本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及蛋白質(zhì)GmGATA44在調(diào)控植物粒重中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：大豆(Glycinemax(L.)Merr.)是優(yōu)質(zhì)的植物蛋白資源，也是健康的食用植物油源。目前，我國大豆平均畝產(chǎn)120公斤，而美國平均畝產(chǎn)214公斤，巴西平均畝產(chǎn)191公斤，阿根廷平均畝產(chǎn)185公斤。我國居民對高蛋白食品需求日益增加，國產(chǎn)大豆是食用大豆的主體。為了滿足居民對植物蛋白的需求，提高國內(nèi)大豆產(chǎn)量勢在必行。提高大豆產(chǎn)量主要是通過提高單株粒數(shù)和百粒重來實現(xiàn)(劉玉庫等，2006)，其中百粒重是影響大豆單產(chǎn)的重要農(nóng)藝性狀。因此，挖掘調(diào)控植物百粒重的基因?qū)Υ蠖褂N具有重要的意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何提高植物粒重。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了蛋白質(zhì)GmGATA44在調(diào)控植物粒重中的應(yīng)用；所述蛋白質(zhì)GmGATA44可為a1)或a2)或a3)：a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；a2)在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質(zhì)；a3)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與植物粒重相關(guān)的蛋白質(zhì)。其中，序列表中序列2由314個氨基酸殘基組成。為了使a1)中的蛋白質(zhì)便于純化，可在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。表1標簽的序列標簽殘基序列Poly-Arg5-6(通常為5個)RRRRRFLAG8DYKDDDDKStrep-tagII8WSHPQFEKc-myc10EQKLISEEDL上述a3)中的蛋白質(zhì)，所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。上述a3)中的蛋白質(zhì)可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。上述a3)中的蛋白質(zhì)的編碼基因可通過將序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上表1所示的標簽的編碼序列得到。編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核酸分子在調(diào)控植物粒重中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：b1)編碼區(qū)如序列表中序列1所示的DNA分子；b2)核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；b3)與b1)或(b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的DNA分子；b4)在嚴格條件下與(b1)或(b2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的DNA分子。其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因組DNA或重組DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。其中，序列表中序列1由945個核苷酸組成，序列表中序列1的核苷酸編碼序列表中序列2所示的氨基酸序列。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向進化和點突變的方法，對本發(fā)明的編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核苷酸序列進行突變。那些經(jīng)過人工修飾的，具有與本發(fā)明分離得到的所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44，均是衍生于本發(fā)明的核苷酸序列并且等同于本發(fā)明的序列。這里使用的術(shù)語“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性?！巴恍浴卑ㄅc本發(fā)明的編碼序列表的序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)GmGATA44的核苷酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計算機軟件進行評價。使用計算機軟件，兩個或多個序列之間的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用來評價相關(guān)序列之間的同一性。上述應(yīng)用中，所述調(diào)控植物粒重可為增加植物粒重。上述應(yīng)用中，所述粒重可為百粒重。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。本發(fā)明所提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，可包括向受體植物中導(dǎo)入編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核酸分子，得到轉(zhuǎn)基因植物的步驟；所述轉(zhuǎn)基因植物與所述受體植物相比粒重增加。