本發(fā)明涉及用于檢測(cè)JAG2基因突變的試劑盒，具體涉及用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的方法。

背景技術(shù)：

JAG2基因是NOTCH信號(hào)通路的配體之一，它的主要作用是參與了次級(jí)腭的形成和發(fā)育過(guò)程，被認(rèn)為是唇腭裂的候選基因之一。JAG2基因rs2238286（n.66+11354A>G）位點(diǎn)位于該基因的5’端附近，在研究中該位點(diǎn)AG、GG基因型表現(xiàn)出與非綜合征性唇腭裂有顯著性相關(guān)性。

作為常見(jiàn)的出生缺陷和顱面發(fā)育缺陷，唇腭裂是一種復(fù)雜的異質(zhì)性疾病，國(guó)際上將其分為綜合征性（syndromic cleft lip or palate，SCLP）和非綜合征性唇腭裂（non-syndromic cleft lip or palate，NSCLP）。全球唇腭裂的發(fā)生率為3-22/10000，而我國(guó)的發(fā)生率約為1.82/1000。NSCLP的發(fā)病原因有很多，其中遺傳和環(huán)境的影響占據(jù)了主要作用。研究發(fā)現(xiàn)許多信號(hào)通路參與了唇腭的發(fā)育，不同染色體區(qū)間在唇腭裂發(fā)病中具有一定作用。目前已知的NSCLP易感區(qū)有Iq32，2p，2q，3q27-28，4q，6p23-p25，8q24，9q21，12p11，14q21-24, 16q24 和 19q13，可能的易感基因有IRF6、SATB2、TP63、FQXE1、PVRL1、MSX1、GABRB3、CRISPLD2、MAFB 和 ABCA4等。

高分辨率熔解曲線(xiàn)（high resolution melting, HRM)的分析原理是在常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）過(guò)程中飽和熒光染枓與雙鏈DNA結(jié)合，當(dāng)通過(guò)加熱升溫使DNA雙鏈解離時(shí)，熒光染料從局部解鏈的DNA分子上釋放，由于突變、SNP位點(diǎn)雙鏈堿基間不匹配會(huì)使雙鏈DNA在此位點(diǎn)首先解開(kāi)，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中的熒光強(qiáng)度，從熒光強(qiáng)度與時(shí)間軸曲線(xiàn)上便可判斷是否存在突變或SNP，而且不同位點(diǎn)、雜合子與否、GC含量、擴(kuò)增子長(zhǎng)度等都會(huì)影響熔解曲線(xiàn)的峰形。所以，HRM分析能夠有效區(qū)分不同突變位點(diǎn)、SNP位點(diǎn)和擁有不同GC含量的擴(kuò)增片段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了用于檢測(cè)JAG2基因突變的試劑盒，具體提供了用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的試劑盒，該試劑盒可用于非綜合唇腭裂易患性的輔助分析。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的試劑盒，所述試劑盒包括引物對(duì)和PCR檢測(cè)反應(yīng)試劑；其中，所述引物對(duì)為（1）或（2）中的一種：

（1）上游引物：JAG2-F 5'- AGGAGCTAGGGGGAGAGAAGAC-3'

下游引物：JAG2-R 5'- AGGGGTCACCTTGGTGGTTA-3'；

（2）與（1）中的互補(bǔ)序列。

作為優(yōu)選，所述PCR檢測(cè)反應(yīng)試劑包括含EvaGreen的Green-2-Go qPCRMastermix。

作為優(yōu)選，所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為：

Green-2-Go qPCRMastermix（含EvaGreen） 5μl

引物F（10μM） 0.1μl

引物R（10μM） 0.1μl

模板（50ng/μl） 0.5μl

ddH₂O 4.3μl

總體積 10μl。

作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒，所述重組陰性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表SEQ ID No.1，所述重組陽(yáng)性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.2。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的方法，步驟如下：

（1）構(gòu)建重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒：所述重組陰性質(zhì)粒的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.1，所述重組陽(yáng)性質(zhì)粒的核苷酸序列參見(jiàn)序列表中SEQ ID No.2；

（2）構(gòu)建PCR擴(kuò)增時(shí)的引物對(duì)，所述引物對(duì)為a或b中的一種：

a、上游引物：JAG2-F 5'- AGGAGCTAGGGGGAGAGAAGAC-3'

