本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及用于診斷肺腺癌的長(zhǎng)鏈非編碼rna標(biāo)志物。

背景技術(shù)：

人體中編碼蛋白質(zhì)的基因大約有2-3萬個(gè)，僅占人類基因組的2％，其余98％不編碼蛋白質(zhì)的基因組dna最初被認(rèn)為是沒有功能的，是生物體中的垃圾，通常被稱為“垃圾dna”。

但目前的研究表明，這些垃圾dna大多可轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生非編碼rna(non-codingrna，ncrna)。根據(jù)成熟轉(zhuǎn)錄本大小的不同，ncrna可分為小分子ncrna(如sirna，mirna，pirna等)，中等長(zhǎng)度ncrna(70-200nt)和長(zhǎng)ncrna(longncrna，lncrna，>200nt)。

目前，ncrna領(lǐng)域研究較多的是小分子ncrna，而對(duì)lncrna的研究還處于起步階段。由于序列內(nèi)部存在過多的終止密碼子，lncrna不能被翻譯成蛋白質(zhì)，他們通常是以rna轉(zhuǎn)錄本的形式行使其生物學(xué)功能，如發(fā)育過程中的細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和類固醇代謝等。

最近的研究發(fā)現(xiàn)lncrna與肺癌、非霍杰金淋巴瘤、皮膚t細(xì)胞淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病等腫瘤疾病有關(guān)。這表明lncrna與細(xì)胞的癌變有著極為密切的聯(lián)系，lncrna在細(xì)胞增殖、分化和癌變中發(fā)揮著重要的作用。

目前，已經(jīng)克隆的人類lncrnas基因已超過4萬多個(gè)，但絕大部分lncrna的功能未知。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于診斷肺腺癌的長(zhǎng)鏈非編碼rna標(biāo)志物。本發(fā)明利用高通量測(cè)序和qpcr實(shí)驗(yàn)證明loc102724660在肺腺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于在癌旁組織中的水平，因此可以將loc102724660作為診斷肺腺癌的分子標(biāo)志物。

為了實(shí)驗(yàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼rna表達(dá)的試劑在制備肺腺癌輔助診斷或預(yù)后預(yù)測(cè)產(chǎn)品中的應(yīng)用；所述長(zhǎng)鏈非編碼rna的編碼基因geneid：102724660。

本發(fā)明的長(zhǎng)鏈非編碼rna在ncbi中的命名為loc102724660。屬于基因id：102724660編碼產(chǎn)物的loc102724660具有不同長(zhǎng)度的轉(zhuǎn)錄本，因此本發(fā)明的長(zhǎng)鏈非編碼rna-loc102724660可以是genbank登錄號(hào)xr_927947(具有681bp的長(zhǎng)度，相應(yīng)的dna序列如seqidno.1所示)、genbank登錄號(hào)xr_927946(具有2459p的長(zhǎng)度，相應(yīng)的dna序列如seqidno.4所示)、genbank登錄號(hào)xr_428245(具有2305p的長(zhǎng)度，相應(yīng)的dna序列如seqidno.5所示)、genbank登錄號(hào)xr_927948(具有688p的長(zhǎng)度，相應(yīng)的dna序列如seqidno.6所示)、genbank登錄號(hào)xr_428246(具有686p的長(zhǎng)度，相應(yīng)的dna序列如seqidno.7所示)中的任意一個(gè)或者多個(gè)。

進(jìn)一步，所述試劑包括利用sybrgreen、taqman探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、或復(fù)合探針檢測(cè)loc102724660表達(dá)量時(shí)使用的pcr擴(kuò)增引物。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述引物序列如seqidno.2和seqidno.3所示。

本發(fā)明提供了一種用于肺腺癌輔助診斷或預(yù)后預(yù)測(cè)的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括檢測(cè)loc102724660表達(dá)水平的試劑。

進(jìn)一步，所述試劑包括sybrgreen、taqman探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、或復(fù)合探針檢測(cè)loc102724660表達(dá)量時(shí)使用的pcr擴(kuò)增引物。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述引物序列如seqidno.2和seqidno.3所示。

進(jìn)一步，前面所述的產(chǎn)品包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高通量測(cè)序平臺(tái)；高通量測(cè)序平臺(tái)是一種特殊的診斷肺腺癌的工具，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，對(duì)一個(gè)人的rna表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過對(duì)比疾病患者和正常人群的rna表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)rna的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知非loc102724660的異常與肺腺癌相關(guān)也屬于loc102724660的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

