本實用新型涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種人博卡病毒檢測試劑盒。

背景技術(shù)：

呼吸道疾病可由幾十種病原體引起，病原體的最終確認(rèn)需要大量的操作步驟，費時費力。

人博卡病毒(Bocavirus)是細(xì)小病毒科細(xì)小病毒亞科的一個屬，與人類急性呼吸道感染密切相關(guān)，病征與普通感冒相似。

目前市面上尚未出現(xiàn)能夠快速檢測出待測樣本中是否含有人博卡病毒的檢測試劑盒。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于此，有必要提供一種能夠快速檢測出待測樣本中是否含有人博卡病毒的人博卡病毒檢測試劑盒。

一種人博卡病毒檢測試劑盒，包括：

盒體；

與所述盒體轉(zhuǎn)動連接的盒蓋；

設(shè)置在所述盒體內(nèi)的軟性墊板，所述軟性墊板遠(yuǎn)離所述盒體底部的一側(cè)設(shè)有第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽以及第四凹槽；以及

與所述第一凹槽相匹配的第一試劑管，與所述第二凹槽相匹配的第二試劑管，與所述第三凹槽相匹配的第三試劑管，與所述第四凹槽相匹配的第四試劑管；

所述第一試劑管用于承裝預(yù)分裝PCR反應(yīng)液，所述第二試劑管用于承載RT-PCR酶，所述第三試劑管用于承載陽性指控品，所述第四試劑管用于承載陰性指控品。

在一個實施例中，所述軟性墊板為泡沫板、軟性塑料板或橡膠板。

在一個實施例中，所述第一凹槽為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽；

所述第二凹槽為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽；

所述第三凹槽為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽；

所述第四凹槽為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽。

在一個實施例中，所述第一凹槽、所述第二凹槽、所述第三凹槽和所述第四凹槽均為圓柱狀凹槽，所述第一凹槽的直徑與所述第二凹槽的直徑的比例為1.5～3：1，所述第二凹槽、所述第三凹槽和所述第四凹槽的大小相同。

在一個實施例中，所述第一凹槽的直徑與所述第二凹槽的直徑的比例為2：1。

在一個實施例中，所述盒蓋包括主體和側(cè)板，所述主體與所述盒體轉(zhuǎn)動連接，所述側(cè)板與所述主體轉(zhuǎn)動連接。

在一個實施例中，還包括相互之間具有磁性吸引力的第一磁性塊和第二磁性塊；

所述第一磁性塊設(shè)置在所述盒蓋上，所述第二磁性塊設(shè)置在所述盒體上，當(dāng)所述盒蓋與所述盒體接觸時，所述第一磁性塊與所述第二磁性塊通過磁性吸引力吸引連接。

在一個實施例中，所述第一試劑管用于承裝預(yù)分裝人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物、TaqMan探針以及dNTPs。

在一個實施例中，所述第二試劑管用于承載M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動Taq DNA聚合酶。

在一個實施例中，所述第四試劑管用于承載DEPC水。

這種人博卡病毒檢測試劑盒操作簡單、實用性強，能夠快速檢測出待測樣本中是否含有人博卡病毒。

附圖說明

圖1為一實施方式的人博卡病毒檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

下面主要結(jié)合附圖及具體實施例對人博卡病毒檢測試劑盒及其制備方法作進一步詳細(xì)的說明。

如圖1所示的人博卡病毒檢測試劑盒，包括：盒體10、盒蓋20、軟性墊板30、第一試劑管(圖中未顯示)、第二試劑管(圖中未顯示)、第三試劑管(圖中未顯示)和第四試劑管(圖中未顯示)。

