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      一種水稻懸浮單細(xì)胞培養(yǎng)基及水稻單細(xì)胞的制備方法與流程

      文檔序號(hào):12411291閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種用于水稻懸浮單細(xì)胞培養(yǎng)的AA液體培養(yǎng)基,其特征在于,所述培養(yǎng)基是由2,4-D,KT,丁香酚以及蔗糖溶解于基本培養(yǎng)基AA中而制成的;其中,丁香酚在所述培養(yǎng)基中的濃度為0.1-1mg/L。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的AA液體培養(yǎng)基,其特征在于,所述AA液體培養(yǎng)基中,2,4-D的濃度為1-5mg/L,KT的濃度為0.1-1mg/L,丁香酚的濃度為0.1-1mg/L,蔗糖的濃度為15-40g/L。

      3.一種利用權(quán)利要求1或2所述的AA液體培養(yǎng)基制備水稻懸浮單細(xì)胞的方法,其特征在于,其包括如下步驟:

      將水稻種子去殼后進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),然后切胚誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng),然后將得到的愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng)基;

      選取繼代培養(yǎng)的愈傷組織,并接種于權(quán)利要求1或2所述的AA液體培養(yǎng)基中,并將接種后的培養(yǎng)基進(jìn)行超聲振蕩處理,然后進(jìn)行震蕩培養(yǎng),即得到水稻懸浮單細(xì)胞。

      4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述制備方法還進(jìn)一步包括將去殼后水稻種子用酒精消毒,并用次氯酸鈉處理的步驟。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述次氯酸鈉的濃度為0.05-0.3mol/L。

      6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述預(yù)培養(yǎng)、誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)以及繼代培養(yǎng)所用培養(yǎng)基均為添加有2,4-D、KT、蔗糖、瓊脂的基本培養(yǎng)基LS;所述培養(yǎng)基中各組分濃度為:2,4-D1-5mg/L,KT0.05-0.3mg/L,蔗糖20-50g/L,瓊脂5-15g/L。

      7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,所述預(yù)培養(yǎng)、誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)以及繼代培養(yǎng)所用培養(yǎng)基中;所述培養(yǎng)基中各組分濃度為:2,4-D2.5-4.5mg/L,KT0.10-0.15mg/L,蔗糖30-40g/L,瓊脂7-12g/L。

      8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述預(yù)培養(yǎng)、誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)以及繼代培養(yǎng)的溫度為20-30℃。

      9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述超聲振蕩的時(shí)間為10-20min,振蕩速度為60-120rpm。

      10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于,所述震蕩培養(yǎng)的溫度為20-30℃。

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