所述試劑盒包括檢測(cè)loc102724660表達(dá)量的試劑，所述試劑包括與loc102724660或其dna序列結(jié)合的核酸，所述核酸包括sybrgreen、taqman探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、或復(fù)合探針檢測(cè)loc102724660表達(dá)量時(shí)使用的pcr擴(kuò)增引物。

所述芯片包括檢測(cè)loc102724660表達(dá)量的試劑，所述試劑包括與loc102724660或其dna序列結(jié)合的核酸，所述核酸包括能夠檢測(cè)loc102724660表達(dá)量的探針。

所述試紙包括檢測(cè)loc102724660表達(dá)量的試劑，所述試劑包括與loc102724660或其dna序列結(jié)合的核酸，所述核酸包括能夠檢測(cè)loc102724660表達(dá)量的探針。

本發(fā)明提供了一種用于治療肺腺癌的藥物組合物，所述藥物組合物包括loc102724660的激活劑。

進(jìn)一步，所述激活劑不受限制，只要是可以增加loc102724660表達(dá)水平或提高loc102724660功能活性即可。

所述激活劑包括loc102724660本身、促進(jìn)型mirna、促進(jìn)型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、或促進(jìn)型靶向小分子化合物。

本發(fā)明的藥物組合物可以作為醫(yī)藥單獨(dú)施用或與其它藥物一起施用?？梢耘c本發(fā)明的藥物組合物一起施用的其它藥物不受限制，只要它不損害本發(fā)明的治療性或預(yù)防性藥物組合物的效果即可，優(yōu)選的是，用于治療或預(yù)防腫瘤的藥物可以包括例如烷化劑，諸如異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰胺、達(dá)卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、白消安、丙卡巴肼、美法侖、和雷莫司??；抗代謝物，諸如依諾他濱、卡培他濱、卡莫氟、克拉屈濱、吉西他濱、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸鹽(cytarabineocfosfate)、替加氟、替加氟-尿嘧啶、替加氟吉美嘧啶奧替拉西鉀、去氧氟尿苷、羥基脲、氟尿嘧啶、氟達(dá)拉濱、培美曲塞、噴司他丁、巰嘌呤、和甲氨蝶呤；植物生物堿，諸如伊立替康、依托泊苷、索布佐生、多西他賽、nogitecan、帕利他賽、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春地辛、和長(zhǎng)春堿；抗癌抗生素，諸如放線菌素d、阿柔比星、氨柔比星、伊達(dá)比星、表柔比星、凈司他丁stimalamer、柔紅霉素、多柔比星、吡柔比星、博來霉素、培洛霉素、絲裂霉素c、和米托蒽醌；基于鉑的藥物，諸如奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、和奈達(dá)鉑；激素藥物，諸如阿那曲唑、依西美坦、雌莫司汀、炔雌醇、氯地孕酮、戈舍瑞林、他莫昔芬、地塞米松、托瑞米芬、比卡魯胺、氟他胺、潑尼松龍、磷雌酚、米托坦、甲睪酮、甲羥孕酮、美雄烷、亮丙瑞林、和來曲唑；生物反應(yīng)修飾劑，諸如干擾素α、干擾素β、干擾素γ、白介素、烏苯美司、干bcg、和香菇多糖；和分子靶向藥物，諸如伊馬替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、吉姆單抗、奧佐米星、他米巴羅汀、曲妥單抗、維a酸、硼替佐米(bortezomib)、和利妥昔單抗等。

本發(fā)明的藥物組合物可根據(jù)需要制備成各種劑型。包括但不限于，經(jīng)皮、粘膜、鼻、口頰、舌下或經(jīng)口使用的片劑、溶液劑、顆粒劑、貼劑、膏劑、膠囊劑、氣霧劑或栓劑。

本發(fā)明的藥物組合物的施用途徑不受限制，只要它能發(fā)揮期望的治療效果或預(yù)防效果即可，包括但不限于靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，眼內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，肺內(nèi)，口服，小泡內(nèi)，肌肉內(nèi)，氣管內(nèi)，皮下的，通過皮膚，通過胸膜，局部的，吸入，通過粘膜，皮膚，腸胃，關(guān)節(jié)內(nèi)，心室內(nèi)，直腸，陰道，顱骨內(nèi)，尿道內(nèi)，肝內(nèi)，瘤內(nèi)。在某些情況下，可以系統(tǒng)地給藥。在某些情況下是局部地給藥。

本發(fā)明的藥物組合物的劑量不受限制，只要獲得期望的治療效果或者預(yù)防效果即可，可以依據(jù)癥狀、性別、年齡等來恰當(dāng)?shù)拇_定。本發(fā)明的治療藥物組合物或預(yù)防藥物組合物的劑量可以使用例如對(duì)疾病的治療效果或者預(yù)防效果作為指標(biāo)來確定。