上述方法中，編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：b1)編碼區(qū)如序列表中序列1所示的DNA分子；b2)核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；b3)與b1)或(b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的DNA分子；b4)在嚴格條件下與(b1)或(b2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述蛋白質(zhì)GmGATA44的DNA分子。其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因組DNA或重組DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。其中，序列表中序列1由945個核苷酸組成，序列表中序列1的核苷酸編碼序列表中序列2所示的氨基酸序列。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種植物育種方法。本發(fā)明所提供的植物育種方法，可包括如下步驟：增加植物中所述蛋白質(zhì)GmGATA44的含量或活性，從而增加植物的粒重。上述任一所述方法中，所述粒重可為百粒重。上述任一所述方法中，所述植物可為如下c1)至c6)中的任一種：c1)雙子葉植物；c2)單子葉植物；c3)豆科植物；c4)大豆；c5)大豆品種天隆一號；c6)大豆耐低氮品種坡黃。實驗證明，將編碼蛋白質(zhì)GmGATA44的基因?qū)胩炻∫惶?，獲得的轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆。與天隆一號相比，轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的T3代種子的百粒重顯著提高。因此，蛋白質(zhì)GmGATA44在調(diào)控大豆粒重中具有重要的應(yīng)用價值。附圖說明圖1為組織表達模式分析結(jié)果。圖2為亞細胞定位分析結(jié)果。圖3為轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的檢測結(jié)果。圖4為百粒重的統(tǒng)計結(jié)果。具體實施方式下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。大豆耐低氮品種坡黃記載于如下文獻中：郝青南，王程，陳水蓮等.大豆苗期氮高效和氮敏感資源的篩選研究.大豆科學(xué)，2011，30(6)：910-920。大豆耐低氮品種坡黃在下文中簡稱坡黃。大豆品種天隆一號記載于如下文獻中：王瑞珍，楊中路，周新安等.高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)春大豆天隆一號的引種與推廣應(yīng)用.大豆科技，2015，5:6-10.，其母本為中豆32，父本為中豆29，為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所經(jīng)有性雜交和系譜法選育而成。大豆品種天隆一號在下文中簡稱天隆一號。載體pMD18-T為TaKaRa公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為6011。SYBRPremixExTaqII試劑盒為TaKaRa公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號RR820A。2×SYBRPremixExTaqII和50×ROXReferenceDyeII均為SYBRPremixExTaqII試劑盒中的組件。載體pBI221-GFP記載于如下文獻中：HuangWJ，SunW，LvHYetal.AR2R3-MYBtranscriptionfactorfromEpimediumsagittatumregulatestheflavonoidbiosyntheticpathway.PLoSOne，2013，8(8)：e70778.doi：10.1371.入門載體pGWC記載于如下文獻中：ChenQJ，ZhouHM，ChenJetal.UsingamodifiedTAcloningmethodtocreatentryclones.AnalyicalBiochemistry，2006，358(1):120-125.載體pB2GW7記載于如下文獻中：KarimiM，InzéD，DepickerA.GATEWAYvectorsforAgrobacterium-mediatedplanttransformation.TrendsinPlantScience，2002，7(5)：193-195.實施例1、GmGATA44基因的克隆1、提取坡黃葉片組織的總RNA，然后將該總RNA用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cDNA，即得到坡黃葉片組織的cDNA。2、以步驟1得到的坡黃葉片組織的cDNA為模板，以5’-GTGTTTTTATGTGTGTTCTCCCA-3’和5’-GTGAAGCGGTGGTAGCTCTAG-3’為引物進行PCR擴增，得到約1kb的PCR擴增產(chǎn)物。3、將步驟2得到的PCR擴增產(chǎn)物和載體pMD18-T連接，得到重組質(zhì)粒pMD18-T-GmGATA44。對重組質(zhì)粒pMD18-T-GmGATA44進行測序。