本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物及其合成方法。

背景技術(shù)：

腫瘤已嚴(yán)重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標(biāo)。隨著藥物化學(xué)的發(fā)展，以嘧啶環(huán)為結(jié)構(gòu)母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關(guān)注。

甘草查爾酮A被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結(jié)構(gòu)如下所示。

近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)甘草查爾酮A具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有很大的開(kāi)發(fā)價(jià)值。但甘草查爾酮A是平面性強(qiáng)的分子，水溶性差，所以，通過(guò)合理、安全的結(jié)構(gòu)修飾來(lái)增強(qiáng)甘草查爾酮A的水溶性，開(kāi)發(fā)天然產(chǎn)物甘草查爾酮A的更多生物活性成為亟待解決的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物及其合成方法。

本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下：

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物，

其中：R為C1-C4的烷基，C1-C4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；

所述的取代為單取代或多取代，取代基為：鹵素、C1-C4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮A、脲類化合物為原料，以有機(jī)堿為催化劑，在甲苯作為反應(yīng)溶劑的條件下進(jìn)行合成；

。

具體來(lái)說(shuō)，包括如下步驟，

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A、脲類化合物，加入有機(jī)溶劑混合均勻，加入有機(jī)堿催化劑，80℃~120℃回流反應(yīng)3~8小時(shí)；

（2）將步驟（1）反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

步驟（1）中所述的甘草查爾酮A與硫脲類化合物的摩爾比優(yōu)選為1:1 ~1:1.3，有機(jī)溶劑為甲苯或DMF，反應(yīng)溫度優(yōu)選為105℃~115℃，有機(jī)堿優(yōu)選為三乙胺。

嘧啶環(huán)是很多天然化合物和合成藥物中的核心結(jié)構(gòu)單元，作為雜環(huán)化合物中的一個(gè)重要分支，嘧啶類化合物因其具有高效、低毒，以及其環(huán)上取代基可以多方位的變換而在藥物領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。將嘧啶環(huán)引入甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，有望增強(qiáng)其生物活性，提高選擇性，具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，可實(shí)現(xiàn)反應(yīng)原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)率低的問(wèn)題，同時(shí)將嘧啶環(huán)引入到甘草查爾酮A的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，對(duì)探究該類化合物的生物活性與總結(jié)構(gòu)效關(guān)系具有重要的理論價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實(shí)施例僅是出于解釋說(shuō)明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)。

一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮A二氫嘧啶類化合物的合成方法包括如下步驟：

（1）向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1~1:1.5加入甘草查爾酮A、脲類化合物，加入甲苯或DMF混合均勻，其中溶劑體積小于反應(yīng)器容積的2/3，加入有機(jī)堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃~120℃，回流反應(yīng)3~8小時(shí)；

（2）反應(yīng)過(guò)程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；

（3）將步驟（2）反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

本發(fā)明部分優(yōu)選實(shí)施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：

實(shí)施例1

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2（1H ）-酮（1）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和56.92mg(1.3mmol) 1-甲基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)3小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（113.41mg），總收率48.65%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 3.47 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 154.0, 148.8, 133.7, 129.3, 129.1, 125.2, 116.4, 116.0, 111.1, 103.8, 56.1, 53.2, 40.1, 39.8, 35.2, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 395.3635, found: 395.3042

實(shí)施例2

1-芐基-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H ） - 酮（2）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-芐基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)5小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（121.79mg），總收率43.79%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.23-7.26(5H, m), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 4.22 (2H, s), 3.83 (3H, s), 1.81-1.66 (2H, m), 1.69 ( 6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 156.1, 155.0, 154.0, 148.8, 136.4, 133.2, 129.1, 127.9, 127.0, 125.2, 116.4,116.0,111.1, 103.8, 56.1, 51.5, 50.6, 40.8, 39.8,28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.4595, found: 471.3804

實(shí)施例 3

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2（1H ） - 酮（3）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和104.61mg(1.3mmol) 1-苯基脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（130.64mg）， 總收率48.42%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.91-7.85 (4H, m), 7.43 (2H, t), 7.19 (1H, t), 6.93 (1H, t), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 1.99-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 139.1, 133.2, 129.1, 128.9, 127.5, 125.2, 121.6, 116.0,111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6;HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 457.3329, found: 457.2917