本發(fā)明還提供了前面所述的激活劑在制備治療肺腺癌的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種診斷肺腺癌的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)獲取受試者的樣品；

(2)檢測(cè)受試者樣品中l(wèi)oc102724660的表達(dá)水平；

(3)將測(cè)得的loc102724660的表達(dá)水平與受試者的患病與否關(guān)聯(lián)起來。

(4)與對(duì)照相比，loc102724660的表達(dá)水平降低，則該受試者被判斷患有肺腺癌、或者肺腺癌患者被判斷為復(fù)發(fā)、或者肺腺癌患者被判斷為預(yù)后不良。

本發(fā)明還提供了一種肺腺癌的治療方法，所述方法包括增加loc102724660表達(dá)量或者增強(qiáng)loc102724660的調(diào)節(jié)活性。

本發(fā)明還提供了一種腫瘤藥物的篩選方法，可以通過在對(duì)癌細(xì)胞添加測(cè)試藥物后或在對(duì)腫瘤模型動(dòng)物施用測(cè)試藥物后的某個(gè)時(shí)期測(cè)量loc102724660的表達(dá)水平來測(cè)定腫瘤藥物改善腫瘤預(yù)后的效果。更具體地說，當(dāng)loc102724660的表達(dá)水平在添加或施用測(cè)試藥物后升高時(shí)或者恢復(fù)正常水平時(shí)，可選擇該藥物作為改善腫瘤預(yù)后的治療藥物。

在本發(fā)明的上下文中，“診斷肺腺癌”包括判斷受試者是否已經(jīng)患有肺腺癌、判斷受試者是否存在患有肺腺癌的風(fēng)險(xiǎn)、判斷肺腺癌患者是否已經(jīng)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、判斷肺腺癌患者對(duì)藥物治療的反應(yīng)性、或者判斷肺腺癌患者的預(yù)后情況。

本文所用的“治療”涵蓋患有相關(guān)疾病或病癥的哺乳動(dòng)物例如人類中治療相關(guān)的疾病或疾病狀態(tài)，并且包括：

(1)預(yù)防疾病或疾病狀態(tài)在哺乳動(dòng)物中發(fā)生，尤其是當(dāng)該哺乳動(dòng)物易感于所述疾病狀態(tài)，但尚未被診斷出患有這種疾病狀態(tài)時(shí)；

(2)抑制疾病或疾病狀態(tài)，即阻止其發(fā)生；或者

(3)緩解疾病或疾病狀態(tài)，即使疾病或疾病狀態(tài)消退。

術(shù)語“治療”通常涉及治療人類或動(dòng)物(例如，被獸醫(yī)所應(yīng)用)，其中可達(dá)到某些預(yù)期的治療效果，例如，抑制病癥的發(fā)展(包括降低發(fā)展速度、使發(fā)展停止)、改善病癥和治愈病癥。還包括作為預(yù)防措施(例如預(yù)防)的治療。對(duì)還沒有發(fā)展為病癥但有發(fā)展為該病癥危險(xiǎn)的患者的用途，也包括在術(shù)語“治療”中。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)了一種診斷肺腺癌的分子標(biāo)志物，使用該分子標(biāo)志物可以在肺腺癌發(fā)生的早期即可作為判斷，提供了患者的生存率。

本發(fā)明的包括loc102724660的激活劑的治療藥物可用作新的肺腺癌的治療藥物。

附圖說明

圖1顯示利用qpcr檢測(cè)loc102724660的差異表達(dá)情況的統(tǒng)計(jì)圖；

圖2顯示利用qpcr檢測(cè)loc102724660過表達(dá)情況的統(tǒng)計(jì)圖；

圖3顯示loc102724660過表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖影響的統(tǒng)計(jì)圖。

具體的實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)(newyork:coldspringharborlaboratorypress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。

實(shí)施例1篩選差異表達(dá)非長(zhǎng)鏈編碼rna

1、取材：

8例原發(fā)肺腺癌患者的手術(shù)切除癌組織和癌旁組織作為實(shí)驗(yàn)樣本。所有癌組織均術(shù)后病理證實(shí)為肺腺癌。全部原發(fā)肺腺癌患者術(shù)前均未行放、化療，全部病例臨床資料完整。

2、組織rna的獲取

從組織樣品中提取totalrna，利用nanodrop2000對(duì)所提rna的濃度和純度進(jìn)行檢測(cè)，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)rna完整性，agilent2100測(cè)定rin值。單次建庫要求rna總量5ug,濃度≥200ng/μl,od260/280介于1.8～2.2之間。

