本發(fā)明屬于新藥發(fā)現(xiàn)與創(chuàng)新藥物合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物、其制備方法，以及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

新藥創(chuàng)新起源于先導物的發(fā)現(xiàn)，而基于優(yōu)勢藥效團骨架的拼合構(gòu)建先導物分子是最經(jīng)濟和有效的策略。由醛或酮與氨基硫脲類構(gòu)建的縮氨基硫脲類衍生物因其與大分子或金屬離子易產(chǎn)生配合物或螯合作用而表現(xiàn)出廣泛的藥理活性備受關(guān)注。然而，構(gòu)建縮氨基硫脲分子的醛或酮多為常見的苯類或雜環(huán)芳香類的醛和酮，而對喹啉醛，尤其是氟喹啉酮醛類形成的縮氨基硫脲類目前尚未見報道。另一方面，喹啉優(yōu)勢藥效團骨架不僅是重要天然產(chǎn)物生物堿，如奎寧和喜樹堿類的重要結(jié)構(gòu)單元，也是抗菌氟喹諾酮類藥物的藥效團骨架。同時，氟喹諾酮類藥物因有親水性的哌嗪基存在而增大其水溶性，提高生物利用度。尤其是氟喹諾酮類藥物的作用靶點—拓撲異構(gòu)酶(TOPO)也是抗腫瘤藥物的重要作用靶點，可將其抗菌活性轉(zhuǎn)化為抗腫瘤活性。為此，將氟喹諾酮C-3羧基轉(zhuǎn)化為甲酰基形成相應(yīng)的氟喹諾酮C-3醛，然后與氨基硫脲類縮合，進而實現(xiàn)喹啉骨架與縮氨基硫脲藥效團間的拼合，以期達到不同結(jié)構(gòu)藥效團間的活性疊加，從中發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤活性的氟喹諾酮候選化合物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為此，本發(fā)明的目的是提供一種N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類類衍生物，其具有抗腫瘤的作用和功效，同時提供了N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物的制備方法。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物，其化學結(jié)構(gòu)通式如式Ⅰ所示：

其中，取代基Ar為苯環(huán)、取代苯環(huán)、吡啶環(huán)、呋喃環(huán)或噻吩環(huán)。

上述的N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物，其結(jié)構(gòu)式具體如下所示：

本發(fā)明所述N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物的制備方法，以式II所示的N-甲基環(huán)丙沙星為原料制備而成；

具體制備步驟如下：

1)將式II所示的N-甲基環(huán)丙沙星與水合肼發(fā)生肼解反應(yīng)制得式III所示的N-甲基環(huán)丙沙星酰肼；

2)將式III所示的N-甲基環(huán)丙沙星酰肼與鐵氰化鉀在氯仿的氨水堿性介質(zhì)中常溫氧化反應(yīng)8～12小時，分出有機層，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，制得式IV所示的中間體N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品，直接用于下步反應(yīng)。

3)將式V所示的芳香胺類與二硫化碳縮合為式VI所示的芳氨基二硫代甲酸銨，再與氯乙酸鈉縮合得到式VII所示的S-羧甲基芳氨基二硫代甲酸酯鈉鹽，然后與水合肼發(fā)生取代反應(yīng)，經(jīng)后處理可得式VIII所示的4-芳氨基硫脲類衍生物。具體操作步驟可參考文獻(侯林艷，含氮雜環(huán)芳基縮氨基硫脲的合成及抗菌活性，碩士學位論文，河北大學，2011年.)的方法。

4)將式IV所示N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品與式VIII所示的4-芳氨基硫脲類衍生物在無水乙醇回流發(fā)生縮合反應(yīng)，待反應(yīng)完全后經(jīng)處理即可制得式I所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物；

其中，取代基Ar為苯環(huán)、取代苯環(huán)、吡啶環(huán)、呋喃環(huán)或噻吩環(huán)。

式I所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物的通用合成制備步驟為：將式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品和式VIII所示的4-芳基氨基硫脲類衍生物在無水乙醇中回流反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束，過濾并收集產(chǎn)生的固體，依次用無水乙醇和蒸餾水洗滌，干燥。粗品用DMF-乙醇混合溶劑重結(jié)晶，得式I淡黃色結(jié)晶物。

作為進一步的改進，制備式I的過程中，回流反應(yīng)所用的溶劑除了無水乙醇外，還可以選擇甲醇、正丙醇、異丙醇、異丁醇和正丁醇中的至少一種，其中優(yōu)選無水乙醇。

