshima，y.；yasumoto，t.；carmichael，w.w.naturaltoxins1997，5，146-151。以下文獻(xiàn)描述了gtx2和3的不完全合成方法：hannick，s.m.；kishi，y.j.org.chem.1983，48，3833-3835。)我們最近公開了用于形成2-氨基咪唑的氧化方法，之后gtx3中的五元環(huán)胍成為我們合成分析的焦點(diǎn)。(參見文獻(xiàn)：kim，m.；mulcahy，j.v.；espino，c.g.，dubois，j.org.lett.2006，8，1073-1076。)這種轉(zhuǎn)換被認(rèn)為是通過(guò)rh結(jié)合的胍氮賓(能夠修飾c-h鍵和π鍵這二者的活性物質(zhì))介導(dǎo)的。為了制備gtx3，由胍類氮烯(guanidinenitrenoid)將吡咯核氨化是該技術(shù)的新應(yīng)用(圖9)。圖9示出了吡咯氧化，并突出了gtx3的合成方法。該反應(yīng)可通過(guò)張力吖丙啶3或偶極物4而發(fā)生，其中c10或c12受親核攻擊會(huì)產(chǎn)生所需的三環(huán)母核。(類似的與吲哚衍生物的氧化反應(yīng)給出了兩性離子中間體的證據(jù)，參見文獻(xiàn)：padwa，a.；flick，a.c.；leverett，c.a.；stengel，t.j.org.chem.2004，69，6377-6386。)盡管存在該區(qū)域化學(xué)(regiochemical)問(wèn)題，但是這樣的策略將gtx問(wèn)題簡(jiǎn)化為相當(dāng)不起眼的雙環(huán)中間體1。根據(jù)該辦法，制定了這樣的合成雙胍1的途徑，其采用吡咯與活性亞胺的分子內(nèi)加成。雖然先例有限，但是由于必要的前體2很容易從絲氨酸獲得，所以可以快速評(píng)價(jià)這種類型的pictet-spengler反應(yīng)。gtx3的合成從將1-絲氨酸甲酯轉(zhuǎn)化為醛5的三步轉(zhuǎn)化序列開始(圖10)。(參見文獻(xiàn)：boger，d.l.；patel，m.j.org.chem.1987，52，2319-2323。)將該醛與烯丙胺縮合，然后用bf3·oet2處理，其可實(shí)現(xiàn)所需的環(huán)的閉合，從而以＞20∶1的非對(duì)映選擇性生成反式取代的脲6。(該中間體的修飾形式的x射線晶體結(jié)構(gòu)證實(shí)了該反式立體排布。)假定該產(chǎn)物的c5/c6立體化學(xué)結(jié)構(gòu)(gtx編號(hào))建立在動(dòng)力學(xué)控制下，則降低c6和n7上的取代基之間的烯丙基張力的構(gòu)象可能是導(dǎo)致所觀察到的非對(duì)映立體選擇性的原因。通過(guò)四步轉(zhuǎn)化序列有效地將6轉(zhuǎn)化為必要的氨化前體7；注意的是，開發(fā)了一步過(guò)程，用于順序進(jìn)行烯丙基脫保護(hù)和異硫脲的形成(參見步驟e，6→7，tces＝so3ch2ccl3)。成功應(yīng)用胍7的rh催化胺化反應(yīng)以獨(dú)一無(wú)二的定義事件(singular，definingevent)的方式組裝成了gtx3的三環(huán)框架。由于插入到鄰近的c6中心的c-h鍵似乎不與吡咯修飾發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)，因此該反應(yīng)是化學(xué)選擇性的。在這一轉(zhuǎn)變中產(chǎn)生的副產(chǎn)物醋酸為推定的吖丙啶增加了區(qū)域選擇性和立體選擇性，從而產(chǎn)生唯一的產(chǎn)物n，o-縮醛8(基于對(duì)反應(yīng)混合物的1hnmr分析)。(這種材料在sio2上的不穩(wěn)定性可能會(huì)造成分離收率降低。溶劑的選擇也對(duì)該步驟的表現(xiàn)有相當(dāng)顯著的影響，ch2cl2為唯一的其中觀察到起始胍7被完全消耗的介質(zhì)。)盡管醋酸酯僅攻擊c10而非c12，但是適當(dāng)?shù)靥幚矸蛛x出的三環(huán)8以完成gtx的合成。8針對(duì)處理和純化操作的穩(wěn)定性被證明是有些變幻莫測(cè)的，從而促使作出決定要減少可能不穩(wěn)定的n，o-縮醛單元。在et3sih和bf3·oet2存在下該轉(zhuǎn)化順利進(jìn)行，產(chǎn)生收率為81％的c11-c12烯。在這些條件下未檢測(cè)到互變烯烴(transposedolefin)產(chǎn)物。采用cl3cc(o)nco使得能夠引入伯氨基甲酸酯。(參見文獻(xiàn)：kocovsky，p.tetrahedronlett.1986，27，5521-5524。)中間體9包含在天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的所有必要的碳中心。已研究了將烯烴9轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的α-酮醇的替代方法。區(qū)域選擇性的酮羥基化作用為所需目標(biāo)提供了最便捷的途徑；但是尚未確定這樣的條件。(酮羥基化作用的先例參見文獻(xiàn)：fleming，j.j.；mcreynolds，m.d.；dubois，j.j.am.chem.soc.2007，129，9964-9975。)相比之下，采用2mol％的oso4和n-甲基嗎啉-n-氧化物進(jìn)行的烯烴二羥基化是相當(dāng)有效的，并產(chǎn)生二醇10，其為單一的立體異構(gòu)體。分子模型分析表明，9中的烯烴的β-面是更加暴露的，這與觀察到的選擇性是一致的。在采用苯甲酰氰和dmap的高度優(yōu)化的條件下，實(shí)現(xiàn)c11-oh的保護(hù)。另外，更多的標(biāo)準(zhǔn)?；瘎?如phc(o)c1)與3。胺或吡啶堿基聯(lián)用，產(chǎn)生不可分離的同分異構(gòu)的苯甲?；锏幕旌衔铩ｋm然可在c11上安裝其他阻斷基團(tuán)如tbume2si-，但是它們所具有的較大的立體體積抑制了c12醇的隨后氧化。采用戴斯-馬丁氧化劑(dess-martinperiodinane)能夠使11在c12位上形成酮(基于六價(jià)鉻、tempo和dmso的氧化方案普遍會(huì)消耗起始物而不生成酮12。)通過(guò)一步操作移除12中的所有3個(gè)保護(hù)基團(tuán)，得到了11β-羥基石房蛤毒素，其以雙-c3f7co2-鹽的形式被分離出來(lái)。該物質(zhì)的分析數(shù)據(jù)(1hnmr，hrms)與文獻(xiàn)中所述一致。(參見文獻(xiàn)：(a)wichmann，c.f.；boyer，g.l.；divan，c.l.；schantz，e.j.；schnoes，h.k.tetrahedronlett.1981，22，1941-1944。(b)shimizu，y.；kobayashi，m.；genenah，a.；oshima，y.tetrahedron1984，40，539-544。)為了完成gtx3的合成，采用dmf·so3與2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(作為酸清除劑)來(lái)實(shí)現(xiàn)c11醇的選擇性硫酸化。反相hplc后獲得純毒素，其為c3f7co2-加成物。這種物質(zhì)在各方面與報(bào)道的天然gtx3的物理性質(zhì)一致，并能阻斷異源表達(dá)的nav1.4離子通道中的電傳導(dǎo)，其ic50值為～20nm(報(bào)道的ic50＝13.2-33.5nm)。(參見文獻(xiàn)：(a)choudhary，g.；shang，l.；li，x.；dudley，jr.，s.c.biophys.j.2002，83，912-919。(b)kao，c.y.；kao，p.n.；james-kracke，m.r.；koehn，f.e.；wichmann，c.f.；schnoes，h.k.toxicon1985，23，647-655。)將gtx3的ph＝8的水溶液靜置后，在c11位發(fā)生差向異構(gòu)而產(chǎn)生gtx2，這也與公開的觀察報(bào)告一致(圖11)。(參見文獻(xiàn)：例如，(a)shimizu，y.；buckley，l.j.；alam，m.；oshima，y.；fallon，w.e.；kasai，h.；miura，i.；gullo，v.p.；nakanishi，k.j.am.chem.soc.1976，98，5414-5416。(b)wichmann，c.f.；boyer，g.l.；divan，c.l.；schantz，e.j.；schnoes，h.k.tetrahedronlett.1981，22，1941-1944。)圖11示出了靜置后c11位發(fā)生的差向異構(gòu)。gtx3的全合成為制備這一族的石房蛤毒素類似物及其相關(guān)結(jié)構(gòu)提供了獨(dú)特的策略方案，同時(shí)要強(qiáng)調(diào)rh催化胺化對(duì)于雜環(huán)組裝的功效。(以下文獻(xiàn)已經(jīng)描述了試圖利用胍c-h鍵插入來(lái)組裝天然產(chǎn)物的溴吡咯衍生物：wang，s.；romo，d.angew.chem.int.ed.2008，47，1284-1286。這一族分子的近期綜述可參見文獻(xiàn)：m.；grube，a.；seiple，i.b.；baran，p.s.angew.chem.iht.ed.2007，46，6586-6594。)材料和方法除非另有說(shuō)明，否則所有試劑均為市售可得的。反應(yīng)在干燥氮?dú)猸h(huán)境下于烘干的玻璃器皿中進(jìn)行。通過(guò)注射器或不銹鋼導(dǎo)管來(lái)轉(zhuǎn)移空氣敏感和濕氣敏感的液體和溶液。減壓條件下(約15托)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮有機(jī)溶液。在即將使用之前，使二氯甲烷(ch2cl2)、四氫呋喃(thf)、乙腈(mecn)、n，n-二甲基甲酰胺、丙酮(phme)通過(guò)活性氧化鋁柱子。在silicycle硅膠60(40-63μm)上采用強(qiáng)制流動(dòng)色譜法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行色譜法純化。在emscience硅膠60f254板(250μm)上進(jìn)行薄層色譜法。通過(guò)熒光淬滅以及通過(guò)用茴香醛乙醇(ethanolicanisaldehyde)、高錳酸鉀水溶液或鉬酸銨鈰(cam)水溶液染色來(lái)實(shí)現(xiàn)展開的色譜圖的可視化。采用varian設(shè)備及alltimac18，10x250mm，10μm柱，采用含有0.1％cf3co2h緩沖液或10mmc3f7cooh的mecn/h2o作為洗脫液進(jìn)行高效液相色譜(hplc)純化(如下文)。在varianinova分光計(jì)上在400、500或600以及100、125或150mhz下分別檢測(cè)1h和13c，并將殘留溶劑信號(hào)作為內(nèi)參。1hnmr數(shù)據(jù)記錄如下：化學(xué)位移(δ，ppm)、多重性(s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；quint，五重峰；m，多重峰；br，寬峰)、積分、耦合常數(shù)(hz)。13c的數(shù)據(jù)以化學(xué)位移(δ，ppm)報(bào)告。在thermo-nicolet300ft-ir分光計(jì)上記錄采用nacl鹽片的薄膜的紅外光譜(ir)，并且以吸收頻率報(bào)告。通過(guò)將樣品裝入位于在nad線下工作的jascodip-1000數(shù)字旋光儀上的50mm的池中，獲得旋光數(shù)據(jù)。高分辨率質(zhì)譜來(lái)自斯坦福大學(xué)的vincentcoates基金會(huì)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)方案和表征數(shù)據(jù)：向冰冷的kotbu(46.0g，409.9mmol，1.1當(dāng)量)的1.2l1∶1et2o/thf溶液中緩慢加入吡咯(26.0ml，372.0mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至室溫并攪拌30min。