本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物的合成技術領域，具體涉及一類新型的靛紅腙雜合4-芳氨基-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉合成的靛紅衍生物，以及它們的制備方法和它們在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術：
癌癥是人類健康的威脅因素之一，傳統(tǒng)的抗癌藥多是細胞毒類藥物，這類藥物在殺傷癌細胞的同時，對正常的人體組織細胞也有極大的毒副作用，為了提高藥物對癌細胞作用的選擇性，人們已開始關注針對關鍵基因、調控分子和特定細胞受體為治療靶點的藥物的研究。
研究表明，當酪氨酸激酶過度活化時，細胞生長調控失去控制，死亡受阻，始終處于增殖狀態(tài)，最后導致惡性腫瘤的發(fā)生。因此，抑制酪氨酸激酶活性，阻斷其活化的信號傳導路徑成為治療腫瘤的新途徑之一。
表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑在腫瘤的治療中已發(fā)揮了重要的作用，其通過與ATP競爭性地與受體酪氨酸激酶結合，使酪氨酸激酶的催化活性和酪氨酸激酶自身酪氨酸殘基的磷酸化受到抑制，從而阻斷下游信號轉導通路，進而抑制腫瘤細胞增殖，加速腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤浸潤和轉移。
人們已經發(fā)現了一些小分子表皮生長因子(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑，如黃酮、異黃酮類、喹唑啉類、喹啉類、嘧啶類、吲哚類和吲唑類等化合物。其中，活性較高、選擇性較好的一類小分子酪氨酸激酶抑制劑是4-芳氨基喹唑啉類化合物，如已上市的抗腫瘤化合物拉帕替尼(Lapatinib)、埃羅替尼(Erlotinib，Tarceva)、吉非替尼(Gefitinib，Iressa)和EKB-2569等。這些藥物在腫瘤的治療中發(fā)揮了良好的作用，但長期使用后會產生明顯的藥物耐受性，給腫瘤的后期治療帶來困難。因此，發(fā)現新的抗腫瘤化合物以降低藥物的毒副作用和克服腫瘤細胞的耐藥性仍具有重要的意義。近年來，以EGFR酪氨酸激酶為作用靶點設計合成抗腫瘤藥物成為研究熱點之一。其中，拉帕替尼作為一種新型的可逆酪氨酸激酶抑制劑，在治療多種惡性腫瘤尤其是晚期的乳腺癌方面具有較好的療效。靛紅是一個很重要的醫(yī)藥中間體與原料，靛紅及其衍生物具有多種生理活性。C-3取代靛紅衍生物的生理活性包括抗癌、抗病毒、抗驚厥等。當C-3為腙或亞胺取代時，可以抑制酪氨酸激酶活性。藥效基團的雜合是一種有效的、常用的發(fā)現新藥物的方法，兩個或兩個以上的生物活性片段的雜合，有互補的藥效功能或不同的作用機制，通常表現出協(xié)同的作用。
技術實現要素：
本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一類新的具有抗腫瘤活性的靛紅腙雜合4-芳氨基-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉合成的靛紅衍生物，以及這些化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
解決上述技術問題所采用的技術方案是：這類靛紅衍生物的結構式如下所示：
式中X代表氫、氟、氯、溴、碘中的任意一種，Ar代表3-乙炔基苯基、4-(E)-丙烯基苯基、3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯基、3-氯-4-氟苯基中的任意一種。
上述靛紅衍生物優(yōu)選下列化合物A～L中的任意一種：
A：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)吲哚啉-2-酮
B：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氟吲哚啉-2-酮
C：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氯吲哚啉-2-酮
D：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯基苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)吲哚啉-2-酮
E：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯基苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氟吲哚啉-2-酮
F：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯基苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氯吲哚啉-2-酮
G：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)吲哚啉-2-酮
H：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氟吲哚啉-2-酮
I：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氯吲哚啉-2-酮
J：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)吲哚啉-2-酮
K：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氟吲哚啉-2-酮
L：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)-5-氯吲哚啉-2-酮
上述靛紅衍生物的合成路線和合成方法如下：
將式2所示的靛紅腙與式1所示的4-芳氨基-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉在醋酸存在下縮合即可得到式3所示的靛紅衍生物。
本發(fā)明靛紅腙雜合4-芳氨基-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉合成的靛紅衍生物在制備抗腫瘤藥物中的用途，其按常規(guī)藥用制劑，與藥學上可接受的載體按照各種制劑的常規(guī)制備工藝制成，可以是片劑、顆粒劑、膠囊劑等。
上述的腫瘤為人皮膚鱗狀癌細胞A431、人肺癌細胞NCI-H1975、人結腸癌細胞SW480、人非小細胞肺癌細胞A549中的任意一種。
本發(fā)明靛紅衍生物的合成方法簡單，對腫瘤細胞的增殖具有良好的抑制作用，可用于制備抗腫瘤藥物，既可以獨自用藥，也可與其它藥物聯合使用；其中化合物A、B、C、G、H對人皮膚鱗狀細胞癌細胞株A431的增殖具有明顯的抑制作用，其效果明顯優(yōu)于臨床使用的抗腫瘤藥物拉帕替尼。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明的保護范圍不僅限于這些實施例。