上述N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。具體的，所述抗腫瘤藥物為治療肝癌、胰腺癌或白血病藥物。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物基于藥效團的拼合理性藥物分子設(shè)計原理，將氟喹諾酮、亞胺席夫堿及硫脲等三種不同藥效團間的有效組合，進而設(shè)計了N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物，實現(xiàn)了不同結(jié)構(gòu)藥效團的互補和活性的疊加，從而達到了增效降毒的效果，可作為全新結(jié)構(gòu)的抗腫瘤藥物開發(fā)。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行詳細說明。

下述實施例中，所用式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品，具體經(jīng)下述步驟獲得：

1)將式II所示的N-甲基環(huán)丙沙星與水合肼發(fā)生肼解反應(yīng)制得式III所示的N-甲基環(huán)丙沙星酰肼；

具體操作步驟可參考文獻(楊勇.喹諾酮C-3[1，3，4]三唑硫醚及衍生物的合成和抗腫瘤活性研究。碩士論文，河南大學，2011年)的方法。

2)將式III所示的N-甲基環(huán)丙沙星酰肼與鐵氰化鉀在氯仿的氨水堿性介質(zhì)中常溫氧化反應(yīng)8～12小時，分出有機層，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，制得式IV所示的中間體N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品，直接用于下步反應(yīng)。具體操作步驟為：將10.0g(29.0mmol)N-甲基環(huán)丙沙星酰肼懸浮于200毫升氯仿與20毫升濃氨水(濃度22-25％)的混合溶液中，常溫下慢慢滴加含鐵氰化鉀(38.0g，115.0mmol)的水溶液120毫升，常溫攪拌反應(yīng)至原料消失(TLC檢測，V_氯仿：V_甲醇＝5:1)。分出有機層，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品，備用。

下述實施例中，所用式VIII所示的4-芳氨基硫脲類衍生物，具體經(jīng)下述步驟獲得：將式V所示的芳香胺類與二硫化碳縮合為式VI所示的芳氨基二硫代甲酸銨，再與氯乙酸鈉縮合得到式VII所示的S-羧甲基芳氨基二硫代甲酸酯鈉鹽，然后與水合肼發(fā)生取代反應(yīng)，經(jīng)后處理可得式VIII所示的4-芳氨基硫脲類衍生物。具體操作步驟可參考文獻(侯林艷，含氮雜環(huán)芳基縮氨基硫脲的合成及抗菌活性，碩士學位論文，河北大學，2011年)的方法。

實施例1

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-苯氨基硫脲(I-1)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為苯環(huán)。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-苯基氨基硫脲(0.6g,3.6mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-1)，得產(chǎn)品0.63g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.74(s,1H,CH＝N),10.08(s,1H,NH),8.76(s,1H,2-H),8.44(s,1H，NH)，7.78～7.16(m,7H,Ph-H、5-H and 8-H),3.69(m,2H，1-N-CH)，3.25(t,4H，piperazine-H)，2.55(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.29～1.15(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₅H₂₇FN₆OS：478.60[M]⁺；Found：479[M+H]⁺。

實施例2

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(4-甲基苯基)氨基硫脲(I-2)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為4-甲基苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(4-甲基苯基)氨基硫脲(0.6g,3.3mmol)，回流反應(yīng)12小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-2)，得產(chǎn)品0.53g，m.p.248～250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.76(s,1H,CH＝N),10.06(s,1H,NH),8.76(s,1H,2-H),8.44(s,1H，NH)，7.78～7.26(m,6H,Ph-H、5-H and 8-H),3.69(m,2H，1-N-CH)，3.25(t,4H，piperazine-H)，2.55(t,4H，piperazine-H),2.32(s,3H，Ph-CH₃),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.27～1.14(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₆H₂₉FN₆OS：492.62[M]⁺；Found：493[M+H]⁺。

實施例3

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(4-甲氧基苯基)氨基硫脲(I-3)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為4-甲氧基苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(4-甲氧基苯基)氨基硫脲(0.7g,3.6mmol)，回流反應(yīng)8小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-3)，得產(chǎn)品0.72g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.78(s,1H,CH＝N),9.97(s,1H,NH),8.76(s,1H,2-H),8.42(s,1H，NH)，7.77～6.92(m,6H,Ph-H、5-H and 8-H),3.77(s,3H,OCH₃),3.70(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.54(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.26～1.16(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₆H₂₉FN₆O₂S：508.62[M]⁺；Found：509[M+H]⁺。