之后，從燒瓶頂端緩慢加入過(guò)量的固體co2(～200g)，導(dǎo)致劇烈冒泡，并且反應(yīng)溫度降低。將該反應(yīng)容器放于室溫水浴中，并靜置至燒瓶底部不再有固體co2。加入300ml的h2o，并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。收集水層，并將有機(jī)相用300ml的h2o洗滌。將合并的水相提取物用1.0mhcl水溶液酸化至ph＜1。然后向該水溶液中加入400ml的et2o，并將內(nèi)容物再次轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。收集有機(jī)相，并用2x400ml的et2o萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用na2so4干燥，過(guò)濾，并減壓濃縮，得到吡咯-1-羧酸，為白色固體(35.6g，86％)。mp為114116℃；1hnmr(cdcl3，400mhz)8.54(brs，1h)，7.31(t，2h，j＝2.4hz)，6.31(t，2h，j＝2.4hz)ppm.，其與文獻(xiàn)中報(bào)道的數(shù)據(jù)一致。(參見文獻(xiàn)：boger，d.l.；patel，m.″activationandcouplingofpyrrole-1-carboxylicacidintheformationofpyrrolen-carbonylcompounds-pyrrole-1-carboxylicacidanhydride.″journaloforganicchemistry1987，52，2319-2323。)向吡咯羧酸(35.6g，323.3mmol，2.0當(dāng)量)的1.25lch2cl2溶液中加入一份固體二環(huán)己基碳二亞胺(68.3g，331.1mmol，2.05當(dāng)量)。劇烈攪拌該混合物20min后，加入一份磨得很細(xì)的1-絲氨酸甲酯鹽酸鹽(25.2g，161.7mmol)和三乙胺(36.7ml，242.2mmol，1.5當(dāng)量)在550mlch2cl2中的懸浮液。再攪拌該混合物22h，然后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。用冷的ch2cl2洗滌燒瓶和濾餅，將合并的過(guò)濾液減壓濃縮。用硅膠色譜法純化分離出的物質(zhì)(梯度洗脫：7∶1→1∶1己烷/etoac)，得到脲jvm.1，為淺黃色的油(22.9g，67％)。tlcrf＝0.24(1∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ7.30-7.26(m，2h)，7.11-7.05(m，1h)，7.24-7.21(m，2h)，4.67-4.64(m，1h)，4.03(dd，1h，j＝11.2，4.0hz)，3.92(dd，1h，j＝11.6，3.6hz)，3.73(s，3h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ171.4，151.5，119.0，112.4，62.7，56.1，53.1ppm；ir(薄膜)v3371，2953，1741，1685，1548，1529，1475，1357，1306，1216，1076，740cm-1。向醇jvm.1(16.3g，76.8mmol)的110mldmf溶液中順序加入咪唑(6.80g，99.9mmol，1.3當(dāng)量)和t-buph2sicl(20.6ml，80.7mmol，1.05當(dāng)量)。攪拌反應(yīng)混合物14h，用300ml的et2o稀釋，然后用250ml的h2o淬滅。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，收集有機(jī)相并用2x250ml的h2o和1x250ml的nacl飽和水溶液洗滌。將該醚提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法純化油狀殘留物(梯度洗脫：1∶0→4∶1己烷/etoac)，得到甲硅烷基醚jvm.2，為淺黃色的油(32.1g，93％)。tlcrf＝0.51(3∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ7.60-7.57(m，4h)，7.46-7.30(m，6h)，7.16(dd，2h，j＝2.4，2.4hz)，6.41(d，1h，j＝8.0hz)，6.29(dd，2h，j＝2.4，2.4hz)，4.70(ddd，1h，j＝8.0，2.4，2.4hz)，4.20(dd，1h，j＝10.4，2.4hz)，4.01(dd，1h，j＝10.4，3.2hz)，3.79(s，3h)，1.05(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ170.5，150.2，135.4，135.3，132.6，132.4，130.00，129.98，127.85，127.82，118.4，112.1，64.2，55.4，52.7，26.7，19.2ppm；ir(薄膜)v3361，2954，2858，1748，1711，1508，1473，1357，1113，736，703cm-1；hrms(es+)：c25h30n2o4si計(jì)算值為450.1975，實(shí)測(cè)值為473.1869(mna+)。將甲酯jvm.2(10.3g，22.9mmol)的230mlch2cl2溶液冷卻至-91℃，向其中滴加ibu2alh(22.9ml的1.50mphme溶液，34.3mmol，1.5當(dāng)量)15min。在-91℃下攪拌該混合物4h，然后加入第二份1bu2alh(7.6ml的1.50mphme溶液，11.4mmol，0.5當(dāng)量)。再攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)1.5h，然后在該溫度下緩慢加入30ml的etoac使反應(yīng)淬滅。將內(nèi)容物倒入裝有220ml的1.0m酒石酸鈉鉀水溶液和440ml的etoac的厄倫美厄(erlenmeyer)燒瓶，并且劇烈攪拌3.5h。然后將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。收集有機(jī)相，用mgso4干燥并減壓濃縮，得到淺黃色的油。不經(jīng)純化而直接使用該物質(zhì)以使光學(xué)純度的損耗達(dá)到最小。通過(guò)硅膠色譜法(9∶1→3∶1己烷/etoac)獲得純?nèi)┑臉悠?。tlcrf＝0.51(3∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ9.72(s，1h)，7.63-7.57(m，4h)，7.52-7.36(m，6h)，7.21(dd，2h，j＝2.4，2.4hz)，6.49(brd，1h，j＝6.4hz)，6.35(dd，2h，j＝2.4，2.4hz)，4.72-4.68(m，1h)，4.40(dd，1h，j＝11.2，2.8hz)，4.12(dd，1h，j＝10.8，3.6hz)，1.12(s，9h)ppm。將未純化的醛(22.9mmol，假定收率為100％)的220mlch2cl2溶液冷卻至0℃，向其中加入烯丙胺(1.71ml，22.9mmol)。用20min將該混合物加熱至室溫，然后冷卻至-78℃。用10min將bf3·oet2(10.2ml，80.0mmol，3.5當(dāng)量)滴加至該溶液中。之后，將內(nèi)容物加熱至23℃。攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)1h，然后加入220ml的飽和nahco3水溶液使該反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌該內(nèi)容物20min，用440ml的etoac稀釋，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)相并用2x140ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：4∶1→1∶1己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到胺jvm.3，為淺黃色泡沫狀(5.9g，兩步獲得56％)。tlcrf＝0.21(1∶1己烷/etoac)；[α]na-93.7°(c＝4.11，cdcl3)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ7.61-7.55(m，4h)，7.43-7.31(m，6h)，7.28(dd，1h，j＝3.2，1.6hz)，6.17(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，6.11-6.09(m，1h)，5.88-5.78(m，2h)，5.18(dd，1h，j＝17.2，1.6hz)，5.10(dd，1h，j＝10.4，1.6hz)，3.96(d，1h，j＝3.2)，3.73(ddd，1h，j＝10.4，6.8，3.6hz)，3.60-3.52(m，2h)，3.30-3.17(m，2h)，1.02(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ149.6，136.2，135.41，135.38，132.7，132.6，129.80，129.77，128.8，127.73，127.69，117.9，116.5，110.6，110.4，64.2，58.2，49.13，49.07，26.6，19.0ppm；ir(薄膜)v3247，2931，2858，1716，1428，1113，733，703cm-1；hrms(es+)：c27h33n3o2si計(jì)算值為459.2342，實(shí)測(cè)值為482.2235(mna+)。混合胺jvm.3(5.50g，12.0mmol)、1，3-二甲基巴比妥酸(5.61g，35.9mmol，3.0當(dāng)量)和pd(pph3)4(277mg，0.24mmol，0.02當(dāng)量)，并用n2將燒瓶吹掃幾分鐘。向反應(yīng)容器中加入120ml的脫氧ch2cl2(3x冷凍/泵送/融化循環(huán))。攪拌該反應(yīng)混合物8h，之后順序加入125ml的1.0mna2co3水溶液和亞胺酯jvm.4(3.84g，12.0mmol)。攪拌該兩相混合物20min，然后用240ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)相，并用1x120ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：9∶1→2∶1己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到異硫脲jvm.5，為黃色泡沫狀(8.1g，96％)。tlcrf＝0.45(3∶2己烷/etoac)；[α]na-83.2°(c＝1.0，meoh)；1hnmr(c6d6，400mhz)δ8.35(brd，1h，j＝8.0hz)，7.64-7.56(m，4h)，7.41(dd，1h，j＝3.2，1.6hz)，7.26-7.20(m，6h)，6.14(brs，1h)，5.95(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，5.31(brs，1h)，5.02(brs，1h)，4.50(brs，2h)，3.33-3.24(m，2h)，2.83(brs，1h)，1.82(brs，3h)，1.09(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ170.5，148.9，135.50，135.47，132.3，132.1，130.3，130.1，128.0(2)，124.5，119.3，112.4，111.6，93.6，78.6，63.1，57.7，47.5，26.8，19.2，14.7ppm；ir(薄膜)v3287，2931，2858，1717，1428，1349，1164，1113，738，703cm-1；hrms(es+)：c28h33cl3n4o5s2si計(jì)算值為702.0727，實(shí)測(cè)值為725.0629(mna+)。向裝有磁力攪拌棒的100ml厚壁試管中加入異硫脲jvm.5(1.95g，2.76mmol)、nh4oac(1.1g，13.8mmol，5.0當(dāng)量)、和nh3(27ml的2.0mmeoh溶液，54.0mmol，19.6當(dāng)量)。