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      一種生物催化劑及其制備方法和應用與流程

      文檔序號:12056347閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種生物催化劑,包含NADH依賴的特異性3-奎寧酮還原酶(QNR)、葡萄糖脫氫酶(GDH)、Ni2+功能化瓊脂糖微球,其特征在于:在衍射角度2θ為27.5±0.2°、31.7±0.2°、45.5±0.2°、52.1±0.2°、66.4±0.2°、75.8±0.2°處有衍射峰。

      2.如權利要求1所述生物催化劑,其特征在于:所述生物催化劑還含有氯化鈉和磷酸二氫鈉。

      3.如權利要求1或2所述生物催化劑,其特征在于:所述生物催化劑具有泡沫樣多孔結(jié)構(gòu),孔徑為10nm-2.5μm。

      4.如權利要求1-3任一項所述生物催化劑,其特征在于:所述生物催化劑酶負載量為5-15%。

      5.如權利要求1-4任一項所述生物催化劑的制備方法,其特征在于,采用如下步驟:

      步驟(1)

      用緩沖溶液A平衡Ni2+功能化瓊脂糖微球,加入含帶組氨酸標簽的3-奎寧酮還原酶(His-QNR)和帶組氨酸標簽的葡萄糖脫氫酶(His-GDH)的細胞裂解混合上清液,用含5-15mM咪唑的緩沖溶液A稀釋成混懸液;

      步驟(2)

      將步驟(1)制備的混懸液以轉(zhuǎn)速30~100 rpm在溫度4~30°C、pH5.0~10.0的條件下連續(xù)攪拌1~3 h;然后離心,收集載酶瓊脂糖微球,用步驟(1)的緩沖溶液A洗滌;

      步驟(3)

      將洗滌后的載酶瓊脂糖微球分散在步驟(1)的緩沖溶液A中, 置于2~8 °C冰箱孵育1~5天;既得;

      所述緩沖溶液A的pH值為7.8-8.2。

      6.如權利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述緩沖溶液A含50 mM 磷酸二氫鈉和300 mM 氯化鈉。

      7.如權利要求1-4任一項所述生物催化劑在合成(R)-3-奎寧醇中的應用。

      8.一種使用1-4任一項所述生物催化劑合成(R)-3-奎寧醇的方法,其特征在于:

      將生物催化劑分散在緩沖溶液B中,加入3-奎寧酮,葡萄糖、NAD+ 和NADH,在室溫條件下,pH為7.5-8.0,以 50~150 rpm轉(zhuǎn)速振蕩,生物轉(zhuǎn)化時間為1-12h;所述緩沖溶液B的pH值為7.2-7.4。

      9.如權利要求8所述的方法,其特征在于:所述緩沖溶液B為10mM磷酸緩沖鹽溶液(PBS),含NaCl 137mM,KCl 2.7mM,Na2HPO4 10mM,KH2PO4 2mM。

      10.一種(R)-3-奎寧醇的生物催化合成方法,包括如下步驟:

      步驟(1)

      用緩沖溶液A平衡Ni2+功能化瓊脂糖微球,加入含帶組氨酸標簽的3-奎寧酮還原酶(His-QNR)和帶組氨酸標簽的葡萄糖脫氫酶(His-GDH)的細胞裂解混合上清液,用含5-15mM咪唑的緩沖溶液A稀釋成混懸液;

      步驟(2)

      將步驟(1)制備的混懸液以轉(zhuǎn)速30~100 rpm在溫度4~30°C、pH5.0~10.0的條件下連續(xù)攪拌1~3 h;然后離心,收集載酶瓊脂糖微球,用步驟(1)的緩沖溶液A洗滌;

      步驟(3)

      將洗滌后的載酶瓊脂糖微球分散在步驟(1)的緩沖溶液A中, 置于2~8 °C冰箱孵育1~5天;制得生物催化劑;

      步驟(4)

      將生物催化劑分散在緩沖溶液B中,加入3-奎寧酮,葡萄糖、NAD+ 和NADH,在室溫條件下,pH為7.5-8.0,以 50~150 rpm轉(zhuǎn)速振蕩,生物轉(zhuǎn)化時間為1-12 h;

      所述緩沖溶液A含50 mM 磷酸二氫鈉和300 mM 氯化鈉,pH值為7.8-8.2;

      所述緩沖溶液B為10mM磷酸緩沖鹽溶液(PBS),含NaCl 137mM,KCl 2.7mM,Na2HPO410mM,KH2PO4 2mM,pH值為7.2-7.4。

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