下游引物：JAG2-R 5'- AGGGGTCACCTTGGTGGTTA-3'；

b、與a中的互補(bǔ)序列；

（3）提取待測(cè)樣本的外周血基因組DNA，對(duì)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒和待測(cè)樣本的DNA均使用步驟（2）所述引物，且在同一條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和HRM分析，收集數(shù)據(jù)；

作為優(yōu)選，所述HRM分析的條件為：94℃ 90s；60℃ 30s；83-94℃收集數(shù)據(jù)，溫度上升速率為0.06℃/s；

（4）根據(jù)收集數(shù)據(jù)繪制高分辨率熔解曲線(xiàn)，根據(jù)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)判斷待測(cè)樣本JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型：

與重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AA；

與重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為GG；

在重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒之間的則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AG。

作為優(yōu)選，所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為：

Green-2-Go qPCRMastermix（含EvaGreen） 5μl

引物F（10μM） 0.1μl

引物R（10μM） 0.1μl

模板（50ng/μl） 0.5μl

ddH₂O 4.3μl

總體積 10μl。

作為優(yōu)選，所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性10s；60℃退火/延伸20s；40個(gè)循環(huán)。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述試劑盒的使用方法，步驟如下：

（1）提取待測(cè)樣本的外周血基因組DNA，對(duì)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒和待測(cè)樣本的DNA均使用相同引物，且在同一條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和HRM分析，收集數(shù)據(jù)；

所述HRM分析的條件為：94℃ 90s；60℃ 30s；83-94℃收集數(shù)據(jù)，溫度上升速率為0.06℃/s；

（2）根據(jù)收集數(shù)據(jù)繪制高分辨率熔解曲線(xiàn)，根據(jù)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)判斷待測(cè)樣本JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型：

與重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AA；

與重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為GG；

在重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒之間的則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AG。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供上述試劑盒在制備輔助診斷非綜合征唇腭裂的試劑中應(yīng)用。

本發(fā)明的試劑盒能夠準(zhǔn)確檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型，靈敏度高，特異性好，檢測(cè)迅速；應(yīng)用本發(fā)明的方法對(duì)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的分型與測(cè)序結(jié)果完全一致，能夠用于非綜合征唇腭裂的易患性分析。

附圖說(shuō)明

附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說(shuō)明書(shū)的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1為本發(fā)明的HRM方法靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

圖2為樣本用本發(fā)明的HRM方法分析結(jié)果；

圖3為樣本的JAG2 rs2238286（n.66+11354A>G）位點(diǎn)的測(cè)序結(jié)果；其中a代表野生型序列，b代表純合突變型序列，c為雜合突變序列。

具體實(shí)施方式

以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為市售。本申請(qǐng)所用引物和所用序列合成及測(cè)序工作均由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

實(shí)施例1 JAG2 rs2238286標(biāo)準(zhǔn)品的制備

要建立HRM分析方法，首先必須制備方法所需的外部標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)包含高度保守和特異性的序列，要保證反應(yīng)的高特異性。本發(fā)明合成包含JAG2 rs2238286（n.66+11354A>G）位點(diǎn)的野生型和純合突變型DNA序列，利用基因重組技術(shù)將其克隆到pMD18-T載體中，構(gòu)建出重組質(zhì)粒pMD18-T-rs2238286的野生型和純合突變型，并進(jìn)行相應(yīng)的PCR鑒定和測(cè)序鑒定，最后經(jīng)定量后作為待建立方法的標(biāo)準(zhǔn)品，野生型重組質(zhì)粒為重組陰性質(zhì)粒，純合突變型重組質(zhì)粒為重組陽(yáng)性質(zhì)粒，為下一步的方法及評(píng)估奠定基礎(chǔ)。

一、pMD18-T-rs2238286重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化

1.合成JAG2 rs2238286（n.66+11354A>G）野生型和純合突變型DNA序列，本發(fā)明合成的序列長(zhǎng)250bp，序列如下：

（1）野生型序列

ACCCAGCTCCGGGCACAGGGCAAATTTGCGAGAGGAGCTAGGGGGAGAGAAGACAGCTCAGTTATCATGGGGATGGGTTGAGGACCCCTCTGGACCATATGGGGATCTTTAACCACCAAGGTGACCCCTAGCTCTGGAAAGGACCGTGCTCACTGGAGGAGAGGAAGGTGCCATTGGTTTTGACCCTGTGGAGGAGCTGCGAGGTCACCCAGGGAGAGGGCAAGGAGGTGACCGCAGAGGATGGGGTGTG