用特氟龍(teflon)螺旋帽封閉該容器，并在60℃下加熱內(nèi)容物24h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷1∶1己烷/etoac)純化，得到胍jvm.6，為白色固體(1.64g，88％)。tlcrf＝0.37(1∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.62-7.56(m，4h)，7.42-7.32(m，6h)，7.26-7.24(m，1h)，6.28-6.26(m，1h)，6.21(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，5.46(brs，1h)，4.62(s，2h)，3.80-3.76(m，1h)，3.66(dd，1h，j＝10.4，4.8hz)，3.45(dd，1h，j＝10.0，7.6hz)，0.99(s，9h)ppm；13cnmr(cd3od，100mhz)δ156.5，150.2，135.6，135.5，132.7，132.5，129.90，129.87，127.83，127.81，127.2，117.9，111.19，111.14，94.5，78.2，64.3，57.4，43.6，26.2，18.9ppm；ir(薄膜)v3355，2932，2859，2455，1695，1544，1445，1298，1114，1019，848，739cm-1。向100ml圓底燒瓶中加入tces胍jvm.6(422mg，0.63mmol)、rh2(esp)2(33mg，44μmol，0.07當(dāng)量)、phi(oac)2(404mg，1.25mmol，2.0當(dāng)量)、和mgo(114mg，2.8mmol，4.4當(dāng)量)。向合并的固體中加入25ml的甲苯。將獲得的深綠色反應(yīng)混合物在40-45℃之間加熱3h。然后將混合物冷卻至室溫并直接過(guò)硅膠柱。梯度洗脫(己烷→1∶1己烷/etoac)，得到胍jvm.7，為白色固體(200mg，43％)。tlcrf＝0.41(1∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.63-7.60(m，4h).7.47-7.37(m，6h)，6.44(d，1h，j＝2.0hz)，6.25(d，1h，j＝5.6hz)，6.07(dd，1h，j＝5.6，2.0hz)，4.63(s，1h)，4.62(s，1h)，4.46(d，1h，j＝1.4hz)，3.65-3.60(m，1h)，3.48(dd，1h，j＝3.0，6.0hz)，2.05(s，3h)，1.05(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ170.5，157.9，154.3，135.79，135.77，133.4，132.3，132.2，130.6，130.5，130.4，128.36，128.33，94.1，85.8，83.6，78.4，63.9，56.4，55.7，27.1，21.5，19.4ppm；ir(薄膜)v3345，2932，2859，1685，1612，1428，1114，734，703cm-1。將乙酸烯丙酯jvm.7(171mg，0.23mmol)和三乙基硅烷(188μl，1.17mmol，5.0當(dāng)量)在5.0mlch2cl2中的溶液冷卻至-78℃，并加入bf3·oet2(68μl，0.54mmol，2.3當(dāng)量)。使反應(yīng)內(nèi)容物緩慢升溫至室溫，并攪拌3h。然后加入5ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅，并劇烈攪拌該混合物15min。用10ml的etoac稀釋該內(nèi)容物并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x10ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到烯烴jvm.8，為白色固體(121mg，77％)。tlcrf＝0.22(1∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.64-7.60(m，4h)，7.46-7.38(m，6h)，6.15-6.12(m，1h)，5.92-5.89(m，1h)，4.60(s，2h)，4.43(d，1h，j＝1.2hz)，4.13(ddd，17.0，2.2，2.2hz，3.81(ddd，1h，j＝17.0，2.2，2.2hz)，3.59-3.51(m，1h)，3.45(dd，1h，j＝7.2，9.6hz)，1.04(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ157.8，156.2，135.82，135.77，132.5，132.4，131.3，130.5，130.4，128.3，128.2，94.1，84.3，78.4，64.0，57.8，57.3，52.2，(30.0)，27.1，19.4ppm；ir(薄膜)v3231，2930，1673，1631，1526，1183，1114，732，702cm-1。向異硫脲jvm.5(6.62g，9.4mmol)和2，4，6-三叔丁基嘧啶(8.64g，34.8mmol，3.7當(dāng)量)在19.0mlch2cl2的溶液中加入三氟甲磺酸乙酯(7.3ml，56.3mmol，6.0當(dāng)量)。用玻璃塞封閉反應(yīng)容器，加熱該溶液至37℃并攪拌14h。然后，冷卻反應(yīng)體系至室溫，加入50ml的ch2cl2稀釋，并轉(zhuǎn)移至含570mlnahco3飽和水溶液的厄倫美厄(erlenmeyer)燒瓶中。劇烈攪拌該兩相混合物12h，用150ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x150ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：1∶0→3∶1己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到異脲jvm.9，為黃色泡沫狀(5.30g，77％)。tlcrf＝0.34(3∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，400mhz)δ8.08(d，1h，j＝8.8hz)，7.65-7.58(m，4h)，7.43-7.30(m，6h)，7.03(dd，1h，j＝3.2，1.6hz)，6.35(dd，1h，j＝3.2，0.8hz)，6.19(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，5.38(dd，1h，j＝8.6，3.4hz)，4.62(s，2h)，4.36-4.19(m，2h)，4.02(ddd，1h，j＝7.6，3.8，3.8hz)，3.75(dd，1h，j＝10.2，4.0hz)，3.25(dd，1h，j＝10.2，8.2hz)，2.50(s，3h)，1.35(t，3h，j＝7.0hz)，1.04(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ170.6，146.7，135.5，135.4，132.8，132.7，129.8，129.7，127.7，127.6，125.2，117.0，111.0，110.4，93.6，78.4，63.4，62.8，60.8，47.7，26.6，19.1，14.5，14.0ppm；ir(薄膜)v3289，2932，2858，1669，1561，1428，1333，1160，1113，732cm-1；hrms(es+)：c30h37cl3n4o5s2si計(jì)算值為730.1040，實(shí)測(cè)值為753.0940(mna+)。向裝有磁力攪拌棒的100ml厚壁試管中加入異脲jvm.9(1.98g，2.71mmol)、nh4oac(1.0g，13.0mmol，4.8當(dāng)量)和nh3(40ml的2.0mmeoh溶液，80.0mmol，29.5當(dāng)量)。用特氟龍螺旋帽封閉該容器，在70℃下加熱該內(nèi)容物24h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。對(duì)未純化產(chǎn)物進(jìn)行的1hnmr分析表明，所得物質(zhì)的純度足以滿足后續(xù)使用。將未純化的胍溶于13.0ml的mecn，并加入ipr2net(2.36ml，13.5mmol，5.0當(dāng)量)。冷卻該溶液至0℃，并加入純的cf3co2et(966μl，8.12mmol，3.0當(dāng)量)。加熱內(nèi)容物至室溫并攪拌24h。然后加入額外份數(shù)的ipr2net(2.36ml，13.5mmol，5.0當(dāng)量)和cf3co2et(966μl，8.12mmol，3當(dāng)量)。攪拌該混合物24h后，減壓移除所有揮發(fā)物。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的產(chǎn)物，得到雙胍jvm.10，為白色固體(1.64g，79％)。tlcrf＝0.43(2∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.58-7.52(m，5h)，7.42-7.23(m，6h)，6.40-6.38(m，1h)，6.30(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，5.41(brs，1h)，4.64(d，1h，j＝11.2hz)，4.60(d，1h，j＝11.2hz)，4.07(ddd，1h，j＝5.2，5.2，2.4hz)，3.78-3.66(m，2h)，0.94(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，100mhz)δ169.2(q，j＝36.4hz)，155.9，154.6，135.54，135.50，132.13，132.10，130.3(2h)，128.1(2h)，125.0，120.1，116.4(d，j＝284hz)，114.5，113.2，94.0，78.3，63.5，57.2，43.7，26.8，19.1ppm；ir(薄膜)v3448，3351，1645，1535，1261，1202，1116，855，736，702cm-1。向50ml圓底燒瓶中加入tces胍jvm.10(131mg，0.17mmol)、rh2(esp)2(6.5mg，8.6μmol，0.05當(dāng)量)、phi(oac)2(137mg，0.43mmol，2.5當(dāng)量)和mgo(31mg，0.77mmol，4.5當(dāng)量)。向合并的固體中加入6.8ml的甲苯。在42℃下加熱獲得的深綠色反應(yīng)混合物達(dá)3h。然后，將該混合物冷卻至室溫，并直接過(guò)硅膠柱。梯度洗脫(己烷→1∶1己烷/etoac)，得到胍jvm.11，為白色固體(74mg，52％)。tlcrf＝0.39(3∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.63-7.56(m，4h)，7.48-7.39(m，6h)，6.80(dd，1h，j＝2.0，0.8hz)，6.31(dd，1h，j＝6.0，0.4hz)，6.09(dd，1h，j＝6.0，2.0hz)，4.65(d，1h，j＝11.2hz)，4.62(d，1h，j＝11.2hz)，4.33(d，1h，j＝2.8hz)，3.86-3.82(m，1h)，3.74(dd，1h，j＝10.4，4.4hz)，3.51(dd，1h，j＝7.6，10.4hz)，2.07(s，3h)，1.01(s，9h)；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ169.8，168.1(q，j＝36.5hz)，159.1，157.7，135.55，135.52，132.5，131.9，131.7，130.6，130.5，130.4，128.2，128.1，116.6(d，j＝285.0hz)，93.7，84.7，81.4，78.2，63.4，57.0，55.8，26.7，20.9，19.1ppm；ir(薄膜)v3282，2933，2860，1743，1622，1429，1351，1150，1017，853，703cm-1。