本發(fā)明的實(shí)施例涉及合成領(lǐng)域，更具體地，涉及三氮唑類化合物的制備及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

白血病是一類造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病。白血病按起病的緩急可分為急、慢性白血病。急性白血病細(xì)胞分化停滯在早期階段，以原始及早幼細(xì)胞為主，疾病發(fā)展迅速，病程數(shù)月。慢性白血病細(xì)胞分化較好，以幼稚或成熟細(xì)胞為主，發(fā)展緩慢，病程數(shù)年。

慢性粒細(xì)胞白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)是一種較為少見的起源于造血干細(xì)胞異常的惡性腫瘤，占所有癌癥的0.3％左右。其主要特點(diǎn)是產(chǎn)生大量不成熟的白細(xì)胞，這些白細(xì)胞能夠在骨髓內(nèi)聚集，從而抑制骨髓的正常造血功能；并且其能夠通過血液擴(kuò)散到全身，因而導(dǎo)致病人出現(xiàn)貧血、血小板增多、脾大、感染、容易出血及氣管感染等癥狀。慢性粒細(xì)胞白血病的發(fā)病率為1～2/10萬，占所有白血病的18％，其發(fā)病人群在50歲以上較為常見，平均發(fā)病人群在65歲，男性和女性比例為1.4:1。在臨床上根據(jù)人體骨髓中白細(xì)胞的數(shù)量和癥狀的嚴(yán)重程度，將CML分為三個(gè)期：慢性期(CP)、加速期(AP)和急變期(BP)。其中，90％的患者在早期診斷時(shí)處于慢性期，1-2年后約3％-4％的患者由慢性期進(jìn)展為加速期，且3-6月后由加速期發(fā)展為急變期，如果患者沒有接受任何治療，其自然病程一般為3年左右。另外，據(jù)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，約90％-95％的患者體內(nèi)均可檢測(cè)到費(fèi)城染色體的存在，它是人類認(rèn)識(shí)的第一個(gè)與惡性腫瘤相關(guān)的染色體異常改變，該染色體t(9；22)(q34；q11)是由9號(hào)染色體q34的c-Abl基因與22號(hào)染色體q11的c-Bcr基因相互易位而形成，其可以編碼出慢性粒細(xì)胞的致病基因：BCR-ABL融合基因。該融合基因可以編碼產(chǎn)生具有高酪氨酸活性的BCR-ABL融合蛋白，與正常的c-ABL蛋白相比，該融合蛋白會(huì)不斷地刺激白細(xì)胞增殖和介導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡的耐受性而形成CML。由于CML對(duì)人類生命和健康的嚴(yán)重威脅，因此，針對(duì)如何治愈CML，控制血液和遺傳學(xué)異常，消除癥狀，最大限度地延長(zhǎng)生存期，依然是目前醫(yī)學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)迫切需要解決的問題。

近年來，對(duì)于CML的治療手段和策略都有了較大的進(jìn)展，主要包括以下幾種方法：第一種：化學(xué)藥物治療或聯(lián)合化學(xué)治療，常用藥物如：羥基脲、馬利蘭、高三尖杉酯堿、阿糖胞苷等。根據(jù)臨床結(jié)果顯示，雖然在一定程度上這些藥物可以改善癥狀，緩解病情，但是往往副反應(yīng)較多，且不能明顯延長(zhǎng)病程或控制病情進(jìn)展。第二種：干擾素α(INF-α)治療CML。INF-α是一種生物糖蛋白，研究表明其具有抑制白細(xì)胞克隆增值，重塑染色體，調(diào)節(jié)免疫，抗腫瘤，抗病毒等功效。并曾在異基因干細(xì)胞移植無效時(shí)，作為治療費(fèi)城染色體陽性白血病的一線治療藥物，但是干擾素的治療也存在較多的副反應(yīng)，部分患者在使用干擾素4.2-20.4月內(nèi)易產(chǎn)生干擾素抗體，并且停藥后有復(fù)發(fā)的報(bào)告。第三種：造血干細(xì)胞移植包括兩種：自體造血干細(xì)胞移植和異基因造血干細(xì)胞移植。處于慢性期的CML患者通過自體造血干細(xì)胞移植，可獲得5年以上生存率高達(dá)40％。但是存在的主要缺陷是患者進(jìn)行移植后細(xì)胞遺傳學(xué)反應(yīng)率低，不能從根本上消除白細(xì)胞惡性克隆。異基因造血干細(xì)胞移植是目前已證實(shí)唯一可以治愈費(fèi)城染色體陽性白血病的手段。但由于合格骨髓提供者來源困難，大部分患者無法得到及時(shí)的治療。另外，一部分患者在移植后存在抗宿主病、易感染、易復(fù)發(fā)及其他相關(guān)并發(fā)癥等，因此選擇移植對(duì)象時(shí)要尤為慎重。第四種：基因靶向治療藥物，即酪氨酸激酶抑制劑(TKI)。其主要是根據(jù)腫瘤細(xì)胞活動(dòng)原理而設(shè)計(jì)的靶向抗癌藥物，在治療慢性粒細(xì)胞白血病中取得了較大的成功，給CML治療帶來了革命性的突破。

