本發(fā)明涉及基因工程
技術(shù)領(lǐng)域：
：，是一種長鏈非編碼RNAXR_426719.1及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒及檢測其的方法及其應(yīng)用，即長鏈非編碼RNAXR_426719.1及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：穩(wěn)定型心絞痛(stableangina,SA)是指心絞痛發(fā)作的程度、頻度、性質(zhì)及誘發(fā)因素在數(shù)周內(nèi)無顯著變化的患者，是冠心病中較為常見的類型。據(jù)報(bào)道，美國約有720萬人患有心絞痛，并且以每年35萬人的速度遞增，因此病而死亡的人數(shù)高達(dá)50余萬人，占人口死亡總數(shù)的三分之一至二分之一，占心臟病死亡總數(shù)的50％至75％。在我國，隨著人民生活水平的提高，生活方式的改變以及生活節(jié)奏的加快，心絞痛的發(fā)病率逐年增高。以發(fā)病率居全國首位的北京為例，2003年心絞痛合并有并發(fā)癥的病死率占人口死亡總數(shù)的13％，目前仍呈上升趨勢，已接近歐美國家水平。穩(wěn)定型心絞痛的早期診斷對于預(yù)防心絞痛發(fā)展為臨床心血管事件具有重要價(jià)值，可以提高心絞痛患者的生存率并能夠改善長期預(yù)后。因此，尋找能夠早期診斷SAP患者并有較高敏感性及特異性的新的生物標(biāo)志物顯得尤為必要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種長鏈非編碼RNAXR_426719.1的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，其能有效解決穩(wěn)定型心絞痛的早期診斷對于預(yù)防心絞痛發(fā)展為臨床心血管事件具有重要價(jià)值，可以提高心絞痛患者的生存率并能夠改善長期預(yù)后，尋找能夠早期診斷穩(wěn)定型心絞痛患者并有較高敏感性及特異性的新的生物標(biāo)志物顯得尤為必要的問題，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)其表達(dá)或功能異常與人類心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，長鏈非編碼RNA有望成為心血管疾病診斷、預(yù)測預(yù)后的標(biāo)志物，同時(shí)也為心血管病的治療提供了新的靶點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中低表達(dá)的長鏈非編碼RNAXR_426719.1，該長鏈非編碼RNAXR_426719.1的序列如SEQIDNO:1所示。下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之一的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：上述該長鏈非編碼長鏈非編碼RNAXR_426719.1為XR_426719.1:1的全長或片段。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種體外檢測血液中長鏈非編碼RNAXR_426719.1的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，該制劑或診斷劑或藥物或試劑盒包括特異性引物對、標(biāo)準(zhǔn)DNA模板、PCR反應(yīng)液，其中，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:2，下游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:3。下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：上述該試劑盒為熒光定量PCR檢測試劑盒。上述特異性引物對用于SYBRGreen、Taqman探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、復(fù)合探針的檢測。上述PCR反應(yīng)液為熒光定量PCR反應(yīng)液。上述熒光定量PCR反應(yīng)液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。上述還包括熒光染料。本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種檢測根據(jù)技術(shù)方案之一所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1的方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備cDNA；第三步，定量擴(kuò)增長鏈非編碼RNAXR_426719.1。本發(fā)明的技術(shù)方案之四是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種根據(jù)技術(shù)方案之一所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1在制備用于檢測穩(wěn)定型心絞痛的試劑盒或用作檢測穩(wěn)定型心絞痛藥物的新靶點(diǎn)的應(yīng)用。本發(fā)明利用長鏈非編碼表達(dá)譜芯片技術(shù)，通過差異分析，篩選到一條在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中顯著低表達(dá)的長鏈非編碼RNAXR_426719.1，進(jìn)一步豐富穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病機(jī)制的研究，同時(shí)，本發(fā)明所述的體外檢測穩(wěn)定型心絞痛相關(guān)基因即長鏈非編碼RNAXR_426719.1的試劑以及本發(fā)明所述的體外檢測穩(wěn)定型心絞痛相關(guān)基因即長鏈非編碼RNAXR_426719.1的試劑盒能夠用于本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1的表達(dá)水平的檢測，通過本發(fā)明所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1的表達(dá)水平的檢測結(jié)果獲知穩(wěn)定型心絞痛的篩查結(jié)果，為穩(wěn)定型心絞痛的診斷和治療提供了新方向。附圖說明附圖1為本發(fā)明中長鏈非編碼RNA表達(dá)譜芯片檢測XR_426719.1在健康對照組與穩(wěn)定型心絞痛組中的檢測信號值。附圖2為本發(fā)明中針對長鏈非編碼RNAXR_426719.1的序列設(shè)計(jì)的一對特異性引物PCR擴(kuò)增后行瓊脂糖凝膠電泳測試引物的效果。附圖3為本發(fā)明中qRT-PCR檢測RNAXR_426719.1在健康對照組與穩(wěn)定型心絞痛組中的相對表達(dá)量。具體實(shí)施方式本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。