（2）純合突變型序列

ACCCAGCTCCGGGCACAGGGCAAATTTGCGAGAGGAGCTAGGGGGAGAGAAGACAGCTCAGTTATCATGGGGATGGGTTGAGGACCCCTCTGGACCATGTGGGGATCTTTAACCACCAAGGTGACCCCTAGCTCTGGAAAGGACCGTGCTCACTGGAGGAGAGGAAGGTGCCATTGGTTTTGACCCTGTGGAGGAGCTGCGAGGTCACCCAGGGAGAGGGCAAGGAGGTGACCGCAGAGGATGGGGTGTG

其中標(biāo)有下劃線(xiàn)的堿基為基因突變位點(diǎn)。

2.連接反應(yīng)：將上述合成的DNA片段與pMD18-T進(jìn)行連接，采用如下連接體系進(jìn)行配制：

pMD18-T 1μL

DNA 2μL

SolutionI 5μL

ddH₂O 2μL

總體積 10μL。

配制完成后置于16℃進(jìn)行過(guò)夜連接反應(yīng)。

3. pMD18-T-rs2238286質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化以及PCR鑒定

（1）從-80℃的超低溫冰箱中取出凍存的DH5α感受態(tài)細(xì)胞，置于冰盒上使其解凍；

（2）取步驟2得到的連接產(chǎn)物10μL加入50μL的DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕搖勻后置冰浴30分鐘；

（3）42℃水浴熱激90秒，熱激后立即置冰上冷卻2min；

（4）于1.5ml EP管中加入預(yù)冷的1ml的不含抗性的LB液體培養(yǎng)基吹打混勻后，37℃ 120轉(zhuǎn)/分輕搖培養(yǎng)90min；

（5）將上述培養(yǎng)液短暫離心吸去900μl后取剩余的100μl涂布于含Amp抗生素的LB平板上，正面向上放置30min，待菌液完全被培養(yǎng)基吸收后，倒置培養(yǎng)皿37℃恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜；

（6）從平板上挑取單克隆菌落于500μL Amp抗性L(fǎng)B液體培養(yǎng)基的1.5ml EP管中，37℃ 220rpm振蕩培養(yǎng)5-6小時(shí)；

（7）取1μL作為模板進(jìn)行菌液PCR鑒定。將鑒定為陽(yáng)性的菌液加入到20ml的LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)搖；

（8）用引物JAG2-F和JAG2-R擴(kuò)增上述稀釋菌液，PCR產(chǎn)物采用2%瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)檢測(cè)PCR產(chǎn)物鑒定陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。

引物序列為HRM分析所用引物，序列如下：

上游引物：JAG2-F 5'- AGGAGCTAGGGGGAGAGAAGAC-3'

下游引物：JAG2-R 5'- AGGGGTCACCTTGGTGGTTA-3'

體系如下：

10×PCR buffer 2μL

dNTP（2.5μM） 2μL

引物F（5μM） 1.5μL

引物R（5μM） 1.5μL

模板 2μL

Taq酶（5U） 0.5μL

ddH₂O 10.5μL

總體積 20μL。

擴(kuò)增程序/反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5min；94℃ 30s、60℃ 30s、72℃ 30sec，35個(gè)循環(huán)；72℃ 10min。

提取重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒采用北京百泰克公司生產(chǎn)的質(zhì)粒制備試劑盒提取重組質(zhì)粒，測(cè)定濃度和純度，同時(shí)吸取一部分純化質(zhì)粒送至上海生物工程有限公司進(jìn)行測(cè)序，確定插入片段的基因序列與目的序列一致。

二、標(biāo)準(zhǔn)品的獲取和定量

（1）將步驟一得到的凍存的含有重組質(zhì)粒pMD18-T-rs2238286的大腸桿菌DH5a 100μl接種于15ml氨芐抗性的LB液體培養(yǎng)基中，37℃ 220rpm培養(yǎng)14-16h；