蛋白酪氨酸激酶(PTK)是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過程中的重要因子，它能夠催化多種底物蛋白的磷酸化，從而傳遞信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、增殖。BCR-ABL融合蛋白是一種高酪氨酸活性的蛋白激酶，它能不斷催化ATP上γ-磷酸轉(zhuǎn)移到蛋白酪氨酸殘基上，激活下游信號(hào)通路，促使成熟CML粒細(xì)胞無限增值，抑制細(xì)胞凋亡，繼而造成造血干細(xì)胞的功能紊亂。由于BCR-ABL在正常細(xì)胞中不表達(dá)，因而抑制其活性成為CML治療的一個(gè)新途徑。

目前，臨床使用的酪氨酸激酶抑制劑主要包括替尼類藥物第一代(TKIs)伊馬替尼，第二代(TKIs)尼羅替尼、達(dá)沙替尼和第三代(TKIs)ponatinib(AP245234)等。伊馬替尼是由瑞士的諾華公司研制的第一個(gè)根據(jù)腫瘤產(chǎn)生機(jī)制而設(shè)計(jì)的靶向抗癌藥物。其能夠特異性的和BCR-ABL蛋白結(jié)合，從而阻斷其下游信號(hào)通路，抑制費(fèi)城染色體陽性細(xì)胞的復(fù)制與增值。另外，BCR-ABL融合基因在正常細(xì)胞中不表達(dá)，所以伊馬替尼對(duì)正常造血細(xì)胞幾乎無抑制作用。但是部分患者長(zhǎng)時(shí)間服用后，均產(chǎn)生了藥物的耐藥性，繼而導(dǎo)致病情復(fù)發(fā)。臨床研究表明，酪氨酸激酶靶點(diǎn)的基因突變，導(dǎo)致藥物分子無法與靶點(diǎn)結(jié)合，是藥物耐藥性的根本原因。為了克服BCR-ABL激酶突變，制藥企業(yè)相繼又研發(fā)出了兩個(gè)新的酪氨酸激酶抑制劑，即：第二代藥物尼羅替尼和達(dá)沙替尼。尼羅替尼是甲磺酸伊馬替尼的類似物，其對(duì)野生型BCR-ABL蛋白的抑制活性較伊馬替尼強(qiáng)20倍，并能有效克服對(duì)伊馬替尼耐藥的大部分BCR-ABL細(xì)胞突變株。達(dá)沙替尼是BCR-ABL激酶和Src族激酶的雙重抑制劑，其體外抑制活性較甲磺酸伊馬替尼高325倍。雖然達(dá)沙替尼和尼羅替尼能夠克服大部分的BCR-ABL激酶突變，但是不能克服最重要的T315I突變，其雖僅占所有相關(guān)酪氨酸激酶突變的15％-20％，但卻對(duì)以上所有酪氨酸激酶抑制劑治療均無響應(yīng)。

