本發(fā)明屬于植物抗病鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種評(píng)價(jià)作物抗辣椒疫病的方法。
背景技術(shù)：
辣椒疫病是一種世界范圍內(nèi)普遍發(fā)生的毀滅性真菌病害，其首先于1918年在美國(guó)新墨西哥州發(fā)現(xiàn)，引起辣椒疫病的辣椒疫霉菌Phytophthora capsici Leonian是Leon Leonian于1922年命名的，它屬于植物病原卵菌。辣椒疫霉以卵孢子或厚垣孢子在土壤病殘?bào)w中越冬，可以存活數(shù)月甚至更長(zhǎng)時(shí)間，寄主范圍廣，主要侵染辣椒、番茄、茄子、黃瓜、南瓜等多種重要蔬菜作物。辣椒疫病露地和保護(hù)地均能發(fā)生，該病的流行致使辣椒損失嚴(yán)重，一般病株率為15-30％，嚴(yán)重時(shí)達(dá)80％以上。自1980年以來(lái)，辣椒疫病在我國(guó)蔬菜種植區(qū)域發(fā)病程度日趨加重，嚴(yán)重影響了蔬菜種植業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，給我國(guó)的蔬菜安全生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。防治該病害最安全有效的措施是利用抗病品種?？共∑贩N需要通過(guò)抗性鑒定驗(yàn)證。常用的菌絲塊創(chuàng)傷法接種需要將待測(cè)定的辣椒品種播種培育至成苗、再移栽，時(shí)間長(zhǎng)，每品種至少10株，在盆栽條件下占用空間較大。因此，開(kāi)發(fā)一種能縮短時(shí)間、節(jié)省空間的接種方法是非常必要的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種評(píng)價(jià)作物抗辣椒疫病的方法，本發(fā)明通過(guò)定量辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子接種作物苗根部，避免了接種量過(guò)大而導(dǎo)致同一的品種抗感的表現(xiàn)差異，在抗性鑒定時(shí)更準(zhǔn)確、有效。
本發(fā)明提供的方法，包括苗的準(zhǔn)備、辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液的制備、灌根接種、統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)4個(gè)步驟，具體包括：
A、作物苗的準(zhǔn)備：種子經(jīng)30%次氯酸鈉表面消毒后，再用滅菌蒸餾水沖洗干凈，在55℃～58℃水浴鍋中燙種20分鐘后，將種子播種于3-5層濕潤(rùn)濾紙上，于相對(duì)濕度80-90%，光照強(qiáng)度3000-5000 LUX，溫度25-28℃下培養(yǎng)，7-10天后形成4-5葉苗備用；B、辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液的制備：將辣椒疫霉模式菌LT1534接種至10% V8培養(yǎng)基平板，于25℃下黑暗培養(yǎng)7-10天至菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)平板，打開(kāi)封口膜在光照強(qiáng)度5000-8000 LUX下照射3-4天，加無(wú)菌水覆蓋整個(gè)平板過(guò)夜，4℃處理15-20分鐘促進(jìn)孢子囊釋放游動(dòng)孢子，用無(wú)菌水調(diào)節(jié)游動(dòng)孢子濃度為1.0×105個(gè)/mL，得到辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液；
C、灌根接種：取B步驟獲得的孢子懸浮液緩慢滴加至有長(zhǎng)苗的濕潤(rùn)濾紙周圍，讓其滲透到每株苗的根部，懸浮液滴加量是一根苗2-3 mL；
D、統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況，評(píng)價(jià)抗病結(jié)果：接種后的作物苗在相對(duì)濕度80-90%、光照強(qiáng)度3000-5000 LUX，溫度25-28℃下繼續(xù)培養(yǎng)3-7天，調(diào)查作物苗的發(fā)病率，按發(fā)病率劃分抗感性，免疫或高抗發(fā)病率為0，抗病發(fā)病率為0.1-25%，中抗發(fā)病率為25.1-45%，中感發(fā)病率為45.1-65%，感病發(fā)病率為65.1-80%，高感發(fā)病率為80.1-100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的材料即可作為抗源。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明的辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子接種作物苗根部可以嚴(yán)格定量，避免了接種量過(guò)大而導(dǎo)致同一的品種抗感的表現(xiàn)差異，游動(dòng)孢子既可從根部侵入也可從下胚軸侵入，與田間自然侵入方式相同，在篩選抗源時(shí)更準(zhǔn)確、有效；在實(shí)際操作中，可大批量進(jìn)行，在人工氣候箱/室進(jìn)行，具有占用空間小、節(jié)約勞動(dòng)成本、縮短實(shí)驗(yàn)周期等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