（2）采用北京百泰克生物科技有限公司生產(chǎn)的質(zhì)粒制備試劑盒提取重組質(zhì)粒；

（3）利用北京百泰克生物科技有限公司的超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（ND5000）對(duì)提取的質(zhì)粒測(cè)定濃度，根據(jù)A₂₆₀/A₂₈₀判斷質(zhì)粒的純度。A₂₆₀/A₂₈₀=1.78。

實(shí)施例2 HRM-PCR檢測(cè)JAG2 rs2238286方法的建立

一、待測(cè)樣本DNA的制備

提取30例樣本的外周血基因組DNA，用作JAG2基因PCR擴(kuò)增的模板。具體提取方法如下：

（1）取1ml全血，加入3ml TE，顛倒混勻后靜置10min，8000rpm離心5分鐘，棄上清液；

（2）重復(fù)上述步驟2-3次至沉淀為白色；

（3）加入900μl 10%SDS和10μl 10mg/ml蛋白酶K，55℃水浴1h；

（4）將離心管冷卻至室溫，加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25:24:1）混勻，12000rpm離心10min；

（5）小心吸取上清后再加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25:24:1）混勻，12000rpm離心10min；

（6）取上清，加入兩倍體積的無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻，12000rpm離心10min，棄上清；

（7）加500μl 70%的乙醇洗滌沉淀，短暫離心后棄上清，開(kāi)蓋干燥至乙醇完全揮發(fā)；

（8）加50μl雙蒸水或TE溶解DNA中，-20℃保存。

二、特異性引物的設(shè)計(jì)與合成

本發(fā)明通過(guò)對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中JAG2rs2238286基因序列進(jìn)行檢索，選取適合設(shè)計(jì)引物的片段序列為靶目標(biāo)，設(shè)計(jì)了一組HRM-PCR引物。

本發(fā)明選取的擴(kuò)增序列如下：

其中標(biāo)有下劃線(xiàn)的堿基為基因突變位點(diǎn)。

設(shè)計(jì)的引物序列如下：

上游引物：JAG2-F 5'- AGGAGCTAGGGGGAGAGAAGAC-3'

下游引物：JAG2-R 5'- AGGGGTCACCTTGGTGGTTA-3'

擴(kuò)增片段大小為：97bp。擴(kuò)增的核苷酸序列為：

三、HRM-PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件

分別以待測(cè)樣本DNA、重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒為模板，以上述引物JAG2-F和JAG2-R為擴(kuò)增引物，采用下述體系和反應(yīng)條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增和HRM分析。

PCR體系：

Green-2-Go qPCRMastermix（含EvaGreen） 5μl

引物F（10μM） 0.1μl

引物R（10μM） 0.1μl

模板（50ng/μl） 0.5μl

ddH₂O 4.3μl

總體積 10μl。

其中引物采用JAG2-F和JAG2-R，HRM-PCR采用生工生物（上海），Green-2-Go qPCRMastermix試劑盒。HRM分析儀為百源基因ASA-9600實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

PCR擴(kuò)增程序：

94℃預(yù)變性3min；94℃變性10s；60℃退火/延伸20s；40個(gè)循環(huán)；

HRM分析：

94℃ 90s

60℃ 30sec

83-94℃收集數(shù)據(jù)，溫度上升速率為0.06℃/s。

四、結(jié)果分析

根據(jù)收集數(shù)據(jù)繪制高分辨率熔解曲線(xiàn)，根據(jù)重組陰性質(zhì)粒、重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)判斷待測(cè)樣本JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型：

與重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AA；

與重組陽(yáng)性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)重合則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為GG；

在重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒之間的則JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286的基因型為AG。

五、靈敏度實(shí)驗(yàn)

將重組陽(yáng)性質(zhì)粒和重組陰性質(zhì)粒均稀釋至50ng/μl后，將二者混合進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)亟M陽(yáng)性質(zhì)粒比例依次為50%、25%、12.5%、5%、2%和1%，按照上述HRM-PCR反應(yīng)體系和參數(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，分析突變檢出范圍，即靈敏度。