為了克服這一迫在眉睫的問題，很多藥物研究單位都將研發(fā)出耐T315I突變的酪氨酸激酶抑制劑作為重點(diǎn)開發(fā)的項(xiàng)目。隨后，大量的文獻(xiàn)和綜述報(bào)道了在這一領(lǐng)域取得的重要突破。例如：PPY-A，TG101113，BCR-ABL/Aurora雙重激酶抑制劑陶扎色替(tozasertib)，達(dá)努賽替(danusertib)等。其中tozasertib已經(jīng)用于治療耐藥CML患者的臨床試驗(yàn)中，但是缺陷是臨床的給藥必需采用靜脈注射的方式。另外，由于較強(qiáng)的毒副作用，在臨床治療中其通常作為挽救療法。盡管已取得這些進(jìn)步，目前依然沒有能夠被批準(zhǔn)治療發(fā)生BCR-ABLT315I突變的藥物。第三代酪氨酸激酶抑制劑ponatinib是一個(gè)新型的口服多靶點(diǎn)激酶抑制劑，除了能夠抑制未發(fā)生突變的酪氨酸激酶和目前所有類型突變的激酶，還能有效抑制T315I突變的BCR-ABL。因此，該藥于2012年12月14日由FDA提前三個(gè)月批準(zhǔn)上市。值得一提的是，由于ponatinib在后期患者治療中發(fā)現(xiàn)存在“危及生命的血栓和血管重度狹窄”風(fēng)險(xiǎn)，已于2013年10月31號(hào)，被FDA要求暫停這種白血病藥物的銷售和推廣。因此，研發(fā)出安全有效多靶點(diǎn)的抗耐藥性的酪氨酸激酶抑制劑具有重要的價(jià)值和研究前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一類可用作酪氨酸激酶抑制劑的化合物，并且提供了這些化合物的合成方法。此外，通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這些化合物的抑制酪氨酸激酶的活性。

本發(fā)明提供了一種化合物的制備方法，包括：在容器中加入第一化合物1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯，在NBS、BPO和CCl₄的作用下反應(yīng)得到第二化合物，所述第二化合物為所述第二化合物與第三化合物在K₂CO₃和THF的作用下反應(yīng)得到第四化合物，所述第三化合物為所述第四化合物為其中，R為所述第四化合物在鋅粉、二氯甲烷和CH₃COOH的作用下反應(yīng)得到第五化合物，所述第五化合物為所述第五化合物在NaNO₂、HCl和NaN₃的作用下反應(yīng)得到第六化合物，所述第六化合物為所述第六化合物在Cu₂O和CH₃CN-H₂O的作用下與第七化合物反應(yīng)得到第八化合物，所述第七化合物為所述第八化合物為所述第八化合物在CuI、Pd(PPh₃)₂Cl₂、DMF和三乙胺的作用下與第九化合物反應(yīng)得到第十化合物，所述第九化合物為所述第十化合物為目標(biāo)化合物

在上述制備方法中，其中，所述第七化合物的制備方法如下：第十一化合物在PCC和DCM的作用下反應(yīng)得到第十二化合物，所述第十一化合物為所述第十二化合物為所述第十二化合物在K₂CO₃和CH₃OH的作用下與第十三化合物反應(yīng)得到所述第七化合物，所述第十三化合物為

在上述制備方法中，其中，當(dāng)R為-CH₂CH₂NH₂時(shí)，還包括：所述第八化合物在DPPA、DMF、DBU和NaN₃的作用下反應(yīng)得到第十四化合物，所述第十四化合物為所述第十四化合物在三苯基膦和THF的作用下反應(yīng)得到第十五化合物，所述第十五化合物為所述第十五化合物在二碳酸二叔丁酯、三乙胺和二氯甲烷的作用下反應(yīng)得到第十六化合物，所述第十六化合物為所述第十六化合物在CuI、Pd(PPh₃)₂Cl₂、DMF和三乙胺的作用下與第九化合物反應(yīng)得到第十七化合物，所述第十七化合物為所述第十七化合物在苯甲醚、二氯甲烷以及三氟乙酸的作用的下反應(yīng)得到第十八化合物，所述第十八化合物是另一目標(biāo)化合物

在上述制備方法中，其中，所述第十八化合物在二環(huán)己基碳二亞胺、二氯甲烷和二硫化碳的作用下反應(yīng)得到第十九化合物，所述第十九化合物是額外的另一目標(biāo)化合物