為進(jìn)一步公開(kāi)而不是限制本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1
評(píng)價(jià)辣椒品種抗辣椒疫病的方法
（1）辣椒苗的準(zhǔn)備：美國(guó)西元椒（感病品種）和閩椒3號(hào)（抗病品種）種子經(jīng)30%次氯酸鈉表面消毒后，再用滅菌蒸餾水沖洗干凈，在56℃水浴鍋中燙種20分鐘后，將種子播種于4層濕潤(rùn)濾紙上，于相對(duì)濕度85%，光照強(qiáng)度4000 LUX，溫度25℃下培養(yǎng)，8天后形成4葉苗備用；
（2）辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液的制備:將辣椒疫霉模式菌LT1534接種至10% V8培養(yǎng)基平板，于25℃下黑暗培養(yǎng)8天至菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)平板，打開(kāi)封口膜在光照強(qiáng)度7000 LUX下照射3天，加無(wú)菌水覆蓋整個(gè)平板過(guò)夜，4℃處理17分鐘促進(jìn)孢子囊釋放游動(dòng)孢子，用無(wú)菌水調(diào)節(jié)游動(dòng)孢子濃度為1.0×105個(gè)/mL，得到辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液；
（3）灌根接種：取B步驟獲得的孢子懸浮液緩慢滴加至有長(zhǎng)苗的濕潤(rùn)濾紙周圍，讓其滲透到每株苗的根部，懸浮液滴加量是一棵苗2-3 mL；
（4）統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況，評(píng)價(jià)抗病結(jié)果：接種后的辣椒苗在相對(duì)濕度80-90%、光照強(qiáng)度3000-5000 LUX，溫度25-28℃下繼續(xù)培養(yǎng)3-7天，調(diào)查發(fā)病率。為確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，均進(jìn)行3-5次重復(fù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，感病品種美國(guó)西元椒3-5天后水浸狀發(fā)病癥狀明顯，發(fā)病率在80.3-95.7%之間，而抗病品種閩椒3號(hào)7天后發(fā)病率在5.3-9.8%之間。重復(fù)發(fā)病率穩(wěn)定在各自的范圍內(nèi)，說(shuō)明方法重復(fù)性符合實(shí)驗(yàn)要求。上述結(jié)果與菌絲塊接種的抗性鑒定結(jié)果一致。
實(shí)施例2
評(píng)價(jià)西瓜品種抗辣椒疫病的方法
（1）西瓜苗的準(zhǔn)備：新紅寶（感病品種）和湘西瓜6號(hào)種子（抗病品種）經(jīng)30%次氯酸鈉表面消毒后，再用滅菌蒸餾水沖洗干凈，在56℃水浴鍋中燙種20分鐘后，將種子播種于4層濕潤(rùn)濾紙上，于相對(duì)濕度85%，光照強(qiáng)度4000 LUX，溫度25℃下培養(yǎng)，8天后形成4葉苗備用；
（2）辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液的制備:將辣椒疫霉模式菌LT1534接種至10% V8培養(yǎng)基平板，于25℃下黑暗培養(yǎng)7-10天至菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)平板，打開(kāi)封口膜在光照強(qiáng)度7000 LUX下照射3-4天，加無(wú)菌水覆蓋整個(gè)平板過(guò)夜，4℃處理17分鐘促進(jìn)孢子囊釋放游動(dòng)孢子，用無(wú)菌水調(diào)節(jié)游動(dòng)孢子濃度為1.0×105個(gè)/mL，得到辣椒疫霉菌游動(dòng)孢子懸浮液;
（3）灌根接種：取B步驟獲得的孢子懸浮液緩慢滴加至有長(zhǎng)苗的濕潤(rùn)濾紙周圍，讓其滲透到每株苗的根部，懸浮液滴加量是一棵苗2-3 mL；
（4）統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況，評(píng)價(jià)抗病結(jié)果：接種后的西瓜苗在相對(duì)濕度90%、光照強(qiáng)度4000 LUX，溫度25℃下繼續(xù)培養(yǎng)7天，調(diào)查發(fā)病率。為確定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，均進(jìn)行3-5次重復(fù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，感病品種新紅寶3-5天后水浸狀發(fā)病癥狀明顯，發(fā)病率在78.5-93.7%之間，而抗病品種湘西瓜6號(hào)5天后發(fā)病率在8.3-15.4%之間。重復(fù)發(fā)病率穩(wěn)定在各自的范圍內(nèi)，說(shuō)明方法重復(fù)性符合實(shí)驗(yàn)要求。上述結(jié)果與菌絲塊接種的抗性鑒定結(jié)果一致。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。