下面實施例中所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉、4-[4-(E)-丙烯基苯氨基]-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉及4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉參考文獻[化學通報，2016,79(4):360～365]中的方法合成；4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基]-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉參考文獻[中國藥科大學學報,2010,41(4):317～320]中的方法合成。其它所用試劑均為分析純?；衔锝Y構確定所用的核磁共振數據由Bruker Avance300、400、600超導核磁共振儀測定，TMS作為內標；紅外光譜數據采用Nicolet170SXFT-IR紅外光譜儀測定；熔點采用X-6顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)測定(溫度未進行校正)；質譜數據用Bruker Esquire3000plus質譜儀測定。
實施例1
合成化合物A
將0.17g(0.5mmol)4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉、0.08g(0.5mmol)(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮、0.5mL醋酸、10mL乙醇和2mL N,N-二甲基甲酰胺加入到反應瓶中，在80℃下回流反應6小時，反應完后冷卻至室溫，抽濾，用乙醇沖洗濾餅，將濾餅在二甲亞砜中重結晶，得到紅色固體即化合物A0.18g，其收率為73.5％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C29H18N6O2)m/z[M+H]+:483.1581(計算值483.1569)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.85(s,1H),10.15(s,1H),9.02(s,1H),8.68(s,2H),8.35(d,J＝8.0Hz,2H),8.08(s,1H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.59(d,J＝3.4Hz,1H),7.47(d,J＝4.6Hz,1H),7.42(d,J＝4.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(d,J＝7.9Hz,1H),4.25(s,1H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ(ppm):165.2,158.2,157.2,155.4,152.1,151.9,150.4,149.7,145.3,139.8,134.1,130.1,129.8,129.4,129.3,127.3,127.2,125.3,123.1,122.9,122.8,122.3,119.5,117.2,116.0,111.1,111.0,83.8,81.1；IR νmax(KBr)cm-1:3545,3417,3235,2062,1639,1617,1487,1396,1174,623。
實施例2
合成化合物B
在實施例1中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物B 0.18g，其收率為72.6％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C29H17FN6O2)m/z[M+H]+:501.1491(計算值501.1475)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.83(s,1H),10.05(s,1H),9.00(s,1H),8.67(s,1H),8.63(s,1H),8.26(d,J＝8.8Hz,1H),8.07(d,J＝9.2Hz,2H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H),7.85(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(d,J＝3.3Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,2H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),6.86(dd,J＝8.4,4.1Hz,1H),4.20(s,1H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.8,158.4,157.7,157.0,155.9(d,1JC-F＝277.9Hz),152.3,151.6(d,4JC-F＝2.5Hz),150.0,149.1,141.1,139.2,129.0,128.9,128.8,127.0,126.7,125.2,122.9,121.8,120.0,119.9,119.2,117.2(d,3JC-F＝9.2Hz),116.2(d,2JC-F＝26.4Hz),115.4(d,2JC-F＝12.5Hz),111.6(d,3JC-F＝7.7Hz),110.6,83.4,80.6；IRνmax(KBr)cm-1:3563,3416,3235,2061,1718,1698,1616,1519,1035,624。
實施例3
合成化合物C
在實施例1中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物C 0.20g，其收率為76.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C29H17ClN6O2)m/z[M+H]+:517.1182(計算值:517.1180)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.90(s,1H),9.96(s,1H),8.93(s,1H),8.64(s,1H),8.59(s,1H),8.33(s,1H),8.24(d,J＝8.7Hz,1H),8.00(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,1H),7.50(s,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,1H),7.37(s,2H),7.26(d,J＝7.4Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),4.20(s,1H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.5,157.8,157.0,155.6,155.0,152.4,150.0,149.1,143.5,143.4,139.2,132.9,129.1,128.9,127.1,127.0,126.7,126.1,126.0,125.4,123.2,121.8,119.3,118.0,115.5,112.2,110.5,83.4,80.6；IRνmax(KBr)cm-1:3555,3416,3235,2062,1719,1638,1616,1396,1174,623。
