本發(fā)明屬于金霉素生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基及利用該培養(yǎng)基的金霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)：

金霉素是四環(huán)素類抗生素的一種，屬于廣譜抗生素，在畜禽養(yǎng)殖中經(jīng)常加入到預(yù)混料中，提高畜禽抵抗力，金霉素生產(chǎn)一般是由金色鏈霉菌作為出發(fā)菌株，經(jīng)過發(fā)酵制得。

金霉素發(fā)酵生產(chǎn)中會產(chǎn)生大量的泡沫，泡沫的產(chǎn)生會造成大量逃液，發(fā)酵液從排氣管路或軸封逃出而增加染菌機會，泡沫嚴重時通氣攪拌也無法進行，導(dǎo)致菌體呼吸受到阻礙，菌體代謝異?；蚓w自溶。為了解決泡沫問題，目前金霉素發(fā)酵中采用的消泡劑只有豆油一種，但豆油成本高，從而使得金霉素的生產(chǎn)成本高，所以在穩(wěn)定生產(chǎn)的前提下，為了降低生產(chǎn)成本，尋找替代豆油且安全可靠的消泡劑成了當務(wù)之急。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基及利用該培養(yǎng)基的金霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法，該培養(yǎng)基中的豆油被棕櫚油替代，棕櫚油不僅消泡效果好，成本低，而且能提高金霉素發(fā)酵效能。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種金霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，每25mL發(fā)酵培養(yǎng)基水溶液中含有花生餅粉0.425-0.825g、黃豆餅粉0.275-0.475g、玉米淀粉2-4g、淀粉酶0.003-0.007g、氯化鈉0.0425-0.0825g、硫酸銨0.10-0.20g、碳酸鈣0.1-0.3g、酵母粉0.05-0.1g、硫酸鎂0.00425-0.00825g、棕櫚油1.0-1.5mL。

一種金霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法，包括以下步驟：

(1)砂土孢子制備：將金色鏈霉菌孢子接入砂土管中，干燥密封，0-10℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)母瓶斜面孢子培養(yǎng)：從砂土管中挑取適量砂土接種于母瓶斜面培養(yǎng)基上，于溫度32±1℃、濕度40-65％的恒溫室中培養(yǎng)3-5天；

(3)子瓶斜面孢子培養(yǎng)：從母瓶上挑取孢子豐滿、無白點的單菌落，加水配成孢子液并接種于子瓶斜面培養(yǎng)基上，于溫度32±1℃、濕度40-65％的恒溫室中培養(yǎng)3-5天；

(4)種子液制備：將子瓶上培養(yǎng)的孢子接種于種子培養(yǎng)基上，230-295轉(zhuǎn)/分、溫度28±2℃、濕度40-65％，搖瓶培養(yǎng)16h制得種子液；

(5)金霉素發(fā)酵液制備：將步驟(4)所得種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基上，于溫度28±2℃的條件下發(fā)酵163±3h，即得金霉素發(fā)酵液；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下：每25mL發(fā)酵培養(yǎng)基水溶液中含有花生餅粉0.425-0.825g、黃豆餅粉0.275-0.475g、玉米淀粉2-4g、淀粉酶0.003-0.007g、氯化鈉0.0425-0.0825g、硫酸銨0.10-0.20g、碳酸鈣0.1-0.3g、酵母粉0.05-0.1g、硫酸鎂0.00425-0.00825g、棕櫚油1.0-1.5mL。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明用價格較低的棕櫚油完全替代豆油作為消泡劑，不但消泡效果好，而且使金霉素發(fā)酵生產(chǎn)的產(chǎn)量提高13％，棕櫚油比豆油價格便宜750元/噸，因此本發(fā)明所述的發(fā)酵培養(yǎng)基既提高了金霉素產(chǎn)量，又降低了原料成本，實用性強。

具體實施方式

為了使本發(fā)明的技術(shù)目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作出進一步的說明。

1實施例

本發(fā)明的所述金霉素發(fā)酵生產(chǎn)方法，是由金色鏈霉菌作為出發(fā)菌株，具體工藝步驟包括砂土孢子制備、母瓶斜面孢子培養(yǎng)、子瓶斜面孢子培養(yǎng)、種子液制備、金霉素發(fā)酵液制備。

(1)砂土孢子制備：將河沙用質(zhì)量分數(shù)為10％的鹽酸浸泡并水洗，然后烘干過60目篩；將土用水浸泡后，烘干過80目篩；然后將所得砂和土按重量比2：1混合均勻，分裝于12×100mm的小試管中，裝量高度約1cm，紗布棉塞封口，間歇滅菌三次，滅菌條件為121-126℃、1小時，烘干做無菌試驗，檢查無菌后備用；