在本發(fā)明中，為了便于描述，各部件的相對位置關(guān)系的描述均是根據(jù)說明書附圖1的布圖方式來進(jìn)行描述的，如：上、下、左、右等的位置關(guān)系是依據(jù)說明書附圖的布圖方向來確定的。本發(fā)明利用長鏈非編碼表達(dá)譜芯片技術(shù)，通過差異分析，篩選到一條在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中顯著低表達(dá)的長鏈非編碼RNAXR_426719.1，其轉(zhuǎn)錄區(qū)域位于1號染色體，起始位置為85,947,965-85,960,447，全長12,482bp。與健康人的血液含量相比，長鏈非編碼RNAXR_426719.1在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中顯著低表達(dá)，并在樣本的熒光定量實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步證實(shí)長鏈非編碼RNAXR_426719.1在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中顯著低于健康人。這一新型的長鏈非編碼RNAXR_426719.1將進(jìn)一步豐富穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病機(jī)制的研究，也為穩(wěn)定型心絞痛的早期診斷及預(yù)后監(jiān)測提供了新的血液分子標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。發(fā)明人提供的穩(wěn)定型心絞痛患者和健康人的血液標(biāo)本各5個(gè)，共10例。通過ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需步驟提取總RNA后，采用北京博奧生物工程有限公司的芯片產(chǎn)品(AgilenthumanlncRNA+mRNAArrayV4.0)進(jìn)行檢測，篩選出一條在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中顯著低表達(dá)的長鏈非編碼RNAXR_426719.1，其核酸序列如SEQIDNo.1所示。后期經(jīng)過對樣本進(jìn)行熒光定量PCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)10個(gè)樣本中穩(wěn)定型心絞痛患者顯著低于健康人。長鏈非編碼RNAXR_426719.1作為穩(wěn)定型心絞痛的新靶點(diǎn)，為穩(wěn)定型心絞痛的臨床治療和藥物開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。實(shí)施例1，一種在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中低表達(dá)的長鏈非編碼RNAXR_426719.1，該長鏈非編碼RNAXR_426719.1的序列如SEQIDNO:1所示。該長鏈非編碼RNAXR_426719.1可豐富穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病機(jī)制的研究，并可對其進(jìn)行早期診斷。實(shí)施例2，作為實(shí)施例1的優(yōu)化，該長鏈非編碼長鏈非編碼RNAXR_426719.1為XR_426719.1:1的全長或片段。實(shí)施例3，一種體外檢測血液中根據(jù)實(shí)施例1和實(shí)施例2所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒，該制劑或診斷劑或藥物或試劑盒包括特異性引物對、標(biāo)準(zhǔn)DNA模板、PCR反應(yīng)液，其中，特異性引物對包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:2，下游引物的核苷酸序列為SEQIDNo:3。該長鏈非編碼RNAXR_426719.1的制劑或診斷劑或藥物或試劑盒能夠更方便的對穩(wěn)定型心絞痛的血清標(biāo)志物進(jìn)行診斷和預(yù)測。實(shí)施例4，作為實(shí)施例3的優(yōu)化，該試劑盒為熒光定量PCR檢測試劑盒。實(shí)施例5，作為實(shí)施例3或?qū)嵤├?的優(yōu)化，特異性引物對用于SYBRGreen、Taqman探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、復(fù)合探針的檢測。實(shí)施例6，作為實(shí)施例3、實(shí)施例4和實(shí)施例5的優(yōu)化，PCR反應(yīng)液為熒光定量PCR反應(yīng)液。實(shí)施例7，作為實(shí)施例6的優(yōu)化，熒光定量PCR反應(yīng)液包括dNTP、Mg2+、Taq酶。實(shí)施例8，作為實(shí)施例3、實(shí)施例4、實(shí)施例5、實(shí)施例6和實(shí)施例7的優(yōu)化，該試劑盒還包括熒光染料。該體外檢測穩(wěn)定型心絞痛的染料類熒光定量PCR試劑盒的使用方法，熒光定量PCR體系：上游引物、下游引物各0.25ul(10uM)；DNA模板cDNA0.5ul；PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ul，加Nuclease-FreeWater4ul，總?cè)萘?0ul。熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個(gè)循環(huán)。實(shí)施例9，一種檢測根據(jù)實(shí)施例1和實(shí)施例2所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1的方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備cDNA；第三步，定量擴(kuò)增長鏈非編碼RNAXR_426719.1。所述方法具體包括如下步驟：一、提取血液總RNA：按照ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需試劑及步驟提取總RNA，再用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量(AppliedBiosystemsAB)定量所提取的的純度和濃度。二、制備樣品cDNA：采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。1、將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。2、打開二級結(jié)構(gòu)，反應(yīng)體系及條件如表1所示；將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。3、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系及條件如表2所示；將反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應(yīng)液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，或低溫保存。