本發(fā)明也提供了根據(jù)以上制備方法得到的目標(biāo)化合物在抑制酪氨酸激酶方面的用途。

本發(fā)明還提供了根據(jù)以上制備方法得到的目標(biāo)化合物在治療白血病中的用途。

附圖說明

圖1示出了化合物13a的¹H NMR。

圖2示出了化合物13a的¹³C NMR。

圖3示出了化合物13b的¹H NMR。

圖4示出了化合物13b的¹³C NMR。

圖5示出了化合物13c的¹H NMR。

圖6示出了化合物13c的¹³C NMR。

圖7示出了化合物13d的¹H NMR。

圖8示出了化合物13d的¹³C NMR。

圖9示出了陽性藥ponatinib對(duì)k562細(xì)胞的活性。

圖10示出了實(shí)例1(化合物13a)對(duì)k562細(xì)胞的活性。

圖11示出了實(shí)例2(化合物13b)對(duì)k562細(xì)胞的活性。

圖12示出了實(shí)例3、4(化合物13c、13d)對(duì)k562細(xì)胞的活性。

圖13示出了ponatinib對(duì)HL60細(xì)胞的活性。

圖14示出了實(shí)例1(化合物13a)對(duì)HL60細(xì)胞的活性。

圖15示出了實(shí)例2-4(化合物13b-d)對(duì)HL60細(xì)胞的活性。

圖16示出了ponatinib對(duì)KG1a細(xì)胞的活性。

圖17示出了實(shí)例1、3-4(化合物13a、13c、13d)對(duì)KG1a細(xì)胞的活性。

圖18示出了實(shí)例2(化合物13b)對(duì)KG1a細(xì)胞的活性。

說明書中的英文簡(jiǎn)寫對(duì)應(yīng)的中文名稱：

NBS：N-溴代丁二酰亞胺

BPO：過氧化苯甲酰

THF：四氫呋喃

TLC：薄層色譜(點(diǎn)板)

PCC：氯鉻酸吡啶鎓鹽

Pd(PPh₃)Cl₂：二氯化三苯基膦合鈀(II)

DMF：二甲基甲酰胺

Et₃N：三乙胺

DPPA：疊氮磷酸二苯酯

DBU：1,8-二氮雜二環(huán)-雙環(huán)(5,4,0)-7-十一烯

(Boc)₂O：二碳酸二叔丁酯

DCC：N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。

化合物的通式為：

其中，R分別為

該化合物的合成路線如下：

1)具體合成步驟

1.01 化合物2的合成

在100mL的兩口圓底燒瓶中，依次加入1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯(化合物1)(2g，9.76mmol)，NBS(1.91g，10.73mmol)，BPO(0.47g，1.95mmol)，將體系封閉，抽真空，N₂保護(hù)，然后用20mL的注射器注入溶劑CCl₄(20mL×2)。將體系升溫至85℃，攪拌5h后，加入20mL飽和NaHCO₃溶液淬滅反應(yīng)，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有機(jī)相，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓濃縮得粗品，無需純化，直接投下一步。

1.02 化合物4a-4b的合成

在50mL圓底燒瓶中，加入粗品化合物2(2g，7.04mmol)，化合物3(實(shí)際上為化合物3a或3b，為了簡(jiǎn)便，在無需對(duì)化合物3a或3b區(qū)分的情況下可以稱為化合物3，其他化合物也可以進(jìn)行類似處理)(14.08mmol)，K₂CO₃(1.95g，14.08mmol)，30mL THF，室溫?cái)嚢?h，TLC檢測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮除去THF，加入飽和20mL飽和NaHCO₃溶液，用二氯甲烷(30mL×2)萃取，合并有機(jī)相，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓濃縮，柱層析純化(CH₂Cl₂:CH₃OH＝30:1，氨水：0.5％)得到化合物4，產(chǎn)率：60％-75％。

化合物4a:淡黃油狀液體。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.49(d,，J＝2Hz，1H)，8.36(dd，J＝2，8.8Hz，1H)，8.09(d，J＝8.8Hz，1H)，3.74(s，2H)，2.53-2.30(m，11H)。

化合物4b:¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.50(d，J＝1.2Hz，1H)，8.37(d，J＝8.8Hz，1H)，8.09(d，J＝8.8Hz，1H)，3.75(s，2H)，3.62(t，J＝5.2Hz，2H)，2.59-2.55(m，10H)。

