1.一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟一、超聲水提
以水為溶劑對(duì)鹿藥根莖及根進(jìn)行超聲提取,料液比1∶20,超聲溫度30℃,超聲時(shí)間20min,超聲提取3次,合并濾液,得到鹿藥多糖水提取液;
步驟二、乙醇分級(jí)沉淀
將步驟一所得的鹿藥多糖水提取液減壓濃縮至原體積的1/10,加入無(wú)水乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%,4℃放置24h后,7000r/min離心10min,分離出上清液,將所得沉淀物用無(wú)水乙醇和丙酮反復(fù)洗滌后冷凍干燥得70%乙醇沉淀鹿藥粗多糖;向上清液中繼續(xù)加入無(wú)水乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%,按上述方法處理得到80%乙醇沉淀鹿藥粗多糖;向上清液中繼續(xù)加入無(wú)水乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%,按上述方法處理得到90%乙醇沉淀鹿藥粗多糖;
步驟三、純化
將步驟二所得的70%乙醇沉淀鹿藥粗多糖、80%乙醇沉淀鹿藥粗多糖和90%乙醇沉淀鹿藥粗多糖分別依次經(jīng)脫蛋白、離子交換色譜柱分離純化、透析、瓊脂糖凝膠柱分離純化、醇沉干燥后得到三種均一組分的鹿藥多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,所得的三種均一組分的鹿藥多糖的比旋光度分別為-45°、-75°、-35°;以葡萄糖計(jì)所得的三種均一組分的鹿藥多糖中的多糖含量分別為89.22%、93.05%、59.83%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,步驟三中,所述脫蛋白的具體步驟為:
將步驟二所得的70%乙醇沉淀鹿藥粗多糖、80%乙醇沉淀鹿藥粗多糖和90%乙醇沉淀鹿藥粗多糖分別配制成濃度為2mg/mL的多糖水溶液,采用Sevag法分別除蛋白6次,經(jīng)冷凍干燥后得到三種脫蛋白的鹿藥多糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,采用Sevag法除蛋白的工藝條件為:氯仿與正丁醇的體積比為4∶1,濃度為2mg/mL的多糖水溶液與Sevag試劑的體積比為2∶1,洗脫6次,每次振蕩15min。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,步驟三中,所述離子交換色譜柱分離純化的具體步驟為:
將所得的脫蛋白的鹿藥多糖加入蒸餾水溶解至濃度為45mg/mL,以離子交換色譜柱分離,依次采用超純水及0.1~0.4mol/L NaCI溶液洗脫,采用苯酚-硫酸法檢測(cè),合并呈峰部分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,所述離子交換色譜柱為DEAE Sepharose FF色譜柱,填料95mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,步驟三中,所述透析的具體步驟為:
將所得的呈峰部分濃縮后以截留分子量4000Da的透析袋進(jìn)行透析,先以自來(lái)水透析48h,再以蒸餾水透析24h,得到截留物質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種鹿藥多糖的制備方法,其特征在于,步驟三中,所述瓊脂糖凝膠柱分離純化的具體步驟為:
將所得的截留物質(zhì)通過(guò)Sephacryl S-300色譜柱分離純化,以超純水洗脫,采用苯酚-硫酸法追蹤檢測(cè),收集呈單峰的洗脫液,洗脫液依次經(jīng)減壓濃縮、無(wú)水乙醇沉淀、冷凍干燥后得到均一組分的鹿藥多糖。
9.采用權(quán)利要求1至8中任意一項(xiàng)所述的制備方法獲得的鹿藥多糖。
10.權(quán)利要求9所述的鹿藥多糖在促進(jìn)豬小腸上皮細(xì)胞增殖方面的應(yīng)用。