三、擴(kuò)增長鏈非編碼RNAXR_426719.1：采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。熒光定量PCR體系如表3所示；熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個(gè)循環(huán)。實(shí)施例10，一種根據(jù)實(shí)施例1和實(shí)施例2所述的長鏈非編碼RNAXR_426719.1在制備用于檢測穩(wěn)定型心絞痛的試劑盒或用作檢測穩(wěn)定型心絞痛藥物的新靶點(diǎn)的應(yīng)用。用于檢測穩(wěn)定型心絞痛的方法，所述方法包括以下步驟：第一步，提取血液總RNA；第二步，制備樣品cDNA；第三步，擴(kuò)增長鏈非編碼RNAXR_426719.1，并根據(jù)相對定量結(jié)果進(jìn)行判斷。實(shí)施例11：穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人血液的長鏈非編碼RNA芯片表達(dá)分析。一、材料和方法1.材料血液樣本來自于穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人血液樣本各5個(gè)。2.方法(1)穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人血液樣本總RNA的提?。喊凑詹W生物技術(shù)有限公司提供的“用于基因芯片分析的血液樣品的準(zhǔn)備步驟”提取穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人血液樣本總RNA。具體實(shí)驗(yàn)材料包括：淋巴細(xì)胞分離液(天津TBD生物技術(shù)發(fā)展中心)；滅菌生理鹽水(普通0.9％生理鹽水滅菌即可)；Trizol試劑(Invitrogen公司)。(2)lncRNA+mRNA表達(dá)譜芯片檢測以待檢測樣品的總RNA為起始，進(jìn)行體外擴(kuò)增和熒光標(biāo)記，標(biāo)記過程采用生物芯片通用標(biāo)記試劑盒。主要包括如下步驟：1)反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA：以TotalRNA起始，含有T7啟動(dòng)子序列的T7Oligo(dT)Primer和T7-隨機(jī)引物，既可以結(jié)合帶poly(A)的mRNA，也可以結(jié)合除rRNA以外其它不帶poly(A)的RNA，使用第一鏈EnzymeMix合成第一鏈cDNA。2)合成第二鏈DNA：用第二鏈EnzymeMix將DNA-RNA雜合體中的RNA鏈轉(zhuǎn)化為第二鏈cDNA，合成雙鏈DNA。3)體外轉(zhuǎn)錄合成cRNA：以第二鏈cDNA為模板，利用T7EnzymeMix合成cRNA。4)cRNA純化：使用RNA純化柱純化cRNA，除去反應(yīng)中的鹽、酶等試劑，并對cRNA進(jìn)行定量、質(zhì)控。5)反轉(zhuǎn)錄：以cRNA為模板，RandomPrimer為引物，CbcScriptⅡ酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。純化回收反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA并定量。6)標(biāo)記：以反轉(zhuǎn)錄的cDNA產(chǎn)物為模板，RandomPrimer為引物，用KlenowFragment酶合成cDNA互補(bǔ)鏈并摻入帶有熒光基團(tuán)的dNTP(Cy3-dCTP、Cy5-dCTP)，純化并定量標(biāo)記產(chǎn)物。帶有熒光基團(tuán)DNA即可用于芯片雜交。7)芯片雜交及清洗：取1μLcDNA溶于雜交液，45℃雜交過夜。取出芯片在博奧SlideWasher8芯片洗干儀進(jìn)行清洗，清洗程序如下：洗液I：0.2％SDS，2×SSC,42℃120S清洗2遍。洗液II：0.2％SDS，2×SSC,42℃80S清洗3遍。清洗程序完成后，離心甩干，待掃描。8)芯片掃描，數(shù)據(jù)分析，差異基因篩選：使用Agilent芯片掃描儀(G2565CA)對清洗后的芯片進(jìn)行掃描，得到雜交圖片。使用AgilentFeatureExtraction(v10.7)軟件對雜交圖片進(jìn)行分析并提取數(shù)據(jù)。然后使用AgilentGeneSpring軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化和差異分析，并用GeneSpringGX軟件進(jìn)行差異基因篩選。二、結(jié)果長鏈非編碼表達(dá)譜芯片檢測XR_426719.1在健康對照組與穩(wěn)定型心絞痛組中的檢測信號值如附圖1所示。芯片篩查發(fā)現(xiàn)多條表達(dá)上調(diào)和表達(dá)下調(diào)的lncRNAs。其中長鏈非編碼RNAXR_426719.1顯示出在穩(wěn)定型心絞痛患者中表達(dá)顯著下調(diào)，F(xiàn)c值為1.734倍，其中，由圖上可知，P小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鑒于其可能在穩(wěn)定型心絞痛患者中存在特異性表達(dá)，本發(fā)明通過以下實(shí)施例采用芯片檢測的樣本進(jìn)行指標(biāo)的重復(fù)驗(yàn)證。實(shí)施例12：qRT-PCR重復(fù)驗(yàn)證長鏈非編碼RNAXR_426719.1在穩(wěn)定型心絞痛患者和健康人中的差異表達(dá)。一、實(shí)驗(yàn)材料選取芯片測試的樣本，對長鏈非編碼RNAXR_426719.1的表達(dá)差異進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。二、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果1.引物特異性鑒定(1)特異性引物的設(shè)計(jì)：從Ensemble數(shù)據(jù)庫提取長鏈非編碼RNAXR_426719.1相關(guān)的轉(zhuǎn)錄本序列，并用根據(jù)轉(zhuǎn)錄本的序列通過NCBI的引物設(shè)計(jì)工具(PrimerBLAST)設(shè)計(jì)引物；設(shè)計(jì)后的引物序列如下：上游引物：SEQIDNo:2下游引物：SEQIDNo:3(2)將穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人血液按照ABI公司的Trizol試劑(貨號15596-026)所需試劑及步驟提取總RNA，再用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量(AppliedBiosystemsAB)定量所提取的的純度和濃度。采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。第一步將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。