1.03 化合物5a-5b的合成

取100mL兩口圓底燒瓶，依次加入化合物4(3.30mmol)，鋅粉(7.11g，108.81mmol)，二氯甲烷25mL。體系冷卻至0℃后，將稀釋于10mL二氯甲烷中的CH₃COOH(1.58g，26.34mmol)用滴液漏斗緩慢滴加到體系中，滴畢，將混合物于0℃，攪拌1h后，移至室溫?cái)嚢?h，TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，過濾鋅粉，濾餅用二氯甲烷洗滌，合并有機(jī)相，用20mL×2飽和NaHCO₃溶液洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓濃縮，柱層析純化(CH₂Cl₂:CH₃OH＝25:1，氨水：0.5％)得到化合物5，產(chǎn)率：62％-70％。

化合物5a:淡黃色固體,¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.44(d，J＝8.3Hz，1H)，6.88(d，J＝2.4Hz，1H)，6.75(dd，J＝2.3，8.3Hz，1H)，3.84(br，2H)，3.46(s，2H)，2.44(m，8H)，2.25(s，3H)。

化合物5b:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.47(d，J＝8.4Hz，1H)，6.92(d，J＝2Hz，1H)，6.79(dd，J＝2，8.4Hz，1H)，3.76(br，2H)，3.61(t，J＝5.6Hz，2H)，3.53(s，2H)，2.57-2.50(m，10H)。

1.04 化合物6a-6b的合成

取50mL的兩口圓底燒瓶，依次加入苯胺化合物5(1.10mmol)，NaNO₂(2.21mmol)，超純水(20mL)，將體系冷卻至0℃后，緩慢滴加HCl(3.30mmol)的水溶液5mL。滴加完畢后，保持反應(yīng)體系的溫度繼續(xù)反應(yīng)1.5h。然后緩慢滴加NaN₃(1.32mmol)的水溶液，滴加完畢后，保持反應(yīng)體系的溫度反應(yīng)3h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和NaHCO₃溶液20mL，用乙酸乙酯30mL×2萃取，合并有機(jī)相，無水Na₂SO₄干燥，濃縮得到疊氮化合物6直接投下一步。

1.05 化合物8的合成

取50mL的圓底燒瓶，依次加入化合物7(1.2g，4.84mmol)，PCC(2.09g，9.68mmol)，二氯甲烷20mL，室溫下攪拌反應(yīng)4h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加硅藻土過濾，濾餅用二氯洗滌，將有機(jī)相用飽和NaCl水溶液洗滌(20mL×3)，無水Na₂SO₄干燥，濃縮，硅膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝70:1)得純品(化合物8)(0.83g，產(chǎn)率：70％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.88(s，1H)，8.29(d，J＝1.2Hz，1H)，7.75(dd，J＝1.2Hz，8Hz，1H)，7.39(d，J＝8Hz，1H)，2.50(s，3H)。

1.06 化合物10的合成

取50mL的單口圓底燒瓶，依次加入3-碘-4甲基苯甲醛(化合物8)(0.5g，2.03mmol)，化合物9(0.47g，2.44mmol)，K₂CO₃(0.56g，4.06mmol)，無水甲醇(20mL)。將混合物室溫?cái)嚢?h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，如原料反應(yīng)不完全則補(bǔ)加化合物9。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液過濾除K₂CO₃固體，二氯洗滌，合并有機(jī)相，減壓濃縮，柱層析純化(僅用二氯過柱)，得到純品化合物10(0.30g，產(chǎn)率：61％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.96(s,1H)，7.36(d，J＝7.6Hz，1H)，7.17(d，J＝8Hz，1H)，3.08(s，1H)，2.43(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ142.47，142.12，131.78，129.30，121.24，100.39，81.86，77.84，28.16。

1.07 化合物11a-11b的合成

在50mL的兩口圓底燒瓶中，依次加入3-碘-4-甲基苯乙炔(化合物10)(0.5g，2.07mmol)，疊氮化合物6(1.86mmol)，CH₃CN-H₂O(10mL：2mL)，并在氮?dú)饬飨录尤氪呋康腃u₂O-NP(NP：納米顆粒)。將體系抽真空，沖N₂，循環(huán)3次后，室溫?cái)嚢?2h。TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，將混合物減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化得到化合物11。