實施例4

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(3-甲氧基苯基)氨基硫脲(I-4)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為3-甲氧基苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(3-甲氧基苯基)氨基硫脲(0.7g,3.6mmol)，回流反應(yīng)11小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-4)，得產(chǎn)品0.57g，m.p.234～236℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.77(s,1H,CH＝N),9.96(s,1H,NH),8.78(s,1H,2-H),8.42(s,1H，NH)，7.77～7.46(m,6H,Ph-H,5-H and 8-H),3.78(s,3H,OCH₃),3.74(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.54(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.26～1.17(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₆H₂₉FN₆O₂S：508.62[M]⁺；Found：509[M+H]⁺。

實施例5

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(3,4-二甲氧基苯基)氨基硫脲(I-5)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為3，4-二甲氧基苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(3，4-二甲氧基苯基)氨基硫脲(0.8g,3.5mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-5)，得產(chǎn)品0.68g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.78(s,1H,CH＝N),9.92(s,1H,NH),8.84(s,1H,2-H),8.45(s,1H，NH)，7.84～7.53(m,5H、Ph-H,5-H and 8-H),3.78,3.76(2s,6H,2×OCH₃),3.75(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.55(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.28～1.16(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₇H31FN₆O₃S：538.66[M]⁺；Found：539[M+H]⁺。

實施例6

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(4-氟苯基)氨基硫脲(I-6)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為4-氟苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(4-氟苯基)氨基硫脲(0.7g,3.8mmol)，回流反應(yīng)8小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-6)，得產(chǎn)品0.72g，m.p.246～248℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.78(s,1H,CH＝N),10.08(s,1H,NH),8.76(s,1H,2-H),8.44(s,1H，NH)，7.77～7.26(m,6H,Ph-H、5-H and 8-H),3.67(m,2H，1-N-CH)，3.25(t,4H，piperazine-H)，2.54(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.27～1.18(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₅H₂₆F₂N₆OS：496.59[M]⁺；Found：497[M+H]⁺。

實施例7

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(4-氯苯基)氨基硫脲(I-7)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為4-氯-苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(4-氯苯基)氨基硫脲(0.7g,3.5mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-7)，得產(chǎn)品0.65g，m.p.243～245℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.76(s,1H,CH＝N),9.88(s,1H,NH),8.76(s,1H,2-H),8.43(s,1H，NH)，7.78～7.35(m,6H,Ph-H,5-H and 8-H),3.67(m,2H，1-N-CH)，3.25(t,4H，piperazine-H)，2.55(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.26～1.20(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₅H₂₆ClFN₆OS：513.04[M]⁺；Found：513[M+H]⁺(³⁵Cl)。

實施例8

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(2,3,4-三氟苯基)氨基硫脲(I-8)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為2,3,4-三氟苯基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(2,3,4-三氟苯基)氨基硫脲(0.8g,3.6mmol)，回流反應(yīng)8小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-8)，得產(chǎn)品0.87g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.92(s,1H,CH＝N),10.07(s,1H,NH),8.97(s,1H,2-H),8.48(s,1H，NH)，8.23～7.35(m,4H,Ph-H、5-H and 8-H),3.68(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.57(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.28～1.22(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₅H₂₄F₄N₆OS：532.57[M]⁺；Found：533[M+H]⁺。

實施例9

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(吡啶-3-基)氨基硫脲(I-9)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為3-吡啶基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(3-吡啶基)氨基硫脲(0.6g,3.2mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-9)，得產(chǎn)品0.74g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.96(s,1H,CH＝N),10.07(s,1H,NH),8.98(s,1H,2-H),8.88(s,1H,Py-H),8.67(d,1H,Py-H),8.46(s,1H，NH)，8.34～7.27(m,4H,Py-H、5-H and 8-H),3.70(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.56(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.27～1.18(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₄H₂₆FN₇OS：479.58[M]⁺；Found：480[M+H]⁺。

實施例10

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(呋喃-2-基)氨基硫脲(I-10)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為2-呋喃基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(2-呋喃基)氨基硫脲(0.5g,3.2mmol)，回流反應(yīng)10小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-10)，得產(chǎn)品0.56g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.78(s,1H,CH＝N),9.86(s,1H,NH),8.94(s,1H,2-H),8.67(d,1H,Furan-H),8.44(s,1H，NH)，7.85～7.34(m,5H,Furan-H、5-H and 8-H),3.68(m,2H，1-N-CH)，3.26(t,4H，piperazine-H)，2.54(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.26～1.16(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₃H₂₅FN₆O₂S：468.56[M]⁺；Found：469[M+H]⁺。