實施例4
合成化合物D
在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉用等摩爾的4-[4-(E)-丙烯基苯氨基]-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物D 0.18g，其收率為72.1％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C30H22N6O2)m/z[M+H]+:499.1900(計算值:499.1882)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.85(s,1H),10.08(s,1H),8.98(s,1H),8.64(s,1H),8.60(s,1H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,2H),7.56(d,J＝3.3Hz,1H),7.41(d,J＝8.6Hz,3H),7.36(d,J＝7.7Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.41(d,J＝15.9Hz,1H),6.25(dq,J＝13.3,6.1Hz,1H),1.86(d,J＝6.1Hz,3H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.8,164.3,157.7,156.7,154.9,151.6,151.1,149.6,149.2,144.9,137.6,133.6,133.3,130.4,129.6,129.1,128.5,126.7,125.8,124.5,122.7,122.5,122.4,122.0,119.1,116.8,115.5,110.6,110.4,18.2；IRνmax(KBr)cm-1:3416,3001,2062,1617,1518,1487,1397,1175,787,622。
實施例5
合成化合物E
在實施例4中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例4相同，得到紅色固體即化合物E 0.20g，其收率為75.8％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C30H21FN6O2)m/z[M+H]+:517.1795(計算值:517.1788)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.84(s,1H),10.00(s,1H),9.00(s,1H),8.67(s,1H),8.58(s,1H),8.25(d,J＝9.9Hz,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.59(d,J＝3.6Hz,1H),7.42(d,J＝3.7Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),6.89(dd,J＝8.5,4.2Hz,1H),6.41(d,J＝15.7Hz,1H),6.26(dq,J＝13.3,6.3Hz,1H),1.86(d,J＝6.3Hz,3H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.8,158.4,157.6,157.1,156.8,155.1,152.3,150.7(d,1JC-F＝250.0Hz),149.1,141.2,137.6,133.2,130.4,128.7(d,2JC-F＝16.6Hz),126.6,125.7,125.6,124.5,122.9,122.6(d,2JC-F＝17.3Hz),120.0,119.9,119.3,117.2(d,3JC-F＝9.1Hz),116.2,116.1,115.5,111.6(d,3JC-F＝8.1Hz),110.5,18.2；IRνmax(KBr)cm-1:3417,2986,2062,1617,1486,1397,1173,1003,787,622。
實施例6
合成化合物F
在實施例4中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例4相同，得到紅色固體即化合物F 0.21g，其收率為79.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C30H21ClN6O2)m/z[M+H]+:533.1509(計算值:533.1493)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.96(s,1H),10.03(s,1H),9.04(s,1H),8.71(s,1H),8.59(s,1H),8.41(s,1H),8.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.85(d,J＝8.2Hz,1H),7.78(d,J＝6.7Hz,2H),7.58(s,1H),7.43-7.38(m,4H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(d,J＝15.8Hz,1H),6.28(dd,J＝15.8,5.6Hz,1H),1.87(d,J＝5.6Hz,3H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.5,157.8,157.1,152.3,149.9,149.0,143.5,141.3,140.7,140.2,133.3,132.9,130.4,129.1,128.8,128.6,126.6,126.1,125.7,124.5,123.5,122.8,122.7,122.6,119.5,119.4,118.1,112.2,110.4,18.2；IRνmax(KBr)cm-1:3448,3409,2990,1722,1614,1515,1394,1178,786,624。
實施例7
合成化合物G