化合物11a：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.87(s，1H)，8.82(s，1H)，8.05-8.04(m，2H)，7.99(d，J＝8Hz，1H)，7.83(d，J＝8Hz，1H)，7.34(d，J＝8Hz，1H)，3.75(s，2H)，2.590-2.495(m，11H)，2.35(s，3H)。

化合物11b:¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.36(br，1H)，8.20(s，1H)，8.05-7.96(m，3H)，7.82(d，J＝8Hz，1H)，7.33(d，J＝8Hz，1H)，3.73(s，2H)，3.62(t，J＝5.2Hz，2H)，2.59-2.56(m，10H)，2.48(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ147.03，141.81，138.81，136.05，135.49，132.14，130.13(J＝30.1Hz)，130.04，129.20，125.62，123.57(J＝272.9Hz)，123.38，117.85(J＝5.9Hz)，117.44，101.43，59.25，57.78，57.67，53.25，52.92，27.92。

1.08 化合物13a-13b的合成

在50mL兩口圓底燒瓶中加入化合物12(0.2g，1.40mmol)，1,2,3-三氮唑化合物11(1.27mmol)后，于手套箱加入催化劑CuI(21mg，0.11mmol)，Pd(PPh₃)₂Cl₂(39mg，0.06mmol)。將體系抽真空，沖Ar₂，循環(huán)三次。用5mL注射器加入溶劑DMF(5mL)，Et₃N(0.3mL，2.01mmol)。將體系加熱至65℃，攪拌10h。TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，將混合物減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化得到純品化合物13，為淡黃色固體。

化合物13a(實(shí)例1)：3-((2-甲基-5-(1-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3(三氟甲基)苯基)-1H-1，2，3-三氮唑-4-基)苯基)乙炔基)咪唑[1，2-b]噠嗪。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.47(d，J＝4Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.10(s，1H)，8.05-7.95(br,5H)，7.87-7.84(m，1H)，7.37-7.35(d，J＝8Hz，1H)，7.14-7.11(q，J＝4Hz，1H)，3.72(s，2H)，2.61(br，11H)，2.33(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ147.9，143.8，140.7，139.6，138.7，138.2，135.6，132.1，130.3，129.1，127.6，126.2，125.9，124.9，123.3，130.0，118.0，117.9，117.6，117.3，113.3，97.3，80.1，57.6，55.0，52.8，45.8，20.7；HRMS(EI)(M⁺H)calculated for C₃₀H₂₇F₃N₈：557.2311 found 557.2379。

化合物13b(實(shí)例2)：2-(4-(4-(4-(3-(咪唑[1，2-b]噠嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯基)-1H-1，2，3-三氮唑-1-基)-2-(三氟甲基)芐基)哌嗪-1-基)乙醇。

(12b)¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.49(d，J＝4.4Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.10-7.96(m，6H)，7.86(d，J＝8Hz，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，7.13(dd，J＝4.4，9.2Hz，1H)，3.73(s，2H)，3.64(t，J＝5.2Hz，2H)，2.62-2.59(m，13H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ147.92，143.88，140.68，139.63，138.70，138.19，135.51，132.11，130.27，130.10(J＝30.8Hz)，129.06，127.58，126.17，125.88，123.57(J＝272.6Hz)，123.34，122.97，117.81(J＝5.7Hz)，117.67，117.42，113.31，97.30，80.17，59.24，57.74，57.64，53.22，52.90，20.70；HR MS(EI)calcd forC₃₁H₃₀F₃N₈O 587.2495[M+H]⁺；found 587.2485。

1.09 化合物15的合成

在50mL的兩口圓底燒瓶中，加入化合物11b(0.5g，0.88mmol)，DMF(10mL)，將體系冷卻至0-5℃后，在N₂保護(hù)下，相繼滴加DPPA(0.6mL，2.63mmol)的DMF溶液(5mL)，DBU(0.4mL，2.63mmol)的DMF溶液(5mL)，滴畢，保持低溫?cái)嚢?h后，加入NaN₃(0.17g，2.63mmol)固體，攪拌30分鐘后，將其移至油浴，加熱至90℃攪拌4-5h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液倒入20mL的飽和Na₂CO₃溶液中，用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有機(jī)相。有機(jī)相用飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na₂SO₄干燥，減壓濃縮得疊氮化合物14，無需純化直接投下一步。

