1.一種可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其由含有C-C糖苷鍵的核苷酸、連接堿基與熒光基團(tuán)的鄰二醇基可切割連接臂和熒光基團(tuán)三部分構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其中所述含有C-C糖苷鍵的核苷酸中的核苷酸為選自由dATP、dTTP、dGTP和dCTP組成的組中的至少之一。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其中所述鄰二醇基可切割連接臂具有如下所述的結(jié)構(gòu)式:
-(CH2)m(CHOH)2(CH2)n-
其中m和n分別為1至5的整數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其中所述鄰二醇基可切割連接臂與所述熒光基團(tuán)通過下述基團(tuán)之一進(jìn)行連接:NH-CO、CO-NH、CO-NH-NH、NH-NH-CO、NH-CO-NH或CO-NH-NH-CO。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其中所述熒光基團(tuán)選自由Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、FITC、Alexa 488、Alexa 568、JOE、ROX、羅丹明6G、四甲基羅丹明、麗絲胺、德克薩斯紅、BODIPY 576/589、BODIPY 630/650和BODIPY 650/665組成的組的至少之一。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸,其具有下式所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)式之一:
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的可完全去疤的可逆末端終止功能核苷酸在在基因測序技術(shù)中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其中所述基因測序?yàn)楦咄繙y序。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用,其包括下述具體步驟:
1)測序DNA模板及引物的固定;
2)引物延伸;
3)延伸終止;
4)堿基讀??;
5)切除連接臂及與其相連的熒光基團(tuán):先加入NaIO4溶液切斷鄰二醇基連接臂去除熒光基團(tuán),然后加入胺類催化劑將剩余的丙醛基完全去除;
6)重復(fù)步驟2-5;
7)序列判讀。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用,其中步驟5)所述的胺類催化劑為選自氨基乙酸、嗎啉和吡咯烷的至少一種。