3、去除rrna

細(xì)胞內(nèi)一部分(>24％)的長(zhǎng)鏈非編碼rna都是缺少傳統(tǒng)polya尾的，因此采用去除rrna的方式建庫可以獲得更加全面的lncrna信息。

4、片段化rna

illumina平臺(tái)是針對(duì)短序列片段進(jìn)行測(cè)序，去除rrna得到的mrna和lncrna是完整的rna序列，平均長(zhǎng)度可能達(dá)幾kb，因此需要對(duì)其進(jìn)行隨機(jī)打斷。利用金屬離子，可以將rna隨機(jī)斷裂成200bp左右的小片段。

5、反轉(zhuǎn)合成cdna

在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，利用隨機(jī)引物，以mrna為模板反轉(zhuǎn)合成一鏈cdna，進(jìn)行二鏈合成時(shí)，dntps試劑中用dutp代替dttp，使cdna第二鏈中堿基包含a/u/c/g。

6、連接adaptor

雙鏈的cdna結(jié)構(gòu)為粘性末端，加入endrepairmix將其補(bǔ)成平末端，隨后在3’末端加上一個(gè)a堿基，用于連接y字形的接頭。

7、ung酶消化cdna二鏈

在pcr擴(kuò)增前，用ung酶將cdna第二鏈消化，從而使文庫中僅包含cdna第一鏈。

8、illuminahiseq4000上機(jī)測(cè)序

文庫富集，pcr擴(kuò)增15個(gè)cycles；

2％瓊脂糖膠回收目的條帶(certifiedlowrangeultraagarose)；

tbs380(picogreen)定量，按數(shù)據(jù)比例混合上機(jī)；

cbot上進(jìn)行橋式pcr擴(kuò)增，生成clusters；

hiseq4000測(cè)序平臺(tái)，進(jìn)行2*150bp測(cè)序。

9、原始測(cè)序數(shù)據(jù)過濾

將序列末端(5’端和3’端)低質(zhì)量(質(zhì)量值小于20)的堿基修剪掉；

去除含n比率超過10％的reads；

10、mrna差異表達(dá)分析

分析軟件：cuffdiff:(http://cufflinks.cbcb.umd.edu/)

cuffdiff是cufflinks套件里用來計(jì)算差異表達(dá)的一個(gè)工具，cuffdiff利用tophat比對(duì)的結(jié)果，調(diào)用cufflinks計(jì)算每個(gè)基因/轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量。通常采用默認(rèn)參數(shù)運(yùn)行軟件，同時(shí)根據(jù)實(shí)際情況，如測(cè)序數(shù)據(jù)量，基因組情況對(duì)參數(shù)做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

顯著差異長(zhǎng)鏈非編碼rna的篩選條件：p-value<0.05，兩組的count平均值之差大于10。

11、結(jié)果

測(cè)序結(jié)果顯示：與癌旁組織相比，肺腺癌組織中差異表達(dá)基因?yàn)?75個(gè)，其中上調(diào)的為63個(gè)，下調(diào)的為112個(gè)。

實(shí)施例2大樣本驗(yàn)證篩選出的差異表達(dá)基因

基于前期高通量測(cè)序的結(jié)果，根據(jù)pvalue的大小，我們選擇loc102724660進(jìn)行驗(yàn)證。

1、樣本收集

按照實(shí)施例1的方法收集肺腺癌組織及其對(duì)應(yīng)的癌旁組織各45例。

2、在mrna水平上進(jìn)行驗(yàn)證

試劑：反轉(zhuǎn)錄試劑盒(ddr037a)購自寶生物工程(大連)有限公司。熒光實(shí)時(shí)(real-time)定量pcr(polymerasechainreaction)所用的sybrpremixextaq^tm(tlirnasehplus)試劑盒為日本takara公司生產(chǎn)。

2.1提取組織rna

步驟同實(shí)施例1。

2.2引物設(shè)計(jì)

根據(jù)loc102724660五種轉(zhuǎn)錄本序列，通過ncbi的引物設(shè)計(jì)工具(primerblast)設(shè)計(jì)引物，設(shè)計(jì)出的引物適用于檢測(cè)五種loc102724660轉(zhuǎn)錄本，上游引物：5’-ggttatatgatgcctatgtga-3’(seqidno.2)；下游引物：5’-ttcttcctgagtctgtgt-3’(seqidno.3)。