實施例11

1-環(huán)丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-喹啉-4(1H)-酮-3-醛縮4-(噻吩-2-基)氨基硫脲(I-11)，其化學結(jié)構(gòu)式為：

即式I中的Ar為2-噻吩基。

該化合物的制備方法為：式IV所示的N-甲基環(huán)丙沙星醛粗品(1.0g)溶于無水乙醇(30毫升)，加入式VIII所示的4-(2-噻吩基)氨基硫脲(0.6g,3.5mmol)，回流反應(yīng)12小時，趁熱過濾，固體依次用乙醇洗滌2次，蒸餾水洗滌2次，干燥，用DMF-乙醇(V:V＝5:3)混合溶劑重結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶物式(I-11)，得產(chǎn)品0.62g，m.p.>250℃。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：11.76(s,1H,CH＝N),9.88(s,1H,NH),8.84(s,1H,2-H),8.44(s,1H，NH)，7.85～6.84(m,5H,thiophen-H、5-H and 8-H),3.66(m,2H，1-N-CH)，3.25(t,4H，piperazine-H)，2.54(t,4H，piperazine-H),2.26(s,3H，N-CH₃)，1.25～1.12(m,4H，CH₂CH₂)；MS(m/z)：Calcd.for C₂₃H₂₅FN₆OS₂：484.62[M]⁺；Found：485：473[M+H]⁺。

試驗例

實施例1-11制備的N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物的體外抗腫瘤活性測定

1、供試樣品

以實施例1-11制備的N-甲基環(huán)丙沙星醛縮4-芳基氨基硫脲類衍生物，及經(jīng)典抗腫瘤TOPO抑制劑10-羥基喜樹堿(羥喜樹堿，HC)和環(huán)丙沙星(CF)為供試樣品，共13種，其中HC和CF為對照組，實施例1-11樣品為實驗組；

實驗癌細胞株分別為人肝癌Hep-3B細胞、人胰腺癌Panc-1細胞和人白血病HL60細胞株均購買自中國科學院上海細胞庫。正常細胞采用VERO非洲綠猴腎細胞，購買于上海通派生物科技有限公司。

2、測定方法

測定方法的具體步驟為：

1)首先將上述13種供試樣品分別用二甲基亞砜(DMSO)溶解，配制成1.0×10^-2mol·L^-1濃度的儲備液，然后用10％(質(zhì)量濃度)小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將儲備液稀釋成具有5個濃度梯度(0.1、1.0、5.0、10.0、50.0μmol·L^-1)的工作液；

2)取對數(shù)生長期的人肝癌Hep-3B細胞、人胰腺癌Panc-1細胞和人白血病HL60細胞及VERO細胞株，以每孔6000個細胞接種于96孔板，隨后分別加入上述13種樣品的具有5個濃度梯度的工作液。培養(yǎng)48小時后每孔加入5g·L^–1噻唑藍(MTT)溶液10μL，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后加入100μL質(zhì)量濃度10％的十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液再培養(yǎng)24小時，然后用酶標儀在570nm波長處測定各自的吸光度(OD)值；

3)按下述所示公式計算不同濃度的供試樣品對癌細胞的抑制率，

癌細胞抑制率＝[(1－實驗組OD值)/對照組OD值]×100％，

最后以供試樣品的各濃度的對數(shù)值對各濃度對應(yīng)的癌細胞抑制率作線性回歸，得到劑量-效應(yīng)方程，從所得劑量-效應(yīng)方程計算出各供試樣品對實驗癌細胞的半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)；每個數(shù)據(jù)平行測定三次，求其平均值，結(jié)果見表1所示。

表1各供試樣品的抗腫瘤活性(IC₅₀)

從表1可以看出，實施例1-11提供的化合物對實驗3種癌細胞的抑制活性顯著強于母體化合物環(huán)丙沙星(CF)的活性，尤其苯環(huán)帶有F原子或雜環(huán)芳香環(huán)取代的化合物對人胰腺癌Panc-1細胞的活性優(yōu)于或相當于對照羥喜樹堿的活性，其IC₅₀值已達到微摩爾濃度。更有意義的是，實施例1-11提供的化合物對VERO細胞顯示出較低的毒性，表明對腫瘤細胞具有較強的選擇性，具有成藥性開發(fā)的潛力。因此，按照藥物開發(fā)的一般途徑是先進行常規(guī)的抗腫瘤體外篩選，然后進行針對性的研究，所以本發(fā)明的化合物具有強的抗腫瘤活性和較低的毒性，可通過與人體可接受的酸成鹽或與藥用載體混合制備抗腫瘤藥物。