1.一種利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于包括以下步驟：
一、小鼠腎細(xì)胞的制備
取小鼠腎臟上皮，剪碎，研磨后用培養(yǎng)液沖洗，收集液體，經(jīng)150目不銹鋼網(wǎng)篩沖洗并收集網(wǎng)上腎細(xì)胞，加1g/L膠原酶I消化培養(yǎng)，37℃消化，每隔5min振蕩1次，15min后加等體積含有10％牛胎血清的培養(yǎng)液終止消化，吹打分散細(xì)胞后靜置5min，1000r/min離心5min，去除上清液，加入含10％牛胎血清的培養(yǎng)液，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)至細(xì)胞長滿培養(yǎng)皿的85％以上，消化、凍存?zhèn)溆茫?/p>
二、小鼠腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜的制備
取步驟一中凍存?zhèn)溆玫膶?shù)生長期的小鼠腎細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為4×105～10×105個/mL，取0.5mL加入到插入式培養(yǎng)皿中的微孔濾膜表面上培養(yǎng)72～96h，待細(xì)胞完全融合后，得到小鼠腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜；
三、熒光素滲漏試驗
3.1檢測范圍確定實驗
將0.4mL，0.01g/100mL、0.1g/100mL、1g/100mL、10g/100mL、20g/100mL、50g/100mL用PBS緩沖液稀釋的受試物溶液到步驟二中的插入式培養(yǎng)皿中的小鼠腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜上，每個受試物濃度設(shè)置3孔平行對照，作用5～20min后，用Hank’s液輕輕沖洗細(xì)胞生長培養(yǎng)膜至其表面沒有受試物；然后再將清洗之后的帶有小鼠腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜的插入式培養(yǎng)皿放入另一含新鮮的10％牛胎血清的培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，加入5～20μg/mL的等體積的熒光素鈉溶液到插入式培養(yǎng)皿中的小鼠腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜上，37℃繼續(xù)培養(yǎng)10～30min，然后用Hank’s液輕輕清洗細(xì)胞生長膜至其表面沒有受試物，用熒光分光光度計檢測含10％牛胎血清的培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中每孔培養(yǎng)基中的熒光素量；
3.2熒光素滲漏試驗
從范圍確定實驗的結(jié)果得到使熒光素滲漏的效應(yīng)發(fā)生的大概濃度范圍，根據(jù)上述范圍進(jìn)行合理的間隔，按照幾何對數(shù)或者最少設(shè)置六個濃度梯度，從而得到精確的評估熒光素漏出量的受試物初濃度，并依次確定以下指標(biāo)：
(1)受試物各濃度對應(yīng)的3個平行孔熒光素漏出量的確定；
(2)不加受試物的溶劑對照組的熒光素漏出量的確定；
(3)無細(xì)胞生長培養(yǎng)膜的最大滲透組的熒光素漏出量的確定；
(4)受試物濃度-熒光素漏出率標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定；
(5)使熒光素漏出率為20％時的受試物濃度的確定；
(6)接觸受試物溶液后使熒光素漏出率為20％時的腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜繼續(xù)培養(yǎng)4h、24h、36h、72h后的熒光素漏出率的確定；
3.3熒光素滲漏試驗結(jié)果分析
實驗獲得反應(yīng)小鼠腎細(xì)胞受損情況相關(guān)的三個參數(shù)：
(1)FL(％)；代表不同受試物濃度下的熒光素漏出百分比，按以下公式計算不同受試物濃度下的熒光素漏出百分比：
FL(％)＝(m-y)/(z-y)×100
m表示受試物各濃度對應(yīng)的3個平行孔熒光素漏出量的平均值，y表示同一塊插入式培養(yǎng)皿不加受試物的溶劑對照組的熒光素鈉漏出量的平均值，z表示同一塊插入式培養(yǎng)皿無細(xì)胞生長培養(yǎng)膜的最大滲透組的熒光素漏出量的平均值；
(2)D值：表示使不同百分比的熒光素漏出的受試物濃度，根據(jù)不同受試物濃度值和其相對應(yīng)的熒光素漏出百分比，統(tǒng)計得出受試物濃度-熒光素漏出百分比標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后得出使20％的熒光素漏出的受試物實際濃度，即D20值；
(3)FL20HY：表示接觸受試物后引起20％熒光素漏出的腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜在含10％牛胎血清的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)Y小時后的熒光素漏出百分比在標(biāo)準(zhǔn)曲線上所對應(yīng)的受試物濃度，根據(jù)3.2得到的熒光素漏出率為20％時的腎細(xì)胞生長培養(yǎng)膜繼續(xù)培養(yǎng)Y小時后的熒光素漏出率，將其代入受試物濃度-熒光素漏出百分比標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出此時對應(yīng)的受試物濃度，即FL20HY；其中Y為4、24、36或72；
四、分類和判斷
根據(jù)上述預(yù)測模型對受試物眼刺激性及程度做出判斷：
根據(jù)預(yù)測模型實驗得到的上述3個參數(shù)，
根據(jù)以下分類標(biāo)準(zhǔn)，直接判斷受試物的眼刺激性及其程度，
(1)當(dāng)FL(％)＝20時，F(xiàn)L20HY＞15g/100mL，無眼刺激性，相當(dāng)于動物實驗MMAS＜25；
(2)當(dāng)FL(％)＝20時，3g/100mL＜FL20HY≤15g/100mL，中度刺激性，相當(dāng)于25＜MMAS＜55，
(3)當(dāng)FL(％)＝20時，F(xiàn)L20HY≤3g/100mL，重度刺激性，相當(dāng)于動物實驗MMAS＞55。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟一中所述的小鼠為AKR/J小鼠或BALB/c小鼠。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟一、二、三中所述的培養(yǎng)液均為無酚紅低糖含谷氨酰胺DMEM培養(yǎng)液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟二中所述的插入式培養(yǎng)皿孔徑為0.4μm，微孔濾膜直徑為6.4mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟二中所述的細(xì)胞完全融合是指細(xì)胞鋪滿整個微孔濾膜表面。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟三中所述的PBS緩沖液含有以下組分：以1L緩沖液計算，氯化鈉8.0g、氯化鉀0.2g、無水磷酸氫鉀0.2g、無水磷酸氫二鈉1.15g、葡萄糖1.8g、剩余為去離子水，該PBS緩沖液pH為7.2～7.4。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
步驟三中所述的Hank′s液為無酚紅含鈣鎂Hank’s平衡鹽溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
本發(fā)明步驟三中所述的檢測熒光素量采用熒光分光光度計檢測，檢測條件為激發(fā)光波長485nm，發(fā)射光波長530nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的利用小鼠腎細(xì)胞系統(tǒng)評價眼刺激性的方法，其特征在于：
本發(fā)明步驟三的3.1中所述受試物作用時間為10～15min；
本發(fā)明步驟三中3.2中繼續(xù)培養(yǎng)Y小時為繼續(xù)培養(yǎng)4h。