將乙酸烯丙酯jvm.11(352mg，0.43mmol)和三乙基硅烷(688μl，4.26mmol，10.0當(dāng)量)在9.0mlch2cl2中的溶液冷卻至-78℃，并加入bf3·oet2(216μl，1.70mmol，4.0當(dāng)量)。使反應(yīng)內(nèi)容物緩慢升溫至0℃并在該溫度下攪拌3h。然后，加入15ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌獲得的兩相溶液15min。然后將該混合物用25ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x25ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到烯烴jvm.12，為白色固體(251mg，73％)。tlcrf＝0.45(1.5∶1己烷/etoac)；)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.64-7.57(m，4h)，7.48-7.37(m，6h)，6.17(ddd，1h，j＝6.0，2.0，2.0hz)，5.93(ddd，1h，j＝6.0，2.0，2.0hz)，4.62(d，1h，j＝11.2hz)，4.59(d，1h，j＝11.2hz)，4.35(m，2h)，4.09(ddd，17.0，2.2，2.2hz，3.81-3.77(m，1h)，3.71(dd，1h，j＝11.2，5.2hz)，3.54(dd，1h，j＝11.2，8.4hz)，1.01(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ167.8(q，j＝35.6hz)，160.2，157.8，135.79，135.77，132.2，132.1，131.9，130.50，130.48，128.3(2h)，127.1，116.8(d，j＝285hz)，93.9，82.4，78.4，63.7，59.1，56.1，53.9，26.9，19.3ppm；ir(薄膜)v3286，2933，1634，1569，1429，1114，907，736cm-1。向裝有磁力攪拌棒的100ml厚壁試管中加入異脲jvm.9(3.98g，5.44mmol)、nh4oac(2.10g，27.2mmol，5.0當(dāng)量)和nh3(32ml的2.0mmeoh溶液，64.0mmol，11.8當(dāng)量)。用特氟龍螺旋帽封閉該容器，并在70℃下加熱該內(nèi)容物24h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：1∶1己烷/etoac→3∶17meoh/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到雙胍jvm.13，為白色泡沫狀(3.38g，85％)。tlcrf＝0.31(6∶1etoac/meoh)；1hnmr(cd3od，500mhz)δ7.56-7.61(m，4h)，7.36-7.45(m，7h)，6.45(d，1h，j＝3.4hz)，6.42(dd，1h，j＝3.4，3.4hz)，5.44(bs，1h)，4.61(d，1h，j＝2.5hz)，3.91-3.95(m，1h)，3.70(dd，1h，j＝10.8，4.5hz)，3.60(dd，1h，j＝10.6，5.8hz)，1.91(s，3h)，0.96(s，9h)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ157.7，151.9，136.73，136.72，133.59，133.47，131.2(2h)，129.09，129.08，128.5，119.2，115.5，114.2，95.7，79.3，65.3，57.6，44.8，27.4，20.0ppm；ir(薄膜)v2932，1699，1627，1542，1427，1330，1184，1114，1019，846，703cm-1。將雙胍jvm.13(3.24g，4.43mmol)的44mlch2cl2溶液冷卻至-20℃，向其中順序加入ipr2net(1.54ml，8.84mmol，2.0當(dāng)量)和三氯乙酰氯(572μl，5.10mmol，1.15當(dāng)量)。在-20℃下攪拌該反應(yīng)混合物1h，然后加入50ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。用100ml的etoac稀釋該兩相內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x50ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：1∶0→3∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到胍jvm.14，為白色固體(3.14g，89％)。tlcrf＝0.43(2∶1己烷/etoac)；mp174-176℃；[α]na-51.6°(c＝0.71，meoh)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.59(dd，1h，j＝3.2，1.6hz)，7.58-7.53(m，4h)，7.40-7.32(m，6h)，6.40-6.37(m，1h)，6.28(dd，1h，j＝3.2，3.2hz)，5.42(brs，1h)，4.65(d，1h，j＝11.2hz)，4.61(d，1h，j＝11.2hz)，4.12(ddd，1h，j＝5.2，5.2，2.4)，3.75-3.66(m，2h)，0.93(s，9h)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ173.9，157.5，155.5，136.57，136.55，133.4，133.3，131.0(2)，128.96，128.92，127.3，120.5，114.0，113.4，97.3，95.5，79.2，65.4，58.2，44.9，27.2，19.8ppm；ir(薄膜)v3464，3358，2931，2859，1603，1589，1363，1212，1115，840，739cm-1；hrms(es+)：c29h32cl6n6o5ssi計(jì)算值為814.0055，實(shí)測(cè)值為836.9949(mna+)。向200ml圓底燒瓶中加入tces胍jvm.14(1.675g，2.05mmol)、rh2(esp)2(78mg，0.10mmol，0.05當(dāng)量)、phi(oac)2(1.65g，5.12mmol，2.5當(dāng)量)和mgo(372mg，9.23mmol，4.5當(dāng)量)。向合并的固體中加入81ml的ch2cl2。用玻璃塞封閉該燒瓶，在42℃下加熱獲得的深綠色反應(yīng)混合物達(dá)2.5h。然后，通過(guò)一小塊硅藻土墊過(guò)濾該懸浮液。用ch2cl2涮洗該燒瓶和濾餅。向合并的濾液中加入80ml的1∶1nahco3飽和水溶液/飽和na2s2o3的溶液。將該混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，收集有機(jī)層，并用2x50ml的etoac提取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：1∶0→2∶1己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到所需的三環(huán)jvm.15，為白色固體(1.12g，62％)。tlcrf＝0.27(2∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.64-7.58(m，4h)，7.47-7.40(m，6h)，6.86(d，1h，j＝2.0hz)，6.32(d，1h，j＝6.0hz)，6.10(dd，1h，j＝5.8，2.2hz)，4.67(d，1h，j＝11.2hz)，4.63(d，1h，j＝11.0hz)，4.36(d，1h，j＝2.4hz)，3.86(ddd，1h，j＝8.0，4.4，2.4hz)，3.73(dd，1h，j＝10.4，4.4hz)，3.51(dd，1h，j＝10.6，7.8hz)，2.09(s，3h)，1.02(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ172.6，169.6，158.8，157.4，135.52，135.50，132.4，131.8，131.7，130.6，130.4，130.3，128.17，128.13，95.8，93.7，85.2，81.4，78.2，63.6，56.8，55.7，26.8，21.1，19.1ppm；ir(薄膜)v3286，2932，2859，1742，1624，1574，1374，1179，1088，1015，909，831，735，703cm-1；hrms(es+)：c31h34cl6n6o7ssi計(jì)算值為872.0110，實(shí)測(cè)值為895.0004(mna+)。將乙酸烯丙酯jvm.15(1.02g，1.16mmol)和三乙基硅烷(940μl，5.82mmol，5.0當(dāng)量)在24.0mlch2cl2中的溶液冷卻至-78℃，并加入bf3·oet2(339μl，2.68mmol，2.3當(dāng)量)。使反應(yīng)內(nèi)容物緩慢升溫至室溫并攪拌1.5h。然后，加入40ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌獲得的兩相溶液達(dá)15min。將該混合物用50ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x25ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到烯烴jvm.16，為白色固體(792mg，83％)。tlcrf＝0.48(2∶1己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ7.65-7.59(m，4h)，7.46-7.37(m，6h)，6.17(ddd，1h，j＝6.0，1.8，1.8hz)，5.95(ddd，1h，j＝6.0，2.2，2.2hz)，4.63(d，1h，j＝11.2hz)，4.60(d，1h，j＝11.2hz)，4.37(ddd，1h，j＝17.0，2.2，2.2hz)，4.32(d，1h，j＝2.4hz)，4.17(ddd，1h，j＝17.0，2.0，2.0hz)，3.82(ddd，1h，j＝8.0，4.4，2.0hz)，3.70(dd，1h，j＝10.6，4.8hz)，3.55(dd，1h，j＝10.6，8.0hz)，1.02(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ172.4，159.7，157.7，135.6(2)，131.9(2)，131.7，130.3(2)，128.1(2)，127.0，96.3，93.8，82.3，78.2，63.8，58.3，55.8，53.8，26.8，19.1ppm；ir(薄膜)v3281，2933，2859，1631，1565，1377，1179，1113，908，840，734cm-1；hrms(es+)：c29h32cl6n6o5ssi計(jì)算值為814.0055，實(shí)測(cè)值為836.9951(mna+)。將烯烴jvm.16(206mg，0.25mmol)的5.0mlthf溶液冷卻至-78℃，并加入四丁基氟化銨(305μl的1.0mthf溶液，0.305mmol，1.2當(dāng)量)。將該混合物加熱至0℃并在該溫度下攪拌20min。然后，加入5.0ml的nh4cl飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。用10ml的etoac稀釋該內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用3x10ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。1hnmr分析表明該物質(zhì)的純度合適，可直接在后續(xù)反應(yīng)中使用。用硅膠色譜法(2∶1→1∶2己烷/etoac)獲得純的脫甲硅基醇樣品。