2.3反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

以提取的總rna(1μg)為模板，加入以下反應(yīng)體系，具體為：buffer4μl，rtenzymemix1μl，oligodtprimer(50μm)1μl，random6mers(100μm)1μl，以無rna酶的ddh2o將反應(yīng)體積補(bǔ)足為20μl。將上述混合液置于37℃15min，85℃5s，即獲得cdna。該cdna可用于lncrnareal-timepcr檢測(cè)。

2.4real-timepcr

按日本takara公司的premixextaq^tm(tlirnasehplus)試劑盒推薦的引物最適濃度(10μm)，將loc102724660引物以去離子水溶解，并建立以下反應(yīng)體系：sybrpremixextaq^tm(2×)25μl，roxreferencedye(50×)1μl，pcr上游引物(10μm)1μl，pcr下游引物(10μm)1μl，cdna4μl，滅菌ddh2o18μl。以95℃20s預(yù)變性，按95℃10s變性、60℃20s退火、70℃10s延伸過程循環(huán)40次，獲得ct值。結(jié)果釆用相對(duì)定量法，運(yùn)用公式2^-△△ct計(jì)算。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3、結(jié)果

結(jié)果如圖1所示，與癌旁組織相比，肺腺癌組織中l(wèi)oc102724660水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。

實(shí)施例3loc102724660過表達(dá)

1、質(zhì)粒構(gòu)建

通過實(shí)施例2的方法獲得loc102724660的cdna，擴(kuò)增序列如seqidno.1所示的loc102724660的cdna序列。將上述cdna序列插入到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcdna3.1中，連接獲得的重組載體pcdna3.1-loc102724660用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、肺腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

2.1細(xì)胞培養(yǎng)

將肺腺癌細(xì)胞株a549于rpmi1640培養(yǎng)基和10％胎牛血清中培養(yǎng)。

2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染

(1)轉(zhuǎn)染前一天將0.5-2*10⁵個(gè)腫瘤細(xì)胞懸浮于500μl不含抗生素的培養(yǎng)基，接種至24孔培養(yǎng)板。

(2)轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)80％-90％，準(zhǔn)備以下復(fù)合物a：將1μg質(zhì)粒dna稀釋于無血清培養(yǎng)基中，輕輕混勻；復(fù)合物b：取4μllipofectamine2000稀釋于無血清培養(yǎng)基中，混勻。

(3)將復(fù)合物a和b混合，輕輕混勻，室溫孵育。

(4)將100μl脂質(zhì)體復(fù)合體加入腫瘤細(xì)胞中，上下左右輕輕混勻，將細(xì)胞放入37℃含5％co2培養(yǎng)箱孵育5-7小時(shí)。

(5)加1ml含有2倍正常血清和抗生素濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞18-24小時(shí)。

3、利用qpcr實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcdna3.1-loc102724660的過表達(dá)情況

3.1提取細(xì)胞總rna利用常規(guī)方法進(jìn)行操作。

3.2逆轉(zhuǎn)錄

步驟同實(shí)施例2。

3.3qpcr

步驟同實(shí)施例2。

3.4結(jié)果

結(jié)果如圖2所示，pcdna3.1-loc102724660能夠成功過表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。

實(shí)施例4loc102724660的表達(dá)對(duì)肺腺癌細(xì)胞增殖能力的測(cè)定

1、步驟：

將轉(zhuǎn)染24小時(shí)后的肺腺癌細(xì)胞a549接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔2*10³個(gè)細(xì)胞/孔/200μl，細(xì)胞分組如下：

實(shí)驗(yàn)組1(對(duì)照組)：肺腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcdna3.1；

實(shí)驗(yàn)組2：肺腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcdna3.1-loc102724660。

將細(xì)胞在37℃、5％co2培養(yǎng)箱再次孵育24小時(shí)后，根據(jù)brdu細(xì)胞增殖試劑盒(chemiconinternational)的說明書，測(cè)量細(xì)胞增殖速率。

2、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)都是按照重復(fù)3次來完成的，結(jié)果數(shù)據(jù)都是以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式來表示，采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件來進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的，兩者之間的差異采用t檢驗(yàn)，認(rèn)為當(dāng)p<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3、結(jié)果

結(jié)果如圖3所示，相比于實(shí)驗(yàn)組1，實(shí)驗(yàn)組2的細(xì)胞增殖減緩，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，loc102724660表達(dá)可以抑制肺腺癌細(xì)胞增殖。

上述實(shí)施例的說明只是用于理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也將落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。

sequencelisting

<110>河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院(河北省腫瘤醫(yī)院）

<120>用于診斷肺腺癌的長(zhǎng)鏈非編碼rna標(biāo)志物

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