在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉用等摩爾的4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基]-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物G 0.21g，其收率為69.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C34H22ClFN6O3)m/z[M+H]+:617.1512(計算值:617.1504)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.85(s,1H),10.07(s,1H),8.97(s,1H),8.65(s,1H),8.61(s,1H),8.31(m,2H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.79(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.57(d,J＝3.6Hz,1H),7.49(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.9Hz,1H),7.43(d,J＝3.6Hz,1H),7.36–7.33(m,2H),7.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.19(t,J＝8.5Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),5.27(s,2H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):165.3,162.7(d,1JC-F＝243.8Hz),158.2,157.3,155.5,152.1,151.7,150.4,150.3,149.7,145.4,140.1(d,3JC-F＝7.5Hz),134.1,133.6,131.0(d,3JC-F＝8.3Hz),130.2,129.7,129.3,127.2,124.5,123.8(d,4JC-F＝2.5Hz),122.9,122.7,121.6,119.4,117.3,115.9,115.2(d,2JC-F＝20.8Hz),114.8,114.7,114.5(d,2JC-F＝22.0Hz),111.1,110.9,69.9；IR νmax(KBr)cm-1:3550,3416,2062,1638,1617,1487,1396,1174,787,622。
實施例8
合成化合物H
在實施例7中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例7相同，得到紅色固體即化合物H 0.23g，其收率為72.1％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C34H21ClF2N6O3)m/z[M+H]+:635.1418(計算值:635.1410)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.85(s,1H),9.99(s,1H),8.95(s,1H),8.66(s,1H),8.58(s,1H),8.24(d,J＝8.6Hz,1H),8.08(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.6Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.57(d,J＝3.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.3Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H)，7.40(d,J＝3.3Hz,1H),7.36–7.30(m,2H),7.26(d,J＝9.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.9Hz,1H),6.88(dd,J＝8.4,4.2Hz,1H),5.25(s,2H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.8,162.2(d,1JC-F＝243.6Hz),158.4,157.6,157.0,155.9(d,1JC-F＝265.2Hz),152.3,151.7,149.8,149.7,149.1,141.1,139.6(d,3JC-F＝7.9Hz),132.9,130.5(d,3JC-F＝8.4Hz),128.8(d,2JC-F＝30.9Hz),126.6,124.2,123.3(d,4JC-F＝2.6Hz),122.9,122.4,121.1,120.0(d,4JC-F＝2.6Hz),119.9(d,2JC-F＝24.1Hz),119.1,117.2(d,3JC-F＝9.6Hz),116.3,115.3,114.7(d,2JC-F＝21.1Hz),114.2,114.0(d,2JC-F＝21.9Hz),111.5(d,3JC-F＝7.4Hz),110.4,69.4；IR νmax(KBr)cm-1:3549,3416,3235,2062,1638,1617,1488,1396,1174,623。
實施例9
合成化合物I
在實施例7中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例7相同，得到紅色固體即化合物I 0.26g，其收率為78.7％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C34H21Cl2FN6O3)m/z[M+H]+:651.1118(計算值:651.1114)；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.93(s,1H),9.93(s,1H),8.92(s,1H),8.66(s,1H),8.55(s,1H),8.36(s,1H),8.24(d,J＝9.1Hz,1H),7.97(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(d,J＝3.4Hz,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.47(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.37–7.33(m,2H),7.26(d,J＝8.9Hz,1H),7.19(t,J＝8.9Hz,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),5.26(s,2H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.5,162.2(d,1JC-F＝243.7Hz),157.7,157.0,155.0,152.5,151.6,149.8,148.9,143.4,139.6(d,3JC-F＝7.4Hz),132.9,132.7,130.5(d,3JC-F＝8.4Hz),129.2,128.6(d,2JC-F＝24.2Hz),126.5,126.0,124.3,123.4,123.3(d,4JC-F＝2.6Hz),122.5,121.0,119.2,118.0,115.3,114.7(d,2JC-F＝20.8Hz),114.3,114.2,114.1,113.9,112.0,110.3,69.4；IR νmax(KBr)cm-1:3551,3417,2062,1617,1487,1397,1174,1002,787,622。