tlcrf＝0.33(1∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ6.28(ddd，1h，j＝6.2，2.0，2.0hz)，6.08(ddd，1h，j＝6.2，2.2，2.2hz)，4.67(d，1h，j＝11.2hz)，4.64(d，1h，j＝11.2hz)，4.43(m，2h)，4.35(d，1h，j＝2.8hz)，3.69-3.63(m，2h)，3.57(dd，1h，j＝12.4，8.4hz)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ172.3，159.4，157.9，130.9，127.4，96.5，94.1，83.1，78.4，61.7，55.5，55.2，54.5ppm；ir(薄膜)v3289，1616，1562，1379，1175，905，841，730cm-1。將未純化的醇的10.0mlch2cl2溶液冷卻至-20℃，并滴加三氯乙酰異氰酸酯(508μl的0.5mch2cl2溶液，0.25mmol)。將該混合物在-20℃下攪拌15min，用20mletoac稀釋，并加入10ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并收集有機(jī)層。用2x10ml的etoac萃取水層。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥、過(guò)濾并減壓濃縮。將分離出的物質(zhì)再溶于10.0ml的meoh中并攪拌該溶液12h。然后，將該混合物減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→1∶2己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到氨基甲酸酯jvm.17，為白色固體(121mg，兩步獲得76％)。tlcrf＝0.18(1∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ6.32(ddd，1h，j＝6.2，2.0，2.0hz)，6.04(ddd，1h，j＝6.2，2.2，2.2hz)，4.64(d，1h，j＝11.2hz)，4.61(d，1h，j＝11.2hz)，4.44(d，1h，j＝2.4hz)，4.43-4.40(m，2h)，4.15-4.03(m，2h)，3.86(ddd，1h，j＝7.4，4.8，2.4hz)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ172.9，161.3，159.0，158.6，131.7，129.0，97.7，95.5，83.3，79.4，64.3，60.5，55.0，54.7ppm；ir(薄膜)v3292，2951，2457，1723，1617，1565，1494，1341，1175，1086，895，842，752cm-1；hrms(es+)：c14h15cl6n7o6s計(jì)算值為618.8936，實(shí)測(cè)值為641.8830(mna+)。向烯烴jvm.17(117mg，0.20mmol)的4.0mlthf溶液中依次加入n-甲基嗎啉-n-氧化物(44mg，0.38mmol，2.0當(dāng)量)和oso4(24μl的4％水溶液，3.8μmol，0.02當(dāng)量)。攪拌該反應(yīng)混合物12h，然后加入4ml的na2s2o3飽和水溶液使反應(yīng)淬滅。用8ml的etoac稀釋該內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x4ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：2∶1→0∶1己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到二醇jvm.18，為白色固體(102mg，82％)。tlcrf＝0.33(neatetoac)；1hnmr(cd3od.400mhz)δ4.63(s，2h)，4.56(d，1h，j＝2.8hz)，4.54(ddd，1h，j＝7.6，7.6，4.0hz)，4.21-4.14(m，2h)，3.98(dd，1h，j＝11.6，8.0hz)，3.95(d，1h，j＝4.0hz)，3.79(ddd，1h，j＝7.2，6.0，2.8hz)，3.45(dd，1h，j＝11.6，7.6hz)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ171.6，160.4，158.2，157.8，96.7，94.3，80.7，78.2，76.1，67.9，63.0，55.7，53.4，50.0ppm；ir(薄膜)v3299，2985，1711，1618，1567，1376，1321，1177，1088，902，845，760cm-1；hrms(es+)：c14h17cl6n7o8s計(jì)算值為652.8990，實(shí)測(cè)值為675.8892(mna+)。將苯甲酰氰(1.64ml的0.1mch2cl2溶液，0.164mmol，1.1當(dāng)量)滴加到-78℃的二醇jvm.18(98mg，0.149mmol)和4-二甲基氨基吡啶(72.8mg，0.60mmol，4.0當(dāng)量)在6.0ml3∶1ch2cl2/mecn混合物中的溶液里。在-78℃下攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)1.5h，然后用50μl的meoh淬滅。用10ml的etoac和5ml的nahco3飽和水溶液稀釋該內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x10ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→1∶2己烷/etoac)純化油狀殘留物，得到苯甲酸酯jvm.19，為白色固體(78mg，69％)。1hnmr(cd3od，400mhz)δ8.12-8.09(m，2h)，7.66-7.61(m，1h)，7.53-7.48(m，2h)，5.61(ddd，1h，j＝8.4，7.6，4.0hz)，4.67(d，1h，j＝10.8)，4.64(d，1h，j＝10.8hz)，4.63(d，1h，j＝3.2hz)，4.40(d，1h，j＝4.0hz)，4.29-4.15(m，3h)，3.85(ddd，1h，j＝8.4，5.2，2.8hz)，3.77(dd，1h，j＝11.8，7.4hz)ppm；13cnmr((cd3)2co，100mhz)δ171.0，165.5，160.0，158.1，156.15，133.5，129.8，129.5，128.6，94.4，81.0，77.9，74.3，71.0，62.5，54.4，53.1，47.9ppm；ir(薄膜)v3294，2985，1715，1620，1274，1177，902，846，760，716cm-1。向苯甲酸酯jvm.19(12.7mg，16.7μmol)的700μlch2cl2溶液中加入戴斯-馬丁氧化劑(10.9mg，26.0μmol，1.5當(dāng)量)。攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)20min，然后加入700μl的1∶1nahco3飽和水溶液/na2s2o3飽和水溶液使反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌該兩相混合物達(dá)10min，用1ml的ch2cl2稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用1x1ml的ch2cl2萃取水相。將合并的有機(jī)提取物直接過(guò)硅膠柱。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→1∶2己烷/etoac)純化，得到j(luò)vm.20，為白色固體(10mg，78％)。1hnmr((cd3)2co，400mhz)δ9.44(brs，1h)，8.20-8.17(m，2h)，7.70-7.65(m，1h)，7.56-7.50(m，2h)，6.76(brs，1h)，6.65(brs，1h)，6.00(brs，2h)，5.72(dd，1h，j＝8.6，7.0hz)，4.87(d，1h，j＝2.4hz)，4.61(s，2h)，4.35(dd，1h，j＝12.2，8.6hz)，4.28-4.25(m，2h)，4.08(m，1h)，3.62(dd，1h，j＝12.2，7.2hz)ppm；13cnmr((cd3)2co，100mhz)δ171.0，165.9，160.2，158.6，156.2，133.7，130.0，129.2，128.5，98.4，96.8，94.4，80.6，77.9，73.6，62.6，54.9，53.7，47.5ppm；ir(薄膜)v3286，1714，1618，1566，1318，1274，1175，1088，1016，903cm-1。向二醇jvm.20(5.8mg，7.6μmol)的2.0mlmeoh溶液中加入50μl的cf3co2h。攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)30min，然后加入pd/c(22mg的10wt.％，0.021mmol，2.75當(dāng)量)。將反應(yīng)容器放于高壓帕爾(parr)貯罐中，將其密封并用h2氣(800psi)沖洗六次。將該貯罐加壓至800psi的h2，在該壓力下攪拌內(nèi)容物12h。然后將該貯罐放空，用菲歇爾(fisher)0.2μmptfe注射器式過(guò)濾器過(guò)濾反應(yīng)混合物。用2ml的meoh洗滌燒瓶和過(guò)濾器，并將濾液減壓濃縮。將薄膜殘余物溶于1.0mlnh3的2.0mmeoh溶液中。攪拌該溶液15min后，減壓移除所有揮發(fā)性物質(zhì)。將分離出的物質(zhì)直接溶于2.0ml的0.5mcf3co2h水溶液并攪拌24h。減壓濃縮該溶液，得到薄膜狀產(chǎn)物，用反相hplc純化(alltimac18，10μm，10x250mm柱，1∶99→30∶70mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫20min，214nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，11β-oh-stx的保留時(shí)間為13.7-15.5min，分離得到白色吸濕性固體(4.6mg，83％)。1hnmr(d2o，400mhz)δ4.80(1h)，4.45(dd，1hj＝8.0，7.2hz)，4.33(dd，1h，j＝11.6，9.6hz)，4.07-3.98(m，2h)，3.82(dd，1h，j＝9.6，4.4hz)，3.27(dd，1h，j＝10.4，7.2hz)ppm；13cnmr(d2o，600mhz，hmbc和hsqc確定)δ158.7，157.6，155.5，97.6，81.7，70.5，63.0，57.5，53.0，48.5ppm；hrms(es+)：c10h17n7o5計(jì)算值為315.1291，實(shí)測(cè)值為316.1366(mh+)。向11β-oh-stx(7.3mg，9.8μmol)和2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(55mg，0.27mmol，27.5當(dāng)量)的溶液中滴加dmf·so3(893μl的0.1mn-甲基吡咯烷酮溶液，89.3μmol，9.1當(dāng)量)。攪拌該反應(yīng)混合物3h，然后加入300μl的h2o使反應(yīng)淬滅。真空濃縮該溶液，并用反相hplc純化該薄膜殘余物(alltimac18柱，10μm，10x250mm柱，1∶99mecn/10mmc3f7co2h水溶液梯度洗脫20min，214nmuv檢測(cè))。流速為6ml/min，gtx3的保留時(shí)間為6.8-7.9min，分離得到白色吸濕性固體(4.2mg，71％)。[α]na+43.3°(c＝0.40(cf3cf2cf2co2-鹽)；1hnmr(d2o，400mhz)δ4.96(dd，1h，j＝8.2，6.8hz)，4.82(d，1h，j＝1.2hz)，4.30(dd，1h，j＝11.8，9.4hz)，4.17(dd，1h，j＝10.6，8.2hz)，4.06(dd，1h，j＝11.8，5.4hz)，3.82(ddd，1h，j＝9.0，5.4，1.2hz)，3.58(dd，1h，j＝10.6，6.8hz)ppm；13cnmr(d2o，600mhz，由hmbc和hsqc確定)δ158.7，157.6，155.5，97.3，81.6，75.7，63.0，57.2，53.1，47.4ppm；hrms(es+)：c10h15n7o7s計(jì)算值為377.0754，實(shí)測(cè)值為378.0833(mh+)。