本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，涉及一種具有高黏附力的植物乳桿菌。
背景技術(shù)：
：益生菌是一類對(duì)人體有益的微生物的總稱，包括乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、放線菌、酵母菌等。其中，乳酸菌是指發(fā)酵糖類并且主要產(chǎn)物為乳酸的一類革蘭氏陽性菌的總稱，廣泛分布在動(dòng)物體的腸道中，具有維持腸道菌群平衡、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用等功效。由于乳酸菌具有上述有益健康的作用，多個(gè)國家和組織將含有乳酸菌的食品視為健康食品或保健食品加以推廣，例如，日本衛(wèi)生部就將含有乳桿菌、雙歧桿菌等的食品定義為有特殊健康意義用途的食品。目前，研究界普遍認(rèn)為乳酸菌在維持腸道菌群平衡方面的作用是通過抑制有害菌生長(zhǎng)來實(shí)現(xiàn)的。有研究表明，乳酸菌能夠利用自身與腸道內(nèi)壁黏液或上皮細(xì)胞的黏附作用來定植在腸道內(nèi)壁上，從而占據(jù)黏附位點(diǎn)，并且通過空間位阻作用阻止有害菌在腸道內(nèi)壁上的黏附和生長(zhǎng)。因此，乳酸菌的黏附力高低是評(píng)價(jià)乳酸菌的對(duì)腸道的有益作用的重要指標(biāo)，其黏附力越高，則越容易在腸道內(nèi)壁上定植，發(fā)揮更好的保健作用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了提供一種具有高黏附力的乳酸菌，本發(fā)明通過菌種分離和篩選，得到了一種具有高黏附力的植物乳桿菌AR326，其特征在于，該植物乳桿菌菌株AR326在中國普通微生物菌種保藏管理中心進(jìn)行保藏，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.12469。進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了上述植物乳桿菌菌株在發(fā)酵制備活性乳酸菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。發(fā)明作用與效果根據(jù)本發(fā)明提供的植物乳桿菌菌株，由于具有高黏附力，能夠在腸道中很好地定植，抑制腸道有害菌的生長(zhǎng)，因此具有的腸道菌群調(diào)節(jié)作用，有利于機(jī)體健康。具體實(shí)施方式以下結(jié)合實(shí)施例來說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。下述實(shí)施例中所使用的HT-29細(xì)胞為人結(jié)腸癌細(xì)胞，由江南大學(xué)饋贈(zèng)；泡菜及黃酒酒糟從市售食品中取樣；其他試劑從普通商業(yè)途徑獲得，未提及的實(shí)驗(yàn)條件均參照常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件或供應(yīng)商建議。<實(shí)施例>首先，從泡菜及黃酒酒糟中采樣，經(jīng)過富集、初篩，得到了19株乳酸菌。然后，對(duì)上述19株乳酸菌進(jìn)行篩選，具體步驟如下：步驟1，制備HT-29細(xì)胞爬片。在12孔板的每個(gè)孔中都放入無菌的空白細(xì)胞爬片，加入2ml1640完全培養(yǎng)基，在每個(gè)孔中加入0.5ml濃度為1×106個(gè)/ml的HT-29細(xì)胞懸液，過夜培養(yǎng)，得到含有80％～90％細(xì)胞的HT-29細(xì)胞爬片。其中，1640完全培養(yǎng)基的配方為1640培養(yǎng)基:胎牛血清＝9:1。步驟2，制備19株菌株的菌懸液，每種菌株的菌懸液制備步驟如下：將菌接種到MRS培養(yǎng)基中制備種子液，再按1％(體積比)的接種量將種子液接種入100mlMRS培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)12小時(shí)后，在3000G條件下離心10分鐘，棄去上清并用PBS緩沖液洗兩次，再用PBS緩沖液將菌體沉淀懸浮，加入適量PBS緩沖液調(diào)節(jié)菌體濃度，直到菌懸液吸光度為0.6。此時(shí)，菌體濃度約為109cfu/ml。其中，MRS培養(yǎng)基的制作方法為：取酪蛋白胨10g、牛肉浸出粉10g、酵母浸粉5g、葡萄糖20g、CH3COONa·3H2O8.3g、檸檬酸氫二胺2g、MnSO4·H2O0.25g、K2HSO42g、MgSO4·7H2O0.58g、吐溫-801mL、1000mL去離子水，混合溶解后115℃滅菌20min。PBS緩沖液的制作方法為：取NaCl8g、KCl0.2g、Na2HPO41.56g、KH2PO40.2g，去離子水溶解后定容至1000ml，調(diào)PH至7.4，115℃滅菌20min。步驟3，將步驟2制備得到的19種菌株的菌懸液各取1ml，分別加入步驟1得到的12孔板的孔中，再向每個(gè)孔中加入1ml1640完全培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)2小時(shí)。PBS緩沖液洗兩次后，加入適量無水甲醇固定20分鐘，用革蘭氏染色法進(jìn)行染色，取出細(xì)胞爬片，1000倍顯微鏡下隨機(jī)選擇20個(gè)視野進(jìn)行拍照，結(jié)果如表1所示。表1不同菌株的黏附性能菌株名稱每百個(gè)細(xì)胞平均黏附數(shù)菌株名稱每百個(gè)細(xì)胞平均黏附數(shù)AR150160AR269411AR187254AR303136AR277205AR289151AR237234AR132372AR287218AR179267AR319384AR371322AR340366AR387390AR345206AR333298AR326430AR226291AR195253由表1可知，在每100個(gè)細(xì)胞上黏附有430個(gè)AR326菌，AR326菌株的黏附數(shù)量明顯高于其他菌株，說明在上述19個(gè)菌株中，AR326菌株具有最高的黏附力。通過利用通用引物27F和1492R擴(kuò)增AR326菌株的16SrDNA序列，測(cè)序后經(jīng)blast比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與植物乳桿菌有99％的相似性，可以確認(rèn)該菌株AR326為植物乳桿菌(LactobacillusplantarumAR326)。另外，該菌株AR326已經(jīng)于2016年5月20日在中國普通微生物菌種保藏管理中心(地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào))進(jìn)行保藏，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.12469。實(shí)施例作用與效果根據(jù)本發(fā)明提供的植物乳桿菌菌株AR326，由于具有高黏附力，其黏附力達(dá)到了每100個(gè)細(xì)胞可黏附430個(gè)菌，因此該菌株AR326能夠在腸道中很好地定植，抑制腸道有害菌的生長(zhǎng)，具有良好的腸道菌群調(diào)節(jié)作用，有利于機(jī)體健康。此外，本發(fā)明提供的植物乳桿菌菌株從泡菜和黃酒酒糟中篩選獲得，其來源均為食物，因此具有高安全性，能夠應(yīng)用在食品發(fā)酵當(dāng)中，其活菌也能夠直接食用而對(duì)人體不產(chǎn)生有害效果。當(dāng)前第1頁1 2 3