實施例10
合成化合物J
在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉用等摩爾的4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(5-甲?；秽?2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物J 0.21g，其收率為82.5％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C27H16ClFN6O2)m/z[M+H]+:511.1101(計算值:511.1085)；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):10.85(s,1H),10.22(s,1H),9.01(s,1H),8.67(s,2H),8.36(d,J＝9.2Hz,1H),8.32(d,J＝7.9Hz,1H),8.19(d,J＝7.5Hz,1H),7.92(t,J＝9.8Hz,2H),7.59(d,J＝3.2Hz,1H),7.51(d,J＝9.2Hz,1H),7.47(d,J＝3.2Hz,1H),7.39(t,J＝7.4Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H)；13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ(ppm):164.8,157.2(d,1JC-F＝159.9Hz),154.9,152.7,151.6,151.2,150.0,149.9,149.3,144.9,136.3,133.7,129.7,129.4,128.9,127.4,127.0,126.9,123.7,122.5(d,3JC-F＝6.8Hz),122.4,122.3(d,4JC-F＝3.8Hz),118.9,116.7(d,3JC-F＝6.8Hz),116.6,115.4,110.6(d,2JC-F＝15.1Hz)；IRνmax(KBr)cm-1:3554,3508,3382,2986,1622,1498,1413,929,788,611。
實施例11
本發(fā)明吲哚啉-2-酮衍生物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用
發(fā)明人分別將上述實施例合成的化合物A～J作為受試化合物，測試其對對腫瘤細胞的生長抑制的作用，具體試驗情況如下：
1、細胞株
人皮膚鱗狀癌細胞A431、人肺癌細胞NCI-H1975、人結腸癌細胞SW480、人非小細胞肺癌細胞A549，均購自中國科學院上海細胞庫。
2、試劑和材料
MTT(MPBIO)、96孔細胞培養(yǎng)板(CorningCostar)、胎牛血清(Gibco)、DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium powder,high glucose,Gibco BRL,Gibco)、青霉素、鏈霉素(碧云天)、胰蛋白酶消化液(碧云天)、酶標儀(PE Enspire)。
3、實驗步驟
(1)細胞培養(yǎng)
A431、NCI-H1975、SW480和A549細胞在完全培養(yǎng)基(含有10％(v/v)胎牛血清、100units/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2mnol/L L-谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基)中，置于飽和濕度、37℃、5％CO2溫箱中培養(yǎng)。每隔2～3天傳代一次。
(2)抗腫瘤活性檢測
化合物A～J對腫瘤細胞的生長抑制活性利用MTT法進行測定。分別取對數生長期的人腫瘤細胞，用0.25％的胰蛋白酶消化液消化、離心、重懸后計數，制備細胞懸液，調整細胞懸液濃度為2.0×104～5×104個/mL。取細胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板中(100μL/孔)，置飽和濕度、37℃和5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。用完全培養(yǎng)基稀釋受試化合物至所需濃度，加入已接種人腫瘤細胞的96孔培養(yǎng)板中(100μL/孔)，DMSO終濃度為0.5％，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。將MTT加入96孔板中(20μL/孔)，培養(yǎng)箱中反應4h。吸棄孔內液體，加入DMSO(150μL/孔)，搖床上震蕩10min，使甲臜完全溶解。然后用酶標儀測定570nm波長處的吸光度(OD值)，630nm波長處的吸光度作為參比，以相應溶劑作為對照，計算細胞生長抑制率。
受試化合物對腫瘤細胞生長抑制率的計算方式如下：
腫瘤細胞生長抑制率％＝[1-(ODs-ODNC)/(ODPC-ODNC)]×100％
其中：ODS表示樣品孔的吸光度值(細胞+待測化合物+MTT)；ODPC表示對照孔的吸光度值(細胞+DMSO+MTT)；ODNC表示調零孔的吸光度值(完全培養(yǎng)基+DMSO+MTT)；ODs＝OD570s-OD630s；ODPC＝OD570PC-OD630PC；ODNC＝OD570NC-OD630NC。
受試化合物對腫瘤細胞生長抑制曲線的擬合及IC50的計算：
采用Graphpad Prism5擬合受試化合物對腫瘤細胞生長的抑制曲線，并得出IC50值。每組設置3個復孔，至少重復3次。
4、實驗結果
以臨床使用的抗腫瘤藥物拉帕替尼為陽性對照，實驗結果如表1所示。
表1受試化合物抑制腫瘤細胞增殖的IC50(μmol/L)
由表1中實驗數據可見，受試化合物A、B、C、G、H對人皮膚鱗狀細胞癌細胞株A431的增殖具有明顯的抑制作用，其效果明顯優(yōu)于拉帕替尼。同時，受試化合物A對人肺癌細胞株A549的增殖具有明顯的抑制作用，受試化合物C對人結腸癌細胞株SW480和人非小細胞肺癌細胞株NCI-H1975的增殖具有明顯的抑制作用。