第二步打開二級結(jié)構(gòu)，反應(yīng)體系及條件如表4所示，將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。第三步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系及條件如表5所示：將反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應(yīng)液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，或低溫保存。(3)擴(kuò)增長鏈非編碼RNAXR_426719.1：采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。熒光定量PCR體系如表6所示；熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個(gè)循環(huán)。電泳檢測，選用0120000Marker(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，貨號CW0632)結(jié)果如附圖2所示：擴(kuò)增片段大小與預(yù)期相同，擴(kuò)增產(chǎn)物只有一個(gè)條帶。該引物對符合上述標(biāo)準(zhǔn)。上游的特異性引物，其序列見序列表SEQIDNo.2，下游的特異性引物，其序列見序列表SEQIDNo.2。2.標(biāo)準(zhǔn)DNA模板的制備根據(jù)長鏈非編碼RNAXR_426719.1堿基序列(其核酸序列如序列表SEQIDNo.1所示)，委托上海生工合成。取樣2ul合成產(chǎn)物，連接到Puc-TTA克隆載體(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，貨號CW0801)，隨后轉(zhuǎn)化到DH5a感受態(tài)細(xì)胞中。通過序列為SEQIDNo.2和SEQIDNo.3的特異性引物篩選陽性克隆，提取質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒DNA用7300realtimePCRsystem核酸定量儀定量，并做10倍系列稀釋作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(標(biāo)準(zhǔn)DNA模板濃度范圍在102-106拷貝/ul)。3.敏感性實(shí)驗(yàn)將標(biāo)準(zhǔn)將標(biāo)準(zhǔn)DNA模板質(zhì)粒按比例稀釋為102、103、104、105、106拷貝/ul，進(jìn)行熒光定量PCR檢測靈敏度。最低檢出濃度為102拷貝/ul。4.合成cRNA模板取上述穩(wěn)定型心絞痛和健康人的總RNA各5個(gè)，采用北京天根生化科技公司FastQuantcDNA第一鏈合成試劑盒試劑盒(貨號KR106)對提取的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。第一步將模板RNA在冰上解凍；5×gDNABuffer、FQ-RTPrimerMix、10×FastRTBuffer、RNase-FreeddH2O在室溫(15-25℃)解凍，解凍后迅速置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，簡短離心以收集殘留在管壁的液體。第二步打開二級結(jié)構(gòu)，反應(yīng)體系及條件如表7所示：將上述組分的基因組DNA的去除體系配制混合液，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置。第三步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系及條件如表8所示：將反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應(yīng)液中，充分混勻。42℃，孵育15min。95℃，孵育3min之后放于冰上，得到的cDNA可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，或低溫保存。5.熒光定量PCR檢測長鏈非編碼RNAXR_426719.1采用ABI公司的PowerSYBRGreenPCRMasterMix熒光定量試劑盒(貨號4367659)，以反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。熒光定量PCR體系如表9所示：熒光定量PCR程序：第一步95℃10分鐘；第2步，95℃15S，60℃1分鐘；第三步，95℃15S，60℃1分鐘，95℃15S，共40個(gè)循環(huán)。qRT-PCR檢測穩(wěn)定型心絞痛患者中長鏈非編碼RNAXR_426719.1的相對表達(dá)量如附圖3所示。根據(jù)qRT-PCR的相對定量公式：2-△△ct，分別計(jì)算出長鏈非編碼RNAXR_426719.1在穩(wěn)定型心絞痛患者和健康人中的表達(dá)水平，結(jié)果所示穩(wěn)定型心絞痛患者與健康人的長鏈非編碼RNAXR_426719.1表達(dá)水平比較，其2-△△ct平均值為0.70。以上結(jié)果說明，長鏈非編碼RNAXR_426719.1在穩(wěn)定型心絞痛患者血液中普遍低表達(dá)，這與前面所述的長鏈非編碼RNA芯片結(jié)果XR_426719.1下調(diào)1.734倍相一致，其中，由圖中可知，P小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，長鏈非編碼RNAXR_426719.1可以作為穩(wěn)定型心絞痛診斷的新的血液生物標(biāo)志物，用于穩(wěn)定型心絞痛的篩查。以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實(shí)施例，其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和實(shí)施效果，可根據(jù)實(shí)際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。表1試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補(bǔ)足至10uL表2試劑用量10×FastRTBuffer2ulRTEnzymeMix1ulFQ-RTPrimerMix2ulRNase-FreeddH2O補(bǔ)足到10μl表3試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總?cè)萘?0ul表4試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補(bǔ)足至10uL表5試劑用量10×FastRTBuffer2ulRTEnzymeMix1ulFQ-RTPrimerMix2ulRNase-FreeddH2O補(bǔ)足到10μl表6試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總?cè)萘?0ul表7試劑用量5×gDNABuffer2ul總RNA1-2ugDEPC水補(bǔ)足至10uL表8表9試劑用量PowerSYBRGreenPCRMaster(2×)5ulcDNA樣品0.5ulForwardPrimer(10μM)0.25ulReversePrimer(10μM)0.25ulNuclease-FreeWater4ul總?cè)萘?0ul序列表<110>新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院<120>長鏈非編碼RNAXR_426719.1及制劑或診斷劑或藥物或試劑盒和應(yīng)用<130><160><170><210>1<211>12482<212>DNA<213>Homosapiens<400>1TTCTTTGAAATTGGTATTTTTGAAACAGTTTATTCCTTTTTTCCCTGCATCCATCACTTTCTGTACTGTTAAGATATCAATTACTCCATGAAGTCTCATGCATATCTCCTGATGAAAACAATCAACTTATTCTTACTTTGTAAGGGATAGATCAAGTCTCAACTTTTTTCAAGAAGGCTTCTTGACTATTTTAAACCACTATAAGCTCTCATTACCCTTATCCTCTTTAGTAACTAAATTATTTACCATGAACTTTTTGGTAACTAAAGAAACCATTAGGCCGGGCGCGGTGGCTCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGGCCGAGGCGGGCGGATCACGAGGTCAGGAGATCGAGACCATCCTGGCTAACACGGTGAAACCCCGTCTCTACTAAAAATACAAAAAATTAGCCGGGCGTGGTAGCGGGCGCCTGTAGTCCCAGCTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATGGCGTGAACCCGGGAGGCGGAGCTTGCAGTGAGCCGAGATCGCGCCACTGCACTCCAGCCTGGGCGACAGAGCGAGACTCCGTCTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAACCATTAACTCTTATCCTGTTTCTTATATTATAAATATTTACTTTTTGAGATTTGATGATCCTTAAGGAGAGCAATGTCATCATGTGTTTCTGTATACCAACACAACTTAGCAACACCAAGGAGTCAAAAAACTATATTTTTGAATGACTCCTCCCTAACTCATTCTATGAGGCCAGTATCATCCTGATACCAAAACCTGGCAGAGATACAACAAAAAAAGAAATCTTCAAGCCAATATCTTTGATGAACATTGATGCAAGCACATGTACCCTAGAACTTAAAGTATAATAAAAAATATATATATATTAAAAAAAATCCTCAACAAAATACTGGCAAGCTGAATCTAACAGCCCATCAAAAAGAGATGTACAACATTAAAAAATACAAAGAATTGCCAATTACTTAATCTTTTTGAGGTTTTCTGAAACTTTTGCTTAACATTCTTTCCTGACATACTTTTGACAATTTTTCATCTTTTCAGTATCGGTTATCGTGACATATTGGTATCTTCTACTATACTATGAAAGCAATCTGGTCTCACAGTCCTTACTCTTACCCGTTTTGTTATATTATTCTAAGATATTTTGTTTCCAAAATCATAGTTAGACATGATTGTCACTTTTTCATTCAACAAATATTTATTGAACAACTGATAAGTGAAAGAGTCTTGTGCTAGGCAGTATGAGGAATATAAATAGGAAGGGAAACACAGATTCTTCCCTAAGACATTTATAATCAAAGAGCCTAGGGATATAAATATCTAATACACAGGAAGAAAGTGCTAAAAATTACAAAAGACTACATTTTATCAAATTTAACAAGAGATAAAGTTTATTTTCAGCTTGGATATTTAGGGAAGATACAAGGAATAGATAAAATTTGGATATATATACAGAGATGGAAGTCTAGGGCATTTCAAAAGAGAACTGAAATCAAGTTGATCCAAATCATTAATCTTTGAACAAATGTTTATTGAATATATATTATGTGCCAGGTACTGTATATAAGATATAGTCCTTGAGTTTATGGAGCTTTTACTCTATTTCCTAAATATCTTTTATAACTTTCCCCTTCATTGCTGCCCAAGTTGAAGCATTTCGCTGTCATTTCTCCTTAATATTACTGCAATAACTTTGTTATTGGTCTCCCTTTATCTCCAATTCATCTTTTATCTTGCAGCTGCAAGATATTTCTAACTGGCAATATGACTGTTTCAAAATATTACTATAAATTCAATGATCTCCTTACGCTACAGGATACAATGTTAATGACTGTAGATGGCATATATACAGGGTTCCTCATTATTTCATCATTGTCTACTCCTTGTTCAGACCCTTTCTTTCCTCCCTCCTCCCTTTTACTGTATGATCCAGTGGTATAAAACTAACTGTTATTCAGTATATATTGGTTCTCTCATGATTCTCAGCCTCTGTACATGTTCTGTTACCTAGAGTGATGCCTAAGGCCTTCTTACATTTTTAGGAAAACTCCTCCACATTATTCAAGGTCCTGCTCAAGAGCTGACTCTTCTTCAAAGCCCTCCCCTGGTTATCCCACAAAAAAAATGCTGTGCTCTTTTATTATAGCCATAAAATATTGTATCATAATGGATTTTTACTTGTCTCTCACGAACACATAAAAAGCAAGAATTTTTTTTAACTATTTATCTGTAACACCTAACGGTTATGTCTGACAAACAATTGGTATCCAAACAATATTTGTGGAATAGTGACAGACTCAAAAAGCCAGTGGATTAAGGTTGTAAAGAATGGATGCAAAACATATTACGGATGTAGAATTTATAAAAGTAACTCACTGAAAGTAAGTACAAAGGAAAAGAGGGAATATAAGAAAAAAATACTGAGCTTTCATCACCTGGTAACTGGAGAGTGTGGTACCAATTACAGAAAATACTAAGAGGAGGGGGTGAATTGAATTTTAGAAGAAAGGTGATAAGTGTGGGTTTGAACCCAGTAAGTATTAGGCTTGAAAACCTGAAAACAGCCTCAAACAATGGCATAAATAAGTTTTAACTTTACTAAAAACTACAGATCAGGGGAAGTGTTCAGATTTAACTTCATCTGTCATTGATTTCACAAACAGAAGTTACCCTTCATGATTTAGTTTTTGCTTCACGAATCATGGCGCTTAAAGGACTTAAGGTCCAGAAGGGAAAAGACATATTCAAATAAAAAATGGCAAGAAGTGGTAATAGAAACATGTATAAAATACAGAGGATACTTGATGTGAAGTATAGAAGTGATACTGGCATTGACTTGTAGAAAAAAAAGTATTTGTAAACTCAAGAAGTTGGGTGGGACATTACAGGCAACTAGTAGAAGCCAGGTGAGCTGTGACTCATTGTGCCTTACCTACCTCCAGCTATCATGAACTGCTTACAGTACAGTTCTGCAAACGCTCCAGGTCATTTCATGCCTTCATGTTTTATTCTCATGCTGTTGTTCCCATTGAAATGTCCTTCCTTATTCCGACTGCTTCACAAGAATCTGTCGCATTTTCAGACTTAGATTAAGCACACTAATGTCCTCTGAATATACAGACAGTAGCAAATAAATTTTAAAAATTACCTTTCATTTCTTAATTTATCATAGTTCAACATACACATAGTGTCAATGTACAAAAATAAGGCATGTGGTCACTGCTGTAGAAGAGCTTTCTGTATGGATAGTTCAAGTAAAAAAGTTACTGTGATATCAAACAATGAATGCTAAGAACCGTAATAGTGTAGATGAAAGTGCTGAAAAGGCTAAAGTAGGAAGAAACGGAATCTAACTGGGCGTGGAGATTAGAAAAGACTTCATGGTTGAGAAGGTAATTTAAGATGGATCTTGAAAGTTGATGCTTGGTGGACAATGAGGGTGGGAAAGCGAAGGTCTTTAGAGGTGACAGAAACAGCCTGAAACAAAGGCATAAATAAGTGAGTGATGTTTAATGAATATTGAGTGGCCAGATCATAGGGAGTAAGTTGGAAAGTGTAGGAATAACAACTGTAAAGGTAGGTGAGGAATATATTGTGGGTGATCTTAAAAGTCAGAATAAAAATTTTTTACAATTTATATTCTTAAAGCCTCTACAGACTCATTTTCCCCCTTATAATCTACTATGTCCCATTCCCCTAGCATTTTTTGGAGGCATTTATATCATCTTGGTCTTTTCTGATTTTAGTGACAGCAAATTGATTTTATCAACATACCAGAAAAACATAGATTCCAAAACTCATTAATCAGAAAAGTGCTGAGCATAACAACCTTGTATCTCAGCTGTTACTATTTTTCCATTTTTAACTGAAAATGAAAAGGTTATATACTTACAAAAAGTTTTCTACAAAACACAAAGGTGGCTATATTTGTGGTTAAAATAAAATCCAGATTTCAATCAATTATTTTTCTTACAGTCAAAAGTAGAGCATTCATATATTTGTGGTCAAAAAATGCAATGCTGCTCCCCTCATCGGGCTGCTTAGTACAATTAATGAAAAAAGAGACATTTCATAAACAGAAGATAGAGTCCAAATTCAAAATATCTCAACCTGATAGGAAATATAAGTTTAATGACATTCTCTGATAACTTTTTCAAAATAATAAAATGAAAAGTCACTAAAACTTAAAATGTAGAAATGCTTTGATCTGTAAAGCAAGACTTCAAAAAACATGTAAAGTGTTCAGAAAAATGTTTCTAGTGAACATGCGCACATAAAGAACAGATTTCACTCCTCTTGAAAATATTTTCTGGTAAGATTCTTAAGTGTTTGTTAAGGAAAAAAAATGATACATTCCATAAAAGTATTTTAGACATACATGTGGTGTACATGTAAATGCAAATTAATTCATTATGTTCACACTACACAAAATAAATATGTGAGAGCAACACAATTTGTCTGCTAATTTGAATCTGTTTTCTGATTTGAGAGTAAGAGTTGAAGAAATCATCACATTTGTGTTTAATGTTTCTTAATGATAAAAGACAAATTAGGCAGAATCACATATGGTAGATTCATTTAACAAAATCTTGTACATCTCAAATAAAGTATAACCTTCCAGGACAGGAAAGGGCAAACTACAGCCCGTAGGCTACCTCCTGCCAGCTGTCTGTTTTTGTAAATAAAGTTACTGGGAACAGAGCCAGGCTCAATCATTTATGTATTCTCGATGGCTGCTTTCATACTACAACAGTTGAGCAGCTATGATAAAGACCGTATGGCCTGAAAGTCTAAAATATATACTCCCTGGCCCTTTATAAAAAAGTTTCCTGACCACTATTCTATAATGTTTGTAACTTTTAAGTTTTAAAATTTAGTATATTGATTACATAGTCCTTAATATTTTTTTAGAAAAATCAGAACCACAATGATTTTTCACTATTTTTACTCTCAGATTATAATTCAGCCATCACCTTCTCTAAGAGTGGTATTGTCAACAGGTGGCCCAAAGCAATGCCTTTACCTTTGCCCCTTCCATTATTTCCATCAGTCCTTCCCATTCTTTAATACCAACAAGCAATGTATTCTCCATTTGATATATCCTGACCATAAAAGTATCATTAGAACCCTTTGCTATTTTTACTGATTTGTAAATAAAAATAAGACAGAGCACTACTAATAAATGCAAACAGTATAGTTTTTATGCAAACTAGCTTCAGGGGAAGTCCCTTGACAGCCTCTTCCAACCAAAATGCCACCCCTCGACCCCTTCTATATAGAAAGTTAGAGCTGCCATTTCCTCGAAAGTTGTGATTAACACTTTATAATATCCCTACCTAAGAGAATAGTAACATGTTTTTAGCAAAATAAAGCCAGAGTTTCTCTATCAACACCTATGTCCTTATGATAGCTGCCAAAACAATTTTTACTTCTTTTTCTTAGAGTATCTTATGAAAGAGGACTAATGTTTTGGCAAAATTATGTGTATAATTCTTTTCTCATTTTCTAGATCGTATACTACTTAAAGATCAAGTCTTACTTTACTGTTATCTCTAGCACACATTAAGTGTTCAGTAAGTGTCTTCTGAATGCTAGAATAAATAAATGAGAAAAATACTAGTTTTTAACTGTATCTTTCTTTTGTTTGGCTATAAAAATCACAGTATCCTTCTAAAGCACAGAAACATAAGTACACGATGAAGAAAAACATGAGACACACATATTTGTAGACAATGAATTTACTTCAAGTCACAGAATAATGTTTAACCCTATTAGGATTCTAAATATTAATGTCACAGGCACATATACAGAATTACATTGAATGTGATTTTTAAAAAATAATCATTAGGAGTAAATCCTTAAAAATCAGAGGTTATTAAAAAATATTATTTCTATCAATTCTAAAACAAGTAAGGTGATCAAGTTTACATTTCCTTAGTCTGAAGGCTAATGGGCTAATTGCCTCTGGGCAGTAAGCATGTTAAATACTCACATCTGAAAAAGACTGATGCTATTGGAAAAGCAAAGTTCCATTTTAATATCTCTTTTATTTTTATTATTTTGAAGAAGTAATTTATTGTTTTTACAATTTGGGCAATCTGAAAAATTTTATTAGACTAAGAAGGGTACTCTCTTGTTTATTACTCTTTAATATGGCACGTATAATAACTAGCTTGTTTTCTACACCAGTACATGAATGCTAGGTCTAATTCTTTTTCAGTTTCAAAAATGATAAATATCAAATACATGATCCTAAGACATAATAATTTTACATGTCCGTGGTTTTTCAGAATAGCTTCTCAAACCATAATATGGTACATGTGGCCCCATGACCTCTAACTTCATGCAGTAATAACAGGATTATACTTATTCATTAGAAAGACAATTGAAAATCTTCAGCTAATTGCTAAGAGGAAGCAGGATGATGGGGAGAAGTTAAAGATATCTCCTTATCAGTCCCAGCTCTGCTGCTATATGACCTGACTTTGGACAAGTTTCTTGACTTCTCTGAAACATAAGTTTCCTTTTGTATAAAATAGGAATAATAATCATTATTTTCCAGGGTGTCTATGAGGATTAAATAATATAATATATGCAAAGTATCTGGCATATTATCAGTTCTCAATAAATGGTAGCTATTTTTTTATCATATTCAGGTAAACATCCTCCTGATGATGAAATGTATCATGGATATACATTTCATATAAATTTCCATTGCCTGAGAAAAATTACTACCCCCTATTACATAGAAGGTATACAACAGCTTTATTGCTGTTTTATAGATACGAGTAGCCTAAAAACAGGAGGGGTCGATGACATTCTTTAAGATAAAGGCACTGAAACTGCAAAGGCCCTAGCTAGGCATAGTTGTAGAGTTATACTACAGTTCTTCCTGCATGGCTGAATGGTACCACCAGTATCTGGGTCTTTCCCTCAAGGAAATATGACTTCTTATGATTTAGGTAGGTCCCACTAAAACTAGCAGTCTCCTATTGATACGGAAGTGCAGGGTAGGGAAGGGCTGGGTAACTGGTGAGGGCTCCACCCTCAGGCCTGTGCCTAGGATGGCCCACCATGCTCCCCATCCTGTGCCGCTATAAGCCGGATACAGACACAGACACAAATGGGTGGATGATAAGAGAAGCAGAATAACACAACAACAGACACCAGCAGGCCATCTACGGGGAGACCACATGGAATTCAGTTGGTGTAGTTGGGAGAAAAGTCCAGCCACTGGGTGGCCTGACTCCAGGGGAAGACCACCTTCCCATTCCATCCCCTTTTGGCTCCCCATCTGGCTTGCTGAGAACAACCTCCATCACTCAGTAAAACCTTGCACCCATCCTCCAAGCCCACATGTGATCTGATTTTTCCAGGACACCAGGGCAAGAACCCGGGATACAGAAAGCCCTCTGTCTTTGCGATAAGGCAGAGCATCTAATTGAGCTGATTAACACAAGCCGCCTGCAGACGGCAAAGCTGAAAGAGCACACTGTAACACATGCCCACTGGGGCTTTGGGAGCTGTAAACACTCAACCCTAGATGCTGCCGTGGGATTGGAGCCCCAAAATGCTACGCACTACCTGCCTGTCTGCATGCTTCCCCTAGGGGTTTGACAGCGGGACACCAAAGAAATGAGCCACACCCCTATTGCACACCCTGCAGGGGGGATAAGGGAAGTTTTCCCATTTCATTATTAATGAAAGAAAAAATTGGAAATAAAATAAAACCAACATGTATCAAGCTAATTTCATGGTAATTCTACCAGAGGGTAGCAAAACCAATCACTGTATCAAATGAGGTTTTGTGCTGAGCACTTCTACGATATTTTTTTCTGGCTCTTTCAAAGTCTTTCCTATTTCTATCACAAATACATTAAGTTATATTTTCATAATTCTCAGAGGCAAATAACATTTGACAATATTTTTAAAAGTAAATTGCCAGCTTGGCTTAAGATATTACAGAGCAAAATTTTATTTTACCCTTTTTCACATCTCTTAAACATTAATTCTCAAGGATGCACTTCAAGTTTAAAAACAGGACAAATTGATGATTACCTGATGCAGAAAAGAGAGACTTGGAACGGAAGATAAAAATTTTGGATTTGAAATCCAGGTCTGCTACTTACTCACTGTATGAATTTGGATACATTACATAACTTCAATAAATTTCAGTTTCCTCATTTATAGAATGCAATATGAAAACTTATTTCATAAGAGTTGTTTAAAGACTAAATGAAATTAACAGGCCTTCAATAAATATATTTATTTCTTTTTATTTCCTCCACTGACTCCACCTCTTTTTGCTTCTGAATGAATTCGTTATAACCCAGCTCAGAATCAGTCATGAGAGGGTTTATGATTATAAAGGTTTTGTAATGAGAAACAGAGTATCTGATTTTGAGGATTATCCATGCCTTTCTCTTCTTCCTCTCTGCTCATCGGTCATTTATTATACATTAGCACACCAGACAGGAGGCAGAAAAACAGAGAGGACACAGTAGATTTCTCATGAAATCTTACTTTGTTCACCAAAGTCTATAAGTAAAGGAATAATTGTGGTAAATCAAATAAGTTGGGTTATGTTTTAAGAGATGAAACAATGTGGCCAGACTACTGGACAATCATCTGAAAATCTTCACGTGGGGCAGAAATGTGGCAACTGAAACTTAATGTAATCAAGGAAACTGTGAAAAAATAAATCCACATTTTACATATAAAATATGAGACCAGAAAATGACCCTAGAAGTCCCCACCGATTATTTGCCAAAGACATCCTCAGTTTCCTGTTACAGGTAAAAGGCTTGCTTGATTTAAGTATCATCAACAGTAAAGAAAACATAATAGGAGTCATTATCCTACTCATGAAGAAAGCTGTGAAGTCACTGCCTCTAAAATACTTTAGTTTTGTTTGCTCCAACATCAGAAAGACATAATGAAACTAGAAAACGGCCAGAGAAACTTAGAACCAACCCAAATGCCCATCAATGATAGACTGGATAAAGAAAATGTGACGCATATACACCACAGAATACTATGCAGCCATAAAAAAGAATGAGTTCATGTCGTACCATCATTCTCAGCAAACTAACAGAGGAACAGAAAACCAAACACTGCATGTTCTCACACATAAGTGGGAGTTGAACAATGAGAACACATGGACACCACGAGGGGAACATCACACACCAGGGCCTGTCAGGGGATGGGGTGCAAGGGGAGGGAGAGCATGAGGACAAATACCTAATGCATGCAGGGTTTAAAACCGAGATGACGGGTTGATGGGTGCAGCAAACCACCATGGCACATGTATACCTATGTAACAAACCTGCGCATTTTGCACATGTATCCCAGAACTTAAAGTATAATTTAATAAATAAATAAATAAAATAAAAGGGCCAGAGAAAAGAAGTCAAATTTGCAGGTGAGAGGAAGACTAGAAACATCAACATTCTTAGAAAGAAGTCATGGATTCTTAGAATTGGAATTATCCTGAGACAGTCTATATGCCATTTCCTTGTGCTTCCAGAATATTCCTGATAAATCCTAAATAGTTTAGTTATCAAAGGCCTAATTGCACACTGGAGACTGACTAGGATCCTCCCCTGATTTGCAGCCTACCTCCAATCTGTTATCTCAAATATCTTCCAAATATATCCACTTCTCTTTATCTCCACTGGTCTAAATCATCTTTCTCATTCATATAGACTACTACAGAAGCATCCTCATTGGTTATCCTCTTCTACTTCTGCTCTTTACAGCCATGCTTCCCAATCCATTGCAATAAGAGTGATCTTAAACCTCAAACTAAATCATAACATTGGCTTACTTAGCATACCTTTAGCGATTGTTCATTGACCTTACATTCAAGTGCAAAGTAATAAACATGGTCCTAAATGATTGGCTCCTGCCTCCTTCACTAGTATCATCTCACATACCTTCTCCCTTTGCTCATCAAAGCTTATCCACACCAACTTTATTTCAGTTCCTCAAAAGAGCTACCATCACATATAACAATAACCTCCACCACAACAGCTAACATTTATCAAGTTTTTACTACATGACTGGCATTGTGATAAGTGCTTTATGTGCATTATCACTTTTAATCCTCATAAGAAAATCTATAAGGTAGTTATTTTCATCGTTTTACTGCTGAAAAAAAAACAAATATTTAGAAACATTAAGTATTTTTTCCATAGCAAGGTAGGTGGCAAAGATGGAAATTATGTTATATTGCATATTCCAGGGAAGTTTTTTCCCCACCCCTTCCCTGGCTAACTTATATCATTCTTTATGATTACTACTTATATGTCATTTCCTCAAAACAGCCTTCTCTCATCTATTGATCTAAAATTGGCACCCTTGTCATAGTCCCTTGTACTATTTTTTATAGAATGCATCACAGTTTACATATTTCTTTCTGTGACTATTTAATATCTGTCAAACCTCCAATAGACTGTAAATTCCATGAAGGTAGGGACCATATGTTTAAAAATGTGCCTGCTATAATCAATAAATATCTGCCTAATAAATGATTGAAAAAAGACATCAAACCTTCCAATAATAAGGTGTTGGATCACTCTATGGAAGAACCTATTTGAGTGTTAGAAATTCTATTAAAATATTCTTGCCTACATTAAACCAAAAGCTGTTCCCTTATAATGTCTATCCACTGATCCTAATATTGGTCTTTTGGCCAATAGTGAAAAAGAACATGTTTTTTTCTTTACAGTTCTTCGAATACTTTCAGCCTAGAAAGTTTAAGACAGAGAGGACTGGTAATTATGGTTAGATAATTCTAGATTTACTTCTAAACATCTGAATGCTAGAATATGGAAGATGAGAGGGCATCTTTTGAAATTAGAGACTCATCTGGGGCACATTTATGGAAATTAAGTCTTTGTATACTATAAATAATTGCAAGAGGTAGACATGAAATATAGGTGGGACTGCTGTGCTTCACACACTCTATCACAAATTGAATTCTAACTGGTATAAATCTAGAAACAAACAAACCTGGAGGAGGGCCAGTTAAAGGCAATTAATGACTATACAAAAAGATTGAACAAAGTAAAAATCAGCTACTACAATTACAAGATAGATGTCATGAAGTGCAACCATATCTTCTCCTATCTCTCAAGAATTTTCTTGGCAACAGAACTCTGGATTAGATGAACTATATTTCTAAGATTTTGAAATTAGAAAGACAAAATGAAAGCCAGAATTACTGAGAGCCAAAAATAAAAATATTCTTTAGACATTTTATATATTTGAATAAACTTGATATAGGCAGTAATTTTTTAAAGAAGGCTTCATGTGCCATCCTTAACAAGAAAGATAGAATCTCAAAGTTGGAAAGGTCTTTTTGTCTAATAACTTATCAGATGCTTAAAGACTCTCTACAACATTTATATGAGATAGCTATTGAACTAATATTAAAATATCCAAGCATGGCATAATGCAAAGATTTGGATTTTGAGTTTGGAGCTTTGGGTTTAAATCTCAGTTCAGTAATTTATTAGCTATGTAACTTTGAACTGGTTACTCAATGTGCTCCAGATTCCTAATTTTAAAACCAGAATAACAAAATGTATCTTTTAAAGCTGTTTGAGAATTAAATGGAATACCGTAATATGAAATGTCACTTGGCACTATACCTAGTACATAGCAAATGTTCAATAAATGTTATTTTCCCTCCAGTGACAAAAATCTACTACCTGCCAAGATAGTCTGTTTCCTCTTTGGAAAGCACTGGCAGTGGGTTCTTATACTATGTGGAATTAGTCCAAAACTATTAAGTAAATAACACTTAAAAGTTTAATATGTAAGATATTACTTTAAGAAAATATGTTCTTCATTAGCATTTTAACTTCGGATGCCAACTTTATATATATTTCTTAAGCAATTTGTCACTCAGAAATGGCAGAATTTGAGTAATCTTAGAGAAATATGTTACAATCATATTTGACTAGAAGCCTTTAATAACCTAATTCATACAAATACTTCCTTGAAACTTTCCCAGAAAAAGCAAGAACAAAAAGTTCTCCTTCTAGTGACTCAGGATTAATTAGGTATGGCAATTATCTTTTAGGACTACACAGATACTCTTCCTATTTTTATTAACAATTAATAACAAAAAATGGGCATCAGAAATGTTTTGTTGTTTTGTCACAAGACCAAGATTTATAATTAATTATTTAAGCCTATAAAACAACCATATAGAAGAAAATTTTTTAAGTCATAAGAAATAATATTATCTATTTTGTGACAATTAATTTAGCACACTCTGTAAACGAATTCACTTTCCTGGTGTTAATTTAATTTTCCACTTTATGTATGTTATGTAAGTTCATTTGTTAGAGAATATTTTGGCTGGCTTTCTTCATTGTAAAGAATAAAATTACTTCTAACAAATCTGATTCAAATACAACATGAAGCCTGTTCTTCCACAATAATATT<210>2<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>2ctggtgtggtgtgaatgctgt<210>3<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>3gatgcagtcctcaacttagtactc當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3