合成的和天然的(+)-膝溝藻毒素3(參見文獻(xiàn)：onodera，h.；satake，m.；oshima，y.；yasumoto，t.；carmichael，w.w.nat.toxins.1997，5，146-151)的光譜數(shù)據(jù)的對(duì)比實(shí)施例3：在利用前面的噁唑烷酮中間體獲得了許多具有線性長(zhǎng)支鏈的石房蛤毒素衍生的分子探針之后，我們進(jìn)一步利用該化學(xué)性質(zhì)合成了許多支鏈衍生物。這些分子在石房蛤毒素母核附近有較大的空間體積，這潛在地使毒素的結(jié)合不穩(wěn)定。我們?cè)O(shè)想采用這些分子并結(jié)合突變鈉通道，從而繪制出當(dāng)stx結(jié)合到所述通道中時(shí)其側(cè)鏈周圍的立體環(huán)境。此外，可以想到引入額外的化學(xué)結(jié)構(gòu)部分(“凸點(diǎn)”(bump))來(lái)設(shè)計(jì)石房蛤毒素衍生物，使其對(duì)野生型通道具有低的結(jié)合親和力而對(duì)具有相應(yīng)“孔”的突變體具有高的結(jié)合親和力。(參見文獻(xiàn)：annualreviewofcellanddevelopmentalbiology2001，17，405-433，通過(guò)引用的方式將其內(nèi)容并入本文中)。在最初的研究中，我們?cè)O(shè)計(jì)了一組分子，其在氨基甲酸酯側(cè)鏈的氮以及該氮附近的碳上具有支鏈。通過(guò)定點(diǎn)突變構(gòu)建兩個(gè)突變通道。在實(shí)施例3的表1中示出了最初的膜片鉗結(jié)果。收集β-stx酚(β-stxol)數(shù)據(jù)點(diǎn)，表明了stx及其衍生物在通道孔內(nèi)類似地定向。stx對(duì)β-stx酚以及環(huán)己基stx對(duì)環(huán)己基β-stx酚的親和力類似地降低，為該兩種分子都以類似的定向方式位于通道孔中提供了強(qiáng)有力的初步證據(jù)。雖然這些石房蛤毒素衍生物對(duì)所述兩種突變體之一都沒有顯示出比野生型通道更高的親和力，但是與天然stx相比，它們確實(shí)表現(xiàn)出顯著的親和力差異。尤其當(dāng)針對(duì)m1240a突變體進(jìn)行測(cè)試時(shí)，母體化合物的失穩(wěn)程度達(dá)大約40倍，而環(huán)己胺衍生物的失穩(wěn)程度僅為4倍。這種差異可能暗示了甲硫氨酸突變?yōu)檩^小的丙氨酸，為氨基甲酸酯的占據(jù)提供了更大的空間，從而更好地容納環(huán)己基側(cè)鏈。正在考察鈉通道的另外的突變以進(jìn)一步研究創(chuàng)建“洞”以容納較大的氨基甲酸酯側(cè)鏈(“凸點(diǎn)”)的可能性。實(shí)施例3表1：各種stx衍生物對(duì)nav1.4及其突變體的親和力除了這些結(jié)構(gòu)方面的研究，我們還設(shè)計(jì)了用于在體內(nèi)對(duì)鈉通道成像的其他探針。具體而言，我們?cè)O(shè)計(jì)了這樣的stx衍生物，其中可通過(guò)生理學(xué)穩(wěn)定的肟鍵而引入18f-標(biāo)記的苯甲醛。(參見文獻(xiàn)：journalofnuclearmedicine2008，49，804-813，通過(guò)引用的方式將其內(nèi)容并入本文中。)從我們通常采用的己胺封端的中間體合成該分子的示例性合成途徑如圖12所示。圖12示出了合成pet成像探針的合成流程圖。合成研究表明，可以成功地進(jìn)行最初的偶聯(lián)，而cheng等人的工作證實(shí)了肟鍵可容易地形成并且在體內(nèi)是穩(wěn)定的。實(shí)施例4：實(shí)施例4描述了皮膚微針應(yīng)用(+)-石房蛤毒素的效果。當(dāng)通過(guò)微針輸送來(lái)測(cè)試石房蛤毒素的止痛功效時(shí)，所有大鼠都用異氟醚(2.5％)深度麻醉。每只雄性sprague-dawley大鼠(harlan，250g)的左、右面頰均被完全脫毛，之后用乙醇擦拭使其徹底清潔。在深度麻醉的情況下，對(duì)每只大鼠施用微針貼片。測(cè)試儀用一對(duì)鈍緣的鑷子將一側(cè)面頰的皮膚向后拉，以使大鼠的皮膚繃緊。此時(shí)，測(cè)試儀將推動(dòng)含石房蛤毒素的微針貼片向下進(jìn)入皮膚。同樣，在相對(duì)一側(cè)的面頰上進(jìn)行相同的操作過(guò)程；然而，該貼片起對(duì)照的作用，并且在微針針頭內(nèi)不含藥物。每個(gè)測(cè)試組由施用了石房蛤毒素的6只大鼠組成。微針貼片在大鼠皮膚上停留約20分鐘，以確保足夠的藥物輸送。在這段時(shí)間里，大鼠受異氟醚的作用減弱，并允許其在各自的籠子里恢復(fù)。一旦移除貼片，就腹膜內(nèi)注射25％的尿烷(1mg/kg)，使大鼠輕微麻醉，從而允許在沒有破壞性運(yùn)動(dòng)的情況下進(jìn)行行為測(cè)量。開始20min后，在30min的時(shí)間內(nèi)以10min的時(shí)間間隔、以及在接下來(lái)的2.5h中每30分鐘一次地重復(fù)評(píng)估針對(duì)持續(xù)的傷害性加熱的縮頰反應(yīng)時(shí)間(cheekwithdrawallatencies)。使用加熱燈(設(shè)定為40v且定位于大鼠的面頰以上7厘米處)，對(duì)大鼠的左頰集中施加輻射熱；記錄大鼠回應(yīng)熱刺激所耗的時(shí)間。在右頰重復(fù)同樣的過(guò)程。受熱20秒后大鼠沒有回應(yīng)則認(rèn)為是無(wú)響應(yīng)。結(jié)果：用石房蛤毒素貼片處理過(guò)的皮膚對(duì)傷害性加熱的反應(yīng)顯著(p＜0.05，anova)低于對(duì)照皮膚(圖13)。因此，觀測(cè)到的熱響應(yīng)反應(yīng)時(shí)間比用對(duì)照微針貼片處理過(guò)的皮膚要高2-2.5s，這表示疼痛敏感性適度降低。實(shí)施例5：5.1可合成和修飾石房蛤毒素和膝溝藻毒素。我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了石房蛤毒素和膝溝藻毒素2/3的合成，以及修飾這些獨(dú)特毒素的形式和功能的方法(圖14)。我們對(duì)stx問(wèn)題進(jìn)行分析的詳細(xì)討論已經(jīng)出現(xiàn)文獻(xiàn)中。(參見文獻(xiàn)：(a)fleming，j.j.，m.d.mcreynolds，andj.dubois，(+)-saxitoxin：afirstandsecondgenerationstereoselectivesynthesis.jamchemsoc，2007.129(32)：p.9964-75。(b)fleming，j.j.andj.dubois，asynthesisof(+)-saxitoxin.jamchemsoc，2006.128(12)：p.3926-7。)我們的研究已經(jīng)證明，對(duì)stx中伯氨基甲酸酯單元(c13)的修飾沒有顯著改變?cè)摶衔飳?duì)ttx-snav通道的親和力?；谶@些數(shù)據(jù)，我們已經(jīng)制備了胺衍生的stx(nh2-stx)，其可連接不同的輔基(如熒光團(tuán)、18f-標(biāo)記物、生物素)。該化合物及相關(guān)結(jié)構(gòu)的合成路線已被高度優(yōu)化，以便于以多克的規(guī)模制備關(guān)鍵中間體。我們已采用這些化學(xué)品制備oregon-green-stx和cy5-stx軛合物，并已測(cè)試這些化合物對(duì)cho細(xì)胞中表達(dá)的rnav1.4的效力。全細(xì)胞電壓鉗記錄表明，這兩種分子都保留對(duì)該nav同工型具有中納摩爾級(jí)的親和力。我們目前對(duì)異源rnav1.7進(jìn)行了電生理學(xué)測(cè)量，并計(jì)劃采用rnav1.8作為對(duì)照，對(duì)rnav1.3和ttx-r通道也進(jìn)行結(jié)合研究。我們已經(jīng)證明，nh2-stx可以有效地偶聯(lián)到4-氟苯甲酸(sfb)的n-羥基琥珀酰亞胺酯上，從而生成[19f]苯甲酰胺-stx。經(jīng)全細(xì)胞電生理學(xué)測(cè)量確定，我們的第一代pet藥劑的非放射性類似物顯示出了對(duì)rnav1.4的ic50為46±7nm。重要的是，將sfb連接至nh2-stx的條件適合于生成該[18f]類似物(參見下文)。膝溝藻毒素(gtxs)包括與stx在結(jié)構(gòu)和功能上都密切相關(guān)的硫酸胍毒素家族。這些分子顯示出針對(duì)ttx-snavs具有低到中納摩爾級(jí)的效力。有趣的是，我們實(shí)驗(yàn)室的定性測(cè)量顯示，相比于stx，gtx3具有慢得多的脫離速率結(jié)合動(dòng)力學(xué)(off-ratebindingkinetics)。由于我們能夠通過(guò)從頭合成而獲得這些毒素，所以已經(jīng)采取類似步驟來(lái)制備氨基甲酸酯衍生物，并評(píng)估這些新的構(gòu)造對(duì)通道結(jié)合的影響。另外，我們已合成了nh2-gtx3類似物，并已證明這種物質(zhì)會(huì)順利地與熒光染料的反應(yīng)性nhs酯發(fā)生一步式化學(xué)反應(yīng)(圖15)。我們現(xiàn)在所處的獨(dú)特地位在于，除了這些毒素的其他那些對(duì)通道的結(jié)合親和力和結(jié)合動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變(即較慢的脫離速率動(dòng)力學(xué)，參見下面)的非天然衍生物以外，還進(jìn)行stx和gtx3的標(biāo)記形式之間的體內(nèi)對(duì)比研究(即生物學(xué)分布、排泄速率、代謝)。只能通過(guò)這些毒素的從頭組裝的合成方案才能使這些研究成為可能。5.2氨基甲酸酯修飾的stxs保留對(duì)nav的納摩爾親和力并且能具有更長(zhǎng)的作用持續(xù)時(shí)間。一個(gè)要解決的關(guān)鍵問(wèn)題在于是否可用成像劑將石房蛤毒素官能化而不顯著干擾結(jié)合效力。我們已經(jīng)通過(guò)設(shè)計(jì)這樣的流程而制備了新的stx的熒光軛合物和pet軛合物，該流程利用了stx衍生物如4(圖15)可用于選擇性化學(xué)連接到親電性酯試劑的性質(zhì)。例如，化合物4，在溫和的堿性條件下用cy5-n-羥基琥珀酰亞氨基(nhs)酯處理時(shí)，僅得到偶聯(lián)產(chǎn)物。該連接步驟通常是在小于3h內(nèi)完成的，并且與各種nhs酯衍生物兼容，從而使得oregongreen、cy5和p-19f-苯甲酰胺衍生物的合成成為可能。電生理學(xué)記錄確定了這些化合物都保留對(duì)nav1.4具有低到中納摩爾級(jí)的效力。我們已經(jīng)觀察到，當(dāng)向鼠科動(dòng)物的后腳掌皮下注射cy5-stx或天然stx時(shí)，在麻醉期(敏感性下降或痛閾值提高)內(nèi)，針對(duì)機(jī)械性刺激，stx和cy5-stx之間表現(xiàn)出明顯的差異(圖16)。就cy5-stx而言，其局部麻醉作用持續(xù)60h或比stx本身長(zhǎng)20倍以上。為了解釋藥物作用持續(xù)時(shí)間上的這種顯著差異，據(jù)信，大的親脂性cy5染料分子可能與質(zhì)膜緊密締合，從而有效地起到膜“錨”的作用，而stx結(jié)構(gòu)部分則位于通道孔的外口中。5.3[18f]苯甲酰胺-stx的合成。我們已經(jīng)表明，nh2-stx可以選擇性偶聯(lián)到反應(yīng)性nhs酯(如[19f]-4-氟苯甲酸)上。最近，用[18f]-sfb成功地復(fù)制了該偶聯(lián)反應(yīng)，生成了放射性標(biāo)記的[18f]苯甲酰胺-stx(圖17)。[18f]-sfb的制備詳情如前所述。(參見文獻(xiàn)：(a)li，z.b.等，18f-labeledbbn-rgdheterodimerforprostatecancerimaging.jnuclmed，2008.49(3)：p.453-61。(b)wu，z.等，18f-labeledmini-pegspaceredrgddimer(18f-fprgd2)：synthesisandmicropetimagingofalphavbeta3integrinexpression.eurjnuclmedmolimaging，2007.34(11)：p.1823-31。)