在50mL的圓底燒瓶中，加入粗品化合物14(0.4g，0.67mmol)，PPh₃(0.26g，1.0mmol)，THF(10mL)，將混合物于室溫?cái)嚢?h后，加入H₂O(4mL)，繼續(xù)攪拌4-5h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)減壓濃縮，飽和NaHCO₃洗滌，乙酸乙酯萃取，無水Na₂SO₄干燥，減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化(二氯甲烷：甲醇＝20：1，氨水：0.5％)得到純品化合物15(0.25g，65％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.27(s，1H)，8.20(s，1H)，7.99-7.97(m，2H)，7.90(d，J＝8.8Hz，1H)，7.72(d，J＝7.6Hz，1H)，7.23(d，J＝8Hz，1H)，3.67(s，2H)，2.76(t，J＝6Hz，2H)，2.49-2.40(m，13H)；

¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ146.92，141.70，138.86，135.96，135.37，132.10，130.02(J＝31.2Hz)，129.99，129.17，125.56，123.56(J＝272.8Hz)，123.27，117.74(J＝5.9Hz)117.50，101.42，60.95，57.66，53.26，53.25，27.89。

1.10 化合物16的合成

在50mL的圓底燒瓶中，加入氨基化合物15(0.5g，0.88mmol)，(Boc)₂O(0.3g，1.31mmol)，Et₃N(0.24mL，1.75mmol)，CH₂Cl₂(15mL)。將混合物置于室溫?cái)嚢?h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后，用飽和NaHCO₃洗滌，二氯甲烷萃取，無水Na₂SO₄干燥，減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化(二氯甲烷：甲醇＝80：1，氨水：0.5％)得到純品化合物16(0.53g，產(chǎn)率：90％)為淡黃色固體。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.32(d，J＝1.6Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.02-7.99(m，2H)，7.93(d，J＝2，8.4Hz，1H)，7.77(dd，J＝1.6，7.6Hz，1H)，7.28(d，J＝8Hz，1H)，3.70(s，2H)，3.23(m，2H)，2.52-2.44(m，13H)，1.44(s，9H)。

1.11 化合物17的合成

化合物17的制備與化合物13a-13b類似。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(d，J＝3.6Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.10(s，1H)，8.05-7.95(m，5H)，7.86(d，J＝8Hz，1H)，7.36(d，J＝8Hz，1H)，7.13(dd，J＝4.4，9.2Hz，1H)，5.00(bs，1H)，3.72(s，2H)，3.24-3.23(m，2H)，2.62(s，3H)，2.54-2.48(m，10H)，1.45(s，9H)。

1.12 化合物13c(實(shí)例3)的合成

在50mL的兩口圓底燒瓶中，加入化合物17(0.5g，0.73mmol)，苯甲醚(anisole)(0.3mL)，CH₂Cl₂(5mL)，將體系冷卻至0℃后，滴加CF₃COOH(1mL)的CH₂Cl₂溶液(5mL)。滴畢，保持0℃攪拌1h后，體系移至室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和Na₂CO₃溶液，調(diào)節(jié)體系PH至堿性。加入二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，無水Na₂SO₄干燥，減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化(二氯甲烷：甲醇＝20：1，氨水：0.5％)得到純品化合物13c(0.25g，產(chǎn)率：60％)為淡黃色固體。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.99(s，1H)，8.61(d，J＝3.6Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.12-8.01(m，5H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.36-7.32(m，2H)，3.73(s，2H)，3.02(t，J＝6Hz，2H)，2.63-2.56(m，13H)；¹³C NMR(100MHz，CD₃OD)δ147.46，144.60，140.14，139.68，138.15，136.51，135.68，132.15，129.95，129.60(J＝31.1Hz)，128.17，127.68，125.74，124.96，123.81(J＝272.1Hz)，122.94，122.71，118.96，118.72，117.13(J＝5.8Hz)，113.20，96.87，79.53，57.40，55.26，52.72，52.69，36.30，19.34；HR MS(EI)calcd for C₃₁H₃₁F₃N₉ 586.2654[M+H]⁺；found 586.2662。