盒體10為長方體、正方體或圓柱體。盒體10與盒蓋20轉(zhuǎn)動連接。

盒蓋20包括主體22和側(cè)板24，主體22與盒體10轉(zhuǎn)動連接，側(cè)板24與主體22轉(zhuǎn)動連接。

軟性墊板30設(shè)置在盒體10內(nèi)。

優(yōu)選的，軟性墊板30為泡沫板、軟性塑料板或橡膠板。

軟性墊板30遠(yuǎn)離盒體10底部的一側(cè)設(shè)有第一凹槽32、第二凹槽34、第三凹槽36以及第四凹槽38。

第一試劑管與第一凹槽32相匹配，第二試劑管與第二凹槽34相匹配，第三試劑管與第三凹槽36相匹配，第四試劑管與第四凹槽38相匹配。

第一凹槽32為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽。

第二凹槽34為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽。

第三凹槽36為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽。

第四凹槽38為圓柱狀凹槽、橢圓柱狀凹槽或長方體柱狀凹槽。

本實施方式中，第一凹槽32為長方體柱狀凹槽，第二凹槽34為圓柱狀凹槽，第三凹槽36為長方體柱狀凹槽，第四凹槽38為圓柱狀凹槽。

在另一個實施例中，第一凹槽32、第二凹槽34、第三凹槽36和第四凹槽38均為圓柱狀凹槽，第一凹槽32的直徑與第二凹槽34的直徑的比例為1.5～3：1(優(yōu)選為2：1)，第二凹槽34、第三凹槽36和第四凹槽的大小相同。

結(jié)合圖1，盒體10還包括第一磁性塊12，盒蓋20還包括第二磁性塊26。第一磁性塊12和第二磁性塊26相互之間具有磁性吸引力。

第一磁性塊12設(shè)置在盒蓋10上，第二磁性塊26設(shè)置在盒體20上，當(dāng)盒蓋10與盒體20接觸時，第一磁性塊12與第二磁性塊26通過磁性吸引力吸引連接。

本實施方式中，第二磁性塊26設(shè)置在側(cè)板24上。

在另一個實施例中，第二磁性塊26嵌入的設(shè)置在側(cè)板24內(nèi)。

第一試劑管用于承裝預(yù)分裝PCR反應(yīng)液，第二試劑管用于承載RT-PCR酶，第三試劑管用于承載陽性指控品，第四試劑管用于承載陰性指控品。

PCR反應(yīng)液包括人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物、TaqMan探針以及dNTPs。第一試劑管用于承裝人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物、TaqMan探針以及dNTPs。

應(yīng)用Primer Premier 5.0或Beacon Designer 8在病原體核酸保守區(qū)內(nèi)設(shè)計特異的TaqMan探針，在針對TaqMan探針設(shè)計相應(yīng)的人博卡病毒正向引物和人博卡病毒反向引物，其擴增子大小應(yīng)為80～150bp，根據(jù)序列的比對的結(jié)果可以在引物上引入簡并堿基。

1)設(shè)計依據(jù)：在人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物和TaqMan探針設(shè)計階段首先要遵循設(shè)計的基本原則是人博卡病毒正向引物和人博卡病毒反向引物的Tm值相差小于2℃，TaqMan探針的Tm要比人博卡病毒正向引物和人博卡病毒反向引物的Tm值高7～10℃，且人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物和TaqMan探針之間不能有明顯的二聚體結(jié)構(gòu)。

2)應(yīng)用Primer Premier 5.0、Beacon Designer 8或DNASTAR評估設(shè)計的人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物和TaqMan探針序列，分析人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物和TaqMan探針之間或內(nèi)部可能形成的所有二聚體結(jié)構(gòu)，其穩(wěn)定性不能超過軟件給出的范圍，若超過則視為不合格序列，需要重新設(shè)計，一般要求形成的Dimer的ΔG絕對值小于4.5kcal/mol為佳；

3)BLAST分析設(shè)計的人博卡病毒正向引物、人博卡病毒反向引物和TaqMan探針序列，確保其特異性，且不能與人基因組高度同源；

RT-PCR酶包括M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動Taq DNA聚合酶。第二試劑管用于承裝RT-PCR酶包括M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動Taq DNA聚合酶。

陽性指控品通過如下方法制備得到：分別以人博卡病毒病原體的核酸為模板，以設(shè)計的人博卡病毒正向引物和人博卡病毒反向引物進行PCR擴增，得到擴增產(chǎn)物，再分別將擴增產(chǎn)物回收并純化后克隆至pMD18-T載體，得到質(zhì)粒DNA，再通過統(tǒng)一稀釋，使其Ct值在一定范圍，得到陽性質(zhì)控品。

陰性指控品為DEPC水。第四試劑管用于承裝DEPC水。

這種人博卡病毒檢測試劑盒操作簡單、實用性強，能夠快速檢測出待測樣本中是否含有人博卡病毒。

以上所述實施例僅表達了本實用新型的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對本實用新型專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實用新型構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本實用新型的保護范圍。因此，本實用新型專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。