測序結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pMD18-T-GmGATA44中含有序列表中序列1所示的DNA分子(以下命名為GmGATA44基因)。實施例2、組織表達模式分析1、提取處于成株期的坡黃材料(坡黃根、坡黃莖、坡黃幼嫩葉片、坡黃成熟花或坡黃幼嫩種子)的總RNA，將該總RNA用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cDNA，得到坡黃材料的cDNA。2、以步驟1得到的坡黃材料的cDNA為模板，使用SYBRPremixExTaqII試劑盒檢測坡黃材料中GmGATA44基因的相對表達量(以GmACT11基因作為內(nèi)參基因)。檢測GmGATA44基因的引物為正向引物1：5’-GTCGCTTTGCAATGCCTGC-3’和反向引物1：5’-GCTTCCACAATAACTGCTCCATC-3’，目的片段如序列表中序列1自5’末端起第591位至第692位所示。檢測GmACT11基因的引物為正向引物2：5’-ATCTTGACTGAGCGTGGTTATTCC-3’和反向引物2：5’-GCTGGTCCTGGCTGTCTCC-3’。反應(yīng)體系為20μL，由10μL2×SYBRPremixExTaqII、0.6μL濃度為10μM的正向引物、0.6μL濃度為10μM的反向引物、0.4μL50×ROXReferenceDyeII、2μL坡黃材料的cDNA和6.4μL無核酸酶水組成。熒光定量PCR檢測的反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性15min；95℃變性10sec，60℃退火15sec，72℃延伸20sec，40個循環(huán)。以坡黃幼嫩葉片中GmGATA44基因的相對表達量作為1，其它坡黃材料中GmGATA44基因的相對表達量見圖1(1為坡黃幼嫩葉片，2為坡黃根，3為坡黃莖，4為坡黃成熟花，5為坡黃幼嫩種子)。結(jié)果表明，GmGATA44基因在坡黃幼嫩葉片中的相對表達量較高，在坡黃根、坡黃莖、坡黃成熟花和坡黃幼嫩種子中的相對表達量均極低。實施例3、亞細胞定位分析一、重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44的構(gòu)建1、以實施例1步驟3得到的重組質(zhì)粒pMD18-T-GmGATA44為模板，以5’-CGGGATCCATGATTCCAGCCTATCGCCA-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶BamHI的識別位點)和5’-GCGTCGACATGAACAAGGCCATAAGATAA-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶SalI的識別位點)為引物進行PCR擴增，得到約960bp的PCR擴增產(chǎn)物。2、用限制性內(nèi)切酶BamHI和SalI雙酶切步驟1得到的PCR擴增產(chǎn)物，回收約960bp的片段甲。3、用限制性內(nèi)切酶BamHI和SalI雙酶切載體pBI221-GFP，回收約4.5kb的載體骨架甲。4、將片段甲和載體骨架甲連接，得到重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44。根據(jù)測序結(jié)果，對重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44進行結(jié)構(gòu)描述如下：向載體pBI221-GFP的BamHI和SalI酶切位點之間插入核苷酸序列是序列表中的序列1自5’末端起第1位至第942位所示的DNA分子。二、亞細胞定位分析1、用鑷子剝?nèi)⊙笫[內(nèi)表皮，分割成小塊(1cm×1cm)，然后置于MS固體培養(yǎng)基上。2、完成步驟1后，采用基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法(ZhengLL，GaoZ，WangJ，etal.MolecularcloningandfunctionalcharacterizationofanovelCBL-interactingproteinkinaseNtCIPK2inthehalophyteNitrariatangutorum[J].GeneticsandMolecularResearch，2014，13(3):4716-4728.)，將重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮。3、完成步驟2后，取所述洋蔥內(nèi)表皮，置于MS固體培養(yǎng)基上25℃暗培養(yǎng)24h；然后置于載玻片上，在激光共聚焦顯微鏡下觀察；待觀察到熒光后，在所述洋蔥內(nèi)表皮上滴加0.5mol/L的NaCl水溶液(目的為進行質(zhì)壁分離)，然后繼續(xù)在激光共聚焦顯微鏡下觀察。按照上述方法，將重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44替換為載體pBI221-GFP，其它步驟均不變，在共聚焦顯微鏡下觀察，作為對照。實驗結(jié)果見圖2(a和b為白光，c和d為紫外光，e和f為白光和紫外光的疊加，a、c和e為重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44，b、d和f為載體pBI221-GFP)：載體pBI221-GFP轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮后，在細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜上均可觀察到綠色熒光；重組質(zhì)粒pBI221-GmGATA44轉(zhuǎn)化洋蔥內(nèi)表皮后，僅在細胞核上觀察到綠色熒光。因此，GmGATA44蛋白定位在細胞核。