本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體涉及一種高純度高收率環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法。
背景技術(shù)：
：環(huán)維黃楊星D(CyclovirobuxineD)是從黃楊科植物小葉黃楊中提取的有效單體生物堿，是治療新血管疾病的藥物或作為新藥開(kāi)發(fā)的前體可廣泛用于醫(yī)療領(lǐng)域。研究表明，采用傳統(tǒng)萃取和重結(jié)晶等方法得到的環(huán)維黃楊星D中，還含有與其結(jié)構(gòu)極為相似的環(huán)黃楊堿D(Cyclobuxine)、環(huán)常綠黃楊堿C(Cyclovirobxine)和環(huán)原綠黃楊堿C(CycloprotobuxineC)等雜質(zhì)成分，總雜質(zhì)含量在7～8％左右，并且這些雜質(zhì)用常規(guī)手段很難除去，其純度遠(yuǎn)遠(yuǎn)無(wú)法滿足環(huán)維黃楊星D作為原料藥制備單體藥物的要求。科研工作者們對(duì)分離純化方法作了深入研究并加以改進(jìn)，但是仍然不能有效除去上述雜質(zhì)?，F(xiàn)有技術(shù)下，有多種檢測(cè)環(huán)維黃楊星D的純度的方法，各種方法檢測(cè)的純度存在差異。如徐新軍等研究采用柱前熒光衍生化RP-HPLC測(cè)定環(huán)維黃楊星D的含量，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)環(huán)維黃楊星D非水滴定法含量均在98％以上，而HPLC含量只有87％左右(徐新軍等，柱前熒光衍生化RP-HPLC測(cè)定環(huán)維黃楊星D的含量，藥學(xué)通報(bào)，2002年第5期，359-361頁(yè))。此外，徐新軍采用液-質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)對(duì)采用重結(jié)晶法和用柱層析法制備的環(huán)維黃楊星D進(jìn)行了檢測(cè)后認(rèn)為“重結(jié)晶難于提高環(huán)維黃楊星D的含量，而柱色譜法則為降低有關(guān)物質(zhì)，提高環(huán)維黃楊星D含量的有效方法”(徐新軍等，HPLC/MA法與柱前衍生化HPLC/UV法測(cè)定環(huán)維黃楊星D有關(guān)物質(zhì)的比較，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33(5)：408-411)。如CN1594355A公開(kāi)一種環(huán)維黃楊星D一甲醇結(jié)晶體，兩次結(jié)晶后經(jīng)干燥去除甲醇后，得到環(huán)維黃楊星D，經(jīng)TLC檢測(cè)，其純度可達(dá)98.5％以上。然而由于受檢測(cè)方法本身所限，其產(chǎn)品實(shí)際上的HPLC純度僅為95％。并沒(méi)有達(dá)到真正意義上的98.5％的純度。雖然現(xiàn)有技術(shù)下公開(kāi)了使用柱層析能夠提高環(huán)維黃楊星D的純度，然而柱層析的方法繁瑣，收率低，不適用工業(yè)化生產(chǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)下缺少簡(jiǎn)便的高純度高收率環(huán)維黃楊星D及其鹽酸鹽的制備方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種種環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法，將環(huán)維黃楊星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一種或幾種進(jìn)行重結(jié)晶；將重結(jié)晶產(chǎn)物溶于有機(jī)溶劑，滴入1M稀鹽酸，室溫反應(yīng)成鹽，將析出的鹽品過(guò)濾干燥后甲醇與乙醇的混合溶劑，加熱回流，溶清后緩慢自然降溫析晶，得到環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽。本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)不足，將環(huán)維黃楊星D粗品重結(jié)晶后，經(jīng)成鹽及再次重結(jié)晶，得到高純度高收率的環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽。本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：一種環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽的制備方法，包括以下步驟：(1)取環(huán)維黃楊星D粗品，使用甲醇、乙醇、氯仿中的一種或幾種進(jìn)行重結(jié)晶；(2)將重結(jié)晶產(chǎn)物溶于有機(jī)溶劑，滴入稀鹽酸，室溫反應(yīng)成鹽，將析出的鹽品過(guò)濾、干燥；(3)將步驟(2)得到的環(huán)維黃楊星D成鹽品加入甲醇與乙醇的混合溶劑，加熱回流，溶清后緩慢自然降溫析晶，得到環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽。優(yōu)選的，所述步驟(1)使用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶。甲醇體積為環(huán)維黃楊星D重量的18～25倍，更優(yōu)選20倍。重結(jié)晶次數(shù)為1-3次，母液回收套用。