實(shí)施例 4

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（鄰甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（4）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-（鄰甲苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)8小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（136.41mg）， 總收率49.05%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.83 (2H, t), 7.24 (1H, t), 7.07 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, s), 3.83 (3H, s), 2.12 (3H, s), 1.99-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 148.8, 136.0, 134.3,133.2, 130.7, 129.3, 129.1, 125.9, 125.2, 121.6, 118.9, 116.0, 111.1, 103.8, 61.6, 56.1, 40.4, 30.8, 28.6, 17.2; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.4599, found：471.4302

實(shí)施例 5

1-（2-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（5）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和118.43mg(1.3mmol) 1-（2-氟苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（140.11mg）， 總收率49.96%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.69 (1H, d), 7.22 (5H, m),7.01 (1H, t), 6.98 (2H, d), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, d), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 164.6, 162.8, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 129.1, 129.0, 125.2, 124.5, 123.3, 121.6, 116.0, 115.7, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 475.3234， found：475.2763

實(shí)施例 6

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（2-甲氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（6）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.68mg(1.3mmol) 1-（2-甲氧基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（141.72mg）， 總收率49.28%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.59 (1H, d),7.08 (2H, d), 6.95 (1H, t), 6.83 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (6H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.4, 160.8, 160.2, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 129.1, 128.2, 126.0, 125.2, 121.6, 121.2, 118.3 116.0, 112.8, 111.1, 103.8, 61.6, 56.1, 55.8, 40.4, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:487.4352, found:487.4986

實(shí)施例 7

1-（2-溴苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（7）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和165.23mg(1.3mmol) 1-（2-溴苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（142.35mg）， 總收率44.98%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.78 (1H, d), 7.86 (1H, d), 7.37 (1H, t), 7.08 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, m), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s);¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.4, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 140.9, 133.2, 131.8, 129.1,128.3, 125.2, 122.6, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 60.6, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:535.1254, found: 535.2014

實(shí)施例 8

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（間甲苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（8）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和115.39mg(1.3mmol) 1-（間甲苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（147.88mg）， 總收率53.17%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.73 (1H, s), 7.68 (1H, d), 7.31 (1H, t), 6.97 (2H, m), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 2.34 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 ( 6H, s);¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 139.0, 138.6, 133.2, 129.1, 128.8, 125.4, 124.6, 121.6, 121.3, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6, 21.3, HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 471.1306, found:471.1138

實(shí)施例 9

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-1-（3-羥基苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（9）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和116.90mg(1.3mmol) 1-（3-羥基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到80℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（147.31mg）, 總收率52.75%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d), 7.32 (1H, m),7.26 (1H, t), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.69 (1H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (3H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s) 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm):164.6, 160.8, 158.7, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 140.5, 133.2, 130.3, 129.1, 128.3, 125.2, 121.6, 120.3, 116.0, 114.6, 111.1, 106.3, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6,HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 473.1883, found: 473.0462

實(shí)施例 10

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（3-（三氟甲基）苯基）-5，6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮10）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和156.85mg(1.3mmol) 1-（3-（三氟甲基）苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（131.67mg），總收率42.47%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 8.12 (1H, s), 7.85 (3H, d), 7.36 (2H, d), 6.98 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91-1.66 (2H, m), 1.69 (6H, s); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 139.4, 133.2, 131.2, 130.8, 129.1, 128.3, 125.2, 124.1, 121.6, 120.7, 116.0, 114.6, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd:525.4309, found:525.3367

實(shí)施例 11

1-（4-氟苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（11）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和118.43mg(1.3mmol) 1-（4-氟苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（129.11mg）， 總收率46.04%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K): d 7.85 (2H, d), 7.79 (2H, d),7.22 (2H, t), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): HRMS (ESI) for (M+H)+: 164.6, 162.9, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 134.7, 133.2, 129.1, 125.2, 123.2, 121.6, 116.0, 115.7, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; calcd: 475.4234, found: 475.3869

實(shí)施例 12

1-（4-氯苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（12）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和131.07mg(1.3mmol) 1-（4-氯苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（140.22mg）， 總收率48.32%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.88 (2H, d), 7.85 (2H, d),7.47 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (3H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 134.2, 133.2, 129.1, 129.0, 126.6, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 491.8781, found: 491.7201

實(shí)施例 13

1-（4-氨基苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（13）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和116.15mg(1.3mmol) 1-（4-氨基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（139.67mg）， 總收率50.12%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.85 (2H, d),7.05 (2H, d), 6.95 (1H, s), 6.85 (2H, d), 6.61 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 6.27 (2H, s), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 144.0, 133.2, 132.2, 129.1, 127.6, 125.2, 121.6, 116.5, 116.0, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 472.3469, found: 472.2864