在ph9.5的水性ch3cn中進(jìn)行與nh2-stx的偶聯(lián)，并通過(guò)制備性hplc來(lái)純化產(chǎn)物。所有該化學(xué)反應(yīng)可通過(guò)采用修改的getracerlabfx-fn合成模塊(gemedicalsystems；位于美國(guó)威斯康星州密爾沃基市)半自動(dòng)完成。用無(wú)菌過(guò)濾器對(duì)[18f]苯甲酰胺-stx的純化級(jí)分進(jìn)行除菌，從而獲得最終產(chǎn)物。通過(guò)為預(yù)裝配的批料管瓶(batchvial)一部分的無(wú)菌注射器將制備的[18f]苯甲酰胺-stx的樣品從所制備的批料的管瓶中取出。分配該等分試樣，用于進(jìn)行以下qc測(cè)試：外觀檢驗(yàn)、放射性化學(xué)和化學(xué)純度、比放射性活度、無(wú)菌性、致熱原性、ph值、殘留溶劑分析、放射性核種識(shí)別(radionuclidicidentity)和細(xì)菌內(nèi)毒素(lal試驗(yàn))。5.4[18f]苯甲酰胺-stx的初步生物分布研究表明體內(nèi)示蹤劑的穩(wěn)定性。在將[18f]stx靜脈內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)(n＝3)后，獲取器官以確定放射性標(biāo)記的生物學(xué)分布。未觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)的骨攝取量(0.05±0.03％id/gm)，這表明氟苯甲酰胺基團(tuán)不會(huì)在體內(nèi)發(fā)生脫氟化作用。另外，在腎臟中發(fā)現(xiàn)了10.7±8.9％id/g，看來(lái)尿排泄是主要的示蹤劑清除途徑。正如預(yù)期的那樣，鑒于stx探針的雙陽(yáng)離子性，在腦中沒有檢測(cè)到示蹤劑(0.03±0.02％id/gm)；因此，預(yù)計(jì)該放射性示蹤劑對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)沒有影響。5.5在神經(jīng)性疼痛大鼠模型中，[18f]苯甲酰胺-stx小動(dòng)物pet-mri(顯微pet-mri)表明示蹤劑對(duì)神經(jīng)損傷位點(diǎn)的結(jié)合作用提高。在我們第一次嘗試將nav表達(dá)進(jìn)行成像時(shí)，對(duì)遭受保留神經(jīng)損傷(sni)的sprague-dawely大鼠進(jìn)行[18f]苯甲酰胺-stx顯微pet-mri，其中sni是廣泛接受的神經(jīng)性疼痛模型，其涉及坐骨神經(jīng)的3個(gè)主要分支中的2個(gè)發(fā)生連接。(參見文獻(xiàn)：例如，decosterd，i.andc.j.woolf，sparednerveinjury：ananimalmodelofpersistentperipheralneuropathicpain.pain，2000.87(2)：p.149-58。)由于mri提供強(qiáng)烈的軟組織反差以及外周神經(jīng)和背根神經(jīng)節(jié)的輪廓，我們利用了7.0t小動(dòng)物mri(可得自我們的小動(dòng)物成像機(jī)構(gòu)(smallanimalimagingfacility))產(chǎn)生坐骨神經(jīng)的解剖圖。在該具體例子中，動(dòng)物在受損傷后5周的時(shí)候(在手術(shù)后炎癥已消散之后過(guò)了相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間)進(jìn)行成像。在異氟醚麻醉下，將動(dòng)物牢固地定位于可轉(zhuǎn)移的固定器上，其將小鼠或大鼠承載在固定位置，以用于周身研究以下兩種成像模式：顯微pet(gehc(suisna)公司的explorevistamicropet)以及顯微mri(通用電氣公司的“microsigna7.0”7t)。靜脈內(nèi)注射500μci的[18f]苯甲酰胺-stx后，用顯微pet對(duì)大鼠成像10min(注射放射性示蹤劑后20min)，然后轉(zhuǎn)移至顯微mri。固定在固定器上的基準(zhǔn)標(biāo)記物以及動(dòng)物使得能夠共同記錄顯微pet和顯微mri數(shù)據(jù)組。鼠固定器在任何所討論的成像模式中均不會(huì)干擾成像過(guò)程。在圖18中，通過(guò)股骨的左側(cè)坐骨神經(jīng)損傷水平面的橫向顯微mr圖像(左邊的圖像)顯示出擴(kuò)大的神經(jīng)瘤，而右側(cè)坐骨神經(jīng)的尺寸和直徑是正常的。中間的圖像是在同一觀察處得到的[18f]苯甲酰胺-stx顯微pet實(shí)驗(yàn)的圖像，右圖示出了兩個(gè)共同記錄的圖像。增強(qiáng)的顯微pet信號(hào)出現(xiàn)在sni產(chǎn)生的神經(jīng)瘤的附近。相比之下，右側(cè)神經(jīng)中沒有看到信號(hào)。另外，在受損神經(jīng)附近的軟組織中也表現(xiàn)出了反射性示蹤劑攝取量的增加(紅色箭頭)。在神經(jīng)瘤以外發(fā)現(xiàn)的活性可能描述了與神經(jīng)損傷相關(guān)的其他變化，這可能是疼痛體驗(yàn)的重要組成部分。在神經(jīng)瘤以外發(fā)現(xiàn)的[18f]stx活性表明，神經(jīng)損傷附近的未受損組織的nav上調(diào)也可能是慢性疼痛綜合征發(fā)展的一個(gè)重要因素。其他人已在受損神經(jīng)及其鄰近的未受損神經(jīng)中均觀察到這樣的前疼痛事件(pro-nociceptiveevent)。例如，已經(jīng)在受損脛骨和正常的腓骨神經(jīng)的細(xì)胞體和外周軸突以及sni模型中的未受損腓腸神經(jīng)中觀測(cè)到nav的β2亞單位的上調(diào)。(參見文獻(xiàn)：例如，pertin，m.等，upregulationofthevoltage-gatedsodiumchannelbeta2subunitinneuropathicpainmodels：characterizationofexpressionininjuredandnon-injuredprimarysensoryneurons.jneurosci，2005.25(47)：p.10970-80。)另外經(jīng)vonfrey試驗(yàn)確定，在神經(jīng)損傷中觀測(cè)到的增加的[18f]苯甲酰胺-stx與動(dòng)物左腳掌的觸痛感增強(qiáng)相關(guān)聯(lián)。圖像的中心和前方的顯微pet信號(hào)與排泄出的放射性示蹤劑物質(zhì)相關(guān)。實(shí)施例6：我們?cè)诖颂峁┝诵薷牡闹苽渎肪€，其能夠獲得c11-硫酸化的鈉離子通道阻斷劑的衍生物(稱為膝溝藻毒素)。我們的操作從醇1開始(圖19)，其可按照實(shí)施例2所述的那樣來(lái)制備。用親電咪唑鹽2處理該物質(zhì)，獲得碳酸苯酯?？蓪⒉泛椭侔诽砑拥皆撐镔|(zhì)中，從而產(chǎn)生氨基甲酸酯修飾的中間體如4a和4b。由五個(gè)步驟的序列完成stx/gtx的n21取代類似物如5a和5b的合成。實(shí)驗(yàn)方案和表征數(shù)據(jù)：將烯烴jvm.16(792mg，0.97mmol)的20mlthf溶液冷卻至-78℃，并加入四丁基氟化銨(1.16ml的1.0mthf溶液，1.16mmol，1.2當(dāng)量)。將該混合物加熱至0℃并在該溫度下攪拌20min。然后，加入20.0ml的nh4cl飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。用40ml的etoac稀釋該內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用3x40ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(2∶1→1∶2己烷/etoac)純化，得到j(luò)vm.21，為白色固體(424mg，75％)。tlcrf＝0.33(1∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd3od，400mhz)δ6.28(ddd，1h，j＝6.2，2.0，2.0hz)，6.08(ddd，1h，j＝6.2，2.2，2.2hz)，4.67(d，1h，j＝11.2hz)，4.64(d，1h，j＝11.2hz)，4.43(m，2h)，4.35(d，1h，j＝2.8hz)，3.69-3.63(m，2h)，3.57(dd，1h，j＝12.4，8.4hz)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ172.3，159.4，157.9，130.9，127.4，96.5，94.1，83.1，78.4，61.7，55.5，55.2，54.5ppm；ir(薄膜)n3289，1616，1562，1379，1175，905，841，730cm-1。向乙醇jvm.21(424mg，0.73mmol)的7.3mlthf溶液中加入jvm.22(297mg，0.84mmol，1.2當(dāng)量)。在室溫下攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)23h，然后加入15ml的nahco3飽和水溶液和20ml的etoac使反應(yīng)淬滅。將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中并收集有機(jī)相。用2x10ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(己烷→1∶2己烷/etoac)純化，得到j(luò)vm.23，為白色固體(357mg，70％)。tlcrf＝0.52(1∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd2cl2，400mhz)δ9.57(d，1h，j＝2.8hz)，7.44-7.39(m，2h)，7.32-7.27(m，1h)，7.20-7.16(m，2h)，6.36(ddd，1h，j＝6.2，2.0，2.0hz)，6.04(ddd，1h，j＝6.2，2.2，2.2hz)，4.64(s，2h)，4.60-4.54(m，1h)，4.51-4.45(m，1h)，4.40(dd，1h，j＝12，6.4hz)，4.35(d，1h，j＝3.2hz)，4.31(dd，1h，j＝12.0，5.2hz)，3.98-3.93(m，1h)ppm。向jvm.23(53mg，0.075mmol))溶于750μlch2cl2的溶液中加入十四烷胺(150μl的1.0mch2cl2溶液，0.15mmol，2.0當(dāng)量)。在室溫下攪拌進(jìn)行該反應(yīng)達(dá)5h，然后加入附加的十四烷胺(300μl的1.0mch2cl2溶液)。在室溫下再攪拌進(jìn)行反應(yīng)達(dá)12h，然后直接轉(zhuǎn)移至硅膠柱。用硅膠色譜法(己烷→1∶2己烷/etoac)純化殘余物，得到j(luò)vm.24，為白色固體(22.1mg，36％)。tlcrf＝0.53(1∶2己烷/etoac)；1hnmr(cd2cl2，400mhz)δ9.61(brs，1h)，6.33(ddd，1h，j＝6.2，2.0，2.0hz)，6.05(ddd，1h，j＝6.2，2.2，2.2hz)，4.98(dd，1h，j＝5.6，5.6hz)，4.67-4.60(m，3h)，4.48-4.41(m，1h)，4.23(dd，1h，j＝12.0，7.2hz)，4.16(dd，1h，j＝12.0，5.2hz)，4.11(d，1h，j＝4.0hz)，3.87-3.81(m，1h)，3.17-3.10(m，2h)，1.53-1.44(m，2h)，1.27(brs，22h)，0.89(t，3h，j＝6.8hz)ppm。1hnmr(cd3od，500mhz)δ4.81(s，1h)，4.41(dd，1h，j＝7.0，7.0hz)，4.31(dd，1h，j＝11.5，9.5hz)，4.06(dd，1h，j＝11.5，4.5hz)，3.79-3.72(m，1h)，3.22(dd，1h，j＝10.5，7.0hz)，3.18-3.06(m，2h)，1.51(brs，2h)，1.31(brs，22h)，0.92(t，3h，j＝7.0hz)ppm。