本發(fā)明涉及醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體涉及一種高純度GCG的制備方法。

背景技術(shù)：

表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是茶葉中的主要兒茶素之一，作為天然抗氧化劑和自由基清除劑，具有明顯的抗衰老、抗突變、防癌抗癌、預(yù)防心血管疾病、防輻射等多種生物學(xué)活性，廣泛運用于食品加工、醫(yī)藥保健和日用化工領(lǐng)域。然而，由于其超強的氧化及結(jié)構(gòu)特性，EGCG也極易受到環(huán)境因素的影響，如在空氣中極易氧化，堿中極易分解，在高溫條件下穩(wěn)定性差，等等。

沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG)是EGCG的一種同分異構(gòu)體，其在天然綠茶之中存在量非常少，很難直接從綠茶中直接得到純度很高的GCG，進而限制了其應(yīng)用研究的進展。不難理解，目前對于GCG的研究還是很少，絕大部分研究集中在其異構(gòu)體EGCG為主。

EGCG研究過程中發(fā)現(xiàn)，通過一些特定的條件來處理，能夠?qū)GCG有效地轉(zhuǎn)化成GCG，再通過一系列純化技術(shù)，最終得到純度高的GCG樣品，并初步發(fā)現(xiàn)以GCG構(gòu)型存在的形式下，其穩(wěn)定性好，更有利于該品種的開發(fā)與應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種高純度GCG的制備方法，通過該制備方法可以得到高純度GCG，工藝簡捷，操作方便，完全能夠滿足于工業(yè)化生產(chǎn)要求。

技術(shù)方案：為了實現(xiàn)上述目的，如本發(fā)明所述的一種高純度GCG的制備方法，包括如下步驟：

(1)以EGCG為原料，加入溶劑溶解后，轉(zhuǎn)移到恒溫攪拌器，控制溫度在60-100℃中反應(yīng)4-6天得反應(yīng)液A，放冷備用；

(2)將反應(yīng)液A在60-100℃濃縮處理至水溶液，放冷，加入乙酸乙酯進行萃取，合并水液，在60-100℃繼續(xù)濃縮除去殘留的乙酸乙酯，得溶液B，放冷備用；

(3)取溶液B，逐漸加入到裝有大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)，依次用水和不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇進行梯度洗脫，每個梯度洗脫2-10個柱體積并分別接收各部分洗脫液，選取含有目標(biāo)成分的洗脫液，濃縮至無醇味，得濃縮液C，備用；

(4)取濃縮液C，加入正丁醇進行萃取，合并正丁醇溶液，在60-100℃濃縮至浸膏，加入水在60-100℃溶解至清，放冷至析晶完全，過濾烘干并粉碎，即得高純度的GCG粉末。

作為優(yōu)選，步驟(1)所述EGCG的HPLC純度≥50％。

作為優(yōu)選，步驟(1)所述溶劑選自純化水、甲醇、乙醇或醋酸中的至少一種，原料與溶劑的重量體積比為1：(5-20)g/ml。

作為優(yōu)選，步驟(2)所述加入乙酸乙酯進行3-5次萃取，每次加入的乙酸乙酯與反應(yīng)液A體積比為0.2-2。

作為優(yōu)選，步驟(2)所述溶液B與原料體積重量比為(5-20):1ml/g。

作為優(yōu)選，步驟(3)所述樹脂型號為HPD-100、HPD-200、HPD-400、HPD-826中的至少一種。

作為優(yōu)選，步驟(3)所述不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇為5-20％乙醇、30-40％乙醇和50-90％乙醇。

作為優(yōu)選，步驟(4)所述加入正丁醇進行3-5次萃取，每次加入的正丁醇與濃縮液C體積比為0.2-2。

步驟(4)所述水與浸膏的體積重量比為(0.5-10)：1ml/g。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：

1、本發(fā)明借助恒溫攪拌器對EGCG原料進行處理，操作安全簡便，反應(yīng)溫度適中，不僅避免了因溫度過高而導(dǎo)致EGCG部分降解為其他非目標(biāo)成分，而且還保證了構(gòu)型轉(zhuǎn)化的充分性。

2、本發(fā)明充分利用了EGCG、EC、ECG等兒茶素類成分與GCG在乙酸乙酯及水中溶解性的差異，通過乙酸乙酯萃取技術(shù)，調(diào)節(jié)萃取劑比例，并控制目標(biāo)成分濃度，能夠?qū)⒋蟛糠值膬翰杷仉s質(zhì)成分有效分離到乙酸乙酯層，而將GCG保留在水溶液中，從而達(dá)到高效分離純化的目的。

3、本發(fā)明還應(yīng)用了大孔樹脂技術(shù)對目標(biāo)成分進行純化，不僅去除了絕大部分色素，還通過不同的洗脫梯度，將目標(biāo)成分純度進一步提高。