反應(yīng)體系如下：

Green-2-Go qPCRMastermix（含EvaGreen） 5μl

引物F（10μM） 0.1μl

引物R（10μM） 0.1μl

模板（50ng/μl） 0.5μl

ddH₂O 4.3μl

總體積 10μl。

PCR擴(kuò)增程序：

94℃預(yù)變性3min；94℃變性10s；60℃退火/延伸20s

HRM分析：

94℃ 90s

60℃ 30sec

83-94℃收集數(shù)據(jù)，溫度上升速率為0.06℃/s。

結(jié)果參見(jiàn)圖1，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)重組陽(yáng)性質(zhì)粒與重組陰性質(zhì)粒體積比分別為1:1、1:3、1:7、1:19、1:49、1:99時(shí)，均能檢測(cè)出重組陽(yáng)性質(zhì)粒，所以本發(fā)明的HRM檢測(cè)方法的靈敏度為1%。

實(shí)施例3 應(yīng)用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒檢測(cè)樣本基因突變

以實(shí)施例2步驟中的檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法，對(duì)30例樣本進(jìn)行HRM分析，與重組陽(yáng)性質(zhì)粒和重組陰性質(zhì)粒的熔解曲線(xiàn)對(duì)照比較，依此確定樣本中的突變類(lèi)型，并根據(jù)HRM分析結(jié)果針對(duì)每種基因型隨機(jī)挑選1個(gè)樣本在生工生物（上海）進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證。

HRM分析結(jié)果參見(jiàn)表1和圖2，數(shù)據(jù)顯示30例樣本中JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286野生型有21例，A>G雜合突變型有6例，A>G純合突變型3例。

Sanger測(cè)序結(jié)果參見(jiàn)圖3：其中a為樣本編號(hào)5的測(cè)序結(jié)果，b為樣本編號(hào)9的測(cè)序結(jié)果，c為樣本編號(hào)20的測(cè)序結(jié)果；與本發(fā)明方法檢測(cè)的結(jié)果完全一致。

表1應(yīng)用本發(fā)明的方法對(duì)樣本的分析結(jié)果

實(shí)施例4 用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的試劑盒

本發(fā)明的用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的試劑盒包括以下組分：

（1）JAG2 rs2238286標(biāo)準(zhǔn)品：重組陰性質(zhì)粒和重組陽(yáng)性質(zhì)粒，按照實(shí)施例1中的方法制備；

（2）引物：該引物序列為：

上游引物：JAG2-F 5'- AGGAGCTAGGGGGAGAGAAGAC-3'

下游引物：JAG2-R 5'- AGGGGTCACCTTGGTGGTTA-3'

（3）含有飽和熒光染料Eva Green的PCR擴(kuò)增試劑。

應(yīng)用該試劑盒檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的方法與實(shí)施例2相同。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

序列表

<110> 蘇州百源基因技術(shù)有限公司

<120> 用于檢測(cè)JAG2基因SNP位點(diǎn)rs2238286基因型的試劑盒

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 250

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

acccagctcc gggcacaggg caaatttgcg agaggagcta gggggagaga agacagctca 60

gttatcatgg ggatgggttg aggacccctc tggaccatat ggggatcttt aaccaccaag 120

gtgaccccta gctctggaaa ggaccgtgct cactggagga gaggaaggtg ccattggttt 180

tgaccctgtg gaggagctgc gaggtcaccc agggagaggg caaggaggtg accgcagagg 240

atggggtgtg 250

<210> 2

<211> 250

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

acccagctcc gggcacaggg caaatttgcg agaggagcta gggggagaga agacagctca 60

gttatcatgg ggatgggttg aggacccctc tggaccatgt ggggatcttt aaccaccaag 120

gtgaccccta gctctggaaa ggaccgtgct cactggagga gaggaaggtg ccattggttt 180

tgaccctgtg gaggagctgc gaggtcaccc agggagaggg caaggaggtg accgcagagg 240

atggggtgtg 250

<210> 3

<211> 200

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

gctccgggca cagggcaaat ttgcgagagg agctaggggg agagaagaca gctcagttat 60

catggggatg ggttgaggac ccctctggac catatgggga tctttaacca ccaaggtgac 120

ccctagctct ggaaaggacc gtgctcactg gaggagagga aggtgccatt ggttttgacc 180

ctgtggagga gctgcgaggt 200

<210> 4

<211> 97

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

aggagctagg gggagagaag acagctcagt tatcatgggg atgggttgag gacccctctg 60

gaccatatgg ggatctttaa ccaccaaggt gacccct 97