優(yōu)選的，所述步驟(2)有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、二氯甲烷中的一種或幾種，更優(yōu)選二氯甲烷，體積為環(huán)維黃楊星D重量的20-40倍，更優(yōu)選40倍。優(yōu)選的，所述步驟(2)優(yōu)選1M稀鹽酸，稀鹽酸摩爾量為環(huán)維黃楊星D的2倍。優(yōu)選的，所述步驟(3)甲醇與乙醇的體積比為1∶1～4，更優(yōu)選1∶1。本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的具體方案為：以環(huán)維黃楊星D市售品為例，作為待純化樣品，其液相純度約為55％。1)取環(huán)維黃楊星D市售品，加入20倍體積(W/V)甲醇，加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。參照此方法反復(fù)結(jié)晶3次。2)取環(huán)維黃楊星D3次結(jié)晶品，加入40倍體積(W/V)二氯甲烷，室溫?cái)嚢枞芮?，滴?M稀鹽酸，稀鹽酸摩爾量為環(huán)維黃楊星D的2倍。室溫反應(yīng)成鹽，反應(yīng)結(jié)束后，可直接將析出成鹽產(chǎn)品濾出，40℃減壓干燥后得到白色成鹽產(chǎn)品。3)取環(huán)維黃楊星D成鹽品，加入20倍體積(W/V)甲醇乙醇(1∶1)混合，65℃加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)純度高。本發(fā)明方法純化后的環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽HPLC純度大于99％；2)成本低。無(wú)需特殊儀器、溶劑，所需溶劑、儀器均為實(shí)驗(yàn)室常用耗材，使用操作方便，價(jià)格低廉；3)操作簡(jiǎn)便。環(huán)維黃楊星D結(jié)晶、成鹽、蒸餾、干燥等操作均比較簡(jiǎn)單，沒(méi)有繁瑣操作和特殊操作；4)易于放大生產(chǎn)。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，具有較好的重現(xiàn)性，能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)；5)收率高。本發(fā)明收率高，成鹽反應(yīng)收率在90％以上；另一方面，本發(fā)明提供了環(huán)維黃楊星D含量的高效液相檢測(cè)方法：色譜條件：色譜柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相A：0.01M庚烷磺酸鈉與0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸調(diào)pH至3.50)，流動(dòng)相B：乙腈，流速：1ml/min，波長(zhǎng)：206nm，柱溫：30℃，流動(dòng)相A-B(77∶23)，采集時(shí)間：60min，等度測(cè)樣。附圖說(shuō)明圖1為環(huán)維黃楊星D市售品HPLC檢測(cè)結(jié)果。圖2為現(xiàn)有技術(shù)精制環(huán)維黃楊星D二次結(jié)晶品HPLC檢測(cè)結(jié)果。圖3為本發(fā)明技術(shù)方案精制環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽HPLC檢測(cè)結(jié)果。具體實(shí)施方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非另有說(shuō)明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體實(shí)施例并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明。應(yīng)理解，該實(shí)施例只是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在以下實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1以環(huán)維黃楊星D市售品(南京世州醫(yī)藥科技有限公司)作為原料，采用CN1594355A公開(kāi)的方法進(jìn)行精制，制得環(huán)維黃楊星D二次結(jié)晶品，分別采用TLC色譜系統(tǒng)以及HPLC測(cè)定純度。TLC色譜系統(tǒng)：薄層板：硅膠G薄層板；展開(kāi)劑：氯仿∶己烷∶甲醇∶氨水＝2.5∶4∶1∶0.1；顯色劑；稀碘化必鉀試劑；點(diǎn)樣量；100～250μg)。測(cè)定結(jié)果顯示，采用CN1594355A公開(kāi)的方法制得的環(huán)維黃楊星D二次結(jié)晶品的TLC純度為96％。高效液相系統(tǒng)：色譜柱：月旭C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相A：0.01M庚烷磺酸鈉與0.01MKH2PO4等量混合溶液(含0.2％三乙胺，用磷酸調(diào)pH至3.50)，流動(dòng)相B：乙腈，流速：1ml/min，波長(zhǎng)：206nm，柱溫：30℃，流動(dòng)相A-B(77∶23)，采集時(shí)間：60min，等度測(cè)樣。測(cè)定結(jié)果顯示，環(huán)維黃楊星D市售品的HPLC液相純度約為55％(結(jié)果如圖1和表1所示)。表1峰保留時(shí)間面積面積％高度分離度拖尾因子17.13431670.293270.00.0027.46674970.687301.10.00318.92139207635.731447523.81.05423.134139371.275096.61.18524.64597610.893342.30.77625.37896060.884261.31.29727.52959811054.51128922.71.40830.535342333.128392.60.97934.157288722.636032.91.11總計(jì)1097262100.0031136采用CN1594355A公開(kāi)的方法制得的環(huán)維黃楊星D二次結(jié)晶品的HPLC純度為94％左右(結(jié)果如圖2，表2所示)，不能達(dá)到98.5％以上。