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.83(dd，1h，j＝7.5，7.5hz)，4.63(d，1h，j＝0.5hz)，4.19(dd，1h，j＝11.5，9.0hz)，4.04(dd，1h，j＝10.5，8.0hz)，3.96(dd，1h，j＝11.5，5.5hz)，3.72(dd，1h，j＝5.0，9.0hz)，3.44(dd，1h，j＝11.0，7.5hz)，2.79(s，3h)，2.74(s，3h)ppm。實(shí)施例7：我們已經(jīng)研究出使結(jié)構(gòu)a描述的雙胍基構(gòu)架中的r7位置發(fā)生選擇性官能化的條件。最為通常的是，這些物質(zhì)由實(shí)施例2所述的烯烴jvm.16或jvm.17制備得到，但是也可從相關(guān)結(jié)構(gòu)制備得到?？刹捎酶鞣N親電試劑實(shí)現(xiàn)r7位置的選擇性官能化，并且在所述的制備11β-oh-stx(實(shí)施例2)的一般途徑之后，可通過(guò)一系列步驟將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為完全脫保護(hù)的stx類似物。圖20示出了在此位置裝配丙烯酸酯和羥基亞甲基結(jié)構(gòu)部分，并將該產(chǎn)物加工成stx的r7-取代類似物。圖21示出了一系列根據(jù)相關(guān)方法制備的n7-取代的stx類似物及其電生理學(xué)數(shù)據(jù)，所述的電生理學(xué)數(shù)據(jù)涉及該化合物抑制哺乳動(dòng)物的鈉通道同工型nav1.4的能力。實(shí)驗(yàn)方案和表征數(shù)據(jù)：向jvm.16(100mg，0.12mmol)的3.5mlch2cl2溶液中加入1，1，3，3-四甲基胍(15μl，0.12mmol，1.0當(dāng)量)。攪拌該混合物1min，然后加入aw.1(65mg，0.21mmol，1.7當(dāng)量)。1.5h后用短硅膠塞過(guò)濾該反應(yīng)物。用硅膠色譜法(2∶1己烷/etoac)純化，得到aw.2，為白色固體(98mg，71％)。tlcrf＝0.31(2∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，500mhz)δ9.52(s，1h)，7.65-7.60(m，4h)，7.50-7.27(m，16h)，6.91(s，1h)，6.12(d，1h，j＝6.0hz)，5.82(d，1h，j＝6.0hz)，5.30(s，2h)，4.91(q，2h，j＝10.0hz)，4.63(s，2h)，4.45-4.39(m，2h)，4.21-4.15(m，1h)，3.92-3.85(m，1h)，3.80-3.74(brs，1h)，3.67-3.58(m，2h)，3.43-3.35(m，1h)，3.33-3.26(m，1h)，3.06-2.99(m，1h)，1.06(s，9h)ppm；13cnmr(cdcl3，125mhz)δ172.7，169.9，160.1，155.7，152.5，135.8，134.5，133.8，132.1，130.8，130.5，130.1，129.3，128.8，128.3，94.2，81.5，78.6，69.8，63.7，62.5，53.7，53.3，47.0，37.7，35.9，31.9，27.0，22.9，19.3，14.4ppm。將jvm.16(30mg，0.037mmol)的1.48mlch2cl2溶液冷卻至-20℃，然后順序加入2-叔丁基-1，1，3，3-四甲基胍(7.1μl，0.037mmol，1.0當(dāng)量)和aw.3(13.5mg，0.044mmol，1.2當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物緩慢加熱至室溫并攪拌1.5h。然后將內(nèi)容物直接過(guò)硅膠柱。用硅膠色譜法(2.5∶1己烷/etoac)純化，得到aw.4(30mg，0.029mmol，78％)。tlcrf＝0.36(2∶1己烷/etoac)；1hnmr(cdcl3，500mhz)δ9.46(s，1h)，7.90(d，2h，j＝9.0hz)，7.55-7.32(m，15h)，7.19(s，1h)，7.08(d，2h，j＝9.0hz)，6.21-6.14(m，2h)，5.24-5.14(m，3h)，4.60-4.49(m，3h)，4.43(brs，1h)，4.38-4.23(m，2h)，3.74(brs，1h)，3.60(dd，1h，j＝10.5，6.5hz)，3.47(dd，1h，j＝10.5，7.5hz)，0.93(s，9h)ppm。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.72(s，1h)，4.39(dd，1h，j＝7.0，7.0hz)，3.97(dd，1h，j＝10.0，8.0hz)，3.86-3.78(m，1h)，3.77-3.63(m，4h)，3.70(s，3h)，2.40(dd，1h，j＝10.5，7.0hz)，2.55-2.49(m，2h)ppm。實(shí)施例8：我們已經(jīng)研究出了使得結(jié)構(gòu)a描述的雙胍基構(gòu)架中的r3位置發(fā)生選擇性官能化的條件。圖22示出了在該位置裝配正丙基，并將該產(chǎn)物加工成gtx3的c10-取代類似物。也研究了在c10位置裝配甲基基團(tuán)的類似條件，并在本實(shí)施例的以下實(shí)驗(yàn)部分直接說(shuō)明。這些過(guò)程證明了我們能夠制備stx和gtx的r3-取代類似物。實(shí)驗(yàn)方案和表征數(shù)據(jù)：將jvm.15(20mg，0.023mmol)的460μlch2cl2溶液冷卻至-78℃，然后順序加入me2zn(57μl的2.0m甲苯溶液，0.11mmol，5.0當(dāng)量)和bf3·oet2(6.61μl，0.053mmol，2.3當(dāng)量)。使反應(yīng)內(nèi)容物緩慢升溫至室溫并攪拌1h。然后，加入1ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌獲得的兩相溶液達(dá)15min。然后將該混合物用3ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x3ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫：己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到烯烴jw.1，為白色固體(11.7mg，61％)。1hnmr(cd3od，500mhz)δ7.64-7.59(m，4h)，7.47-7.36(m，6h)，6.13(dd，1h，j＝7.5，2.5hz)，5.89(dd，1h，j＝7.5，2.0hz)，4.64(d，1h，j＝13.5hz)，4.60(d，j＝13.5hz)，4.58-4.51(m，1h)，4.20(d，1h，j＝3.5hz)，3.79-3.75(m，1h)，3.72(dd，1h，j＝13.0，5.5hz)，3.52(dd，1h，j＝13.0，10.0hz)，1.55(d，3h，j＝8.5hz)，1.01(s，9h)ppm。將jvm.15(150mg，0.171mmol)的3.42mlch2cl2溶液冷卻至-78℃，然后順序加入烯丙基三甲基硅烷(136μl，0.86mmol，5.0當(dāng)量)和bf3·oet2(50μl，0.39mmol，2.3當(dāng)量)。使反應(yīng)內(nèi)容物緩慢升溫至室溫并攪拌1.5h。然后，加入5ml的nahco3飽和水溶液使該反應(yīng)淬滅。劇烈攪拌獲得的兩相溶液達(dá)15min。將該混合物用15ml的etoac稀釋，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。收集有機(jī)層并用2x10ml的etoac萃取水相。將合并的有機(jī)提取物用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫∶己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到烯烴jw.2，為白色固體(102mg，70％)。1hnmr(cd3od，500mhz)δ7.64-7.58(m，4h)，7.46-7.36(m，6h)，6.15(dd，1h，j＝7.5，2.5hz)，5.95(dd，1h，j＝7.5，2.5hz)，5.84-5.72(m，1h)，5.23-5.14(m，2h)，4.61(d，2h，j＝1.0hz)，4.53-4.48(m，1h)，4.19(d，1h，j＝3.5hz)，3.78-3.70(m，2h)，3.54-3.48(m，1h)，2.99-2.92(m，1h)，2.68(ddd，1h，j＝17.0，10.5，10.5hz)，1.02(s，9h)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ171.5，160.2，157.9，135.7，135.6，134.1，133.5，132.4，132.3，130.1，127.9，127.5，119.0，94.3，82.0，78.2，67.1，63.8，58.0，55.8，47.4，26.3，18.8ppm。在n2環(huán)境中，向固體jw.2(102mg，0.12mmol)和ru(pph3)3cl(1.1mg，0.0002mmol，0.01當(dāng)量)中加入12ml脫氧的1∶1甲苯/etoh。引入氫氣氣氛，并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1h。然后，將反應(yīng)物減壓濃縮。用硅膠色譜法(梯度洗脫∶己烷→2∶1己烷/etoac)純化分離出的物質(zhì)，得到j(luò)w.3，為白色固體(96mg，94％)。1hnmr(cd3od，500mhz)δ7.67-7.62(m，4h)，7.49-7.40(m，6h)，6.28(dd，1h，j＝6.0，2.0hz)，5.95(dd，1h，j＝6.0，2.0hz)，4.67(d，1h，11.5hz)，4.64(d，1h，11.5hz)，4.52-4.48(m，1h)，4.21(d，1h，j＝3.0hz)，3.82-3.76(m，2h)，3.55(dd，1h，j＝9.5，7.0hz)，2.45-2.36(m，1h)，1.71-1.62(m，1h)，1.53-1.36(m，2h)，1.05(s，9h)，1.01(t，3h，j＝7.5hz)ppm；13cnmr(cd3od，125mhz)δ171.4，160.0，158.2，135.7，135.6，134.8，132.4，130.0，127.93，127.90，127.0，81.6，78.3，67.2，63.9，58.2，55.6，37.0，26.3，19.1，18.8，13.3，0.3ppm。1hnmr(d2o，500mhz)δ4.35(d，1h，j＝6.0hz)，4.16-4.13(m，2h)，4.04(d，1h，j＝6.0hz)，3.67-3.62(m，1h)，3.53-3.48(m，1h)1.80(brs，1h)，1.63(brs，1h)，1.35(brs，2h)，0.86(t，3h，j＝7.5hz)ppm。應(yīng)當(dāng)指出本申請(qǐng)中的比率、濃度、數(shù)量、和其他數(shù)值數(shù)據(jù)均可表述為范圍格式?？梢岳斫猓褂梅秶袷绞菫榱朔奖愫秃?jiǎn)潔，因此，應(yīng)以靈活的方式理解，其不僅包括作為范圍極限而明確敘述的數(shù)值，而且還包括所有包含在該范圍內(nèi)的每一個(gè)數(shù)值或亞范圍，如同已經(jīng)明確敘述了每一個(gè)數(shù)值或亞范圍一樣。例如，濃度范圍“約0.1％至約5％”，應(yīng)解釋為不儀包括明確敘述的約0.1％到約5％的濃度，而且還包括所述范圍內(nèi)的每一種濃度(如1％、2％、3％、4％)和亞范圍(如0.5％、1.1％、2.2％、3.3％、4.4％)。在實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“約”可包括根據(jù)該數(shù)值的有效數(shù)字所作的常規(guī)的四舍五入。另外，短語(yǔ)“約‘x’至‘y’”包括“約‘x’至約‘y’”。可對(duì)上述實(shí)施方案進(jìn)行各種變化和修改。所有這些修改和變化都包括在本申請(qǐng)公開和所附權(quán)利要求書保護(hù)的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12當(dāng)前第1頁(yè)12