將分離篩選得到的金色鏈霉菌孢子在無菌條件下接入上述制備的砂土管中，貼上標簽，記上砂土名稱及埋藏日期，放入設(shè)有干燥劑的容器中，蓋緊密封，置于0-10℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)母瓶斜面孢子培養(yǎng)：在無菌條件下從砂土管中挑取適量砂土接種于母瓶斜面培養(yǎng)基上，要求菌落分布稍稀疏，標識后，放于溫度32±1℃、濕度40-65％的恒溫室中培養(yǎng)3-5天，孢子成熟后放于0-10℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)子瓶斜面孢子培養(yǎng)：從母瓶上挑取孢子豐滿、無白點的單菌落4-10只，加入約5mL無菌水，攪勻配成孢子液，然后用玻璃鏟挑孢子液接種于子瓶斜面培養(yǎng)基上，要求菌落分布較密，同時做露碟和肉湯無試檢查，標識后，放于溫度32±1℃、濕度40-65％的恒溫室培養(yǎng)3-5天，孢子成熟后放于0--10℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟(2)和(3)斜面培養(yǎng)基的組成為：

(4)種子液制備：在潔凈室中，用75％酒精(體積分數(shù)，下同)擦試所需接種的種子搖瓶，然后用已滅菌的接種鏟以挖塊法或刮取孢子法將子瓶中的孢子接種于種子培養(yǎng)基上，一根接種鏟接一瓶種子，將接種后的種子搖瓶扎好瓶口，放到搖瓶機上培養(yǎng)，將搖瓶機旋轉(zhuǎn)速度調(diào)至230-295轉(zhuǎn)/分、溫度28±2℃、濕度40-65％，搖瓶培養(yǎng)16h后，進行下一步的發(fā)酵；

(5)金霉素發(fā)酵液制備：將步驟(4)培養(yǎng)完成的種子搖瓶移入潔凈室，用75％酒精擦試種子搖瓶外壁，然后用已滅菌的吸管或移液器吸取種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基上，接種量為12％，扎好瓶口，上搖瓶機培養(yǎng)，將搖瓶機旋轉(zhuǎn)速度調(diào)至230-295轉(zhuǎn)/分、溫度28±2℃、濕度40-65％，經(jīng)163±3hr培養(yǎng)后，即得金霉素發(fā)酵液，測定其化學(xué)效價，對金霉素發(fā)酵液采用常規(guī)工藝做進一步的加工處理即得金霉素產(chǎn)品。

上述步驟(4)和步驟(5)中的搖瓶培養(yǎng)基組成為：

所述棕櫚油為精煉8℃棕櫚油，棕櫚油是飽和油脂，富含C16和C18的脂肪酸。

2消泡試驗

為了驗證替代的可行性，本發(fā)明進行了消泡試驗，消泡試驗中，精煉8℃棕櫚油按1：1的體積比完全替代豆油，消泡試驗過程如下：

1、實驗材料

(1)黃豆；(2)電爐、秒表、玻璃儀器等.

2、實驗方法

取定量的黃豆磨制成一定濃度的黃豆?jié){，倒入燒杯中，移至電爐石棉網(wǎng)上，用電爐加熱，控制升溫速度，適當攪拌，加熱至沸騰，待泡沫升至A毫升處，按下秒表并同時加入占干豆質(zhì)量0.1％的消泡劑(豆油或棕櫚油)，用玻璃棒攪拌，液面降至B毫升處時，即停止攪拌并記錄下時間t1，繼續(xù)觀察待泡沫再回升至A毫升處時則按停秒表，記錄下總時間(T)，總時間(T)減去(tl)為消泡時間(t)，共做三組上述消泡試驗，統(tǒng)計結(jié)果如表1所示。

表1棕櫚油和豆油的消泡效果對比

由表1可知，棕櫚油完全替代豆油消泡可行，且效果良好。

3發(fā)酵效果對比

為了探究棕櫚油對金霉素發(fā)酵液產(chǎn)量的影響，本發(fā)明在同樣的發(fā)酵生產(chǎn)條件下，分別以棕櫚油培養(yǎng)基和豆油培養(yǎng)基進行發(fā)酵生產(chǎn)，分別制備得到金霉素發(fā)酵液，并以化學(xué)方法分別測定所得發(fā)酵液中金霉素的效價，結(jié)果對比如表2所示：

表2棕櫚油培養(yǎng)基和豆油培養(yǎng)基的發(fā)酵效果對比

由表2可知，以棕櫚油完全替代豆油后的發(fā)酵培養(yǎng)基，使得金霉素發(fā)酵液的產(chǎn)量平均提高13.0％；且棕櫚油比豆油成本低廉，因此本發(fā)明所述的培養(yǎng)基不僅降低了原料成本，消泡效果良好，而且提高了金霉素的發(fā)酵生產(chǎn)水平。

最后所應(yīng)說明的是：上述實施例僅用于說明而非限制本發(fā)明的技術(shù)方案，任何對本發(fā)明進行的等同替換及不脫離本發(fā)明精神和范圍的修改或局部替換，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明權(quán)利要求保護的范圍之內(nèi)。