實施例4、轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的獲得及其鑒定一、重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44和重組農(nóng)桿菌的構(gòu)建1、重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44的構(gòu)建(1)以實施例1步驟3中的重組質(zhì)粒pMD18-T-GmGATA44為模板，以5’-ATGATTCCAGCCTATCGCC-3’和5’-TCAATGAACAAGGCCATAAGATA-3’為引物，進行PCR擴增，得到約950bp的PCR擴增產(chǎn)物。(2)用限制性內(nèi)切酶AhdI酶切入門載體pGWC，回收約2500bp的載體骨架1。(3)完成步驟(2)后，將步驟(1)得到的PCR擴增產(chǎn)物和載體骨架1連接，得到重組質(zhì)粒pGWC-GmGATA44。(4)完成步驟(3)后，將重組質(zhì)粒pGWC-GmGATA44和載體pB2GW7進行LR重組反應(yīng)，得到重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44。對重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44進行測序。測序結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44中含有序列表中序列1所示的DNA分子，表達序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)(以下命名為GmGATA44蛋白或蛋白質(zhì)GmGATA44)。2、重組農(nóng)桿菌的構(gòu)建將重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105，得到重組農(nóng)桿菌，命名為EHA105/pB2GW7-GmGATA44。將載體pB2GW7導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌EHA105，得到重組農(nóng)桿菌，命名為EHA105/pB2GW7。二、T0代擬轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的獲得采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化方法(PazM，MartinezJC，KalvigABetal.ImprovedcotyledonarynodemethodusinganalternativeexplantderivedfrommatureseedforefficientAgrobacterium-mediatedsoybeantransformation.PlantCellReports，2006，25(3)：206-213)，將EHA105/pB2GW7-GmGATA44轉(zhuǎn)化天隆一號(轉(zhuǎn)化過程中，用除草劑進行篩選)，獲得T0代擬轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆。按照上述方法，將EHA105/pB2GW7-GmGATA44替換為EHA105/pB2GW7，其它步驟均不變，得到T0代轉(zhuǎn)空載體大豆，以下簡稱轉(zhuǎn)空載體大豆。三、擬轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的檢測1、分子水平檢測隨機選取4個T0代擬轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆植株(分別命名為植株1、植株2、植株3和植株4)進行分子水平檢測。待測大豆為植株1、植株2、植株3、植株4、天隆一號或轉(zhuǎn)空載體大豆。以待測大豆葉片組織的基因組DNA為模板，以5’-CATTTGGAGAGGACTCCGG-3’和5’-CCTATAAGAACCCTAATTCC-3’為引物進行PCR擴增，得到PCR擴增產(chǎn)物，然后進行如下判斷：如果PCR擴增產(chǎn)物中含有大小為1.4kb的條帶，則待測大豆即為轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆；如果PCR擴增產(chǎn)物中不含有大小為1.4kb的條帶，則待測大豆即為非轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆。按照上述方法，將待測大豆葉片組織的基因組DNA替換為重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44，其它步驟均不變，作為陽性對照。部分實驗結(jié)果見圖3中a(M為DNA分子Marker，1為植株1，2為植株2，3為植株3，4為植株4，5為天隆一號，6為重組質(zhì)粒pB2GW7-GmGATA44)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)空載體大豆和天隆一號的PCR擴增產(chǎn)物中均不含有大小為1.4kb的條帶，植株1、植株2、植株3和植株4的PCR擴增產(chǎn)物中均含有大小為1.4kb的條帶。2、蛋白水平檢測完成步驟1后，采用Bar免疫檢測試劑盒對植株1、植株2、植株3和植株4進行蛋白水平檢測。Bar免疫檢測試劑盒為美國Envirologix公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為AS013LS。檢測試紙條、離心管、研磨棒和EB2抽屜緩沖液均為Bar免疫檢測試劑盒中的組件。