4、本發(fā)明所涉及的方法可以以等效方式進行放大，工藝簡捷，操作方便，完全能夠滿足于工業(yè)化生產(chǎn)要求。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。

實施例1

(1)稱取HPLC純度為55％的EGCG粉末50g為原料，加入10％甲醇1000ml溶解后，轉(zhuǎn)移到80℃恒溫攪拌器水浴中，共反應(yīng)5天，得反應(yīng)液A，放冷備用；

(2)將反應(yīng)液A在70℃濃縮處理至無醇味水溶液，放冷后加入乙酸乙酯進行3萃取，每次加入的乙酸乙酯與反應(yīng)液A體積比為0.5，合并水液，在70℃繼續(xù)濃縮除去殘留的乙酸乙酯，補純化水使最終溶液總體積為500ml，得溶液B，放冷備用；

(3)取溶液B，逐漸加入到裝有1000g大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)(樹脂型號為HPD-100與HPD-400按質(zhì)量1:1混合)，依次用水、20％乙醇、40％乙醇和60％乙醇進行梯度洗脫，每個梯度洗脫4個柱體積并分別接收各部分洗脫液，選取含有目標(biāo)成分的洗脫液，濃縮至無醇味，得濃縮液C，備用；

(4)取濃縮液C，加入正丁醇進行3次萃取，每次加入的正丁醇與濃縮液C體積比為0.2，合并正丁醇溶液，在80℃濃縮至浸膏，加水在80℃溶解至清，(水與浸膏的體積重量比為2ml/g)，放冷至析晶完全，過濾烘干并粉碎，即得白色粉末6.1g，經(jīng)鑒別，確定為GCG，經(jīng)HPLC檢測，其純度為92.3％。

實施例2

(1)稱取HPLC純度為60％的EGCG粉末50g為原料，加入10％乙醇250ml溶解后，轉(zhuǎn)移到60℃恒溫攪拌器水浴中，共反應(yīng)4天，得反應(yīng)液A，放冷備用；

(2)將反應(yīng)液A在60℃濃縮處理至無醇味水溶液，放冷后加入乙酸乙酯進行5次萃取，每次加入的乙酸乙酯與反應(yīng)液A體積比為0.2，合并水液，在60℃繼續(xù)濃縮除去殘留的乙酸乙酯，補純化水使最終溶液總體積為250ml，得溶液B，放冷備用；

(3)取溶液B，逐漸加入到裝有1000g大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)(樹脂型號為HPD-200)，依次用水、5％乙醇、30％乙醇和50％乙醇進行梯度洗脫，每個梯度洗脫2個柱體積并分別接收各部分洗脫液，選取含有目標(biāo)成分的洗脫液，濃縮至無醇味，得濃縮液C，備用；

(4)取濃縮液C，加入正丁醇進行5次萃取，每次加入的正丁醇與濃縮液C體積比為0.5，合并正丁醇溶液，在60℃濃縮至浸膏，加水在60℃溶解至清，(水與浸膏的體積重量比為10ml/g)，放冷至析晶完全，過濾烘干并粉碎，即得白色粉末5.4g，經(jīng)鑒別，確定為GCG，經(jīng)HPLC檢測，其純度為94.5％。

實施例3

(1)稱取HPLC純度為58％的EGCG粉末50g為原料，加入10％醋酸500ml溶解后，轉(zhuǎn)移到100℃恒溫攪拌器水浴中，共反應(yīng)6天，得反應(yīng)液A，放冷備用；

(2)將反應(yīng)液A在100℃濃縮處理至水溶液，放冷后加入乙酸乙酯進行4萃取，每次加入的乙酸乙酯與反應(yīng)液A體積比為2，合并水液，在100℃繼續(xù)濃縮除去殘留的乙酸乙酯，補純化水使最終溶液總體積為1000ml，得溶液B，放冷備用；

(3)取溶液B，逐漸加入到裝有1000g大孔吸附樹脂的層析柱內(nèi)(樹脂型號為HPD-826)，依次用水、20％乙醇、40％乙醇和90％乙醇進行梯度洗脫，每個梯度洗脫2個柱體積并分別接收各部分洗脫液，選取含有目標(biāo)成分的洗脫液，濃縮至無醇味，得濃縮液C，備用；

(4)取濃縮液C，加入正丁醇進行4次萃取，每次加入的正丁醇與濃縮液C體積比為2，合并正丁醇溶液，在100℃濃縮至浸膏，加水在100℃溶解至清，(水與浸膏的體積重量比為0.5ml/g)，放冷至析晶完全，過濾烘干并粉碎，即得白色粉末7.2g，經(jīng)鑒別，確定為GCG，經(jīng)HPLC檢測，其純度為90.3％。