1.13 化合物13d(實(shí)例4)的合成

在50mL兩口圓底燒瓶中加入化合物13c(0.3g，0.51mmol)，DCC(0.20g，0.77mmol)，CH₂Cl₂(5mL)，將體系冷卻至0℃后，滴加CS₂(0.31mL，5.1mmol)的CH₂Cl₂(5mL)溶液。滴畢，反應(yīng)液保持0℃繼續(xù)攪拌2h，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后減壓濃縮并用硅膠拌樣后，通過硅膠柱分離純化(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得到純品化合物13d(0.27g，產(chǎn)率：85％)為淡黃色固體。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ8.48(dd，J＝1.2，4.4Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J＝1.2Hz，1H)，8.05-7.95(m，5H)，7.85(dd，J＝1.6，8Hz，1H)，7.36(d，J＝8Hz，1H)，7.13(dd，J＝4.4，9.2Hz，1H)，3.72(s，2H)，3.59(t，J＝6Hz，2H)，2.70(t，J＝6.4Hz，2H)，2.62(s，3H)，2.57(br，8H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ147.98，143.86，140.73，139.70，138.25，135.60，132.17，130.29，130.20(J＝31.4Hz)，129.12，127.62，126.21，125.90，123.57(J＝272.8Hz)123.38，123.03，117.89(J＝5.9Hz)，117.62，117.37，113.36，97.32，80.20，57.62，57.20，53.08，52.95，43.06，20.70；HR MS(EI)calcd for C₃₂H₂₉F₃N₉S 628.2219[M+H]⁺；found 628.2208。

活性測(cè)試

MTT粉末購買于Sigma公司，用磷酸緩沖液(PBS)將其配制成濃度為5毫克/毫升的溶液，選取0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，然后于4℃下避光保存。K562細(xì)胞(慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系)購于自北京金紫晶生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞培養(yǎng)基為改良型RPMI-1640(Hyclone)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。

MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活性包括下面幾個(gè)步驟(以K562細(xì)胞的測(cè)試方法為例，KG1a、HL60細(xì)胞的測(cè)試方法與K562細(xì)胞的方法一致)：

(1)選取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的K562細(xì)胞，按每孔3×10³接種于96孔板，5％CO₂，37℃孵育培養(yǎng)過夜。

(2)加藥，本實(shí)驗(yàn)中設(shè)置了9個(gè)濃度梯度，根據(jù)需要采用不同的濃度梯度，例如,體系中藥物終濃度梯度為：100nM，33.3nM，11.1nM，3.7nM，1.2nM，0.41nM，0.137nM，0.0457nM，0.0152nM。每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組(不加藥僅接種細(xì)胞)及空白孔(未接種細(xì)胞僅加培養(yǎng)基)，5％CO₂，37℃培養(yǎng)箱孵育72小時(shí)。

(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

(4)4小時(shí)后終止培養(yǎng)，小心地吸去孔內(nèi)的液體。并向每孔加入150μL的二甲基亞砜。然后置于搖床上低速振蕩15min左右，使結(jié)晶物充分溶解。采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀MULTISKAN FC(Thermo scientific)測(cè)定490nm處及570nm各孔的吸光度值，測(cè)量時(shí)以空白孔作為調(diào)零孔。

(5)處理數(shù)據(jù)。以藥物濃度為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)為縱坐標(biāo)，用數(shù)據(jù)處理軟件SPSS軟件(IBM公司)進(jìn)行幾率單位加權(quán)回歸法(Bliss法)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，作圖，得到IC₅₀值。見表1。

表1 實(shí)例1-4化合物對(duì)K562、HL60、KG1a細(xì)胞的IC₅₀值

由以上實(shí)例1-4對(duì)應(yīng)的化合物的IC50的數(shù)據(jù)可知，合成的化合物對(duì)K562、KG1a、HL60細(xì)胞具有抑制活性，具有用于治療白血病的前景。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，以上實(shí)施例僅是示例性實(shí)施例，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以進(jìn)行多種變化、替換以及改變。