(1)處理液的獲得待測大豆為植株1、植株2、植株3、植株4、天隆一號或轉(zhuǎn)空載體大豆。取待測大豆的葉片0.1g，置于離心管中，先用力旋轉(zhuǎn)研磨棒20-30s(目的為搗碎葉片)，然后加入500μLEB2抽提緩沖液，用力旋轉(zhuǎn)研磨棒20-30s，得到處理液。(2)檢測將檢測試紙條恢復(fù)至室溫，然后垂直插入處理液(浸入深度約為0.5cm)，10min后取出放平閱讀檢測結(jié)果。(3)結(jié)果判斷檢測線及對照線一般可在3-7min內(nèi)出現(xiàn)，檢測標準為：在檢測試紙條上僅出現(xiàn)一條紫紅色條帶，即一條紫紅色質(zhì)控線，為陰性結(jié)果；在檢測試紙條上出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條為紫紅色檢測線，一條為紫紅色質(zhì)控線，此為陽性結(jié)果。凡能得到兩條紫紅色條帶的待測大豆即為轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆；凡能得到一條紫紅色條帶的待測大豆即為非轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆。部分實驗結(jié)果見圖3中b(WT為天隆一號，1為植株1，2為植株2，3為植株3，4為植株4)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)空載體大豆和天隆一號在檢測試紙條上均僅出現(xiàn)一條紫紅色條帶，植株1、植株2、植株3和植株4在檢測試紙條上均出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。上述結(jié)果表明，植株1、植株2、植株3和植株4均為轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆植株。每個轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆植株及其后代均為一個株系。將植株1及其后代的株系命名為GATA44OX-1，將植株2及其后代的株系命名為GATA44OX-2。將植株1經(jīng)連續(xù)兩代自交，獲得T2代GATA44OX-1的純合株系。將植株2經(jīng)連續(xù)兩代自交，獲得T2代GATA44OX-2的純合株系。將轉(zhuǎn)空載體大豆經(jīng)連續(xù)兩代自交后，獲得T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆。四、轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆植株的實時定量PCR檢測待測大豆為GATA44OX-1的T2代純合植株、GATA44OX-2的T2代純合植株、天隆一號或T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆。1、提取處于幼苗期的待測大豆葉片組織的總RNA，將該總RNA用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cDNA，得到待測大豆的cDNA。2、以步驟1得到的待測大豆的cDNA為模板，使用SYBRPremixExTaqII試劑盒檢測待測大豆中GmGATA44基因的相對表達量(以GmACT11基因作為內(nèi)參基因)。檢測GmGATA44基因的引物為正向引物1：5’-GTCGCTTTGCAATGCCTGC-3’和反向引物1：5’-GCTTCCACAATAACTGCTCCATC-3’，目的片段如序列表中序列1自5’末端起第591位至第692位所示。檢測GmACT11基因的引物為正向引物2：5’-ATCTTGACTGAGCGTGGTTATTCC-3’和反向引物2：5’-GCTGGTCCTGGCTGTCTCC-3’。反應(yīng)體系為20μL，由10μL2×SYBRPremixExTaqII、0.6μL濃度為10μM的正向引物、0.6μL濃度為10μM的反向引物、0.4μL50×ROXReferenceDyeII、2μL坡黃材料的cDNA和6.4μL無核酸酶水組成。熒光定量PCR檢測的反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性15min；95℃變性10sec，60℃退火15sec，72℃延伸20sec，40個循環(huán)。以天隆一號中的GmGATA44基因的相對表達量作為1，GATA44OX-1的T2代純合植株、GATA44OX-2的T2代純合植株或T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆中GmGATA44基因的相對表達量部分結(jié)果見圖3中c(WT為天隆一號)。結(jié)果表明，與天隆一號相比，GATA44OX-1的T2代純合植株和GATA44OX-2的T2代純合植株中GmGATA44基因的相對表達量顯著提高，T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆中GmGATA44基因的相對表達量無顯著差異。五、統(tǒng)計轉(zhuǎn)GmGATA44基因大豆的百粒重將30株待測大豆材料(T2代GATA44OX-1純合株系、T2代GATA44OX-2純合株系、天隆一號或T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆)種植于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所轉(zhuǎn)基因圃(株距10cm，行距40cm)，成熟后將種子收獲并晾干。隨機取100粒成熟種子作為樣品1。隨機取100粒成熟種子作為樣品2。隨機取100粒成熟種子作為樣品3。將樣品1、樣品2和樣品3先分別稱重，再取平均值，得到待測大豆材料種子的百粒重。