實(shí)施例 14

6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-1-（4-甲氧基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（14）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和127.68mg(1.3mmol) 1-（4-甲氧基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（136.83mg）， 總收率47.58%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：d 7.92 (1H, d), 7.85 (2H, d), 6.97 (3H, m), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, t), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 158.9, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 133.2, 131.4, 129.1, 125.2, 122.6, 121.6, 116.0, 114.5, 111.1, 103.8, 61.3, 56.1, 55.8, 40.4, 39.8, 28.6; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 485.4832, found: 485.4309

實(shí)施例 15

1-（2,4-二甲基苯基）-6-（4-羥基-2-甲氧基-5-（2-甲基丁-3-烯-2-基）苯基）-4-（4-羥基苯基）-5,6-二氫嘧啶-2（1H） - 酮（15）的制備。

在反應(yīng)器中加入200mg(1mmol)甘草查爾酮A和126.16mg(1.3mmol) 1-（2,4-二甲基苯基）脲，加50ml甲苯和5mLDMF作反應(yīng)溶劑，加入0.5mL三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末（142.12mg），總收率49.62%。

棕黃色結(jié)晶性粉末固體。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300K)：7.85 (2H, d), 7.65 (1H, d), 7.08 (1H, s), 7.02 (1H, d), 6.85 (2H, d), 6.41 (1H, s), 6.30 (1H, m), 5.35 (2H, s), 5.00-4.98 (2H, m), 4.9 (1H, t), 3.83 (3H, s), 2.34 (3H, s), 1.91 (1H, m), 1.69 (6H, s), 1.66 (1H, m); ¹³CNMR (75MHz, DMSO-d6) δ(ppm): 164.6, 160.8, 155.1, 154.7, 153.7, 148.8, 143.4, 134.2, 133.2, 133.0, 131.1, 129.1, 128.3, 126.2, 125.2, 121.6, 116.0, 111.1, 103.8, 61.6, 40.4, 39.8, 28.6, 21.6, 17.5 ; HRMS (ESI) for (M+H)+: calcd: 485.4822, found: 485.4376

實(shí)施例 16 本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測(cè)試

對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn),試驗(yàn)方法采用常規(guī)的MTT法。

細(xì)胞株選用：人前列腺癌(PC-3)，人胃腺癌細(xì)胞(SGC-7901)，人肺癌細(xì)胞(A-549)。培養(yǎng)液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1,1,10,20,40,60,80,100 μmol/L。

將抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶 (5-FU) 以同樣的條件配成對(duì)照品溶液。

細(xì)胞培養(yǎng)：貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)于含 10% 滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素（各100萬(wàn)U/L）的 1640 培養(yǎng)液中，置于 37℃，5% CO2，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，每 2～3 天傳代 1 次，傳代時(shí)首先倒出培養(yǎng)液，PBS洗 2 次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細(xì)胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性及IC₅₀的測(cè)定：

實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臜 (MTT formazan),并沉積在細(xì)胞中，生成的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞沒(méi)有這種功能。DMSO能溶解藍(lán)紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測(cè)定的光吸收值可反映細(xì)胞存活率。

實(shí)驗(yàn)方法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化、計(jì)數(shù)，以 3×105/mL 的密度接種于 96 孔培養(yǎng)板中，每孔100 μl。培養(yǎng) 24小時(shí)后，將待測(cè)化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100 μmol/L濃度處理細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，以含0.4% DMSO的培養(yǎng)液作對(duì)照。藥物作用 48小時(shí)后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽）(1mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng) 4小時(shí)，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570 nm處測(cè)定吸光度值，采用 IC₅₀ 計(jì)算軟件求出半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

試驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表1，其中，樣品是指相應(yīng)實(shí)施例中制備的甘草查爾酮A二氫嘧啶類衍生物，樣品編號(hào)對(duì)應(yīng)制備實(shí)施例中所得到的化合物的具體編號(hào)。

表1 化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC₅₀（單位：μmol/L）

表1結(jié)果顯示，化合物1-15在所測(cè)試的3種細(xì)胞株中均表現(xiàn)出了不同程度的抗腫瘤活性,其中化合物11、12和5的活性較好，對(duì)細(xì)胞呈現(xiàn)較強(qiáng)的抑制效果，在特定細(xì)胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于5-氟尿嘧啶，對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株具有明顯選擇性。綜上，本發(fā)明的甘草查爾酮A二氫嘧啶類衍生物可作為抗腫瘤候選藥物進(jìn)一步進(jìn)行臨床前研究，也可以做為抗腫瘤先導(dǎo)化合物進(jìn)一步研究。