表2峰保留時(shí)間面積面積％高度分離度拖尾因子18.69166180.962520.01.92218.75053910.7829218.70.88322.738140832.055227.41.11426.62464863694.29164024.42.59528.429131821.925492.11.02總計(jì)687909100.0018018實(shí)施例2取環(huán)維黃楊星D市售品，加入20倍體積(W/V)甲醇，加熱攪拌至回流(65℃)、溶清，溶清后回流15min，停止加熱，緩慢自然降溫，攪拌析晶。參照此方法反復(fù)結(jié)晶4次，得到四次結(jié)晶產(chǎn)物。母液反復(fù)利用，四次結(jié)晶后，收率達(dá)70％左右。四次結(jié)晶結(jié)果如下：表3.環(huán)維黃楊星D市售品在甲醇中結(jié)晶結(jié)果環(huán)黃楊堿D(％)最大單雜(％)總雜(％)純度(％)環(huán)維黃楊星D未純化35.733.1245.4954.51一次結(jié)晶產(chǎn)物4.612.138.7391.27二次結(jié)晶產(chǎn)物0.782.055.7194.29三次結(jié)晶產(chǎn)物未檢出1.692.9197.01四次結(jié)晶產(chǎn)物未檢出2.112.5697.44如表3所示，表中依次為環(huán)維黃楊星D粗品以及粗品1至4次結(jié)晶的數(shù)據(jù)。第1次結(jié)晶效果尤為顯著。環(huán)維黃楊星D純度從54.51％上升至91.27％。然而，其后3次結(jié)晶效果不甚顯著，4次結(jié)晶后環(huán)維黃楊星D純度最高為97.44％，尤其第3次和第4次結(jié)晶，其結(jié)果幾乎不變。結(jié)果證明用反復(fù)重結(jié)晶無(wú)法顯著提高產(chǎn)物純度。若要制備得到99.5％以上的環(huán)維黃楊星D，還需進(jìn)一步增加精制手段。實(shí)施例3以實(shí)施例2環(huán)維黃楊星D三次結(jié)晶品為原料，作為待成鹽樣品，其液相純度約為97％。取環(huán)維黃楊星D三次結(jié)晶品30g平均分成三分，分別溶于40倍體積(W/V)水、40倍體積(W/V)甲醇和40倍體積(W/V)二氯甲烷，室溫下進(jìn)行成鹽反應(yīng)。而后室溫滴入2eq1M稀鹽酸攪拌成鹽。用水做溶劑成鹽后室溫下無(wú)法析出晶體或析出晶體較少，將溫度降至4℃左右析晶；用甲醇做溶劑成鹽后，產(chǎn)物和甲醇呈膏狀，很難過(guò)濾處理；用二氯甲烷做溶劑，成鹽反應(yīng)結(jié)束后，產(chǎn)物直接析出，過(guò)濾極為方便。三種溶劑成鹽結(jié)果如下：表4.環(huán)維黃楊星D市結(jié)晶品在不同溶劑中成鹽結(jié)果編號(hào)環(huán)黃楊堿D(％)最大單雜(％)總雜(％)純度(％)收率(％)環(huán)維黃楊星D三次結(jié)晶品未檢出1.692.9197.01/水中成鹽未檢出1.221.7898.2255甲醇中成鹽未檢出1.291.8698.1480二氯甲烷中成鹽未檢出1.892.2497.7695如表4所示，在以上三種溶劑中進(jìn)行成鹽反應(yīng)所得環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽純度相當(dāng)，差別很小。水中成鹽所得產(chǎn)品純度最高為98.504，但收率僅為55％。甲醇中成鹽后得到鹽酸鹽純度為97.862％，收率為80％。二氯甲烷中成鹽后得到鹽酸鹽純度為97.5624％，收率為95％。從純度、收率以及操作便利方面綜合考慮，選用二氯甲烷作為最優(yōu)成鹽溶劑。實(shí)施例4以實(shí)施例3得到的環(huán)維黃楊星D二氯甲烷中制得的鹽酸鹽作為待精制樣品，其液相純度約為97％。取環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽30g，平均分成三份，分別用10倍體積水(W/V)、10倍體積甲醇(W/V)，20倍體積甲醇乙醇(1∶1)混合液(W/V)進(jìn)行結(jié)晶。攪拌加熱至取環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽溶清，溶清后停止加熱，自然降溫至室溫析晶，過(guò)濾干燥后即得環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽精制品。三種溶劑結(jié)晶結(jié)果如下：表5.環(huán)維黃楊星D市結(jié)晶品在不同溶劑中精制結(jié)果表6峰保留時(shí)間面積面積％高度127.6520.7680.5531.678229.873138.12299.44759.894總計(jì)138.890100.0061.572如表5所示，環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽在水、甲醇以及甲醇乙醇混合液(1∶1)中結(jié)晶后所得精制品純度相當(dāng)，分別為99.52％、99.35％、99.45％。三種溶劑結(jié)晶后，收率卻相差甚大，分別為35％、60％、85％。綜合純度和收率因素，更優(yōu)選甲醇乙醇(1∶1)混合液為環(huán)維黃楊星D鹽酸鹽精制溶劑(HPLC液相檢測(cè)結(jié)果如圖3，表6所示)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3