實驗結(jié)果見圖4(WT為天隆一號)。結(jié)果表明，與天隆一號種子相比，T2代GATA44OX-1純合株系的種子和T2代GATA44OX-2純合株系的種子的百粒重顯著提高(分別增加了12.9％和33.3％)，T2代純合轉(zhuǎn)空載體大豆的種子的百粒重?zé)o顯著差異。上述結(jié)果表明，蛋白質(zhì)GmGATA44在調(diào)控大豆粒重(如百粒重)中具有重要的應(yīng)用價值。<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所<120>蛋白質(zhì)GmGATA44在調(diào)控植物粒重中的應(yīng)用<160>2<170>PatentInversion3.5<210>1<211>945<212>DNA<213>大豆（Glycinemax（L.）Merr.）<400>1atgattccagcctatcgccactcagtatcttctgttatgcctctggatcttaatgaagat60caaaaccacgagttcttcagtccaattcatcacccttcctcttcgttttcttctctatct120tcatcatatcctattctcttcaacccgccaaatcaagatcaagaagctcgatcatacgac180tgggaaacaacaaagcacttaccaagtcatgaagaagaggctgagaagattatccctact240agtggatcatggggtcactcggtggaagaaagtgagcataaggtgacagtttggagaaaa300gaagagaggaatgaaaatcttgctgaagatggttcggtgaagtggatgccttcgaagatg360agaattatgcggaagatgttggtgtccaatcaaactgatgcatacacttcagacaacaac420actacgcacaagtttgatgatcataaacaacaactgtcgtcaccgcttggaattgatgat480aacagcagcaacaactattcagacaaaagtaacaacagtattgttagggtttgttctgat540tgccacaccaccaagactcctctatggaggagtggaccaagaggccccaagtcgctttgc600aatgcctgcggaattcgacaaaggaaggcaagacgagccatggcagctgctgcggcggca660gcattgggagatggagcagttattgtggaagctgagaaatctgtgaagggaaagaagttg720cagaagaagaaagagaagaagacaagaattgagggtgcagctcagatgaaaatgaagcgg780aagcttggagttggagcaaaggcatcacaaagtagaaacaagtttggttttgaggatttg840acattgcgcttgagaaagaacttggctatgcatcaagttttccctcaggacgagaaggag900gctgcgatcctcctcatggctttatcttatggccttgttcattga945<210>2<211>314<212>PRT<213>大豆（Glycinemax（L.）Merr.）<400>2MetIleProAlaTyrArgHisSerValSerSerValMetProLeuAsp151015LeuAsnGluAspGlnAsnHisGluPhePheSerProIleHisHisPro202530SerSerSerPheSerSerLeuSerSerSerTyrProIleLeuPheAsn354045ProProAsnGlnAspGlnGluAlaArgSerTyrAspTrpGluThrThr505560LysHisLeuProSerHisGluGluGluAlaGluLysIleIleProThr65707580SerGlySerTrpGlyHisSerValGluGluSerGluHisLysValThr859095ValTrpArgLysGluGluArgAsnGluAsnLeuAlaGluAspGlySer100105110ValLysTrpMetProSerLysMetArgIleMetArgLysMetLeuVal115120125SerAsnGlnThrAspAlaTyrThrSerAspAsnAsnThrThrHisLys130135140PheAspAspHisLysGlnGlnLeuSerSerProLeuGlyIleAspAsp145150155160AsnSerSerAsnAsnTyrSerAspLysSerAsnAsnSerIleValArg165170175ValCysSerAspCysHisThrThrLysThrProLeuTrpArgSerGly180185190ProArgGlyProLysSerLeuCysAsnAlaCysGlyIleArgGlnArg195200205LysAlaArgArgAlaMetAlaAlaAlaAlaAlaAlaAlaLeuGlyAsp210215220GlyAlaValIleValGluAlaGluLysSerValLysGlyLysLysLeu225230235240GlnLysLysLysGluLysLysThrArgIleGluGlyAlaAlaGlnMet245250255LysMetLysArgLysLeuGlyValGlyAlaLysAlaSerGlnSerArg260265270AsnLysPheGlyPheGluAspLeuThrLeuArgLeuArgLysAsnLeu275280285AlaMetHisGlnValPheProGlnAspGluLysGluAlaAlaIleLeu290295300LeuMetAlaLeuSerTyrGlyLeuValHis305310當(dāng)前第1頁1 2 3